專利名稱：包含細(xì)胞和具有至少20個(gè)碳原子的多不飽和脂肪酸(lc-pufa)的組合物的制作方法
包含細(xì)胞和具有至少20個(gè)碳原子的多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)的組合物本發(fā)明涉及一種包含細(xì)胞和具有至少20個(gè)碳原子的多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)的組合物，涉及一種用于干燥包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物的方法，涉及一種從包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物中得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法。LC-PUFA可以由微生物通過(guò)發(fā)酵法生產(chǎn)。LC-PUFA也可以在植物中產(chǎn)生。隨后，含有LC-PUFA的微生物或植物部分可以被預(yù)處理，之后可以分離出LC-PUFA或含LC-PUFA的油。例如，WO 2006/085672描述了一種方法，其中LC-PUFA是從微生物生物質(zhì)中分離的。濕細(xì)胞在兩級(jí)干燥工藝中干燥?？梢允褂?20°C或更高的干燥溫度，得到含濕量為
l-2wt. %的干燥細(xì)胞。
可以在生產(chǎn)含有LC-PUFA的組合物之后，立即從中分離LC-PUFA和/或含LC-PUFA的油。然而，實(shí)際中含有LC-PUFA的組合物在進(jìn)一步使用(例如分離LC-PUFA和/或含LC-PUFA的油)之前通常被儲(chǔ)存和/或運(yùn)輸。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，含有LC-PUFA的組合物易感于自動(dòng)加熱。即，在儲(chǔ)存期間，溫度可能自發(fā)地增大，最終導(dǎo)致不期望的爆炸和火災(zāi)。還發(fā)現(xiàn)，此易感性隨LC-PUFA含量的增加而增大，隨LC-PUFA的雙鍵數(shù)量的增加而增大。本發(fā)明的目標(biāo)是提供一種包含(i)LC-PUFA和(ii)細(xì)胞的組合物，該組合物要更安全。本發(fā)明現(xiàn)在提供了一種組合物，其包含(i)具有至少20個(gè)碳原子的多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)和(ii)細(xì)胞，該組合物在40°C下的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I.T.)大于24小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的組合物的優(yōu)點(diǎn)在于，其安全性得以改善，S卩，其自燃溫度增大，減少了不期望的爆炸和火災(zāi)。本發(fā)明的組合物的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，組合物的儲(chǔ)存不會(huì)消極地影響LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的品質(zhì)，或至少是對(duì)品質(zhì)影響的程度較小。根據(jù)本發(fā)明的組合物在40°C下的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T.)大于24小時(shí)。組合物的T. I. T.是通過(guò)使用如 Recommendations on the Transport of Dangerous Goods, Manualof Tests and Criteria, Section 28. 4. 4, Test H. 4, United Nations, New York,1999 中所述的熱量累積儲(chǔ)存測(cè)試法來(lái)測(cè)定，其中調(diào)整和規(guī)定如下所示使用內(nèi)徑為57mm、高度為210mm的0. 5L的玻璃杜瓦瓶(Dewar vessel)。杜瓦瓶的熱損失為16mW/K。樣品尺寸占杜瓦瓶體積的75%。用高度約為50mm的橡膠塞蓋上杜瓦瓶，松散地塞緊以允許呼吸。通過(guò)塞子中心的孔將熱電偶插入杜瓦瓶中。將含有初始溫度為20°C的樣品的杜瓦瓶放入控制為40°C的腔室中，使用熱電偶來(lái)監(jiān)測(cè)樣品的溫度。熱誘導(dǎo)時(shí)間被定義為在樣品的溫度達(dá)到比腔室的溫度低2V (即38°C )的時(shí)刻與樣品的溫度達(dá)到比腔室的溫度高2V (即42°C )的時(shí)刻之間經(jīng)過(guò)的時(shí)間。圖I說(shuō)明了 T. I. T.的測(cè)定。優(yōu)選地，在40°C下測(cè)量時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的組合物的T. I. T.為至少2天(48小時(shí))，優(yōu)選至少3天(72小時(shí))，優(yōu)選至少4天(96小時(shí))，優(yōu)選至少5天。在40°C下測(cè)量時(shí)，T. I. T可以為至少8天，例如至少10天。T.I.T.沒(méi)有特定的上限。在40°C下測(cè)量時(shí)，Τ. I.T.可以小于25天，例如小于20天。根據(jù)本發(fā)明的具有增大T. I. T.的組合物可以基于本發(fā)明所提供的教導(dǎo)而得到。組合物可以是干燥的組合物。已發(fā)現(xiàn)，如果干燥溫度降低，則T. I. T.增大。還發(fā)現(xiàn)，如果組合物中的LC-PUFA的含量或LC-PUFA的雙鍵數(shù)量較高，有利于降低干燥溫度。例如，干燥溫度可以低于40°C，優(yōu)選低于350C，更優(yōu)選低于33°C，更優(yōu)選低于30°C，更優(yōu)選低于25°C。在本文中使用時(shí)，干燥溫度指的是干燥器中產(chǎn)品的溫度。例如，如果干燥器是流化床干燥器，干燥溫度指的是床的溫度。
因此，本發(fā)明還提供了一種用于干燥包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物的方法，該方法包括在低于40°C (優(yōu)選低于35°C，優(yōu)選低于33°C，優(yōu)選低于30°C，優(yōu)選低于25°C )的溫度下干燥組合物。干燥可以通過(guò)任何合適的方法。干燥可以在任何適當(dāng)?shù)母稍锲髦羞M(jìn)行。優(yōu)選地，使用能防止熱點(diǎn)的形成或使熱點(diǎn)的形成最小化的干燥器。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用流化床干燥器來(lái)進(jìn)行干燥。已發(fā)現(xiàn)，T. I. T.隨干燥時(shí)間的減少而增大。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，使用經(jīng)調(diào)節(jié)的空氣來(lái)進(jìn)行干燥。優(yōu)選地，所用空氣的露點(diǎn)< 15°C，優(yōu)選< 10°C，優(yōu)選< 5°C。降低露點(diǎn)的好處是，在優(yōu)選的(低)干燥溫度下，可以有效地實(shí)現(xiàn)優(yōu)選的含濕量。因此，本發(fā)明還提供了一種用于干燥包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物的方法，該方法包括使組合物與經(jīng)調(diào)節(jié)的空氣接觸，所述經(jīng)調(diào)節(jié)的空氣的露點(diǎn)優(yōu)選< 15 °C，優(yōu)選< 10°C，優(yōu)選<5°C。優(yōu)選地，在上述優(yōu)選的干燥溫度下進(jìn)行干燥。還發(fā)現(xiàn)，T. I. T.隨組合物的含濕量的增加而增大。優(yōu)選地，(例如經(jīng)干燥的)組合物的含濕量為至少Iwt. %,優(yōu)選至少2wt. %,優(yōu)選至少3wt. %,優(yōu)選至少4wt. % ο含濕量沒(méi)有特定的上限。組合物的含濕量可以低于20wt. %，例如低于15wt. %，例如低于12wt. %,例如低于IOwt. %，例如低于9wt. %。已發(fā)現(xiàn)，使含濕量降低至低于優(yōu)選的值能增大組合物的微生物穩(wěn)定性。在本文中使用時(shí)，含濕量是在濕重的基礎(chǔ)上計(jì)算，S卩，在組合物(包括干物質(zhì)、油和水分)的總重量的基礎(chǔ)上計(jì)算。其可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員測(cè)定，例如通過(guò)使水在105°C的溫度下蒸發(fā)，然后測(cè)定蒸發(fā)的水分的重量。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，如本文所公開(kāi)的對(duì)組合物的干燥獲得了如本文所公開(kāi)的優(yōu)選的含濕量。還發(fā)現(xiàn)，在組合物的處理過(guò)程中避免自由基的形成可以導(dǎo)致T. I. T.值增大。基于這一見(jiàn)解，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以避免導(dǎo)致形成自由基的步驟。因此，通常優(yōu)選使細(xì)胞在可能促進(jìn)自由基形成的環(huán)境中的暴露(例如暴露在高溫下和/或氧氣中)最小化。如果細(xì)胞是微生物細(xì)胞(有利的是含這些細(xì)胞的發(fā)酵液)，細(xì)胞要加熱以充分地殺死發(fā)酵液中可能存在的酶。優(yōu)選的加熱方案是W097/037032和WO 2004/001021所述的那些，其通過(guò)引用結(jié)合于此。優(yōu)選地，要加熱的發(fā)酵液的溶解氧含量很低，例如< lOppm，例如< 5ppm,例如< 2ppm,例如< lppm。殺死酶(特別是使用上面所述的方案)可能導(dǎo)致T. I.T.值增大。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的組合物的含油量為至少IOwt. %，例如至少20wt. % ,例如至少30wt. % ,例如至少40wt. %0含油量可以低于70wt. %，例如低于60wt. %。含油量可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法測(cè)定。用于測(cè)定本文所用的組合物的含油量的適當(dāng)方法是通過(guò)使用正己燒作溶劑的索氏萃取(Soxhlet extraction),其中進(jìn)行萃取的組合物的含濕量< 15wt. %，并且其中組合物和細(xì)胞被粉碎(以確保所有油都從細(xì)胞中釋放并可以溶于溶劑中)。在本文中使用時(shí)，含油量在干重的基礎(chǔ)上計(jì)算，即，在組合物的總的干燥重量(包括干物質(zhì)和油，但不包括水分)的基礎(chǔ)上計(jì)算。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的組合物的含油量如上面所定義，其中油的組成如下面優(yōu)選的實(shí)施方式所述。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含這樣的油，其中相對(duì)于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含至少IOwt. %、例如至少20wt. %、例如至少30wt. %、例如至少40wt. %的具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA ;相對(duì)于所述油中所有脂肪酸的量,所述油包含例如低于80wt. %、例如低于70wt. %、例如低于60wt. %的 具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA。在本文中使用時(shí)，具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA的wt. %指的是具有至少3個(gè)雙鍵的所有PUFA的總量。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含這樣的油，其中相對(duì)于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含至少IOwt. %、例如至少20wt. %、例如至少30wt. %、例如至少40wt. %的花生四烯酸(ARA);相對(duì)于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含例如低于80wt. %、例如低于70wt. %、例如低于60wt. %的ARA0在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含這樣的油，其中相對(duì)于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含至少IOwt. %、例如至少20wt. %、例如至少30wt. %、例如至少40wt. %的二十二碳六烯酸(DHA);相對(duì)于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含例如低于80wt. %、例如低于70wt. %、例如低于60wt. %的DHA0用于測(cè)定本文中所用的油的組成的適當(dāng)方法是通過(guò)如上所述的使用正己烷作溶劑的索氏萃取(Soxhlet extraction)從組合物中萃取油，并測(cè)定所萃取的油的脂肪酸組成。如果含油量和/或雙鍵數(shù)量相對(duì)較高，優(yōu)選選擇較低的干燥溫度和在干燥器中的較短的停留時(shí)間?；诒疚牡慕虒?dǎo)，可以得到較高的T. I. T.值，甚至對(duì)于含油量高的組合物和/或含有高濃度的具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA的油的組合物來(lái)說(shuō)也如此。在本文中使用時(shí)，下列縮寫(xiě)用在整個(gè)申請(qǐng)中PUFA指的是多不飽和脂肪酸；LC-PUFA(長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸)指的是具有至少20個(gè)碳原子的PUFA ；HUFA (高度不飽和脂肪酸)指的是具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA ；LC-HUFA (長(zhǎng)鏈高度不飽和脂肪酸)指的是具有至少20個(gè)碳原子和至少3個(gè)雙鍵的多不飽和脂肪酸。本發(fā)明不限于特定的LC-PUFA。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，LC-PUFA具有至少3個(gè)雙鍵。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，LC-PUFA具有至少4個(gè)雙鍵。本發(fā)明的益處對(duì)雙鍵數(shù)量增大的LC-PUFA來(lái)說(shuō)甚至更加顯著，因?yàn)樽詣?dòng)加熱的易感性隨著雙鍵數(shù)量的增加而增大。LC-PUFA 可以是 ω -3LC-PUFA 或 ω -6LC-PUFA。
LC-PUFA 包括例如二高-Y -亞麻酸(dihomo-Y-Iinolenic acid, DGLA, 20:3 ω -6)；花生四烯酸(ARA，20:4co-6);二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA, 20:5 ω-3)；二十二碳五烯酸(DPA，22:5co-3，或 DPA 22:5，ω-6),二十二碳六烯酸(DHA : 22:6 ω -3)。優(yōu)選的LC-PUFA包括花生四烯酸(ARA)和二十二碳六烯酸(DHA)。特別地，ARA是優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的組合物包含細(xì)胞。該細(xì)胞可以是任何含有LC-PUFA和/或生產(chǎn)了 LC-PUFA的細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，細(xì)胞是微生物細(xì)胞(微生物)。微生物細(xì)胞的例子為酵母細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞和藻類細(xì)胞。優(yōu)選真菌，優(yōu)選 Mucorales 目的真菌。所述真菌的例子為 Mortierella、Phycomyces> Blakeslea、Aspergillus、Thraustochytrium、Pythium 或 Entomophthora。優(yōu)選的花生四烯酸(ARA)來(lái)源來(lái)自Mortierella alpina。藻類可以是甲藻(dinofIagellate)和/或包括Porphyridium、Nitschia 或 Crypthecodinium(例如 Crypthecodinium cohnii)。酵母包括Pichia 屬或 Saccharomyces 屬，例如 Pichia ciferrii。細(xì)菌可以是 Propionibacterium屬的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含Mortierella屬的真菌，優(yōu)選包含Mortierella alpina 種的真菌，其中優(yōu)選 LC-PUFA 是 ARA 或 DGLA。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含Thraustochytriales目的真菌,例如Thraustochytrium 屬或 Schizochytrium 屬，其中優(yōu)選 LC-PUFA 是 DHA 和 / 或 EPA。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含Crypthecodinium屬的藻類,優(yōu)選包含Crypthecodinium cohnii 種的藻類，其中優(yōu)選 LC-PUFA 是 DHA。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，細(xì)胞是植物細(xì)胞。細(xì)胞可以是轉(zhuǎn)基因植物的植物細(xì)胞。合適的植物和種子在例如WO 2005/083093,WO 2008/009600 和 W02009/130291 中有所描述，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合于此。本發(fā)明中可以使用的其他植物和種子在例如 WO 2008/100545,WO 2008/124806,WO 2008/124048,WO 2008/128240,WO 2004/071467、WO 2005/059130中公開(kāi)，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合于此。種子可以是(轉(zhuǎn)基因)大豆種子或(轉(zhuǎn)基因)油菜種子。植物可以是(轉(zhuǎn)基因)大豆植物或(轉(zhuǎn)基因)油菜植物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，植物是十字花(Brassicaceae)科的(轉(zhuǎn)基因)植物，例如 Brassica 屬、Camelina 屬、Melanosinapis 屬、Sinapis 屬、Arabidopsis 屬，例如如下的屬和種Brassica alba、Brassica carinata、Brassica hirta、Brassica napus、Brassicaa rap a ssp.、Sinapis arvensis、Brassica juncea、Brassica juncea var.juncea、Brassica juncea var. crispifolla、Brassica juncea var. foliosa、Brassicanigra、Brassica sinapioides、Camelina sativa、Melanosinapis communis> Brassicaoleracea 或 Arabidopsis thaliana。組合物可以是包含LC-PUFA的任何生物質(zhì)。優(yōu)選地，組合物是通過(guò)本文所公開(kāi)的干燥方法得到或可得到的(干燥的)組合物。組合物可以是包含微生物和LC-PUFA的微生物生物質(zhì)。優(yōu)選的微生物和LC-PUFA是上面所提到的那些。在本發(fā)明一個(gè)可能的實(shí)施方式中，包含根據(jù)本發(fā)明的微生物(微生物細(xì)胞)的組合物是通過(guò)下列方法得到的，該方法包括加熱含有微生物細(xì)胞的發(fā)酵液(也被稱為巴氏消毒或滅菌)，使微生物細(xì)胞脫水(例 如通過(guò)過(guò)濾)，然后在上述方法中干燥微生物細(xì)胞。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，經(jīng)脫水的微生物細(xì)胞在干燥之前進(jìn)行造粒(優(yōu)選通過(guò)擠出造粒)。優(yōu)選的造粒(例如擠出造粒)在低于25°C的溫度下進(jìn)行。一種優(yōu)選的工藝在W097/037032中有所描述，其通過(guò)引用結(jié)合于此。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，組合物包含含有LC-PUFA的種子和/或組合物可以是種子的形式，所述種子在40°C下的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T.)大于24小時(shí)。優(yōu)選地，種子是上面所提到的植物的種子。已發(fā)現(xiàn)，保持低的損傷種子的百分比，將使得T. I. T.增大。優(yōu)選地，小于12%的種子是完全損傷的種子，優(yōu)選小于8%、優(yōu)選小于5%、優(yōu)選小于3%的種子是完全損傷的種子。優(yōu)選地，小于6 %的種子是顯著生的種子(distinctly green seed),優(yōu)選小于4%、優(yōu)選小于2%、優(yōu)選小于1%的種子是顯著生的種子。優(yōu)選地，小于O. 5%的種子是經(jīng)加熱的種子，優(yōu)選小于O. 3%、優(yōu)選小于O. I %、優(yōu)選小于O. 05%的種子是經(jīng)加熱的種子。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，小于8 %的種子是完全損傷的種子，小于4%的種子是顯著生的種子，小于O. 3%的種子是經(jīng)加熱的種子。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，小于5%的種子是完全損傷的種子，小于2%的種子是顯著生的種子，小于O. I %的種子是經(jīng)加熱的種子。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，小于3%的種子是完全損傷的種子，小于1%的種子是顯著生的種子，小于O. 05%的種子是經(jīng)加熱的種子。在本文中使用時(shí)，完全損傷的種子、顯著生的種子和經(jīng)加熱的種子的百分比是根據(jù)the Official Grain Grading Guide. 2001 of the Canadian Grain Commission(用于油菜和油菜籽)來(lái)測(cè)定。具有優(yōu)選百分比的完全損傷的種子、顯著生的種子和經(jīng)加熱的種子的種子可以在收獲之后通過(guò)種子的適當(dāng)選擇而得到。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了包含LC-PUFA的種子，其中完全損傷的種子、顯著生的種子和/或經(jīng)加熱的種子的百分比如上面所公開(kāi)的。優(yōu)選地，相對(duì)于種子中脂肪酸的總量，該種子包含至少5wt. %、優(yōu)選至少IOwt. %、優(yōu)選至少15wt. %、優(yōu)選至少20wt. %的LC-PUFA(例如如本文所述的LC-PUFA)。優(yōu)選地，相對(duì)于種子中脂肪酸的總量，該種子包含至少5wt. %、優(yōu)選至少IOwt. %、優(yōu)選至少 15wt. %、優(yōu)選至少 20wt. %的 co-6LC_PUFA。優(yōu)選地，相對(duì)于種子中脂肪酸的總量，該種子包含至少5wt. %、優(yōu)選至少IOwt. %、優(yōu)選至少15wt. %、優(yōu)選至少20wt. %的ARA0優(yōu)選地，相對(duì)于種子中脂肪酸的總量，該種子包含至少5wt. %、優(yōu)選至少IOwt. %、優(yōu)選至少 15wt. %、優(yōu)選至少 20wt. %的 co-3LC_PUFA。
優(yōu)選地，相對(duì)于種子中脂肪酸的總量，該種子包含至少5wt. %、優(yōu)選至少IOwt. %、優(yōu)選至少15wt. %、優(yōu)選至少20wt. %的DHA0優(yōu)選地，基于種子中脂肪酸的總量，該種子包含小于2wt. %的芥酸，優(yōu)選小于Iwt. %,優(yōu)選小于 O. 5wt. %。根據(jù)本發(fā)明的組合物在進(jìn)一步使用和/或加工之前，可以適當(dāng)?shù)貎?chǔ)存。有利的是，組合物在低于10°C、優(yōu)選低于5°C、優(yōu)選低于(TC、優(yōu)選低于零下5°C、優(yōu)選低于零下10°c的溫度下儲(chǔ)存。儲(chǔ)存溫度沒(méi)有特定的下限。通常，組合物在高于零下30°C的溫度下儲(chǔ)存。如果組合物包含種子或者組合物是種子的形式，優(yōu)選地，該種子的含濕量小于15wt. %,例如小于12wt. %,例如小于IOwt. %,例如小于9. 5wt. %,例如高于6wt. %,例如高于7wt. % ,例如高于8wt. %。含濕量可以例如介于6-15wt. %之間,例如介于7-12wt. % 之間，例如介于8-lOwt. %之間。優(yōu)選的含濕量可以通過(guò)如上所述的使種子干燥而得到。組合物可以儲(chǔ)存任意合適的時(shí)間段。組合物可以例如儲(chǔ)存至少一天，例如至少I周，例如至少2周，例如至少I個(gè)月，例如至少3個(gè)月。儲(chǔ)存時(shí)間沒(méi)有特定的上限。該組合物可以例如儲(chǔ)存少于12個(gè)月，例如少于6個(gè)月。本發(fā)明還涉及用于得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法，該方法包括從根據(jù)本發(fā)明的組合物中或從根據(jù)本發(fā)明的方法得到或可得到的組合物中分離所述LC-PU FA或含有LC-PUFA的油。脂質(zhì)LC-PUFA或含有LC-PUFA的油可以通過(guò)從組合物中萃取LC-PUFA或含有LC-PUFA的油而得到，優(yōu)選地通過(guò)溶劑萃取?？梢允褂萌魏魏线m的溶劑，例如C1,烷基酯(例如乙酸乙酯或乙酸丁酯)、甲苯、Cp3醇(例如甲醇、丙醇)、C3_6烷烴(例如己燒)或超臨界流體(例如液態(tài)CO2或超臨界丙烷)。優(yōu)選地，該溶劑是非極性溶劑，例如C3-C8烷(優(yōu)選己烷)或超臨界流體(優(yōu)選超臨界CO2或超臨界丙烷)。優(yōu)選的萃取過(guò)程在WO 97/037032中有所描述。如果組合物包含種子或組合物是種子的形式，那么LC-PUFA和/或含有LC-PUFA的油可以按下列方法分離。種子和/包含種子的組合物可以被壓碎或壓成薄片。這有助于回收LC-PUFA或含有LC-PUFA的油。隨后，壓碎和/或壓成薄片的種子和/或包含該種子的組合物可以被加熱，例如在高于60°C的溫度下。加熱可以在相對(duì)低的溫度下進(jìn)行。種子和/或包含該種子的組合物可以例如在介于50-900C之間的溫度下加熱，例如介于60-800C之間，優(yōu)選地加熱2-60分鐘的時(shí)間，優(yōu)選5-30分鐘。如果選擇升高的溫度，那么優(yōu)選減少加熱的持續(xù)時(shí)間。種子和/包含種子的組合物可以以高速率加熱。該方法可以例如包括以下列方式加熱種子或包含種子的組合物，其中溫度在小于I分鐘、優(yōu)選小于30秒、優(yōu)選小于20秒的時(shí)間內(nèi)從40°C升至70°C。該方法可以例如包括以下列方式加熱種子或包含種子的組合物，其中溫度在小于I分鐘、優(yōu)選小于30秒，優(yōu)選小于20秒的時(shí)間內(nèi)從40°C升至100°C。根據(jù)本發(fā)明的方法可以包括，通過(guò)使用過(guò)熱蒸汽來(lái)加熱種子和/包含種子的組合物。根據(jù)本發(fā)明的方法可以例如包括，使種子和/包含種子的組合物與過(guò)熱蒸汽接觸。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的方法包括在相對(duì)較高的溫度(例如介于120_160°C之間)下和相對(duì)較短的時(shí)間內(nèi)加熱種子和/包含種子的組合物。該方法可以例如包括，使種子和/包含種子的組合物保持在高于120°C (例如低于160°C )的溫度下小于8分鐘、例如小于5分鐘、例如小于3分鐘、例如小于2分鐘的時(shí)間段。使種子和/包含種子的組合物保持在介于120°C和例如(低于)160°C之間的溫度下至少5秒、例如至少10秒的時(shí)間段。優(yōu)選地，以相對(duì)較高的速率來(lái)冷卻種子和/包含種子的組合物。優(yōu)選地，使種子和/包含種子的組合物的溫度在小于60分鐘、優(yōu)選小于30分鐘、優(yōu)選小于15分鐘的時(shí)間段內(nèi)從最高溫度降低至40°C的溫度。這些方案可以單獨(dú)使用或組合使用。例如，高速率加熱可以與將種子和/包含種子的組合物保持在優(yōu)選的溫度下相對(duì)短的時(shí)間組合和/或與快速冷卻組合。加熱并不限于方法的某一特定階段。加熱可以在粉碎種子(例如壓碎或壓成薄片)之前或之后進(jìn)行。另一方面，本發(fā)明提供了用于加熱含有LC-PUFA的種子的方法，其中按上面所公開(kāi)的來(lái)加熱該種子。油的級(jí)分可以通過(guò)壓榨種子或包含種子的組合物得到。為排出油的級(jí)分而壓榨種子可以通過(guò)使用本領(lǐng)域已知的方法來(lái)進(jìn)行?？梢允褂寐輻U壓榨機(jī)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明包括使用冷卻的壓榨機(jī)(例如螺桿壓榨機(jī))來(lái)壓榨種子或包含種子的組合物以排出油。油的還有的級(jí)分可以通過(guò)從上面所述的壓榨得到的壓濾餅中溶劑萃取而得到。油的提純可以包括脫膠、精煉、脫色(bleaching)和/或脫臭。這些是已知的步驟，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)實(shí)施。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，除臭是在低于200°C的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選低于190°C，優(yōu)選低于185°C。使脫臭溫度降低至低于優(yōu)選的值將改善油的品質(zhì)。本發(fā)明還提供了一種用于得到食品(特別是嬰幼兒配方奶粉)的方法，其包括從根據(jù)本發(fā)明的組合物中得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油，并將所述LC-PUFA或含有所述LC-PUFA的油摻入所述食品中。權(quán)利要求書(shū)中公開(kāi)了其他優(yōu)選的方面、實(shí)施方式和特征。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式和/或方面的優(yōu)選特征和特性在進(jìn)行必要的修正后同樣適用于另一個(gè)實(shí)施方式。在本文中使用時(shí)，LC-PUFA的優(yōu)選的特征和特性適用于本發(fā)明的所有方面和實(shí)施方式中的所有LC-PUFA。通過(guò)參考下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例IMortierella alpina的發(fā)酵液(發(fā)酵8天后得到的)在70°C下巴氏消毒I小時(shí)。過(guò)濾經(jīng)巴氏消毒的發(fā)酵液，得到含濕量為50wt. %的濾餅。在低于15°C的溫度下將濾餅壓碎并擠出。擠出物(直徑為3_)在具有三個(gè)區(qū)的連續(xù)流化床干燥器中干燥至含濕量為7%。在第一區(qū)中，床溫度為32°C，空氣溫度為50°C (丁露點(diǎn)=15V ) ο第一區(qū)床溫度32°C，空氣溫度50°C (T露點(diǎn)=15°C ) 45分鐘第二區(qū)床溫度32°C，空氣溫度35°C (T露點(diǎn)=1°C ) 45分鐘第三區(qū)床溫度15°C，空氣溫度15°C (T露點(diǎn)=I0C ) 30分鐘干燥的生物質(zhì)的含油量為39%。相對(duì)于油中所有脂肪酸的量，ARA的含量為46%。在40°C下所測(cè)的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T. ) :2_天。
對(duì)比實(shí)駘A重復(fù)上述的發(fā)酵和巴氏消毒。使用連續(xù)式脫水機(jī)回收濕細(xì)胞并使其碎裂，隨后通過(guò)熱風(fēng)干燥(熱風(fēng)溫度為120°C )進(jìn)行干燥，用振動(dòng)流化床使其干燥至含濕量為Iwt. %。通過(guò)在流化床中提供室溫的空氣使干燥的細(xì)胞冷卻。ARA和油的含量與實(shí)施例一樣。在40°C下所測(cè)的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T. ) < 12小時(shí)。實(shí)施例2從轉(zhuǎn)基因的Brassica植物中得到含有19%的花生四烯酸(相對(duì)于脂肪酸的總量)的種子，所述轉(zhuǎn)基因的Brassica植物是通過(guò)使用W02008009600中所述的方法轉(zhuǎn)變的。種子的規(guī)格(根據(jù)the Official Grain Grading Guide, 2001 of the CanadianGrain Commission測(cè)定)如下所不顯著生< 2%,完全損傷< 5%。使用流化床干燥器來(lái)干燥含濕量為17wt. %的種子。床溫度為28°C。使用露點(diǎn)為10°C的經(jīng)調(diào)節(jié)的空氣。經(jīng)干燥的種子的含濕量為8. 5wt. %。含油量為35wt. %。在40°C下所測(cè)的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T. ) :14天。


圖I示出了測(cè)定熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T.)的示意圖。
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包含(i)具有至少20個(gè)碳原子的多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)，和(ii)細(xì)胞，該組合物在40°C下的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T. I. T.)大于24小時(shí)。
2.如權(quán)利要求I所述的組合物，其含濕量為l_20wt.%，優(yōu)選為2-15wt. %，優(yōu)選為3-12wt. %，優(yōu)選為 3. 5-10wt. %，優(yōu)選為 4-9wt. V0o
3.如權(quán)利要求I或2所述的組合物，其含油量為至少IOwt.%，例如至少20wt. %，例如至少30wt. %，例如至少40wt. %，例如低于70wt. %，例如低于60wt.
4.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述組合物包含這樣的油，其中基于所述油中所有脂肪酸的量，所述油含有至少IOwt. %、例如至少20wt. %、例如至少30wt. %、例如至少40wt. %的具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA ;基于所述油中所有脂肪酸的量，所述油含有例如低于80wt. %、例如低于70wt. %、例如低于60wt. %的具有至少3個(gè)雙鍵的PUFA0
5.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述LC-PUFA具有至少3個(gè)雙鍵。
6.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述LC-PUFA為ω-3或co-6PUFA。
7.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述LC-PUFA選自由二高-Y-亞麻酸(DGLA，20:3co-6)、花生四烯酸(ARA，20:4 ω-6)、二十碳五烯酸(ΕΡΑ，20:5 ω-3)、二十二碳六烯酸(DHA :22:6 ω-3)、二十二碳五烯酸(DPA，22:5 ω-3，或DPA 22:5，ω-6)組成的組。
8.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述LC-PUFA是ARA或DHA。
9.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述細(xì)胞是微生物細(xì)胞。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述微生物細(xì)胞是酵母細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞或藻類細(xì)胞。
11.如前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述組合物包含Mortierella屬的微生物，優(yōu)選包含Mortierella alpina種的微生物，其中優(yōu)選地，所述LC-PUFA是AM。
12.如權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)所述組合物，其中，所述組合物包含Thraustochytriales 目的微生物，例如 Thraustochytrium 屬或 Schizochytrium 屬的微生物，其中優(yōu)選地，所述LC-PUFA是DHA或EPA。
13.如權(quán)利要求1-10中任意一項(xiàng)所述組合物,其中，所述組合物包含Crypthecodinium屬的微生物，優(yōu)選包含Crypthecodinium cohnii種的微生物,其中優(yōu)選地,所述LC-PUFA是DHA。
14.如權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述組合物，其中，所述細(xì)胞是植物細(xì)胞。
15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中，所述細(xì)胞是轉(zhuǎn)基因植物的植物細(xì)胞。
16.如權(quán)利要求14或15所述的組合物，其中，所述細(xì)胞是十字花科植物的植物細(xì)胞，優(yōu)選是Brassica屬的植物的植物細(xì)胞
17.一種用于干燥包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物的方法，所述方法包括，在低于40°C、優(yōu)選低于35°C、優(yōu)選低于33°C、優(yōu)選低于30°C、優(yōu)選低于25°C的溫度下干燥所述組合物。
18.如權(quán)利要求17所述的用于干燥包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物的方法，所述方法包括，使所述組合物與優(yōu)選具有露點(diǎn)< 15°C、優(yōu)選< 10°C、優(yōu)選< 5°C的經(jīng)調(diào)節(jié)的空氣接觸。
19.如權(quán)利要求17或18所述的方法，其包括使用流化床干燥器來(lái)干燥所述組合物。
20.通過(guò)權(quán)利要求17-19中任意一項(xiàng)所述的方法可得到的組合物。
21.如權(quán)利要求20所述的組合物，其具有如權(quán)利要求2所定義的含濕量。
22.—種用于得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法，所述方法包括，從根據(jù)前面任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物中或從通過(guò)權(quán)利要求17或21中任意一項(xiàng)所述的方法得到或可得到的干燥的組合物中分離LC-PUFA或含有LC-PUFA的油。
23.一種用于得到食品、特別是嬰幼兒配方奶粉的方法，所述方法包括，根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油，然后將所述LC-PUFA或含有所述LC-PUFA的油摻入所述食品中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種包含具有至少20個(gè)碳原子的多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)和細(xì)胞的組合物，該組合物在40℃下的熱誘導(dǎo)時(shí)間(T.I.T.)大于24小時(shí)。本發(fā)明還涉及一種用于干燥包含細(xì)胞和LC-PUFA的組合物的方法，該方法包括在低于40℃的溫度下干燥組合物。
文檔編號(hào)A23D9/007GK102665431SQ201080049979
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2010年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日
發(fā)明者丹尼爾·韋爾科埃爾簡(jiǎn), 亨德里克·路易斯·比杰爾, 克里斯蒂安·左爾 申請(qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司