專利名稱：用于待施用于吞咽困難患者的熱或冷食物和飲料的包含益生菌的即用型增稠劑的制作方法
用于待施用于吞咽困難患者的熱或冷食物和飲料的包含益生菌的即用型增稠劑發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及吞咽困難患者的水化和營養(yǎng)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及包含益生微生物的增稠劑和包含此增稠劑的組合物。益生微生物可以是非復(fù)制的益生微生物,例如生物學(xué)活性的、熱處理的益生微生物。
背景技術(shù)：
吞咽困難是咽下困難癥狀的醫(yī)學(xué)術(shù)語。吞咽困難可以導(dǎo)致影響患者安全吞咽液體或食物的能力的各種問題。
估計(jì)超過15，000，000美國人患有吞咽困難。吞咽困難可以由多種狀況引起，這些狀況可發(fā)生在人的一生中。例如，創(chuàng)傷性腦損傷、腦癱和帕金森氏病可以引起吞咽困難。
當(dāng)未采取適當(dāng)步驟處理吞咽困難時(shí)，患者有誤吸和繼發(fā)吸入性肺炎的高度危險(xiǎn)， 食物或液體不被正確吞咽，最終達(dá)到肺部而非胃。未處理的吞咽困難還可以導(dǎo)致脫水、營養(yǎng)不良和腎衰竭。
為了避免這點(diǎn)，已開發(fā)了滿足吞咽困難患者需求的專門增稠的營養(yǎng)組合物或飲料。
吞咽困難膳食的標(biāo)準(zhǔn)在2002年10月由美國膳食協(xié)會(huì)(American Dietetic Association)公布(“美國國家吞咽困難膳食(National Dysphagia diet) ”，NDD)。
對(duì)增稠食物組合物依賴的必要性限制了現(xiàn)有食物組合物用于吞咽困難患者。
尤其是對(duì)于具有吞咽病癥的患者，必需的是，機(jī)體能夠?qū)τ诘竭_(dá)腸道的營養(yǎng)物完全消化和吸收。功能性的腸道菌群對(duì)于確保自消化的食物恰當(dāng)?shù)匚諣I養(yǎng)是必需的。
此外，期望的是，有可以支持吞咽困難患者的免疫系統(tǒng)的可用組合物。特別地，當(dāng)吞咽困難患者患有由吞咽困難引起的營養(yǎng)不良時(shí)，免疫系統(tǒng)可能被削弱，需要支持。
最后，如果吞咽困難膳食也提供天然且施用安全而無副作用的抗炎化合物，則將是有利的。
因此，本領(lǐng)域需要一種向吞咽困難患者提供營養(yǎng)和飲料的方式，該方式可以允許改善消化道的功能、加強(qiáng)免疫系統(tǒng)和/或提供抗炎作用，同時(shí)易于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，并且理想地在更長的貨架期或增加的溫度下不喪失活性。
本發(fā)明人解決了這一需求。
因此，本發(fā)明的目的是對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的改善，解決上述需求。
本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，他們可以通過獨(dú)立權(quán)利要求的主題達(dá)到這個(gè)目的。從屬權(quán)利要求進(jìn)一步發(fā)展本發(fā)明的想法。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，包含益生微生物的用于施用于吞咽困難患者的食物或飲料的增稠劑滿足上述需要。
因?yàn)橛糜谕萄世щy患者的增稠劑或增稠的食品或飲料通常具有比包含益生菌的酸乳飲品長的貨架期，所以益生菌目前不加入此類組合物中，因?yàn)椴淮_定益生菌的生活力是否可以在延長的貨架期中得到保證。
本發(fā)明人現(xiàn)在能夠證實(shí)，甚至非復(fù)制性益生菌也可以提供益生菌的健康益處，且甚至可以具有提高的益處。
因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是用于施用于吞咽困難患者的組合物的增稠劑，其包含增稠化合物和益生微生物。
組合物可以是例如食物或飲料。增稠劑旨在用于熱或冷組合物。
熱組合物可以具有高于45°C的溫度；而冷組合物可以具有45°C或低于45°C的溫度。
如果加入熱組合物中，那么益生微生物的生活力將降低。對(duì)于超過75 °C的組合物， 幾乎沒有任何活的益生微生物可以在組合物中保留。
增稠化合物可以是任何可以用于增稠基于水的液體組合物的食品級(jí)化合物。如果一種物質(zhì)一般地是被批準(zhǔn)的且被認(rèn)為對(duì)于人消費(fèi)是安全的，則該物質(zhì)是食品級(jí)的。
例如，增稠劑可以是例如淀粉，例如玉米淀粉。淀粉可以是改性的。改性淀粉通過物理、酶促或化學(xué)處理淀粉以改變淀粉的特性而制備。使淀粉改性的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。淀粉可以進(jìn)行改性，以增加其對(duì)抗過度的熱、酸、剪切的穩(wěn)定性；改變其質(zhì)地；減少或增加粘度，延長或縮短膠凝化時(shí)間，或增加粘性_穩(wěn)定性(visco-stability)。
增稠劑可以快速混合而不結(jié)塊，不隨時(shí)間持續(xù)增稠，且可以幫助確保食物和飲料的足夠稠度而不改變味道。
益生微生物可以以任何形式存在于本發(fā)明的增稠劑或組合物中。
如果益生菌是增稠劑的一部分，那么可能優(yōu)選的是，益生菌以干形式例如冷凍干燥、風(fēng)干或凍干形式提供。
增稠劑可以由增稠化合物和益生微生物組成。
本發(fā)明還涉及包含增稠化合物和益生微生物的組合物。此類組合物可以是增稠的食物組合物或飲料。
這些組合物可以具有稀的、花蜜狀(nectar)、蜂蜜狀(honey)或湯匙稠的 (spoon-thick)液體稠度。這些稠度應(yīng)按照2002年10月美國膳食協(xié)會(huì)公布的吞咽困難膳食標(biāo)準(zhǔn)(“美國國家吞咽困難膳食”NDD)所定義的來理解。
本發(fā)明的增稠組合物可以含有83%以上，例如90%以上的游離水。游離水是滿足最低限度液體需求所必需的。一般地，吞咽困難患者有不足的水化。
本發(fā)明的組合物包含需要增稠至適于吞咽困難患者的液體組合物。例如，該組合物可以選自增稠的水、增稠的乳品飲料、增稠的汁、增稠的咖啡和增稠的谷類制品。
本發(fā)明的組合物可以部分包含或僅包含非復(fù)制的益生微生物。
本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，例如就免疫加強(qiáng)效應(yīng)而言和/或就抗炎效應(yīng)而言，非復(fù)制益生微生物甚至可以比復(fù)制性益生微生物更有效。
這是令人驚訝的，因?yàn)橐嫔１欢x為“當(dāng)以足夠量施用時(shí)，對(duì)宿主賦予健康益處的活微生物”(FA0/WH0指南)。絕大多數(shù)的出版文獻(xiàn)涉及活益生菌。此外，有幾項(xiàng)研究調(diào)查了由非復(fù)制性細(xì)菌遞送的健康益處，并且其中大多數(shù)指出，益生菌的滅活(例如通過熱處理)會(huì)導(dǎo)致?lián)Q的益生菌的健康益處的喪失(Rachmilewitz, D.等人， 2004, Gastroenterology 126 :520_528 ；Castagliuolo 等人，2005, FEMS Immunol. Med. Microbiol. 43 197-204 ；Gill, H. S.和 K. J. Rutherfurd,2001, Br. J. Nutr. 86 285-289 ； Kaila，M.等人，1995，Arch. Dis. Child 72:51-53·)。某些研究顯示被殺死的益生菌可以保留某些健康作用(Rachmilewitz,D.等人，2004,Gastroenterology 126 :520_528 ;Gill, H. S.和 K. J. Rutherfurd, 2001, Br. J. Nutr. 86 :285_289)，但明顯地，活益生菌迄今為止在本領(lǐng)域中被公認(rèn)為更有效。
根據(jù)本發(fā)明的組合物或增稠劑可以包含任何有效量的益生微生物，例如相應(yīng)于約106-1012cfu/g干重的量。
益生微生物可以是非復(fù)制性益生微生物。
“非復(fù)制”益生微生物包括已經(jīng)熱處理的益生細(xì)菌。這包括滅活的、死的、無生活力的和/或作為碎片例如DNA、代謝物、細(xì)胞質(zhì)化合物和/或細(xì)胞壁物質(zhì)存在的微生物。
“非復(fù)制”意指通過經(jīng)典鋪平板方法無法檢測到活細(xì)胞和/或菌落形成單位。經(jīng)典鋪平板方法在微生物學(xué)教科書中有總結(jié)James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden. 2005. Modern food microbiology.第7版，Springer Science,New York,N. Y.第 790頁。一般地，活細(xì)胞的不存在可以如下顯示在用不同濃度的細(xì)菌制劑(‘非復(fù)制’樣品)接種和在合適條件下孵育(有氧和/或缺氧大氣，至少24小時(shí))后，在瓊脂平板上無可見菌落或在液體生長培養(yǎng)基中無增加的濁度。
為了本發(fā)明的目的，益生菌定義為“對(duì)宿主的健康(health)或康健(well-being) 具有有利作用的微生物細(xì)胞制劑或微生物細(xì)胞組分”。(Salminen S, Ouwehand A. Benno Y.等人“Probiotics :how should they be defined，，Trends Food Sci. Technol. 1999 10107-10)。
使用非復(fù)制益生微生物的可行性提供了幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。在嚴(yán)重免疫受損患者中，活益生菌的使用可能因發(fā)展菌血癥的潛在危險(xiǎn)而在異常的情況下受限制。非復(fù)制益生菌可以使用而無任何問題。
此外，非復(fù)制益生微生物的提供允許熱重構(gòu)同時(shí)保留健康益處。
本發(fā)明的組合物或增稠劑包含足以至少部分地產(chǎn)生健康益處的量的益生微生物和/或非復(fù)制益生微生物。足以完成這點(diǎn)的量定義為“治療有效劑量”。對(duì)于這個(gè)目的有效的量將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多因素，例如患者的重量和一般健康狀態(tài)，以及食物基質(zhì)的影響。
在預(yù)防應(yīng)用中，根據(jù)本發(fā)明的組合物或增稠劑施用于對(duì)病癥敏感或有罹患病癥危險(xiǎn)的消費(fèi)者，其施用量足以至少部分地降低發(fā)展該病癥的危險(xiǎn)。此量定義為“預(yù)防有效劑量”。再次，精確量取決于許多因素例如患者的健康狀態(tài)和重量，以及食物基質(zhì)的影響。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠適當(dāng)?shù)卣{(diào)整治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量。
一般而言，本發(fā)明的組合物或增稠劑含有治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量的益生微生物和/或非復(fù)制益生微生物。
一般地，治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量在約0，005mg-1000mg益生微生物和/ 或非復(fù)制益生微生物/日劑量的范圍內(nèi)。
就數(shù)值量而言，“短時(shí)間高溫”處理的非復(fù)制微生物可以以對(duì)應(yīng)于IO4-IO12等價(jià)cfu/g干組合物或增稠劑的量存在于組合物或增稠劑中。明顯地，非復(fù)制微生物不形成菌落，因此，這個(gè)術(shù)語應(yīng)理解為得自104-1012cfu/g復(fù)制細(xì)菌的非復(fù)制微生物量。這包括滅活的、無生活力的或死的、或作為碎片例如DNA或細(xì)胞壁或細(xì)胞質(zhì)化合物存在的微生物。換言之，組合物或增稠劑含有的微生物的數(shù)量以該數(shù)量的微生物的菌落形成能力(cfu)來表達(dá)，就如同所有微生物是活的一樣，而不管它們事實(shí)上是否是非復(fù)制性的，例如滅活的或死的、成碎片的、或是這些狀態(tài)的任何或所有的混合物。
優(yōu)選地，非復(fù)制微生物以等價(jià)于104-109cfu/g干組合物或增稠劑的量，更加優(yōu)選以等價(jià)于105-109cfu/g干組合物或增稠劑的量存在。
益生菌可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法而成為非復(fù)制的。
目前可用于使益生菌菌株成為非復(fù)制性的技術(shù)通常有熱處理、Y-輻射、UV光或化學(xué)試劑(福爾馬林、多聚甲醛)的使用。
優(yōu)選使用在食品工業(yè)的工業(yè)化環(huán)境下相對(duì)易于應(yīng)用的技術(shù)來使益生菌成為非復(fù)制性的。
目前上市的含有益生菌的大多數(shù)產(chǎn)品是在其生產(chǎn)過程中被熱處理過的。因此，有利的是，能夠連同所生產(chǎn)的產(chǎn)品一起或至少以相似方式熱處理益生菌，同時(shí)益生菌保留或改善其對(duì)于消費(fèi)者的有利特性或甚至獲得新的有利特性。
然而，益生微生物通過熱處理的滅活在文獻(xiàn)中一般與益生活性的至少部分喪失相關(guān)。
本發(fā)明人目前已驚訝地發(fā)現(xiàn)，致使益生微生物非復(fù)制(例如通過熱處理)，并不導(dǎo)致益生菌健康益處的喪失，而是——相反地——可以增強(qiáng)已有的健康益處且甚至生成新的健康益處。
因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是組合物或增稠劑，其中非復(fù)制益生微生物已通過熱處理而成為非復(fù)制性的。
此熱處理可以在至少71. 5°C執(zhí)行至少I秒。
可以使用長期熱處理或短期熱處理。
在工業(yè)規(guī)模中，目前通常的短期熱處理例如UHT樣熱處理是優(yōu)選的。這類熱處理減少細(xì)菌載量，并且減少加工時(shí)間，從而減少對(duì)營養(yǎng)物的破壞。
本發(fā)明人首次證實(shí)，高溫短時(shí)間熱處理的益生微生物，無論其初始性質(zhì)如何，均顯示出抗炎免疫譜/性質(zhì)。特別地，通過該熱處理，可以發(fā)展新的抗炎譜/性質(zhì)，或增強(qiáng)已有的抗炎譜/性質(zhì)。
因此，目前可以通過使用對(duì)應(yīng)于一般工業(yè)上適用的熱處理的特定熱處理參數(shù)，生成具有抗炎免疫譜的非復(fù)制益生微生物，即使活的對(duì)應(yīng)微生物不是抗炎菌株。
因此，例如，熱處理可以是在約71. 5_150°C高溫處理約1_120秒。高溫處理可以是高溫/短時(shí)間(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
可以對(duì)益生微生物實(shí)施在約71. 5_150°C約1_120秒的短期高溫處理。
更優(yōu)選可以對(duì)微生物實(shí)施在約90_140°C，例如90_120°C，約1-30秒的短期高溫處理。
這種高溫處理致使微生物至少部分地非復(fù)制。
高溫處理可以在正常大氣壓下執(zhí)行，但也可以在高壓下執(zhí)行。一般壓力范圍是1-50巴，優(yōu)選1-10巴，更加優(yōu)選2-5巴。明顯地，優(yōu)選的是，當(dāng)應(yīng)用熱時(shí)，在液體或固體的培養(yǎng)基中對(duì)益生菌進(jìn)行熱處理。待應(yīng)用的理想壓力因此將取決于提供的微生物所在的組合物或增稠劑的性質(zhì)和使用的溫度。
高溫處理可以在約71. 5-150°C、優(yōu)選約90_120°C、更加優(yōu)選約120_140°C的溫度范圍中執(zhí)行。
高溫處理可以執(zhí)行約1-120秒、優(yōu)選約1-30秒、更加優(yōu)選約5_15秒的短時(shí)間。
該給定的時(shí)幀是指對(duì)益生微生物施加該給定溫度的時(shí)間。注意，取決于提供微生物的組合物的性質(zhì)和量且取決于使用的加熱器的構(gòu)造，熱應(yīng)用時(shí)間可以不同。
然而，一般地，本發(fā)明的組合物或增稠劑和/或微生物通過高溫短時(shí)間(HTST)處理、巴氏瞬間滅菌(flash pasteurization)、或超高溫(UHT)處理來進(jìn)行處理。
UHT處理是通過將組合物在超過135°C (275 °F )的溫度(這是殺死奶中的細(xì)菌孢子所需的溫度)加熱約1-10秒的短時(shí)間，涉及至少部分地滅菌組合物的超高溫加工或超熱處理(兩者均縮寫為UHT)。例如，使用超過135°C的溫度以這種方式加工奶，允許在該必要的保持時(shí)間(至2-5秒)中細(xì)菌載量的減少，從而使得連續(xù)流操作成為可能。
存在2種王要類型的UHT系統(tǒng)直接和間接系統(tǒng)。在直接系統(tǒng)中，通過蒸汽注射或蒸汽輸注，處理產(chǎn)品；而在間接系統(tǒng)中，使用板式換熱器、管式換熱器或刮面式換熱器來熱處理產(chǎn)品。UHT系統(tǒng)的組合可以在產(chǎn)品制備過程中的任何步驟或多個(gè)步驟應(yīng)用。
HTST處理定義如下(高溫/短時(shí)間):設(shè)計(jì)以達(dá)到奶中活微生物數(shù)目的5-log減少，即，殺死99，9999%的活微生物，的巴氏滅菌方法。這被認(rèn)為足以破壞幾乎所有酵母、霉菌和常見腐敗細(xì)菌，并且還確保對(duì)常見致病性耐熱生物產(chǎn)生足夠破壞。在HTST過程中，將奶加熱至 71. 7V (161 0F ) 15-20 秒。
巴氏瞬間滅菌法是易腐飲料如果汁和蔬菜汁、啤酒和乳制品的熱巴氏滅菌方法。 它在填充到容器內(nèi)之前完成，以便殺死腐敗微生物，使得產(chǎn)品更安全且延長其貨架期。液體以受控的連續(xù)流進(jìn)行移動(dòng)，同時(shí)被施加于71. 50C (160 0F )-74°C (165 0F )的溫度約15-30秒。
為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“短時(shí)間高溫處理”應(yīng)包括例如高溫短時(shí)間(HTST)處理、 UHT處理和巴氏瞬間滅菌。
因?yàn)榇藷崽幚硖峁┝司哂懈纳频目寡鬃V的非復(fù)制益生菌，所以本發(fā)明的組合物或增稠劑可以用于炎性病癥的預(yù)防或治療中。
可以通過本發(fā)明的組合物或增稠劑治療或預(yù)防的炎性病癥并無特別的限制。例如，它們可以選自急性炎癥例如敗血癥；燒傷；和慢性炎癥例如炎性腸病，例如Crohn氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、隱窩炎(pouchitis);壞死性小腸結(jié)腸炎；皮膚炎癥例如UV或化學(xué)品誘導(dǎo)的皮膚炎癥、濕疫、反應(yīng)性皮膚(reactive skin);腸激惹綜合征；眼炎癥；變態(tài)反應(yīng)、哮喘；及其組合。
如果長期熱處理用于致使益生微生物非復(fù)制，那么此熱處理可以在約70_150°C的溫度范圍中執(zhí)行約3分鐘-2小時(shí)，優(yōu)選在約80-140°C的范圍中約5分鐘-40分鐘。
雖然現(xiàn)有技術(shù)一般教導(dǎo)，就發(fā)揮其益生特性而言，通過長期熱處理致使非復(fù)制的細(xì)菌通常比活細(xì)胞效力低，但本發(fā)明人能夠證實(shí)與其活性對(duì)應(yīng)物比較，熱處理的益生菌在刺激免疫系統(tǒng)方面更佳。
本發(fā)明還涉及包含益生微生物的組合物或增稠劑，所述益生微生物已經(jīng)通過在至少約70°C熱處理至少約3分鐘而是非復(fù)制性的。
非復(fù)制益生菌的免疫增強(qiáng)效應(yīng)通過體外免疫譜分析而得到證實(shí)。所用的體外模型使用來自人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)的細(xì)胞因子譜分析，該模型在本領(lǐng)域中被公認(rèn)為是用于測試免疫調(diào)節(jié)化合物的標(biāo)準(zhǔn)模型(Schultz等人,2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ;Taylor 等人，2006, Clinical and Experimental Allergy,36,1227-1235 ； Kekkonen 等人，2008, World Journal of Gastroenterology, 14,1192-1203)。
該體外PBMC分析法已被幾個(gè)作者/研究組用于例如根據(jù)益生菌的免疫譜，即其抗炎或促炎特征，來分類益生菌(Kekkonen等人,2008, World Journal of Gastroenterology, 14,1192-1203)。例如，該分析法已顯示允許預(yù)測益生菌候選物在腸道結(jié)腸炎小鼠模型中的抗炎效應(yīng)(Foligne, B.等人,2007, World J. Gastroenterol. 13 236-243)。此外，該分析法被常規(guī)用作臨床試驗(yàn)中的讀出手段，并且已經(jīng)被證實(shí)導(dǎo)致與臨床結(jié)果相一致的結(jié)果(Schultz 等人，2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ；Taylor 等人，2006, Clinical and Experimental Allergy, 36,1227-1235)。
變態(tài)反應(yīng)疾病在過去數(shù)十年一直在穩(wěn)步地增加，目前被WHO視為流行病。一般地， 變態(tài)反應(yīng)被認(rèn)為起因于免疫系統(tǒng)的Thl和Th2應(yīng)答之間的失衡，導(dǎo)致強(qiáng)烈地偏向Th2介質(zhì)的產(chǎn)生。因此，通過恢復(fù)免疫系統(tǒng)的Thl和Th2臂之間的合適平衡，可以減輕、下調(diào)或防止變態(tài)反應(yīng)。這提示減少Th2應(yīng)答或增強(qiáng)(至少瞬時(shí)地)Thl應(yīng)答的必要性。后者將是免疫加強(qiáng)應(yīng)答的特征，通常伴隨例如更高水平的IFNy , TNF-α和IL-12。(Kekkonen等人，2008， World Journal of Gastroenterology, 14,1192-1203 ；Viljanen M.等人，2005, Allergy, 60,494-500)
因此，本發(fā)明的組合物或增稠劑允許治療或預(yù)防與受損的(compromised)免疫防御有關(guān)的病癥。
相應(yīng)地，可以通過本發(fā)明的組合物或增稠劑治療或預(yù)防的與受損的免疫防御有關(guān)的病癥并無特別的限制。
例如，它們可以選自感染，特別是細(xì)菌、病毒、真菌和/或寄生物感染；吞噬細(xì)胞缺陷；低至嚴(yán)重的免疫抑制水平，例如由應(yīng)激或免疫抑制藥物、化療或放療誘導(dǎo)的那些 ’天然的低免疫活性的免疫系統(tǒng)狀態(tài)，例如新生兒的免疫系統(tǒng)；變態(tài)反應(yīng)；及其組合。
本發(fā)明中所述的組合物或增稠劑還允許增強(qiáng)患者對(duì)疫苗特別是口服疫苗的應(yīng)答。
任何量的非復(fù)制微生物都是有效的。然而，通常優(yōu)選至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地所有的益生菌是非復(fù)制的。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所有的微生物是非復(fù)制的。
因此，在本發(fā)明的組合物或增稠劑中，至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少 98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99. 9%、最理想所有的益生菌可以是非復(fù)制的。
所有的益生微生物都可以用于本發(fā)明的目的。
例如，益生微生物可以選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬 (Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)或其組合，例如長雙歧桿菌 (Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、動(dòng)物雙歧桿菌 (Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infant is)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium ado lescent is)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、約氏乳桿菌(Lactobacillus j ohnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、雙乙酸乳球菌 (Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)、保加利亞乳桿菌 (Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌 (Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和 / 或其混合物。
本發(fā)明的組合物或增稠劑可以例如包含益生微生物，所述的益生微生物選自長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約氏乳桿菌LaU副干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、羅伊氏乳桿菌DSM17983、 羅伊氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC 15、乳酸乳球菌NCC 2287或其組合。
所有這些菌株或是在布達(dá)佩斯條約(Budapest treaty)下保藏和/或是可商購獲得的。
在布達(dá)佩斯條約下保藏的菌株如下
長雙歧桿菌NCC 3001ATCC BAA-999長雙歧桿菌NCC 2705:CNCM 1-2618短雙歧桿菌NCC 2950CNCM 1-3865乳雙歧桿菌NCC 2818:CNCM 1-3446副千酪乳桿菌NCC 2461:CNCM 1-2116鼠李糖乳桿菌NCC 4007:CGMCC 1.3724嗜熱鏈球菌NCC 2019CNCM 1-1422嗜熱鏈球菌NCC 2059CNCM 1-4153乳酸乳球菌NCC 2287CNCM 1-4154干酪乳桿菌NCC 4006CNCM 1-1518干酪乳桿菌NCC 1825ACA-DC 6002嗜酸乳桿菌NCC 3009ATCC 700396保加利亞乳桿菌NCC 15:CNCM 1-1198約氏乳桿菌LalCNCM 1-1225羅伊氏乳桿菌DSM17983DSM17983羅伊氏乳桿菌ATCC55730ATCC55730大腸桿菌Nissle 1917:DSM 6601
本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解它們可以自由地組合本文描述的所有本發(fā)明特征，而不脫離所公開的本發(fā)明的范圍。
根據(jù)下列實(shí)施例和附圖，本發(fā)明的進(jìn)一步的優(yōu)點(diǎn)和特征是顯而易見的。
附圖簡述
圖IA和B表示用“短時(shí)高溫”處理的益生菌的抗炎免疫譜的增強(qiáng)。
圖2表示非抗炎的益生菌株在用“短時(shí)高溫”處理后變成抗炎的，即表現(xiàn)出顯著的體外抗炎免疫譜。
圖3A和B表示商購可獲得的產(chǎn)品中使用的益生菌株在用“短時(shí)高溫”處理后體外表現(xiàn)出增強(qiáng)的或新的抗炎免疫譜。
圖4A和B表不乳品起子菌株(diary starter strains)(即Lcl起子菌株)在高溫?zé)崽幚砗篌w外表現(xiàn)出增強(qiáng)的或新的抗炎免疫譜。
圖5表示非抗炎的益生菌株在用HTST處理后體外表現(xiàn)出抗炎免疫譜。
圖6 :使用活的和熱處理(140°C，15秒)形式的益生菌株和乳品起子菌株產(chǎn)生的 PBMC數(shù)據(jù)(IL-12p40、IFN-Y、TNF-a、IL-10)的主成分分析。每個(gè)點(diǎn)表示活的或熱處理的一種菌株(通過其NCC號(hào)或名稱標(biāo)識(shí))。
圖7表示活的和熱處理(85°C，20分鐘)的菌株的IL-12p40/IL_10比例?？偟膩碚f，相比本發(fā)明的“短時(shí)高溫”處理，85°C熱處理20分鐘引起IL-12p40/IL-10比例的增加 (圖 1、2、3、4 和 5)。
圖8表示用熱處理細(xì)菌刺激的人PBMCs的體外細(xì)胞因子分泌的增加。
圖9表示在用鹽水攻擊(challenged)的OVA-致敏小鼠(陰性對(duì)照)、用OVA攻擊的OVA-致敏小鼠(陽性對(duì)照)和用OVA攻擊且用熱處理或活的短雙歧桿菌NCC2950處理的OVA-致敏小鼠中觀察到的腹瀉強(qiáng)度的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果以腹瀉強(qiáng)度百分?jǐn)?shù)顯示(由4個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)計(jì)算出的平均值土SEM)，100%的腹瀉強(qiáng)度對(duì)應(yīng)于陽性對(duì)照組(變應(yīng)原致敏和攻擊) 發(fā)生的癥狀。實(shí)施例
實(shí)施例I :
方法學(xué)
細(xì)菌制劑
活的益生菌對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的健康益處通常被認(rèn)為是菌株特異性的。體外誘導(dǎo)高水平IL-10和/或誘導(dǎo)低水平促炎細(xì)胞因子的益生菌(PBMC分析法)已經(jīng)顯示是有效的體內(nèi)抗炎菌株(Foligne, B.等人，2007, World J. Gastroenterol. 13 :236_243)。
使用數(shù)種益生菌株來研究熱處理的益生菌的抗炎特性。這些菌株是長雙歧桿菌 NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、副干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)和大腸桿菌Nissle。還測試了數(shù)種起子培養(yǎng)菌株，包括一些商業(yè)用于生產(chǎn)Nestl6Lcl發(fā)酵產(chǎn)品的菌株嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、保加利亞乳桿菌NCC 15和乳酸乳球菌NCC 2287。
細(xì)菌細(xì)胞是在5-15L生物反應(yīng)器中在針對(duì)每種菌株優(yōu)化的條件下培養(yǎng)的。所有的一般細(xì)菌生長培養(yǎng)基均是可用的。這類培養(yǎng)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。當(dāng)pH調(diào)至5. 5 時(shí)，連續(xù)加入30%堿溶液(NaOH或Ca(OH)2)。當(dāng)足夠時(shí)，通過用CO2氣體處理頂部空間來維持缺氧條件。大腸桿菌是在標(biāo)準(zhǔn)的需氧條件下培養(yǎng)的。
通過離心(5，000Xg，4°C )收集細(xì)菌細(xì)胞,并且重懸于足夠體積的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中，以便達(dá)到終濃度約109-10lclcfu/mL。部分制劑用15%甘油凍存于_801。另一部分細(xì)胞通過以下進(jìn)行熱處理
-超高溫140°C，15秒；通過間接蒸汽注射。
-高溫短時(shí)(HTST):74°C、90°C和120°C，15秒，通過間接蒸汽注射。
-水浴中的長時(shí)低溫(850C，20分鐘)。
熱處理后，將樣品凍存于-80°c，直至使用。
細(xì)菌制劑的體外免疫譜分析
評(píng)估活的和熱處理的細(xì)菌制劑的免疫譜(即體外誘導(dǎo)人血細(xì)胞分泌特定細(xì)胞因子的能力)。從血液過濾器分離人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)。通過細(xì)胞密度梯度分離后， 收集單核細(xì)胞并且用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。然后將細(xì)胞重懸于補(bǔ)充有10 %胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)、1% L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和 0. I %慶大霉素(Sigma)的Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM, Sigma)中。然后將PBMCs (7 X IO5個(gè)細(xì)胞/孔)與活的和熱處理的細(xì)菌(相當(dāng)于7 X IO6Cfu/孔)在48孔板中孵育36小時(shí)。活的和熱處理的細(xì)菌的作用是在來自8位單獨(dú)供體的PBMCs上測試的，分為兩個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)。孵育36小時(shí)后，將培養(yǎng)板冷凍并且保持在-20°C，直至細(xì)胞因子測量。細(xì)胞因子譜分析是在活的細(xì)菌和它們的熱處理的對(duì)應(yīng)物中平行進(jìn)行的(即在相同批次的PBMCs 上在相冋試驗(yàn)中)。
按照供應(yīng)商的說明，通過ELISA(R&D DuoSet Human IL-10, BD OptEIA Human IL12p40, BD OptEIA Human TNFa，BD OptEIA Human IFN-γ)測定 36 小時(shí)孵育后細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中細(xì)胞因子(IFN-Y、IL-12p40、TNF-α和IL-10)的水平。IFN-Y、IL_12p40 和TNF-α是促炎細(xì)胞因子，而IL-10是有力的抗炎介質(zhì)。結(jié)果是以4位單獨(dú)供體的平均值(pg/mL)+/-SEM表示的，并且是各用4位供體進(jìn)行的兩個(gè)單獨(dú)試驗(yàn)的代表。計(jì)算每個(gè)菌株的IL-12p40/IL-10的比值，作為體內(nèi)抗炎作用的預(yù)測值(Foligne, B.等人，2007，World J. Gastroenterol. 13 :236_243)。
將通過ELISA(參見上面)測定的每個(gè)菌株的細(xì)胞因子數(shù)值(pg/mL)轉(zhuǎn)移至 BioNumerics v5. 10 軟件(Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgium)中。對(duì)該組數(shù)據(jù)進(jìn)行了主成分分析(PCA,維技術(shù)(dimensioning technique))。該分析包括減去特征值的平均值和除以特征值的方差(Subtraction of the averages over the characters and division by the variances over the characters were included in this analysis)。
結(jié)果
超高溫(UHT) /高溫短時(shí)(HTST)-樣處理產(chǎn)生的抗炎譜
將在研的益生菌株進(jìn)行一系列的熱處理(超高溫(UHT)、高溫短時(shí)(HTST)、和85°C 20分鐘)，并且在體外將它們的免疫譜與活細(xì)胞的免疫譜進(jìn)行比較。當(dāng)與人PBMC(

圖1、2、3、4和5)溫育時(shí)，活的微生物(益生菌和/或乳品起子培養(yǎng)物)誘導(dǎo)不同水平的細(xì)胞因子產(chǎn)生。這些微生物的熱處理以溫度依賴方式改變了 PBMC產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平?！岸虝r(shí)高溫”處理(120°C或140°C，15秒)產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復(fù)制細(xì)菌(圖1、2、3和4)。 事實(shí)上，UHT-樣處理的菌株(140°C，15秒)誘導(dǎo)了更少的促炎細(xì)胞因子(TNF-α、IFN-Y、 IL-12p40)，而維持或誘導(dǎo)額外的IL-10產(chǎn)生(相比活的對(duì)應(yīng)物)。相比活細(xì)胞，任何UHT-樣處理的菌株產(chǎn)生的IL-12p40/IL-10比例都更低(圖1、2、3和4)。對(duì)于以HTST-樣處理法處理的細(xì)菌，該觀察也是對(duì)的，所述的HTST-樣處理即120°C進(jìn)行15秒(圖1、2、3和4)，或 74°C和90°C進(jìn)行15秒(圖5)。熱處理(UHT-樣或HTST-樣處理)對(duì)益生菌株(圖1、2、3 和5)和乳品起子培養(yǎng)物(圖4)的體外免疫譜具有相似的影響。對(duì)活的和熱處理(140°C， 15秒)的益生菌和乳品起子菌株產(chǎn)生的PBMC數(shù)據(jù)的主成分分析表明，活菌株均沿著χ軸分布，說明菌株在體外展示出非常不同的免疫譜，促炎細(xì)胞因子的從低(左側(cè))到高(右側(cè)) 的誘導(dǎo)者。熱處理的菌株聚集在圖的左側(cè)，這表明熱處理的菌株誘導(dǎo)了少得多的促炎細(xì)胞因子(圖6)。通過比較，85°C熱處理20分鐘的細(xì)菌比活細(xì)胞誘導(dǎo)更多的促炎細(xì)胞因子和更少的IL-10，從而導(dǎo)致更高的IL-12p40/IL-10比例(圖7)。
UHT-樣和HTST-樣處理增強(qiáng)或產(chǎn)生抗炎譜。
UHT和HTST處理的菌株表現(xiàn)出抗炎譜，不管它們各自最初的免疫譜(活細(xì)胞)如何。已知具有體內(nèi)抗炎并且體外表現(xiàn)出抗炎譜的益生菌株(長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)在“短時(shí)高溫”處理后表現(xiàn)出增強(qiáng)的體外抗炎譜。如圖I所示，UHT-樣處理的雙歧桿菌屬菌株的IL-12p40/IL-10比例低于活對(duì)應(yīng)細(xì)菌的比例，從而表明UHT-樣處理的樣品的改善的抗炎譜。更引人注目地，在非抗炎性活菌株中也證實(shí)了通過UHT-樣和HTST-樣處理可以產(chǎn)生抗炎譜?；畹氖罄钐侨闂U菌NCC 4007和副干酪乳桿菌NCC 2461表現(xiàn)出體外高的IL-12p40/IL_10比例(圖2和5)。兩種活菌株顯示出不能防止小鼠中TNBS-誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。在“短時(shí)高溫”處理(UHT或HTST)后鼠李糖乳桿菌NCC 4007和副干酪乳桿菌NCC 2461誘導(dǎo)的IL-12p40/IL_10比例急劇下降，達(dá)到與雙歧桿菌屬菌株獲得的同樣低的水平。這些低的IL-12p40/IL-10比例的原因是低水平的IL-12p40產(chǎn)生并且組合無變化(鼠李糖乳桿菌NCC 4007)或急劇誘導(dǎo)的IL-10分泌(副干酪乳桿菌NCC 2461)(圖2)。結(jié)果-UHT-樣和HTST-樣熱處理可以增強(qiáng)活微生物的抗炎譜/特性(例如長雙歧桿菌NCC 2705、長雙歧桿菌NCC 3001、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)-UHT-樣和HTST-樣熱處理可以使非抗炎的活微生物產(chǎn)生抗炎譜/特性(例如，鼠李糖乳桿菌NCC 4007、副干酪乳桿菌NCC 2461、乳品起子嗜熱鏈球菌NCC 2019)-從可商購獲得的產(chǎn)品中分離的菌株(包括益生的大腸桿菌菌株)也證實(shí)了抗炎譜/特性(圖3A & B)。UHT/HTST-樣處理的影響對(duì)于所有測試的益生菌和乳品起子是類似的，例如乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬。UHT/HTST-樣處理已經(jīng)應(yīng)用于數(shù)種表現(xiàn)出不同體外免疫譜的乳桿菌、雙歧桿菌和鏈球菌。UHT/HTST-樣處理后的所有菌株比它們的活對(duì)應(yīng)菌株都誘導(dǎo)了更少的促炎細(xì)胞因子(圖1、2、3、4、5和6)，這證實(shí)了 UHT/HTST-樣處理對(duì)這些所得非復(fù)制細(xì)菌的免疫特性的影響可以概括至所有益生菌，特別是乳桿菌和雙歧桿菌以及特定的大腸桿菌菌株，和所有乳品起子培養(yǎng)物，特別是鏈球菌、乳球菌和乳桿菌。實(shí)施例2:方法學(xué)細(xì)菌制劑五種益生菌株用于研究非復(fù)制益生菌的免疫增強(qiáng)特性3種雙歧桿菌(長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、短雙歧桿菌NCC2950)和2種乳桿菌(副干酪乳桿菌NCC2461,鼠李糖乳桿菌NCC4007)。細(xì)菌細(xì)胞生長在MRS上，于37°C分批發(fā)酵16-18小時(shí)，無pH控制。將細(xì)菌細(xì)胞旋轉(zhuǎn)沉降(5，000Xg，4°C )，并且重懸于磷酸鹽緩沖液中，之后在鹽水中稀釋以達(dá)到終濃度約10E10cfu/mLo將長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、副干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007在85°C水浴中熱處理20分鐘。將短雙歧桿菌NCC2950在90°C水浴中熱處理30分鐘。將熱處理的細(xì)菌懸浮液等分并且凍存于_80°C直至使用?；罴?xì)菌在PBS-甘油15%中存于_80°C直至使用。細(xì)菌制劑的體外免疫譜分析評(píng)估活的和熱處理的細(xì)菌制劑的免疫譜/特性(即，體外誘導(dǎo)人血細(xì)胞分泌特定細(xì)胞因子的能力)。從血液過濾器分離人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)。通過細(xì)胞密度梯度分離后，收集單核細(xì)胞并且用Hank平衡鹽溶液洗漆兩次。然后將細(xì)胞重懸于補(bǔ)充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)、1% L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和O. I %慶大霉素(Sigma)的Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM, Sigma)中。然后將PBMCs (7 X IO5個(gè)細(xì)胞/孔)與活的和熱處理的細(xì)菌(相當(dāng)于7 X IO6Cfu/孔)在48孔板中培養(yǎng)36小時(shí)?；畹暮蜔崽幚淼募?xì)菌的作用是在來自8位單獨(dú)供體的PBMCs上測試的，分為兩個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)。培養(yǎng)36小時(shí)后，將培養(yǎng)板冷凍并且保持在-20°C，直至細(xì)胞因子測量。細(xì)胞因子譜分析是在活的細(xì)菌和它們的熱處理對(duì)應(yīng)細(xì)菌中平行進(jìn)行的(即在相同批次PBMCs上在相同試驗(yàn)中)。按照供應(yīng)商的說明，通過ELISA(R&D DuoSet Human IL-10, BD OptEIA HumanIL12p40, BD OptEIA Human TNF, BD OptEIA Human IFN- y )測定培養(yǎng) 36 小時(shí)后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-12p40、TNF-α 和 IL-10)的水平。IFN-Y、IL_12p40 和TNF-α是促炎細(xì)胞因子，而IL-IO是有力的抗炎介質(zhì)。結(jié)果是以4位單獨(dú)供體的平均值(pg/mL) +/-SEM表示的，并且是各用4位供體進(jìn)行的兩個(gè)單獨(dú)試驗(yàn)的代表?；畹暮蜔崽幚淼亩屉p歧桿菌NCC2950在防止變應(yīng)性腹瀉中的體內(nèi)作用變應(yīng)性腹瀉的小鼠模型用于測試短雙歧桿菌NCC2950的Thl促進(jìn)作用(BrandtE. B等人.JCI 2003; 112 (II) :1666-1667)。致敏(以14天的間隔，于第O和14天，2次腹膜內(nèi)注射卵白蛋白(OVA)和硫酸鋁鉀)后，將雄性Balb/c小鼠用OVA 口服攻擊6次(第27、29、32、34、36、39天)，導(dǎo)致短暫的臨床癥狀(腹瀉)和免疫參數(shù)變化(總IgE、OVA特異性IgE、小鼠肥大細(xì)胞蛋白酶I即MMCP-I的血漿濃度)。在OVA致敏前(第_3、-2、_1、0天和第11、12、13和14天)和攻擊期內(nèi)(第23至39天)將活的或90°C熱處理30分鐘的短雙歧桿菌NCC2950通過管飼法施用4天。使用每日細(xì)菌劑量約IO9菌落形成單位(cfu)或等價(jià)的cfu/小鼠。結(jié)果熱處理后對(duì)“促炎”細(xì)胞因子分泌的誘導(dǎo)體外評(píng)估了熱處理的細(xì)菌菌株刺激人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)分泌細(xì)胞因子的能力。用熱處理的細(xì)菌刺激PBMCs后基于四種細(xì)胞因子的免疫譜與在相同的體外分析試驗(yàn)中由活細(xì)菌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫譜進(jìn)行比較。將熱處理的制劑鋪板并且評(píng)估不存在任何存活的細(xì)菌計(jì)數(shù)。熱處理的細(xì)菌制劑鋪板后不產(chǎn)生菌落。當(dāng)與人PBMCs溫育時(shí)，活的益生菌誘導(dǎo)了不同且菌株依賴性水平的細(xì)胞因子產(chǎn)生(圖8)。益生菌的熱處理，與它們的活對(duì)應(yīng)細(xì)菌比較，改變了 PBMCs產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平。熱處理的細(xì)菌比它們的活對(duì)應(yīng)細(xì)菌誘導(dǎo)了更多的促炎細(xì)胞因子(TNF-α、IFN-Y、IL-12p40)。通過比較，熱處理的細(xì)菌比活細(xì)胞誘導(dǎo)了相似或更低量的IL-10。這些數(shù)據(jù)表明熱處理的細(xì)菌比它們的活對(duì)應(yīng)細(xì)菌更能刺激免疫系統(tǒng)，并且因此更能加強(qiáng)減弱的免疫防御。換言之，體外數(shù)據(jù)說明了熱處理后細(xì)菌菌株的增強(qiáng)的免疫加強(qiáng)作用。為了說明熱處理的短雙歧桿菌NCC2950對(duì)免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)作用(相比活細(xì)胞)，在變應(yīng)性腹瀉的動(dòng)物模型中測試了活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (菌株A)。相比陽性對(duì)照組，用熱處理的短雙歧桿菌NCC2950處理后腹瀉強(qiáng)度顯著且一致地下降(41.1% ±4. 8),而用活的短雙歧桿菌NCC2950處理后腹 寫強(qiáng)度僅降低20±28.3%。這些結(jié)果證實(shí)，熱處理的短雙歧桿菌NCC2950比其活的對(duì)應(yīng)細(xì)菌表現(xiàn)出對(duì)變應(yīng)性腹瀉的增強(qiáng)的保護(hù)作用。結(jié)果顯示，熱處理后提高了益生菌增強(qiáng)免疫防御的能力。實(shí)施例3-5:食物增稠劑食物改性淀粉(玉米)。益生菌109cfu/g約氏乳桿菌Lal增稠的水成分水、食物改性淀粉(玉米)、糖、天然調(diào)味料、磷酸重量摩爾滲透壓濃度(mOsm/kg水)139游離水92-94%70_80kcal/客25mg 鈉 / 客17_19mg碳水化合物/客221_226ml 水 / 客益生菌IO9Cfu熱處理的(75°C，20分鐘)長雙歧桿菌NCC 3001/客實(shí)施例3增稠的乳品飲料成分2%減脂奶、食物改性淀粉(玉米)、糖、乳蛋白質(zhì)濃縮物、磷酸三鈣重量摩爾滲透壓濃度(mOsm/kg水)香草400原始330游離水花蜜狀86%蜂蜜狀84%170_190kcal/客5g脂肪/客180mg 鈉 / 客24-28g碳水化合物/客8g蛋白質(zhì)/客202_206ml 水 / 客益生菌IO9Cfu UHT處理的約氏乳桿菌Lal/客打印輸出(電子表格原件)(該頁不作為國際申請(qǐng)的一部分并且不作國際申請(qǐng)頁計(jì))
權(quán)利要求
1.用于待施用于吞咽困難患者的熱或冷組合物的增稠劑，其包含增稠化合物和益生微生物。
2.依照權(quán)利要求I的增稠劑，其中所述增稠化合物是淀粉，例如玉米淀粉或改性玉米淀粉，和/或所述益生微生物以干燥形式存在。
3.包含依照權(quán)利要求I或2中任一項(xiàng)的增稠劑的組合物，其中例如依照美國國家吞咽困難膳食的標(biāo)準(zhǔn)，所述組合物具有稀的、花蜜狀的、蜂蜜狀的或湯匙稠的液體稠度。
4.依照權(quán)利要求3的組合物，其中所述組合物選自增稠的水、增稠的乳品飲料、增稠的汁、增稠的咖啡和增稠的谷類制品。
5.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其中所述益生微生物包含非復(fù)制益生微生物。
6.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其包含對(duì)應(yīng)于約IO6-IO12Cfu的量的益生微生物。
7.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其中所述非復(fù)制益生微生物是已經(jīng)通過熱處理，優(yōu)選通過在至少71. 5°C高溫處理至少I秒，而成為非復(fù)制的。
8.依照權(quán)利要求7的組合物或增稠劑，其中所述熱處理是在約71.5-150°C高溫處理約 1-120秒，并且優(yōu)選是高溫/短時(shí)間(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
9.依照權(quán)利要求8的組合物或增稠劑用于在炎性病癥的預(yù)防或治療中使用。
10.依照權(quán)利要求7的組合物或增稠劑，其中所述熱處理在約70-150°C的溫度范圍中執(zhí)行約3分鐘-2小時(shí)，優(yōu)選在約80-140°C的范圍中約5分鐘-40分鐘。
11.依照權(quán)利要求10的組合物或增稠劑用于在預(yù)防或治療與受損的免疫防御有關(guān)的病癥中使用。
12.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其中至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地所有的益生菌是非復(fù)制的。
13.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其中所述益生微生物選自雙歧桿菌、乳桿菌、丙酸桿菌或其組合，例如長雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、短雙歧桿菌、 嬰兒雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、約氏乳桿菌、植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、乳酸乳球菌、嗜熱鏈球菌、 乳酸乳球菌、雙乙酰乳球菌、乳脂乳球菌、保加利亞乳桿菌、瑞士乳桿菌、德氏乳桿菌、大腸桿菌、和/或其混合物。
14.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其中所述益生微生物選自長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約氏乳桿菌LaU副干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、羅伊氏乳桿菌DSM17983、 羅伊氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC 15、乳酸乳球菌NCC 2287、或其組合。
15.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物或增稠劑，其含有約0，005mg-1000mg非復(fù)制微生物/日劑量。
全文摘要
本發(fā)明涉及吞咽困難患者的水化和營養(yǎng)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及包含益生微生物的增稠劑和包含此增稠劑的組合物。該益生微生物可以是非復(fù)制的益生微生物，例如生物學(xué)活性的熱處理的益生微生物。
文檔編號(hào)A23L1/05GK102939093SQ201080031154
公開日2013年2月20日 申請(qǐng)日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日
發(fā)明者A·梅賽尼爾, S·努特恩, G·普里烏特 申請(qǐng)人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司