專利名稱：一種應(yīng)用米根霉降解pla的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物法降解聚乳酸的方法，屬于環(huán)境生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的石油基塑料在自然環(huán)境中很難被降解，人們對這些“白色污染”的處理主要 通過焚燒和填埋，而這兩種方法都會對環(huán)境造成破壞。同時，石油能源日益告急，為了應(yīng)對 這些不可生物降解的石油基塑料產(chǎn)品所帶來的環(huán)境和能源問題，人們正尋求生物質(zhì)的可生 物降解的材料。PLA屬于生物可降解脂肪族聚酯，單體為乳酸。PLA在環(huán)境中的降解可大致 劃分為兩階段，第一階段是在以非生物條件(光、壓力、水、氧氣和熱等)為主的影響下發(fā)生 形態(tài)上的改變，如褪色、脆化、破碎和屈光度的變化等，表面變白可以認為是聚合物開始水 解的信號；第二階段則主要依靠微生物進行徹底的降解作用，最終轉(zhuǎn)化為CO2和H20。研究人員已經(jīng)篩選得到一些對PLA有降解能力的菌種，主要屬于假諾卡氏菌科及 其相關(guān)的屬種擬無枝酸菌屬(Amycolatopsisi)、糖絲菌屬(Saccharithrix)、倫茨菌屬 (Lentzea)、鏈狀特異壁菌屬(Streptoalloteichus)、擬孢囊菌屬(Kibdelosporangium)。 然而，篩選得到真菌降解PLA尤其霉菌的報道還很少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生物法降解聚乳酸(PLA)的方法，是將米根霉添加于含 PLA的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。所述米根霉(lihizopus oryzae)購買于美國農(nóng)業(yè)研究菌種保藏中心 (Agricultural Research Service Culture Collection, NRRL 1526)。所述米根霉的接種量為2-10%，優(yōu)選5%。所述PLA含量優(yōu)選0.5%。所述培養(yǎng)基組成為酵母浸膏，100；MgSO4 · 7H20, 200 ；NaCl, 100 ；CaCl2 · 2H20, 20 ； FeSO4 · H20,10 ；Na2MoO4 · 2Η20，0· 5 ；Na2WO4 · 2Η20，0· 5 ；MnSO4,0. 5 ；K2HPO4,1600 ；KH2PO4, 200 ； (NH4)2S04,1000 ；pH 7. 1。本發(fā)明首次將米根霉添加于富含PLA的培養(yǎng)基中從而實現(xiàn)了 PLA的生物法降解， 開拓了米根霉的應(yīng)用領(lǐng)域，應(yīng)用生物法降解PLA具有環(huán)境友好、節(jié)能環(huán)保等優(yōu)點。


圖1米根霉在基本培養(yǎng)基和以PLA為唯一碳源的基本培養(yǎng)基中的生長情況·米根霉在以PLA為唯一碳源的基本培養(yǎng)基中·米根霉在基本培養(yǎng)基中具體實施方法材料和方法種子培養(yǎng)基(g/L蒸餾水)葡萄糖，40 ； (NH4)2S04，4 ；Corn steep Iiguar, 3. Oml ； KH2PO4,1 ；MgSO4 · 7Η20，0· 25 ；ZnSO4 · 7Η20，2· 2X10—3 ；FeSO4 · 7Η20，0· 01 ；瓊脂，0· 1。
基本培養(yǎng)基M(mg/L 蒸餾水)酵母浸膏，100 ；MgSO4 · 7H20, 200 ；NaCl, 100 ； CaCl2 · 2H20, 20 ；FeSO4 · H20,10 ；Na2MoO4 · 2Η20，0· 5 ；Na2WO4 · 2Η20，0· 5 ；MnSO4, 0. 5 ；K2HPO4, 1600 ；KH2PO4, 200 ； (ΝΗ4) 2S04，1000 ；pH 7. 1。以PLA為唯一碳源的基本培養(yǎng)基M+PLA 基本培養(yǎng)集中紅添加0. 5%的PLA顆粒。PLA的稱重PLA在添加到培養(yǎng)基中進行降解之前，75°C烘干24h稱重，降解培養(yǎng)結(jié) 束后，水洗、75 °C烘干24h再次稱重。菌體生長濃度的測定日本島津uvmini-1240分光光度計，在600nm處測定吸光值。實施例1米根霉種子活化培養(yǎng)方法從斜面挑取菌落接種到種子培養(yǎng)基，30°C、200rpm培養(yǎng)2天。實施例2米根霉在以PLA為唯一碳源的基本培養(yǎng)基中生長取R. oryzae種子活化培養(yǎng)液5ml于無菌離心管，8000rpm離心5min后加5ml 無菌水懸浮，重復(fù)1次后分別接種到含玻璃珠的M和M+PLA(顆粒0.5% )中，裝液量 100ml/500ml搖瓶，30°C、200rpm培養(yǎng)。24h取樣測定OD 600篩選能夠以PLA為唯一碳源較 好生長的菌株。圖1顯示的是R.oryZae在M和M+PLA(顆粒0.5%)中的生長情況。另外， R. oryzae在M+PLA中生長后劃線馬鈴薯培養(yǎng)基培養(yǎng)后菌落形態(tài)發(fā)生很大變化。實施例3米根霉對PLA降解性能的測定取菌株活化培養(yǎng)液5ml于無菌離心管，8000rpm離心5min后加5ml無菌水懸浮，重 復(fù)1次后分別接種到M和M+PLA(顆粒0. 5% )，裝液量100ml/500ml搖瓶，30°C、200rpm培 養(yǎng)35天，稱重顯示PLA降解后質(zhì)量減少0. 07g,降解率為14%。
權(quán)利要求
1.一種應(yīng)用米根霉降解PLA的方法，是將米根霉(lihizopus oryzae)添加于含PLA的 培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
2.權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，米根霉為NRRL1526。
3.權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，米根霉添加量為2%-10%。
4.權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，米根霉添加量為5%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種應(yīng)用米根霉降解PLA的方法，屬于環(huán)境生物技術(shù)領(lǐng)域。將米根霉添加于富含PLA的培養(yǎng)基中從而實現(xiàn)了PLA的生物法降解，開拓了米根霉的應(yīng)用領(lǐng)域。應(yīng)用生物法降解PLA具有環(huán)境友好特性，節(jié)能環(huán)保，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C12R1/845GK102120962SQ20101058206
公開日2011年7月13日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月10日
發(fā)明者周景文, 堵國成, 林娟, 陳堅 申請人:江南大學