專利名稱：一種蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢測(cè)水質(zhì)遺傳毒性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水質(zhì)毒性的檢測(cè)方法，具體涉及一種蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢測(cè)水質(zhì) 遺傳毒性的方法。
背景技術(shù)：
為了保障飲水安全，降低環(huán)境惡化給飲用水水質(zhì)帶來的威脅，人們常采用各種方 法對(duì)水質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以有效的掌握飲用水引起的健康風(fēng)險(xiǎn)。微核試驗(yàn)是檢測(cè)染色體畸變的重要方法之一，自1982年由Degressi等建立以來， 以其簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于對(duì)水源、土壤、大氣等環(huán)境中化學(xué)有毒物質(zhì)和環(huán) 境污染物的致突變性檢測(cè)。早在1986年國(guó)家環(huán)境保護(hù)局就將蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢測(cè)技術(shù) 列入了《環(huán)境檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》用于水環(huán)境檢測(cè)技術(shù)。研究表明微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Ames試驗(yàn)有 一定的相關(guān)性，且所誘發(fā)的微核率在一定范圍內(nèi)存在著劑量-效應(yīng)關(guān)系，適于定量化評(píng)價(jià) 水質(zhì)毒性?，F(xiàn)有評(píng)價(jià)技術(shù)的缺點(diǎn)但大多數(shù)微核試驗(yàn)只是采用污染指數(shù)定量評(píng)價(jià)水質(zhì)毒性， 毒性反應(yīng)不夠直觀，毒性等級(jí)劃分有一定的主觀性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有水質(zhì)遺傳毒性檢測(cè)方法的不足，提供了一種蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢 測(cè)水質(zhì)遺傳毒性的方法，該方法將Cr6+作為標(biāo)準(zhǔn)毒性物質(zhì)，在評(píng)價(jià)水質(zhì)遺傳毒性時(shí)以Cr6+的 濃度表示水質(zhì)的遺傳毒性，實(shí)現(xiàn)了水質(zhì)毒性的定量化，而且檢測(cè)結(jié)果更加直觀、明確，易于 統(tǒng)一，為水質(zhì)毒性定量化評(píng)價(jià)提供了有力的支持。本發(fā)明是通過以下措施實(shí)現(xiàn)的
本發(fā)明選擇Cr6+作為標(biāo)準(zhǔn)毒性物質(zhì)，六價(jià)鉻離子是世界衛(wèi)生組織致癌物名單中的一 種，在生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中屬于毒理指標(biāo)，限值為0. 05mg/L，在地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也 有不同等級(jí)的限值，因此用Cr6+濃度表示水質(zhì)毒性結(jié)果易于統(tǒng)一，其操作為首先，選擇鉻 離子濃度范圍，選擇原則為能夠引起不同數(shù)量的微核數(shù)量，然后用不同濃度的鉻離子溶液 對(duì)蠶豆根尖進(jìn)行處理，再通過微核試驗(yàn)得到鉻離子對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核率的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然 后用同樣的方法對(duì)待測(cè)水樣進(jìn)行蠶豆根尖微核試驗(yàn)，將所得的微核率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得 到用鉻離子濃度表示的水樣毒性，這種方法避免了其他實(shí)驗(yàn)因素所產(chǎn)生的影響，使水質(zhì)毒 性更加準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果更易于統(tǒng)一。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下步驟
一種蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢測(cè)水質(zhì)遺傳毒性的方法，其特征是至少包括以下步驟
(1)以松滋青皮豆為指示生物，通過浸種、催芽，得初生根為1. 5cm 2cm長(zhǎng)的松滋 青皮豆種子；
(2)用不同濃度的Cr6+溶液分別對(duì)松滋青皮豆種子的根尖進(jìn)行處理，然后經(jīng)根尖細(xì) 胞修復(fù)、固定、染色步驟后，對(duì)根尖進(jìn)行鏡檢，計(jì)算不同濃度Cr6+溶液處理的細(xì)胞微核千分 率；(3)以Cr6+濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞微核千分率為縱坐標(biāo)，繪制Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分 率的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(4)采用同樣的方法對(duì)經(jīng)待測(cè)水樣處理過的松滋青皮豆進(jìn)行微核試驗(yàn)，計(jì)算細(xì)胞微 核千分率，將待測(cè)水樣所得的細(xì)胞微核千分率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到Cr6+濃度表示的待 測(cè)水樣的水質(zhì)毒性。上述方法中，步驟(2)的具體操作為用不同濃度的Cr6+溶液分別對(duì)松滋青皮豆種 子的根尖處理5-7h，處理后將松滋青皮豆種子分別用去離子水浸洗干凈，對(duì)根尖細(xì)胞修復(fù) 22h 24h，然后從根尖頂端切下Icm的幼根，加入卡諾氏固定液固定24_48h，最后用孚爾根 染色法染色5-6h，在生物顯微鏡下對(duì)根尖細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，計(jì)算不同濃度Cr6+溶液處理的細(xì) 胞微核千分率。上述步驟(2)中，優(yōu)選的，對(duì)根尖處理6h，對(duì)根尖細(xì)胞修復(fù)24h，根尖加卡諾氏固定 液固定24h、染色5h。上述步驟(1)中，浸種時(shí)間為24h 36h，催芽時(shí)間為48_72h。上述步驟(1)中，優(yōu)選的，浸種時(shí)間為24h，催芽時(shí)間為60h，松滋青皮豆種子的初 生根為1. 5cm。
本發(fā)明的有益效果是選擇Cr6+為標(biāo)準(zhǔn)毒性物質(zhì)，通過Cr6+對(duì)微核率的標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn) 對(duì)水質(zhì)毒性的定量化評(píng)價(jià)，本發(fā)明的方法能更加直觀、準(zhǔn)確的檢測(cè)水質(zhì)的遺傳毒性，結(jié)果易 于統(tǒng)一，重現(xiàn)性好，能夠?qū)λ|(zhì)污染狀況做出判斷，為突發(fā)性水質(zhì)污染和水廠的水處理技術(shù) 提供支持，降低由于飲用水暴露導(dǎo)致的人類致癌風(fēng)險(xiǎn)。


圖1為實(shí)施例1中Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分率的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是為 了解釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。本發(fā)明所用的鉻離子溶液均是采用重鉻酸鉀配制而成的。實(shí)施例1
本具體實(shí)施例采用如下步驟
(1)選擇松滋青皮豆作為指示生物；
(2)通過浸種24h，催芽60h,種子的初生根長(zhǎng)至1.5cm后，在Cr6+濃度0-0. 015mg/L 的范圍內(nèi)取5個(gè)濃度點(diǎn)分別對(duì)根尖進(jìn)行處理6h，這5個(gè)濃度點(diǎn)的Cr6+濃度分別為Omg/L、 0. 025mg/L、0. 05mg/L、0. Img/L、0. 15mg/L ；將處理后的種子用去離子水浸洗凈后對(duì)根尖細(xì) 胞修復(fù)24h，之后從根尖頂端切下Icm的幼根，加卡諾氏固定液固定24h，最后經(jīng)孚爾根染色 法染色5h后，在生物顯微鏡下對(duì)根尖細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，Cr6+濃度從小到大所得的細(xì)胞微核千 分率分別是 0. 25%，4. 25%，7. 75%，10. 33%，12. 67% ；
(3)以Cr6+濃度為橫坐標(biāo)，微核千分率為縱坐標(biāo)，繪制Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分率的標(biāo) 準(zhǔn)曲線，如圖1所示；
(4)取日常城市自來水進(jìn)行對(duì)蠶豆根尖實(shí)驗(yàn)，所得水樣產(chǎn)生的細(xì)胞微核千分率是 2. 33%。，該水樣對(duì)蠶豆的毒性作用大小相當(dāng)于0. 014mg/L的Cr6+的作用效果。實(shí)施例2本具體實(shí)施例采用如下步驟
(1)選擇松滋青皮豆作為指示生物；
(2)通過浸種36h，催芽48h，種子的初生根長(zhǎng)至2cm后，在Cr6+濃度0-0.015mg/L的范圍 內(nèi)取5個(gè)濃度點(diǎn)分別對(duì)根尖進(jìn)行處理5h，這5個(gè)濃度點(diǎn)的Cr6+濃度分別為0mg/L、0. 025mg/ L、0. 05mg/L、0. Img/L、0. 15mg/L ；將處理后的種子用去離子水浸洗凈后對(duì)根尖細(xì)胞修復(fù) 22h，之后從根尖頂端切下Icm的幼根，加卡諾氏固定液固定48h，最后經(jīng)孚爾根染色法染色 6h后，在生物顯微鏡下對(duì)根尖細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，Cr6+濃度從小到大所得的細(xì)胞微核千分率分 別是 0. 25%，4. 26%，7. 78%，10. 38%，12. 70% ；
(3)以Cr6+濃度為橫坐標(biāo)，微核千分率為縱坐標(biāo)，繪制Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分率的標(biāo) 準(zhǔn)曲線；
(4)取日常城市水廠的進(jìn)廠水進(jìn)行對(duì)蠶豆根尖實(shí)驗(yàn)，所得水樣產(chǎn)生的細(xì)胞微核千分率 是3%。，該水樣對(duì)蠶豆的毒性作用大小相當(dāng)于0. 015mg/L的Cr6+的作用效果。 實(shí)施例3
本具體實(shí)施例采用如下步驟
(1)選擇松滋青皮豆作為指示生物；
(2)通過浸種24h，催芽50-72h，種子的初生根長(zhǎng)至1.5cm后，在Cr6+濃度0-0. 015mg/ L的范圍內(nèi)取5個(gè)濃度點(diǎn)分別對(duì)根尖進(jìn)行處理6h，這5個(gè)濃度點(diǎn)的Cr6+濃度分別為Omg/L、 0. 025mg/L、0. 05mg/L、0. Img/L、0. 15mg/L ；將處理后的種子用去離子水浸洗凈后對(duì)根尖細(xì) 胞修復(fù)24h，之后從根尖頂端切下Icm的幼根，加卡諾氏固定液固定24h，最后經(jīng)孚爾根染色 法染色5h后，在生物顯微鏡下對(duì)根尖細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，Cr6+濃度從小到大所得的細(xì)胞微核千 分率分別是 0. 25%，4. 26%，7. 77%，10. 35%，12. 69% ；
(3)以Cr6+濃度為橫坐標(biāo)，微核千分率為縱坐標(biāo)，繪制Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分率的標(biāo) 準(zhǔn)曲線；
(4)取日常城市水廠的工藝出水進(jìn)行對(duì)蠶豆根尖實(shí)驗(yàn)，所得水樣產(chǎn)生的細(xì)胞微核千分 率是3. 75%。，該水樣對(duì)蠶豆的毒性作用大小相當(dāng)于0. 022mg/L的Cr6+的作用效果。
權(quán)利要求
1.一種蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢測(cè)水質(zhì)遺傳毒性的方法，其特征是至少包括以下步驟(1)以松滋青皮豆為指示生物，通過浸種、催芽，得初生根為1.5cm 2cm長(zhǎng)的松滋青皮 豆種子；(2)用不同濃度的Cr6+溶液分別對(duì)松滋青皮豆種子的根尖進(jìn)行處理，然后經(jīng)根尖細(xì)胞 修復(fù)、固定、染色步驟后，對(duì)根尖進(jìn)行鏡檢，計(jì)算不同濃度Cr6+溶液處理的細(xì)胞微核千分率；(3)以Cr6+濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞微核千分率為縱坐標(biāo)，繪制Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分率 的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(4)采用同樣的方法對(duì)經(jīng)待測(cè)水樣處理過的松滋青皮豆進(jìn)行微核試驗(yàn)，計(jì)算細(xì)胞微核 千分率，將待測(cè)水樣所得的細(xì)胞微核千分率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到Cr6+濃度表示的待測(cè) 水樣的水質(zhì)毒性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是步驟(2)的具體操作為用不同濃度的Cr6+溶 液分別對(duì)松滋青皮豆種子的根尖處理5-7h，處理后將松滋青皮豆種子分別用去離子水浸洗 干凈，對(duì)根尖細(xì)胞修復(fù)2 Mh，然后從根尖頂端切下Icm的幼根，加入卡諾氏固定液固定 24-48h,最后用孚爾根染色法染色5-6h，在生物顯微鏡下對(duì)根尖細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，計(jì)算不同濃 度Cr6+溶液處理的細(xì)胞微核千分率。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是步驟(2)中，對(duì)根尖處理他，對(duì)根尖細(xì)胞修 復(fù)Mh，根尖加卡諾氏固定液固定Mh、染色證。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征是步驟(1)中，浸種時(shí)間為24h 36h，催芽時(shí)間為48-7 。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是步驟(1)中，浸種時(shí)間為Mh，催芽時(shí)間為 60h，松滋青皮豆種子的初生根為1. 5cm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蠶豆根尖微核試驗(yàn)檢測(cè)水質(zhì)遺傳毒性的方法，包括將松滋青皮豆浸種、催芽，得初生根為1.5cm～2cm長(zhǎng)的種子；用不同濃度的Cr6+溶液分別對(duì)種子根尖進(jìn)行處理，然后經(jīng)根尖細(xì)胞修復(fù)、固定、染色步驟后，對(duì)根尖進(jìn)行鏡檢，計(jì)算不同濃度Cr6+溶液處理的細(xì)胞微核千分率；繪制Cr6+濃度對(duì)細(xì)胞微核千分率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后采用同樣的方法得待測(cè)水樣的細(xì)胞微核千分率，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得到Cr6+濃度表示的待測(cè)水樣的水質(zhì)毒性。本發(fā)明選擇Cr6+為標(biāo)準(zhǔn)毒性物質(zhì)，通過Cr6+對(duì)微核率的標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)對(duì)水質(zhì)毒性的定量化評(píng)價(jià)，本發(fā)明的方法能更加直觀、準(zhǔn)確的檢測(cè)水質(zhì)的遺傳毒性，結(jié)果易于統(tǒng)一，重現(xiàn)性好。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK102094063SQ20101058078
公開日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者孫韶華, 宋艷, 張諾, 賈瑞寶 申請(qǐng)人:濟(jì)南市供排水監(jiān)測(cè)中心