專利名稱：一種活性生物復(fù)合劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種降解有機污染物的活性劑及其制備方法，尤其是涉及一種活性生物復(fù)合劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
已知國際上興起的生物加強(投放)工藝，其原理是利用生物培養(yǎng)的方法，選擇單一菌種，制備成含菌量較高的液體制劑，投放到工程界面中，用以強化生物降解的力量。但其制備成本高、產(chǎn)能低、液體菌劑在工程界面中有效期短、穩(wěn)定性差、另儲存條件昔刻、工程應(yīng)用運耗過大。缺乏產(chǎn)業(yè)化前景，最致命的缺陷是液體菌劑的菌種自然屬性絲毫不變，無法從根本上解決耐污性弱、環(huán)境耐受性差和分解速率低的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種制造成本低，產(chǎn)能高，有效期長，穩(wěn)定性強的活性生物復(fù)合劑及其制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)一種活性生物復(fù)合劑，其特征在于，該復(fù)合劑的原料包括以下組分及重量百分比
含量清酒酵母菌液 0.3 0.8%;灰色鏈霉球菌液 0.3 0.8%;米糠70 90%;水余量。所述的清酒酵母菌液的含菌量為4X IO7 4X 1012。所述的灰色鏈霉球菌液含菌量為4 X IO7 4X 1012。一種活性生物復(fù)合劑的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)清酒酵母菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0. 15mpa，12rC，滅菌 15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基；b、三角瓶菌種的制備取斜面清酒酵母菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率100 200rpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；C、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到清酒酵母菌液；(2)灰色鏈霉球菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0. 15mpa，12rC，滅菌 15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基；b、三角瓶菌種的制備取斜面灰色鏈霉球菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽
4培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率100 200rpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；C、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到清酒酵母菌液；(3)按照以下組分及重量百分比含量備料清酒酵母菌液0. 3 0. 8 %、灰色鏈霉球菌液0. 3 0. 8 %、米糠70 90%、水余量；(4)活性生物復(fù)合劑的制備將清酒酵母菌液、灰色鏈霉球菌液按配方混拌于米糠中，加入水保持濕度為30 70%，堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫大于20°C時，將米糠移至發(fā)酵槽繼續(xù)發(fā)酵，并通風(fēng)lOmin/lOh， 每1 翻堆一次，同時控制堆溫在50 70°C，濕度在20 60%，發(fā)酵7d后攤平料堆降溫， 堆溫降至20°C以下，濕度降至14 16%時即得到活性生物復(fù)合劑。所述的麥芽汁培養(yǎng)基按以下組分及重量份含量混合得到硝酸鉀0. 5 1. 5 ；磷酸二氫鉀0. 25 0. 75 ；硫酸鎂0.25 0.75;硫酸亞鐵0. 0005 0. 0015 ；可溶性淀粉1 3 ；瓊脂粉 1 3 ；麥芽汁 90 98。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明克服了利用生物培養(yǎng)的實驗方法制備成本高、產(chǎn)能低、液體菌劑的有效期短、穩(wěn)定性差、儲存條件苛刻、工程應(yīng)用運耗過大，是其利用的菌種仍是土著菌。自然屬性絲毫不變，缺乏產(chǎn)業(yè)化前景的缺陷，以米糠為主要菌劑為載體，選用清酒酵母和灰色鏈霉球菌為主發(fā)酵劑的可以降解環(huán)境中天然有機污染物的活性生物復(fù)合劑，它是采用生物液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)清酒酵母和灰色鏈霉球菌生物制劑，制造成本低， 產(chǎn)能高，有效期長，穩(wěn)定性強，儲存條件簡易，運輸方便、不同菌種可復(fù)合配伍一體，耐污性跨度大，環(huán)境耐受彈性強，分解速率高的工業(yè)級馴化型固體活性生物復(fù)合劑，從根本上解決耐污性弱、環(huán)境耐受性和分解速率低的問題。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1以下用高氏一號配方為例對本發(fā)明作進一步描述其原、輔料用量(按成份百分比)1、清酒酵母菌液6% (含菌量4X101Q)2、灰色鏈霉球菌液6% (含菌量4X 101°)3、米糠 85%
4、水余量高氏一號培養(yǎng)基配方組合(％ )硝酸鉀1.0%磷酸二氫鉀 0.5%硫酸鎂0.5%硫酸亞鐵0.001%可溶性淀粉 2%瓊脂粉2%麥芽汁93.999%活性生物復(fù)合劑的制備1.清酒酵母菌種的制備首先取940ml的麥芽汁培養(yǎng)基和940ml高氏一號培養(yǎng)基分裝IOOml三角瓶各9瓶于0. 15mpa，控制溫度為121，滅菌15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基。2.三角瓶菌種的制備分別選取清酒酵母菌和灰色鏈霉球菌3支斜面種子，其中清酒酵母菌種接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的三角瓶中，灰色鏈霉球菌接入含有高氏一號培養(yǎng)基的三角瓶中。3.分別在旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)48h，其條件為T = 34°C，轉(zhuǎn)速為200Y/min，下床備用。4.生產(chǎn)菌種的制備分別將兩種菌液各9瓶在無菌的條件下接入兩個12L發(fā)酵罐中，其中清酒酵母液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，裝液量3L，灰色鏈霉球菌液接入含有高氏一號培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，裝液量3L。5.兩種菌液發(fā)酵罐培養(yǎng)基條件為T = 35°C，通風(fēng)比1 1 (V/V) 4 后，分別補麥芽汁培養(yǎng)基和高氏培養(yǎng)基各3L，然后在培養(yǎng)條件不變的情況下繼續(xù)發(fā)酵48h中止。6.活性生物復(fù)合劑的制備按前述菌種制備工藝要求，將已制好的生產(chǎn)菌種分別各取0. ^g，加入IOOOkg含有20%左右水分的米糠中拌勻，堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫達到20°C 以上時，每隔10h，輕微通風(fēng)lOmin，每12h翻堆一次，控制堆溫在50-70°C，濕度在60 %左右，發(fā)酵7d，最后攤平料堆降溫。當(dāng)溫度降至20°C以下，濕度降至14-16%左右時，即可包裝為成品。達到耐污性跨度C0Dcr 10mg/L-10000mg/L耐溫性跨度_5°C _90°C耐酸性跨度 PH3-10 ；耐氧性跨度富氧，缺氧，無氧界面皆能生存；分解速率高于土著菌5-40 ；降解性能最終降解可將污染有機物降解成C02、H2O和無機灰質(zhì)。實施例2一種活性生物復(fù)合劑的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)清酒酵母菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0. 15mpa，12rC，滅菌 15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基，其中，麥芽汁培養(yǎng)基按以下組分及含量混合得到硝酸鉀0. ^g、磷酸二氫鉀0. 25kg、硫酸鎂0. 25kg、硫酸亞鐵0. 0005kg、可溶性淀粉1kg、瓊脂粉 lkg、麥芽汁98kg;b、三角瓶菌種的制備取斜面清酒酵母菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率IOOrpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；
C、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到含菌量為4X107的清酒酵母菌液；(2)灰色鏈霉球菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0. 15mpa，12rC，滅菌 15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基，其中使用的麥芽汁培養(yǎng)基與步驟(1)中的相同；b、三角瓶菌種的制備取斜面灰色鏈霉球菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率IOOrpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；C、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到含菌量為4X107的清酒酵母菌液；(3)按照以下組分及重量百分比含量備料清酒酵母菌液0. 3wt%、灰色鏈霉球菌液0. 8wt%、米糠70wt%、水為余量，配成100% ；(4)活性生物復(fù)合劑的制備將清酒酵母菌液、灰色鏈霉球菌液按配方混拌于米糠中，加入水保持濕度為70%， 堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫大于20°C時，將米糠移至發(fā)酵槽繼續(xù)發(fā)酵，并通風(fēng)lOmin/lOh，每12h 翻堆一次，同時控制堆溫在50°C，濕度在60%，發(fā)酵7d后攤平料堆降溫，堆溫降至20°C以下，濕度降至14%時即得到活性生物復(fù)合劑。實施例3一種活性生物復(fù)合劑的制備方法，該方法包括以下步驟(1)清酒酵母菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0. 15mpa，12rC，滅菌 15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基，其中，麥芽汁培養(yǎng)基按以下組分及含量混合得到硝酸鉀1. ^g、磷酸二氫鉀0. 75kg、硫酸鎂0. 75kg、硫酸亞鐵0. 0015kg、可溶性淀粉3kg、瓊脂粉 :3kg、麥芽汁 90kg;b、三角瓶菌種的制備取斜面清酒酵母菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率200rpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；C、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到含菌量為4X IO12的清酒酵母菌液；(2)灰色鏈霉球菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0. 15mpa，12rC，滅菌 15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基，其中使用的麥芽汁培養(yǎng)基與步驟(1)中的相同；b、三角瓶菌種的制備取斜面灰色鏈霉球菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率200rpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；C、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到含菌量為4X IO12的清酒酵母菌液；(3)按照以下組分及重量百分比含量備料清酒酵母菌液0. 8wt %、灰色鏈霉球菌液0. 8wt %、米糠90wt %、水為余量，配成 100% ；(4)活性生物復(fù)合劑的制備將清酒酵母菌液、灰色鏈霉球菌液按配方混拌于米糠中，加入水保持濕度為30%， 堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫大于20°C時，將米糠移至發(fā)酵槽繼續(xù)發(fā)酵，并通風(fēng)lOmin/lOh，每12h 翻堆一次，同時控制堆溫在70°C，濕度在20%，發(fā)酵7d后攤平料堆降溫，堆溫降至20°C以下，濕度降至14 16%時即得到活性生物復(fù)合劑。
權(quán)利要求
1.一種活性生物復(fù)合劑，其特征在于，該復(fù)合劑的原料包括以下組分及重量百分比含量清酒酵母菌液 0.3 0.8%;灰色鏈霉球菌液0. 3 0. 8 % ；米糠70 90%;水余量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種活性生物復(fù)合劑，其特征在于，所述的清酒酵母菌液的含菌量為4X107 4X1012。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種活性生物復(fù)合劑，其特征在于，所述的灰色鏈霉球菌液含菌量為4X107 4X1012。
4.一種如權(quán)利要求1所述的活性生物復(fù)合劑的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)清酒酵母菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0.15mpa，12rC，滅菌15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基；b、三角瓶菌種的制備取斜面清酒酵母菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;34°C，振率100 200rpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；c、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到清酒酵母菌液；(2)灰色鏈霉球菌液的制備a、液體培養(yǎng)基的制備選用麥芽汁培養(yǎng)基為營養(yǎng)源，在0.15mpa，12rC，滅菌15min，得到已滅菌的麥芽培養(yǎng)基；b、三角瓶菌種的制備取斜面灰色鏈霉球菌種在無菌環(huán)境中接入含有已滅菌麥芽培養(yǎng)基的三角瓶中，在;M°C，振率100 200rpm，培養(yǎng)48h，得到三角瓶菌種液；c、生產(chǎn)菌種的制備按3wt%的接種量將三角瓶菌種液接入含有麥芽汁培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在35°C，通風(fēng)比為1 1(V/V)，裝液量為發(fā)酵罐體積的1/3，發(fā)酵48h，然后再按上述條件補加發(fā)酵罐體積的1/3的麥芽汁培養(yǎng)基再發(fā)酵48h，得到清酒酵母菌液；(3)按照以下組分及重量百分比含量備料清酒酵母菌液 0.3 0.8%、灰色鏈霉球菌液0.3 0.8%、米糠70 90%、水余量；(4)活性生物復(fù)合劑的制備將清酒酵母菌液、灰色鏈霉球菌液按配方混拌于米糠中，加入水保持濕度為30 70 %，堆料覆蓋發(fā)酵，當(dāng)堆溫大于20°C時，將米糠移至發(fā)酵槽繼續(xù)發(fā)酵，并通風(fēng)lOmin/lOh， 每Ia1翻堆一次，同時控制堆溫在50 70°C，濕度在20 60%，發(fā)酵7d后攤平料堆降溫， 堆溫降至20°C以下，濕度降至14 16%時即得到活性生物復(fù)合劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種活性生物復(fù)合劑的制備方法，其特征在于，所述的麥芽汁培養(yǎng)基按以下組分及重量份含量混合得到 硝酸鉀 0. 5 1. 5 ； 磷酸二氫鉀0. 25 0. 75 ； 硫酸鎂 0. 25 0. 75 ； 硫酸亞鐵 0. 0005 0. 0015 可溶性淀粉1 3 瓊脂粉 1 3 ； 麥芽汁 90 98。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種活性生物復(fù)合劑及其制備方法，該復(fù)合劑的原料包括以下組分及重量百分比含量清酒酵母菌液0.3～0.8％、灰色鏈霉球菌液0.3～0.8％、米糠70～90％、水為余量，利用麥芽糖培養(yǎng)基培養(yǎng)出清酒酵母菌液及灰色鏈霉球菌液，然后將上述原料混合發(fā)酵即可得到活性生物復(fù)合劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以米糠為主要菌劑為載體，選用清酒酵母和灰色鏈霉球菌為主發(fā)酵劑的可以降解環(huán)境中天然有機污染物的活性生物復(fù)合劑，制造成本低，產(chǎn)能高，有效期長，穩(wěn)定性強，儲存條件簡易，運輸方便、不同菌種可復(fù)合配伍一體，耐污性跨度大，環(huán)境耐受彈性強。
文檔編號C12N1/20GK102485291SQ201010571839
公開日2012年6月6日 申請日期2010年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月3日
發(fā)明者馮坤范 申請人:馮坤范