專利名稱：用于魚翅pcr-rflp鯊魚種類鑒別的引物、試劑盒和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及用于不同種屬鯊魚魚翅區(qū)分的 寡核苷酸引物、試劑盒、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析(polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis, PCR-RFLP)檢測 方法，以及所述寡核苷酸引物在鑒別不同種屬鯊魚魚翅中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
魚翅，海產(chǎn)烹飪原料，又稱鮫鯊翅、沙魚翅、金絲菜，是一種由軟骨魚系鯊魚或犁頭 鰩的鰭經(jīng)加工而制成的產(chǎn)品，主要以鰭中的軟骨(又稱翅筋、翅針)供食，包括背鰭、胸鰭、 腹鰭、臀鰭、背鰭、尾鰭。魚翅種類甚多，南北名稱很不一致，尚無一個統(tǒng)一的分類。通常的分類方法有三 種一、按魚鰭部位分類；二、按加工與否和加工品的形狀分類；三、按鯊魚的品種分類。下 面主要介紹按鯊魚的品種分類(1)披刀翅、青翅、勾尾翅、勾尖翅用日本翅鯊、黑印真鯊、沙拉真鯊、擴口真鯊和 大青鯊的鰭制成，如大青鯊、澳洲半沙條鯊；(2)象耳白翅以三鐸錐齒鯊的鰭制成，如尖吻斜鋸牙鯊、加勒比斜鋸牙鯊；(3)猛鯊翅、猛鯊青翅、猛鯊尾翅以老鼠鯊、蒙鯊、昂鯊的鰭制成，如尖吻鯖鯊；(4)脊披刀翅、反白青翅、脊勾尾翅以雙髻鯊的鰭制成，如路氏雙髻鯊；等等。由于我國相關(guān)食品法規(guī)的不完善和檢測手段的相對落后，如何規(guī)范市場秩序，打 擊摻雜摻假以及以次充好的商業(yè)欺詐行為，為消費者提供良好的食品安全保障手段，是當(dāng) 前眾多學(xué)者研究的熱點與難點。目前魚翅產(chǎn)品缺乏相關(guān)標準、規(guī)范，執(zhí)法困難，許多不法企 業(yè)趁機謀取暴利。截止現(xiàn)在，未見有成熟的魚翅真?zhèn)舞b別的方法。當(dāng)前主要依靠個人經(jīng)驗， 通過眼看、手摸、口嘗等感官方法進行魚翅的真?zhèn)舞b別，使檢測結(jié)果的準確性及精確性大打 折扣。PCR-RFLP技術(shù)作為一種分子生物學(xué)技術(shù)，從基因水平分析食品的真?zhèn)?，不受環(huán)境、取 材部位、時間等因素的影響，而且信息量大，可以用來區(qū)分形態(tài)標記難以鑒別的細微差異， 準確、快速。PCR-RFLP技術(shù)在魚翅制品中鯊魚種類的鑒別尚未有過報道。目前，國內(nèi)外少見報道能快速、簡單、特異且靈敏地檢測不同種屬鯊魚魚翅的方 法。因此，本領(lǐng)域需要一種快速、特異性好、靈敏度高的不同種屬鯊魚魚翅的檢測方 法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于，提供用于快速鑒別不同種屬鯊魚魚翅的寡核苷酸引物。本發(fā)明的另一個目的在于，提供快速鑒別不同種屬鯊魚魚翅的PCR-RFLP檢測方法。本發(fā)明的再一個目的在于，提供用于快速鑒別不同種屬鯊魚魚翅的試劑盒。
本發(fā)明的還一個目的在于，提供本發(fā)明所述寡核苷酸引物在鑒別不同種屬鯊魚魚 翅中的應(yīng)用。針對上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，本發(fā)明提供用于PCR-RFLP方法鑒別不同種屬鯊 魚魚翅的寡核苷酸引物對。本發(fā)明的寡核苷酸引物對是根據(jù)鯊魚綱和硬骨魚類的線粒 體16s rDNA序列設(shè)計的，所述引物對能夠特異性地鑒別不同種屬鯊魚魚翅。在一個實 施方案中，所述引物對由第一對引物和第二對引物組成，其中所述第一對引物為SK-Fll CTCAGCCATCTTACCTGTGGCAAT(SEQ ID No. 1)和 SK-Rll :CYCCTCCTGCTGGGTCAAAG(SEQ ID No. 2)，所述第二對引物為Sharkfin-F2 :CTACAAACCACAAAGATATCGGCACC(SEQ ID No. 3)和 Sharkfin-R2 :CTCCTCCTGCTGGGTCAAAGAATGTTG(SEQ ID No. 4)。所述第一對引物 SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2和第二對引物SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4的組合是發(fā)明人經(jīng)多次 設(shè)計、比較，并經(jīng)實驗測定篩選到的，該組合的引物對能夠特異性地區(qū)分多種不同種屬的鯊 魚。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸引物對能夠區(qū)別不同種屬鯊魚的魚翅，例 如區(qū)別大青鯊、尖吻斜鋸牙鯊、澳洲半沙條鯊、路氏雙髻鯊、加勒比斜鋸牙鯊、尖吻鯖鯊等魚 翅。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，本發(fā)明提供區(qū)分不同種屬鯊魚魚翅的PCR-RFLP 檢測方法，所述方法包括使用針對魚翅的寡核苷酸引物對，所述引物對是根據(jù)鯊魚綱和硬 骨魚類的線粒體16s rDNA序列而設(shè)計的。在一個實施方案中，在本發(fā)明的不同種屬鯊魚魚 翅的PCR-RFLP檢測方法中，所使用的寡核苷酸引物對由第一對引物和第二對引物組成，其 中所述第一對引物為SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2，所述第二對引物為SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的鑒別不同種屬鯊魚魚翅的PCR-RFLP檢測方 法還進一步包括使用特異性限制性內(nèi)切酶。優(yōu)選地，在本發(fā)明的PCR-RFLP方法中，所述特 異性限制性內(nèi)切酶為Alul。在一個實施方案中，本發(fā)明的鑒別不同種屬鯊魚魚翅的PCR-RFLP檢測方法還進 一步包括提取魚翅樣品總DNA的步驟。在一個實施方案中，所述DNA提取步驟是通過巢氏 PCR檢測鯊魚綱和硬骨魚類的線粒體16S rDNA序列來測試樣品總DNA的提取質(zhì)量，同時其 為酶切反應(yīng)提供合適的模板。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述線粒體16S rDNA序列的PCR 反應(yīng)的第一對引物對序列分別為SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2，所述PCR 擴增條件是 94°C預(yù)變性 8min -MV 30s，50°C 30s, 72°C 60s，35 個循環(huán)； 和第二對引物對(巢氏引物對)序列為SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4，所述PCR擴增 條件是 94°C預(yù)變性 8min ；94°C 30s, 50°C 30s, 72°C 60s，20 個循環(huán)。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，在所述鑒別不同種屬鯊魚魚翅的PCR-RFLP檢測方 法中，酶切反應(yīng)條件是整個反應(yīng)體系共20 μ L，由CldH2O 7. 5 μ LU0XNEB Buffer 2 μ L、 AluI 0. 5 μ L和PCR反應(yīng)產(chǎn)物10 μ L組成，于37°C水浴2h。根據(jù)本發(fā)明的魚翅PCR-RFLP檢 測方法，還進一步包括在65°C烘箱中鈍化酶活lOmin，并在反應(yīng)結(jié)束后進行4%瓊脂糖電泳 分析的步驟。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，本發(fā)明提供用于快速鑒別不同種屬鯊魚魚翅的試 劑盒，所述試劑盒包括本發(fā)明的用于PCR-RFLP方法鑒別不同種屬鯊魚魚翅的寡核苷酸引物對和使用說明書。在本發(fā)明的試劑盒的優(yōu)選實施方案中，所述寡核苷酸引物對由第一對 引物和第二對引物組成，其中所述第一對引物為SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2，所述第二對 引物為SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4。在優(yōu)選的實施方案中，所述試劑盒還包括用于樣品 DNA提取的試劑和用于PCR-RFLP反應(yīng)的試劑。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述試劑盒還包 括限制性內(nèi)切酶，更優(yōu)選地，所述試劑盒包括限制性內(nèi)切酶Alul。在一個優(yōu)選的實施方案 中，所述試劑盒的使用說明書中包括對用于快速鑒別不同種屬鯊魚魚翅的PCR擴增的條件 的描述。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述試劑盒的說明書中給出的PCR擴增條件是對于 第一對引物的PCR擴增條件是94°C預(yù)變性8min ；94°C 30s, 50°C 30s, 72°C 60s，35個循環(huán)； 對于第二對引物(巢氏引物對)的PCR擴增條件是94°C預(yù)變性Smin ；94°C 30s, 50°C 30s, 72°C 60s, 20 個循環(huán)。根據(jù)本發(fā)明的再一個實施方案，本發(fā)明提供本發(fā)明的寡核苷酸引物對在鑒別不同 種屬鯊魚魚翅中的應(yīng)用。在本發(fā)明應(yīng)用的優(yōu)選實施方案中，所述寡核苷酸引物對由第一對 引物和第二對引物組成，其中所述第一對引物為SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2，所述第二對 引物為SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4。在另一個實施方案中，本發(fā)明還提供本發(fā)明的試劑盒 在鑒別不同種屬鯊魚魚翅中的應(yīng)用。優(yōu)選地，在本發(fā)明的上述應(yīng)用中，所述試劑盒還包括限 制性內(nèi)切酶，更優(yōu)選地，所述試劑盒還包括限制性內(nèi)切酶AluI。本發(fā)明以魚翅的DNA為檢測基礎(chǔ)，根據(jù)GeneBank中已提交的鯊魚綱和硬骨魚類的 線粒體16S rDNA序列設(shè)計引物，利用PCR-RFLP法檢測樣品中的不同種屬鯊魚魚翅成分。優(yōu)選地，在本發(fā)明中使用巢式PCR進行DNA擴增。巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈 反應(yīng)(PCR)，使用兩對(而非一對)PCR引物擴增完整的片段。第一對PCR引物擴增片段和 普通PCR相似。第二對引物稱為巢式引物(因為他們在第一次PCR擴增片段的內(nèi)部)結(jié)合 在第一次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴增片斷短于第一次擴增。巢式PCR的好處在于， 如果第一次擴增產(chǎn)生了錯誤片斷，則第二次能在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率極 低。因此，巢式PCR的擴增非常特異。使用本發(fā)明的寡核苷酸引物和PCR-RFLP法能夠快速、高靈敏度和高特異性地鑒 別不同種屬鯊魚魚翅。


圖1是顯示用于檢測樣品DNA提取效果的巢氏PCR中第一輪PCR后的常規(guī)電泳 結(jié)果，其中使用第一對引物進行PCR，電泳條帶分別為M 分子量Marker (2000) ；1.大青鯊；
2.澳洲半沙條鯊；3.尖吻斜鋸牙鯊；4.尖吻鯖鯊；5.加勒比斜鋸牙鯊；6.路氏雙髻鯊； B.空白對照(無菌水)；圖2是顯示用于檢測樣品DNA提取效果的巢氏PCR中第二輪PCR電泳結(jié)果，使用 巢氏引物對檢測，電泳條帶分別為M 分子量Marker (2000) ；1.大青鯊；2.澳洲半沙條鯊；
3.尖吻斜鋸牙鯊；4.尖吻鯖鯊；5.加勒比斜鋸牙鯊；6.路氏雙髻鯊；B.空白對照(無菌 水)；圖3是顯示樣品PCR-RFLP檢測結(jié)果，其中電泳條帶分別為M 分子量 Marker (500) ；1.大青鯊；2.澳洲半沙條鯊；3.尖吻斜鋸牙鯊；4.尖吻鯖鯊；5.加勒比斜鋸 牙鯊；6.路氏雙髻鯊；B.空白對照(無菌水)。
具體實施例方式通過實施例的方式對本發(fā)明作進一步的說明，但是本發(fā)明并不僅僅局限于以下實 施例。實施例1本實施例為通過根據(jù)鯊魚綱和硬骨魚類線粒體16S rDNA序列設(shè)計了不同種屬鯊 魚的通用引物。本發(fā)明的發(fā)明人對NCBI數(shù)據(jù)庫鯊魚綱中不同種屬鯊魚和硬骨魚類的線粒體16S rDNA 基因序列進行了全面的分析，基于 GeneBank 號 AB015962. UAJ310141. UFJ853422. 1、 Y18134. 1的保守序列，經(jīng)ClustalW軟件對比找出他們的保守序列的相同序列，以此來設(shè)計 相應(yīng)的引物。經(jīng)多次比對、測試和驗證大量的引物對后篩選得到以下兩對引物第一輪引物SK-Fll :CTCAGCCATCTTACCTGTGGCAAT (SEQ ID No. 1)SK-Rll CYCCTCCTGCTGGGTCAAAG(SEQ ID No. 2)第二輪引物Sharkfin-F2 CTACAAACCACAAAGATATCGGCACC(SEQ ID No. 3)Sharkfin-R2 CTCCTCCTGCTGGGTCAAAGAATGTTG(SEQ ID No. 4)。使用該兩對引物對的組合，在樣品量極少的情況下，相對于其他引物對仍能特異、 靈敏地擴增出目的片段。以下實施例2和3描述了通過本發(fā)明的PCR-RFLP方法對不同種屬鯊魚魚翅樣品 進行區(qū)分。在實施例2中，例示了通過巢氏PCR方法進行鯊魚魚翅樣本的擴增，為之后的 RFLP分析提供合適的模板。在實施例3中，例示了通過使用限制性內(nèi)切酶對實施例2中巢 氏PCR后得到的產(chǎn)物進行RFLP。實施例2使用鯊魚綱和硬骨魚類通用引物對進行巢氏PCR反應(yīng)，每輪PCR后，測試樣品總 DNA的提取質(zhì)量，為之后的RFLP分析提供合適的模板。本實施例中所使用的用于檢測鯊魚綱和硬骨魚類的巢氏PCR反應(yīng)引物對序列為第一輪引物由SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2組成，和第二輪引物由SEQ ID No. 3 和 SEQ ID No. 4 組成。通過檢測線粒體16S rDNA序列，測試樣品總DNA的提取質(zhì)量，并為酶切反應(yīng)提供 合適的模板。本實施例中巢氏PCR的反應(yīng)體系為第一輪PCR反應(yīng)條件為94°C預(yù)變性Smin ； 940C 30s, 500C 30s, 72°C 60s，35個循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后進行2%瓊脂糖電泳分析；第二輪PCR 反應(yīng)條件為94°C預(yù)變性8min ；94°C 30s, 50°C 30s, 72°C 60s, 20個循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后進行2% 瓊脂糖電泳分析。在本實施例中，檢測了 6份樣本大青鯊、尖吻斜鋸牙鯊、澳洲半沙條鯊、路氏雙髻 鯊、加勒比斜鋸牙鯊、尖吻鯖鯊的魚翅。所使用的檢測主要儀器微量移液器(10μL、100y L、1000y L Eppendorf)、、高速臺式離心機(Picol7 Thermo)、高速粉碎機(IKA-WEARKE GERMANY)、核酸蛋白分析儀(DYY-6C北京六一儀器廠)、水浴鍋、普通PCR儀等檢測主要試劑Taq酶、dNTPs、10 X PCR緩沖液、溴化乙錠、分子量Marker (500，2000bp)均購自大 連寶生物公司；瓊脂糖(電泳純)、Tris飽和酚/氯仿(體積25 24)，購自上海生工公司； CTAB 裂解液(20g/L CTAB, 1. 4mol/L NaCl，0. lmol/L Tris、20mmol/LNa2_EDTA)、CTAB 沉淀 液(5g/L CTAB，0.04mol/L NaCl)、1. 2mol/L NaCl均為本實驗自行配制；無水乙醇、氯仿、異 丙醇均購自北京六合通公司；限制性內(nèi)切酶AluI購于北京百靈克生物科技有限公司。檢測主要步驟IDNA 提取待測樣品為大青鯊、尖吻斜鋸牙鯊、澳洲半沙條鯊、路氏雙髻鯊、加勒比斜鋸牙 鯊、尖吻鯖鯊的魚翅。稱取0. Ig磨碎的樣品粉末至一潔凈2. OmL離心管中，加入1. 5mL CTAB裂解液， 65 0C 2h，間期不斷混勻幾次；8000rpm離心15min，取ImL上清液至1只潔凈2. OmL離心 管中，加入700 μ L氯仿，劇烈混勻30s，14500rpm離心lOmin，分別取650 μ L上清液至 潔凈2. OmL離心管中，加入1300 μ L CTAB沉淀液，劇烈混勻30s,室溫靜置Ih ； 14500rpm 離心20min，棄上清液，加入350 μ L 1. 2Μ NaCl,劇烈振蕩30s，再加入350 μ L氯仿，劇 烈混勻30s，14500rpm離心IOmin ；分別取上清液320 μ L，加入0. 8倍體積異丙醇，混勻 后，-20°C lh, 14500rpm離心20min，棄上清液，加入500 μ L 70%乙醇，混勻后，14500rpm離 心20min，棄上清液，晾至風(fēng)干，加入100 μ L ddH20溶解，4°C儲存?zhèn)溆谩?巢氏PCR反應(yīng)體系第一輪PCR反應(yīng)10 X PCR反應(yīng)緩沖液2. 5μ L ；上下游引物(10ymol/L)各IyL; dNTPs 0. 5μ L ；Hotstar Taq DNA 聚合酶(5U/μ L) 0. 3 μ L ;DNA 模板 2 μ L (約 50ng)，用無菌 水補至總體系為25 μ L。第二輪PCR反應(yīng)10 X PCR反應(yīng)緩沖液2. 5μ L ；上下游引物(10ymol/L)各IyL; dNTPs 0. 5 μ L ；Hotstar Taq DNA 聚合酶(5U/ μ L) 0. 3 μ L ；DNA 模板 2 μ L (將第一輪 PCR 反 應(yīng)產(chǎn)物稀釋10倍作為模板)，用無菌水補至總體系為25 μ L。注每次PCR檢測均設(shè)立相應(yīng)的空白對照(用配制反應(yīng)體系的超純水代替DNA模 板，檢測試劑是否受到污染)；3巢氏PCR反應(yīng)參數(shù)第一輪PCR 反應(yīng)94°C預(yù)變性 8min ;94°C 30s,50°C 30s, 72°C 60s，35 個循環(huán)。反
應(yīng)結(jié)束后進行2%瓊脂糖電泳分析。第二輪PCR 反應(yīng)94°C預(yù)變性 8min -MV 30s,50°C 30s，72°C 60s，20 個循環(huán)。反
應(yīng)結(jié)束后進行2%瓊脂糖電泳分析。注不同儀器應(yīng)將PCR各試劑及反應(yīng)參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整。如圖1-2所示，用鯊魚綱和硬骨魚類通用引物擴增待測樣品的DNA時均能在相應(yīng) 位置擴增出現(xiàn)明亮的電泳條帶，表明所有待測樣品DNA提取成功實施例3本實施例為通過如下試驗對鯊魚樣品進行PCR-RFLP分析。本實施例中使用的酶切物為通過實施例2中所述巢氏PCR方法獲得PCR反應(yīng)終產(chǎn)物。通過對線粒體16S rDNA序列進行酶切反應(yīng)，可以確定鯊魚引物的特異性。整個反 應(yīng)體系共 20μ L :ddH20 7. 5 μ L，10 XNEB Buffer 2 μ L，AluI 0. 5 μ L，PCR 反應(yīng)產(chǎn)物 10 μ L。 于37°C水浴2h ；酶切完在65°C烘箱中鈍化酶活lOmin。反應(yīng)結(jié)束后進行4%瓊脂糖電泳分 析。所使用的檢測主要儀器微量移液器(10μ L、100 μ L、1000 μ L Eppendorf)、高速臺式離心機(Picol7 Thermo)、高速粉碎機(IKA-WEARKE GERMANY)、核酸蛋白分析儀(DYY-6C北京六一儀器廠)、 水浴鍋、普通PCR儀等檢測主要試劑Taq酶、dNTPs、10 X PCR緩沖液、溴化乙錠、分子量Marker (500，2000bp)均購自大 連寶生物公司；瓊脂糖(電泳純)、Tris飽和酚/氯仿(體積25 24)，購自上海生工公司； CTAB 裂解液(20g/L CTAB, 1. 4mol/L NaCl，0. lmol/L Tris、20mmol/LNa2-EDTA)、CTAB 沉淀 液(5g/L CTAB，0.04mol/L NaCl)、1. 2mol/L NaCl均為本實驗自行配制；無水乙醇、氯仿、異 丙醇均購自北京六合通公司；限制性內(nèi)切酶AluI購于北京百靈克生物科技有限公司。檢測主要步驟1檢測樣本大青鯊、尖吻斜鋸牙鯊、澳洲半沙條鯊、路氏雙髻鯊、加勒比斜鋸牙 鯊、尖吻鯖鯊鯊魚魚翅等巢氏PCR反應(yīng)終產(chǎn)物。2酶切反應(yīng)體系整個反應(yīng)體系共20 μ LddH207. 5 μ L10ΧΝΕΒ Buffer 2μ LAluI0· 5 μ LPCR 反應(yīng)產(chǎn)物 10 μ L。3酶切反應(yīng)參數(shù)于37°C水浴2h ；酶切完在65°C烘箱中鈍化酶活lOmin。反應(yīng)結(jié)束后進行4%瓊脂 糖電泳分析如圖3所示，利用本發(fā)明的PCR-RFLP方法檢測鯊魚魚翅的線粒體16s DNA序列時， 6種鯊魚樣品等均出現(xiàn)清晰的不同酶切片段，充分說明本實驗所建立的PCR-RFLP方法成功 地區(qū)分大青鯊、尖吻斜鋸牙鯊、澳洲半沙條鯊、路氏雙髻鯊、加勒比斜鋸牙鯊、尖吻鯖鯊6種 不同種屬鯊魚的魚翅樣品。雖然已經(jīng)對本發(fā)明的具體實施方案進行了描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認識到， 在不偏離本發(fā)明的范圍或精神的前提下可以對本發(fā)明進行多種改變與修飾。因而，本發(fā)明 意欲涵蓋落在權(quán)利要求書及其同等物范圍內(nèi)的所有這些改變與修飾。
權(quán)利要求
用于PCR RFLP方法鑒別不同種屬鯊魚魚翅的寡核苷酸引物對，所述引物對由第一對引物和第二對引物組成，其中所述第一對引物為SEQ ID No.1和SEQ ID No.2，所述第二對引物為SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。
2.不同種屬鯊魚魚翅區(qū)分的PCR-RFLP檢測方法，所述方法包括使用權(quán)利要求1所述的 寡核苷酸引物對。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的PCR-RFLP檢測方法，所述方法進一步包括使用限制性內(nèi)切酶 的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的PCR-RFLP檢測方法，所述方法進一步包括使用限制性內(nèi) 切酶Alul的步驟。
5.鑒別不同種屬鯊魚魚翅的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的寡核苷酸引物 對和使用說明書。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其中所述試劑盒還包括限制性內(nèi)切酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的試劑盒，其所述試劑盒還包括限制性內(nèi)切酶Alul。
8.權(quán)利要求1所述的寡核苷酸引物對或權(quán)利要求5-7中任一項所述的試劑盒在鑒別不 同種屬鯊魚魚翅中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于不同種屬鯊魚魚翅區(qū)分的寡核苷酸引物。本發(fā)明還涉及用于不同種屬鯊魚魚翅區(qū)分的PCR-RFLP檢測方法，所述方法包括使用本發(fā)明的寡核苷酸引物。本發(fā)明還涉及用于不同種屬鯊魚魚翅區(qū)分的PCR-RFLP檢測試劑盒，所述試劑盒包括本發(fā)明的寡核苷酸引物。本發(fā)明還涉及所述寡核苷酸引物在鑒別不同種屬鯊魚魚翅中的應(yīng)用。使用本發(fā)明的寡核苷酸引物、檢測試劑盒和PCR-RFLP檢測方法，能夠簡單、快速、特異且靈敏地測定不同種屬鯊魚魚翅。
文檔編號C12Q1/68GK101984076SQ201010567610
公開日2011年3月9日 申請日期2010年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月25日
發(fā)明者鄧婷婷, 陳穎, 韓建勛, 黃文勝 申請人:中國檢驗檢疫科學(xué)研究院