專利名稱：一種b群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基、鑒定培養(yǎng)基及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物培養(yǎng)基，尤其涉及一種B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
B群鏈球菌(GBS)又稱無乳鏈球菌，屬于革蘭氏陽性菌，是棲息在人體胃腸道和下 生殖道的正常菌群，從20世紀(jì)70年代以來，GBS逐漸成為新生兒嚴(yán)重感染性疾病的重要致 病菌之一，已經(jīng)引起全世界的廣泛關(guān)注。GBS感染是引起圍產(chǎn)期胎兒宮內(nèi)感染、新生兒肺炎、 敗血癥、腦膜炎等嚴(yán)重感染的主要原因?？梢l(fā)早產(chǎn)，胎兒發(fā)育遲緩(低出生體重兒)、胎膜 早破及晚期流產(chǎn)等嚴(yán)重后果，在圍產(chǎn)期醫(yī)學(xué)中占重要地位。新生兒GBS感染主要是由母親的垂直感染而來，據(jù)報(bào)道產(chǎn)房陰道帶菌率相當(dāng)高， 相關(guān)報(bào)道在4. 6-35%之間不等，GBS不僅帶菌率高，而且感染后具有發(fā)病率和病死率高的特 點(diǎn)，有研究報(bào)道美國新生兒GBS感染的發(fā)病率達(dá)全部活產(chǎn)嬰兒的1. 9-3. 7%。，病死率在不采 取藥物干預(yù)的情況下高達(dá)50%，適當(dāng)?shù)乃幬锔深A(yù)可降至5-6%。而據(jù)報(bào)道2003年美國早產(chǎn)兒 感染GBS的病死率仍高達(dá)22%。另一方面，感染GBS的存活嬰兒也多有嚴(yán)重的后遺癥，如智 力發(fā)育遲緩，視力或聽力受損等，腦膜炎存活兒中15-30%有神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。據(jù)流行病學(xué) 調(diào)查統(tǒng)計(jì)顯示，GBS感染率呈上升趨勢，排除隨著培養(yǎng)技術(shù)水平的提高，GBS檢出率可能上 升的因素外，這種趨勢可能與人們的生活方式的改變及其他一些尚未明了的因素亦有一定 的關(guān)系。Regan等通過對(duì)妊娠期母親GBS感染與新生兒GBS敗血癥的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，孕中期母親 帶菌，其新生兒GBS敗血癥發(fā)病率為2. 6% ；而產(chǎn)時(shí)母親帶菌，其新生兒敗血癥發(fā)病率大大 提高，為16%。，兩組結(jié)果均明顯高于母親無GBS感染的新生兒敗血癥發(fā)病率?？股仡A(yù)防(intrapartum antibiotic prophylaxis, IAP)，即在分娩過程中給予 青霉素或氨芐青霉素靜脈滴注可以降低新生兒感染的發(fā)病率和死亡率，目前認(rèn)為IAP可以 暫時(shí)清除陰道菌落，減少新生兒出生時(shí)感染的風(fēng)險(xiǎn)，并且抗生素可以通過胎盤，可以對(duì)先前 的感染進(jìn)行治療。在美國，由于IAP的廣泛開展，孕婦GBS感染率下降達(dá)21%，新生兒早期 GBS感染的發(fā)生率已由1. 7%。降至0. 6%。，但是對(duì)于不攜帶GBS的孕婦不宜使用ΙΑΡ，所以及 時(shí)而準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)孕產(chǎn)婦是否攜帶GBS是降低GBS感染和致病的關(guān)鍵。目前，在對(duì)孕產(chǎn)婦是否攜帶GBS進(jìn)行篩查的時(shí)候主要有兩種方法，第一種是使用 檢測試劑盒進(jìn)行快速診斷。但是通過檢測試劑盒進(jìn)行快速診斷對(duì)操作的要求和成本均比較 高，限制了檢測試劑盒的推廣應(yīng)用。第二種，也就是目前最常見的方法，是利用培養(yǎng)基對(duì)取 得的樣品進(jìn)行培養(yǎng)，然后通過直接觀察法、革蘭氏染色法、觸酶試驗(yàn)、協(xié)同溶血(CAMP)試驗(yàn) 等判斷是否感染GBS。但是孕婦生殖道和直腸有多種細(xì)菌存在，而目前的培養(yǎng)基不能有效抑 制GBS以外的其他菌的生長，這些細(xì)菌生長速度快，常使GBS菌生長受到抑制，造成GBS菌 漏檢。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明提供了一種能夠特異性的擴(kuò)增B群鏈球菌的選擇性培養(yǎng)基，能夠抑制其他細(xì)菌的生長，如果樣品中存在B群鏈球菌則可正常生長為 優(yōu)勢菌，為后續(xù)的鑒定工作帶來了極大的便利，提高了 B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率。本發(fā)明的另一目的在于，提供一種B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基，包括選擇性培養(yǎng)基和 轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，在提高B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率的同時(shí)，極大的便利了 B群鏈球菌 的取樣。本發(fā)明還提供了上述兩種培養(yǎng)基的使用方法，所述方法操作簡單，不需要特殊的 儀器設(shè)備。一種B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基，以IOOOmL計(jì)包含以下組分
心臟浸出物I-IOg;新蛋白胨l_50g;右旋葡萄糖I-IOg ;NaCl I-IOg ；Na2HPO4 0. l-5g ；Na2CO3 I-IOg;慶大霉素l_50mg ；萘啶酮酸l_50mg ；余量由水補(bǔ)足。優(yōu)選的，所述B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基，以IOOOmL計(jì)包含以下組分
心臟浸出物2-7g;新蛋白胨10-30g;右旋葡萄糖1. 5-5g ；NaCl 1. 5-5g ；Na2HPO4 0. 2-lg ；Na2CO3 1.5-5g;慶大霉素4_20mg ；萘啶酮酸5_25mg ；余量由水補(bǔ)足。上述任一方案中更優(yōu)選的，所述B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基還包含終濃度為 5-50mg/L的氟康唑。氟康唑能夠抑制真菌的生長。更優(yōu)選的，所述B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基的氟康唑濃度為10_30mg/L。一種基于上述任一種B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基的使用方法，包含以下步驟將樣 品接種于B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基中，于5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)18-24小時(shí)。本發(fā)明還提供了一種既可以單獨(dú)使用，又能夠與上述任一方案中B群鏈球菌選擇 性培養(yǎng)基聯(lián)合使用的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，所述轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基以IOOOmL計(jì)包含以下組分
NaCl I-IOg ；KCl 0. I-Ig ；CaCl2 0. Ol-Ig ；MgCl2 0. Ol-Ig ；KH2PO4 0. I-IOg ；Na2HPO4 I-IOg;巰基乙酸鈉I-IOg;瓊脂l_20g;余量由水補(bǔ)足。所述轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基是專門用于轉(zhuǎn)運(yùn)樣品的無營養(yǎng)的半固體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基能夠 保護(hù)兼性厭氧的B群鏈球菌，使得B群鏈球菌的采樣和培養(yǎng)能夠在不同的地方進(jìn)行，適合在 醫(yī)院，尤其是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用。更優(yōu)選的，所述B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基中的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基以IOOOmL計(jì)包含以下組 分
NaCl 2-5g ；KCl 0. 1-0. 6g ；CaCl2 0. 05-0. 5g ；MgCl2 0. 05-0. 5g ；KH2PO4 0. l-2g ； Na2HPO4 l_4g;巰基乙酸鈉l_5g ；瓊脂2_10g ；余量由水補(bǔ)足。一種基于上述任一種轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基的使用方法，包含以下步驟將樣品插入轉(zhuǎn)運(yùn)培 養(yǎng)基中，室溫保存或低溫保存。室溫保存時(shí)間最好不要超過4小時(shí)，4°C保存可達(dá)24小時(shí)。一種B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基，包括選擇性培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，所述選擇性培養(yǎng) 基，以IOOOmL計(jì)包含以下組分
心臟浸出物I-IOg;新蛋白胨l_50g;右旋葡萄糖I-IOg ;NaCl I-IOg ；Na2HPO4 0. l-5g ；Na2CO3 I-IOg;慶大霉素l_50mg ；萘啶酮酸l_50mg ；余量由水補(bǔ)足; 所述轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基以IOOOmL計(jì)包含以下組分
NaCl I-IOg ；KCl 0. I-Ig ；CaCl2 0. Ol-Ig ；MgCl2 0. Ol-Ig ；KH2PO4 0. I-IOg ；Na2HPO4 I-IOg ；巰基乙酸鈉I-IOg ；瓊脂l-20g ；余量由水補(bǔ)足；所述轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基用于轉(zhuǎn)運(yùn)過程中樣品的保存，所述選擇性培養(yǎng)基用于培養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基 所保存的樣品。優(yōu)選的，所述選擇性培養(yǎng)基，以IOOOmL計(jì)包含以下組分
心臟浸出物2-7g;新蛋白胨10-30g;右旋葡萄糖1. 5-5g ；NaCl 1. 5-5g ；Na2HPO4 0. 2-lg ；Na2CO3 1.5-5g;慶大霉素4_20mg ；萘啶酮酸5_25mg ；余量由水補(bǔ)足。更優(yōu)選的，所述選擇性培養(yǎng)基還包含終濃度為5_50mg/L的氟康唑。上述任一種B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基方案中更優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基以IOOOmL計(jì) 包含以下組分
NaCl 2-5g ；KCl 0. 1-0. 6g ；CaCl2 0. 05-0. 5g ；MgCl2 0. 05-0. 5g ；KH2PO4 0. l-2g ； Na2HPO4 l-4g ；巰基乙酸鈉l_5g ；瓊脂2-10g ；余量由水補(bǔ)足。一種基于上述任一種B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基的使用方法，包含以下步驟:A.將樣 品插入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中；
B.將步驟A中插入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基的樣品轉(zhuǎn)移至B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基中，于5%二氧化 碳培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)18-24小時(shí)。本方法解決了，當(dāng)采樣現(xiàn)場離培養(yǎng)場地較遠(yuǎn)，不適合直接將樣品接種于B群鏈球 菌選擇性培養(yǎng)基中的情況，通過轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基保護(hù)樣品，極大的便利了采樣的進(jìn)行，同時(shí)選擇 性培養(yǎng)基又提高了 B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有益效果如下本發(fā)明提供的B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基 能夠抑制其他細(xì)菌的生長，如果樣品中存在B群鏈球菌則可正常生長為優(yōu)勢菌，為后續(xù)的 鑒定工作帶來了極大的便利，提高了 B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率，且本發(fā)明的選 擇性培養(yǎng)基使用方法操作簡單，不需要特殊的儀器設(shè)備。本發(fā)明提供的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基能夠保 護(hù)兼性厭氧的B群鏈球菌，使得B群鏈球菌的采樣和培養(yǎng)能夠在不同的地方進(jìn)行，適合在 醫(yī)院，尤其是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用，方便了樣品的采樣工作，同時(shí)保證了 B群鏈球菌的檢出效 果，且本發(fā)明的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基使用方法操作簡單。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合


及具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。表1給出了 B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基實(shí)施例1-6中的組分及各組分含量。
權(quán)利要求
一種B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基，以1000mL計(jì)包含以下組分心臟浸出物 1 10g；新蛋白胨 1 50g；右旋葡萄糖 1 10g；NaCl 1 10g；Na2HPO4 0.1 5g；Na2CO3 1 10g；慶大霉素1 50mg；萘啶酮酸1 50mg；余量由水補(bǔ)足。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在于以IOOOmL計(jì)包含以 下組分心臟浸出物2-7g;新蛋白胨10-30g;右旋葡萄糖1. 5-5g ；NaCl 1. 5-5g ；Na2HPO4 0. 2-lg ；Na2CO3 1. 5_5g ；慶大霉素4_20mg ；萘啶酮酸5_25mg ；余量由水補(bǔ)足。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在于所述B群鏈球菌選 擇性培養(yǎng)基還包含終濃度為5-50mg/L的氟康唑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在于所述B群鏈球菌選 擇性培養(yǎng)基的氟康唑濃度為10-30mg/L。
5.一種B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基，包括選擇性培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，所述選擇性培養(yǎng)基 以IOOOmL計(jì)包含以下組分心臟浸出物I-IOg;新蛋白胨l_50g;右旋葡萄糖I-IOg ;NaCl I-IOg ；Na2HPO4 0. l-5g ；Na2CO3 I-IOg ；慶大霉素l_50mg ；萘啶酮酸l_50mg ；余量由水補(bǔ)足；所述轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基以IOOOmL計(jì)包含以下組分NaCl I-IOg ；KCl 0. I-Ig ；CaCl2 0. Ol-Ig ；MgCl2 0. Ol-Ig ；KH2PO4 0. I-IOg ；Na2HPO4 I-IOg;巰基乙酸鈉I-IOg;瓊脂l_20g;余量由水補(bǔ)足。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基，其特征在于所述選擇性培養(yǎng)基還 包含濃度為5-50mg/L的氟康唑。
7.一種基于權(quán)利要求1至4任一所述的B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基的使用方法，包含 以下步驟將樣品接種于B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基中，于5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng) 18-24小時(shí)。
8.一種基于權(quán)利要求5或6所述的B群鏈球菌鑒定培養(yǎng)基的使用方法，包含以下步驟將樣品插入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中；將步驟A中插入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基的樣品轉(zhuǎn)移至B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基中，于5% 二氧化碳 培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)18-24小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基及其使用方法，屬于微生物培養(yǎng)基領(lǐng)域，該培養(yǎng)基以1L計(jì)包含以下組分心臟浸出物1-10g，新蛋白胨1-50g，右旋葡萄糖1-10g，NaCl1-10g，Na2HPO40.1-5g，Na2CO31-10g，慶大霉素1-50mg，萘啶酮酸1-50mg，余量由水補(bǔ)足。本發(fā)明還提供了該培養(yǎng)基的使用方法。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的B群鏈球菌選擇性培養(yǎng)基能夠抑制其他細(xì)菌的生長，如果樣品中存在B群鏈球菌則可正常生長為優(yōu)勢菌，為后續(xù)的鑒定工作帶來了極大的便利，提高了B群鏈球菌的檢測正確率和檢測效率，且本發(fā)明的選擇性培養(yǎng)基使用方法操作簡單，不需要特殊的儀器設(shè)備。
文檔編號(hào)C12Q1/14GK101985648SQ20101056619
公開日2011年3月16日 申請日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月30日
發(fā)明者李楊茜, 陳虎 申請人:深圳市愛杰特醫(yī)藥科技有限公司