專利名稱：可用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及魚類育種領域，尤其涉及一種可用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒，是一種用于魚混雜群體分離的技術(shù)。
背景技術(shù)：
在鯉生產(chǎn)中種質(zhì)混雜現(xiàn)象比較嚴重，混雜種質(zhì)的有效利用率更低。因此，從混雜的 種質(zhì)中鑒別、分離種質(zhì)成為解決種質(zhì)混雜問題的一個重要且必須的途徑。因而，簡單、便捷 的可用于解決混雜種質(zhì)分離的試劑盒的開發(fā)顯得很重要。因此，開發(fā)一種可用于分離建鯉、 黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒是解決育種和生產(chǎn)實踐中造成種質(zhì)混雜現(xiàn)象的有效方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的分離種質(zhì)問題，提供一種簡 單、便捷、可靠的用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)
一種可用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒，所述試劑盒的PCR (聚合酶鏈 式反應)反應體系由分離包裝的IOX擴增緩沖液lml、25mmol/L的Mg2+lml、各2mmol/L的 dNTP 混合物 800ul、IOmmo 1/L 的上游引物 5，一>3，GTGCCTCTTATTGCTTTCTACC 和 IOmmol/ L 的下游引物 5，—>3，GAAACATCTCGCTCGGACTT 各 60ul、5U/ul 的 TaqDNA 聚合酶 30ul、 CldH2Olml、100ng/ul的模板野生型DNA和lOOng/ul的模板突變型DNA各15ul組成，所述試 劑盒還包括試劑盒使用說明書、野生型序列圖和突變型序列圖。本發(fā)明所述的試劑盒采用的分離方法包括
1)獲取建鯉、黃河鯉和建鯉正交Fl代群體的血液，并提取血液中的DNA樣本；
2)將步驟1)中提取的DNA樣本通過本發(fā)明所述的試劑盒進行PCR(聚合酶鏈式反應) 反應，獲得的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳并結(jié)合goldview顯 色進行檢測，然后回收該PCR產(chǎn)物，送往測序公司進行核苷酸序列檢測；
3)將步驟2)得到的核苷酸序列檢測結(jié)果與本發(fā)明所述的試劑盒中提供的序列圖進行 對照，根據(jù)給定的對照(野生型堿基C，突變型為CA)，鑒別并分離出突變型或野生型的種質(zhì) 資源。本發(fā)明的有益效果在于能夠方便、快捷的從建鯉、黃河鯉和建鯉正交混合群體中 分離出建鯉，且概念為67. 6%，分離出黃河鯉和建鯉正交Fl代的概率為100%。由于黃河鯉 和建鯉正交Fl代的自交后代可遺傳突變型標記，故可用于這種混雜群體的種質(zhì)分離，且突 變型為自交后代的概率也為100%。
具體實施例方式本發(fā)明實施例所述的一種可用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒， 其中，試劑盒的PCR (聚合酶鏈式反應)反應體系由分離包裝的IOX擴增緩沖液1ml、25mmol/L 的 Mg2+Iml、各 2mmol/L 的 dNTP 混合物 800ul、IOmmo 1/L 的上游引物 5，一>3， GTGCCTCTTATTGCTTTCTACC 和 10mmol/L 的下游引物 5，一>3，GAAACATCTCGCTCGGACTT 各 60ul、5U/ul 的 TaqDNA 聚合酶 30ul、ddH201ml、100ng/ul 的模板野生型 DNA 和 100ng/ul 的 模板突變型DNA各15ul組成，所述試劑盒還包括試劑盒使用說明書、野生型序列圖和突變 型序列圖。本發(fā)明實施例所述的試劑盒采用的分離方法包括 1)獲取建鯉、黃河鯉和建鯉正交Fl代群體的血液，并提取血液中的DNA樣本；
2)將步驟1)中提取的DNA樣本通過本發(fā)明所述的試劑盒進行PCR(聚合酶鏈式反應) 反應，獲得的PCR產(chǎn)物用質(zhì)量濃度為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳并結(jié)合goldview顯 色進行檢測，然后回收該PCR產(chǎn)物，送往測序公司進行核苷酸序列檢測；
3)將步驟2)得到的核苷酸序列檢測結(jié)果與本發(fā)明所述的試劑盒中提供的序列圖進行 對照，根據(jù)給定的對照(野生型堿基C，突變型為CA)，鑒別并分離出突變型或野生型的種質(zhì) 資源。其中，步驟2)中PCR (聚合酶鏈式反應)反應步驟為94°C預變性3min ；94°C變性 20s ；56°C退火溫度20s ；72°C延伸30s ；33個循環(huán)；72°C再延伸IOmin。本發(fā)明根據(jù)已獲取的能夠從建鯉、黃河鯉和建鯉的正交Fl代混合群體中進行種 質(zhì)鑒別的遺傳標記，結(jié)合遺傳標記的檢測過程進行系統(tǒng)集成，做成試劑盒?？蓪⒋龣z測個體 提取血液DNA，并進行質(zhì)量檢測，質(zhì)量檢測后，即可通過試劑盒獲取目的序列，并與試劑盒中 提供的序列圖進行序列比對，確定突變型和野生型，從而達到方便、快捷分離種質(zhì)資源的目 的。本發(fā)明能夠方便、快捷的從建鯉、黃河鯉和建鯉正交混合群體中分離出建鯉，且概念為 67. 6%，分離出黃河鯉和建鯉正交Fl代的概率為100%。由于黃河鯉和建鯉正交Fl代的自交 后代可遺傳突變型標記，故可用于這種混雜群體的種質(zhì)分離，且突變型為自交后代的概率 也為100%。
權(quán)利要求
一種可用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒，其特征在于所述試劑盒的PCR反應體系由分離包裝的10×擴增緩沖液1ml、25mmol/L的Mg2+1ml、各2mmol/L的dNTP混合物800ul、10mmol/L的上游引物5’ >3’ GTGCCTCTTATTGCTTTCTACC和10mmol/L的下游引物5’ >3’ GAAACATCTCGCTCGGACTT各60ul、5U/ul的TaqDNA聚合酶30ul、ddH2O1ml、100ng/ul的模板野生型DNA和100ng/ul的模板突變型DNA各15ul組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種可用于分離建鯉、黃河鯉和建鯉正交群體的試劑盒，其中，試劑盒的PCR(聚合酶鏈式反應)反應體系由分離包裝的10×擴增緩沖液1ml、25mmol/L的Mg2+1ml、各2mmol/L的dNTP混合物800ul、10mmol/L的上游引物5’-->3’GTGCCTCTTATTGCTTTCTACC和10mmol/L的下游引物5’-->3’GAAACATCTCGCTCGGACTT各60ul、5U/ul的TaqDNA聚合酶30ul、ddH2O1ml、100ng/ul的模板野生型DNA和100ng/ul的模板突變型DNA各15ul組成，試劑盒還包括試劑盒使用說明書、野生型序列圖和突變型序列圖。本發(fā)明的有益效果為能夠方便、快捷的從建鯉、黃河鯉和建鯉正交混合群體中分離出建鯉，且概念為67.6%，分離出黃河鯉和建鯉正交F1代的概率為100%。
文檔編號C12Q1/68GK101974648SQ20101056247
公開日2011年2月16日 申請日期2010年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月29日
發(fā)明者蘇勝彥, 董在杰, 袁新華 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心