專利名稱：木質纖維分解復合菌群的制備方法及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種木質纖維分解復合菌群的制備方法及其用途，是一種利用微生物 處理農業(yè)廢棄秸稈的生物技術。
背景技術：
我國是個養(yǎng)牛大國，近年來，隨著養(yǎng)牛業(yè)向規(guī)?；?、集約化方向發(fā)展，牛糞對環(huán)境 的污染問題變得越來越嚴重。1999年中國農業(yè)統(tǒng)計年鑒表明，牛的飼養(yǎng)量為3506. 94萬頭 /年，每頭牛產糞量10. 6噸/年、產尿量4. 9噸/年；總產糞量13689. 52萬噸/年，總產尿 量4500. 66萬噸/年。堆肥法對于性冷牛糞需要三四個月甚至半年，歷時長，處理效率低下， 難以適應現代規(guī)模養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。傳統(tǒng)的牛糞堆的溫度也不高，難以殺滅牛糞中所含的大量 雜草中子和蟲卵病菌等缺點限制了其使用價值。如何迅速而有效地處理牛糞是科技工作者 面臨的新挑戰(zhàn)。新鮮牛糞含水率都在80%以上，常常通過添加麥秸、稻殼等農作物秸稈進行調節(jié)。 農業(yè)秸稈中較難降解的有機成分是木質素，其在堆肥化中的降解是促進堆肥化進程的關 鍵。木質素的降解能為提高堆肥的效率、縮短堆肥時間改善堆肥質量的研究提供一條新的 思路和技術。在自然界中，能降解木質素并產生相應酶類的生物只占少數。降解木質素的真菌 主要是白腐真菌，此類真菌能夠分泌胞外氧化酶降解木質素，因此被認為是最主要的木質 素降解微生物。目前，國內外普遍采用的秸稈發(fā)酵技術如好氧發(fā)酵或厭氧發(fā)酵存在諸如菌 種較單一，分解能力弱，纖維素總降解率低，一般為20 40%左右以及發(fā)酵周期較長，一般 需要50d左右的發(fā)酵周期等問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種木質纖維分解復合菌群的制備方法及其用途，為解決現 有在秸稈降解過程中所利用的微生物菌劑種類單一、分解能力弱、纖維素總降解率低以及 發(fā)酵周期長等問題，提供了一種高效秸稈分解復合菌群。本發(fā)明的目的是這樣實現的本發(fā)明的木質纖維分解復合菌群的制備方法按照以下的步驟進行(1)牛糞培養(yǎng)基的制備稱取牛糞150g加入IOOOmL的燒杯中，倒入400mL水，充 分攪拌30min，過濾取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)搖瓶培養(yǎng)接種劑制備取牛糞堆肥150g投加到含400mL水的IOOOmL的燒杯 中，充分攪拌30min，待用；(3)取IOmL搖瓶培養(yǎng)接種劑投加到IOOmL液體牛糞培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置 于轉速為120r/min和溫度為45°C的搖床上培養(yǎng)3 5d ；(4)黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的 常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根霉(lihizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)(Coprinus sp)的原毛平胃 (Phanerochaete
chrysosporium)禾口木霉(Trichodermasp)、根霉(Rhizopus sp)、花裙傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的菌種分別經過含PDA培養(yǎng)基的斜面培養(yǎng)，獲得其孢子，濃 度為每毫升1 X IO5個孢子，其中PDA培養(yǎng)基采用200g/L的馬鈴薯浸出液，然后添加20g/ L的葡萄糖和17 20g/L的瓊脂并定溶至IL ；(5)將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Wianerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(lihizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液 混合，幾種菌液的體積比為2 :1:1:1:1: 1，然后干燥，獲得發(fā)酵菌劑。本發(fā)明的木質纖維分解復合菌群的用途，是將該種微生物菌劑作為牛糞與農業(yè)秸 稈的堆肥發(fā)酵菌劑。本發(fā)明具有以下優(yōu)點1、能全面降解各種有機物質，尤其是秸稈和牛糞中的木質 纖維素，降解率高，周期短，適宜條件下25天左右，降解率達60%以上；2、可實現農業(yè)廢棄 物和畜禽糞便的有效利用，改良農業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)生態(tài)環(huán)境，減少因焚燒秸稈造成的空氣污染和 保護環(huán)境。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明的木質纖維分解復合菌群的制備方法按以下具體步驟制備(1)牛糞培養(yǎng)基的制備稱取牛糞150g加入IOOOmL的燒杯中，倒入400mL水，充 分攪拌30min，過濾取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)搖瓶培養(yǎng)接種劑制備取牛糞堆肥40g，過篩，然后在稱取20g投加到含50mL 水的IOOOmL的燒杯中，充分攪拌30min，待用；(3)取IOmL搖瓶培養(yǎng)接種劑投加到IOOmL液體牛糞培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置 于轉速為120r/min和溫度為45°C的搖床上培養(yǎng)3d 5d ；(4)黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的 常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、Panaeolus sp、 Coprinus sp 的；t音養(yǎng)。黃 包原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)禾口木 β (Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花裙傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌 (Coprinus sp)的菌種分別經過含PDA培養(yǎng)基的斜面培養(yǎng)，獲得其孢子，濃度為每毫升 IX IO5個孢子，其中PDA培養(yǎng)基采用200g/L的馬鈴薯浸出液，然后添加20g/L的葡萄糖和 17 20g/L的瓊脂并定溶至IL ；(5)將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Wianerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(lihizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液 混合，菌液的體積比為2 1 1 1 1 1。干燥，獲得發(fā)酵菌劑。實施例2牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Wianerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(lihizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液混合的制備如實施例1。該復合菌劑適合秸稈和糞便為主要原料的堆肥使用。實施例3牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Wianerochaete chrysosporium)和采用微生物分離的常規(guī)方法自牛糞上分離的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(lihizopus sp)孢子懸液混合的制備如實施例1。將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Wianerochaete chrysosporium)、木霉(Trichoderma)和根霉(Rhizopus sp)的孢子懸液混合,三種菌液的 體積比為1 2 1。該復合菌劑適合秸稈(菌液與粉碎為1厘米左右秸稈的體積比采用 1 100-1 200，二者充分混合，濕度控制在75-80% )為主要原料的堆肥使用。
權利要求
1.一種木質纖維分解復合菌群的制備方法，其特征是，按照以下的步驟進行(1)牛糞培養(yǎng)基的制備稱取牛糞150g加入IOOOmL的燒杯中，倒入400mL水，充分攪 拌30min，過濾取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)搖瓶培養(yǎng)接種劑制備取以牛糞為原料采用常規(guī)方法堆置獲得的堆肥40g，過篩 后，然后再將過篩后的堆肥稱取20g投加到含50mL水的IOOOmL的燒杯中，充分攪拌30min， 待用；(3)取IOmL搖瓶培養(yǎng)接種劑投加到IOOmL液體牛糞培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置于轉 速為120r/min和溫度為45°C的搖床上培養(yǎng)3d 5d ；(4)黃孢原毛平革菌Wianerochaetechrysosporium和采用微生物分離的常規(guī)方法 自牛糞上分離的木霉Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、曲霉Aspergillus sp、花褶傘屬PanaeolusCoprinus spPhanerochaetechrysosporium 和 Trichoderma sp>|[|5 Rhizopus sp、花傘屬真菌 Panaeolus 屬真菌Coprinus sp的菌種分別經過含PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，獲得其孢子，濃度為每毫升1 X IO8 個孢子，其中PDA培養(yǎng)基采用200g/L的馬鈴薯浸出液，然后添加20g/L的葡萄糖和17 20g/L的瓊脂并定溶至IL ；(5)將采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌Wianerochaete chrysosporium 禾口 Trichoderma sp>|[|5 Rhizopus sp、花傘屬真菌 Panaeolus 屬真菌Coprinus sp的孢子懸液混合，菌液的體積比為2 :1:1:1:1: 1，然后干燥， 獲得發(fā)酵菌劑。
2.權利要求1所述的木質纖維分解復合菌群的用途，其特征在于將該種微生物菌劑 作為牛糞與農業(yè)秸稈的堆肥發(fā)酵菌劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種木質纖維分解復合菌群的制備方法及其用途，是一種快速簡便的制備高效木質纖維分解復合菌群的方法，具體為牛糞與農業(yè)秸稈地堆肥化提供微生物菌劑，解決了牛糞和農業(yè)秸稈難堆肥化的問題。該復合菌群由采用牛糞培養(yǎng)基的發(fā)酵獲得的發(fā)酵液與黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和分離自牛糞的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花褶傘屬真菌(Panaeolus sp)、鬼傘屬真菌(Coprinus sp)的孢子懸液混合組成，能夠全面降解牛糞和木質纖維素的農業(yè)秸稈。在牛糞與稻秸的堆肥中使用該菌劑，其發(fā)酵周期短，僅需25d。菌群的制作方法簡單，易于實施，單位原料中菌群含量大，活性高。
文檔編號C12N1/14GK102120970SQ20101056238
公開日2011年7月13日 申請日期2010年11月29日 優(yōu)先權日2010年11月29日
發(fā)明者劉張, 周成, 寧平, 熊向峰, 瞿廣非, 賈麗娟, 鄧志華, 黃兆林, 黃凱 申請人:昆明理工大學