專利名稱：用于制備生物菌肥的復合菌劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及微生物復合菌劑及其制備方法，尤其是用于制備生物菌肥的微生物復 合菌劑。
背景技術(shù)：
生物有機肥的出現(xiàn)，利用土壤中的有益微生物來改善作物和土壤的微生態(tài)體系， 將土壤中含量豐富的難溶性磷、鉀元素釋放出來，或?qū)⑥r(nóng)作物的秸稈等難以利用的物質(zhì)轉(zhuǎn) 化為可被利用的有效營養(yǎng)物質(zhì)，既緩解肥料供需矛盾，又改善生態(tài)環(huán)境惡化的局面，為綠色 生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展提供了可能性，國內(nèi)外在生物有機肥方面的研究和運用從上世紀五六十年代 就開始了，上世紀80年代末生物肥在我國興起，但是由于多是單菌，功能單一，不能全面解 決土壤情況復雜的問題，隨著我國自己的生物肥研究發(fā)展，研究復合菌生物有機肥成為趨 勢，復合菌肥利用微生物之間的互利共棲現(xiàn)象，通過單向有利或互為有利共存，能較為全面 的解決土壤中存在的多種問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于制備生物菌肥的復合菌劑及其制備方法，利用這 種復合菌劑制備生物菌肥時能把秸稈和禽畜糞便中的粗纖維及其它營養(yǎng)成分有效分解、釋 放，制備出的生物有機肥能夠調(diào)理土壤，激活土壤中微生物活躍率，克服土壤板結(jié)，增加土 壤空氣通透性，起到增加產(chǎn)量的作用，并且有效解決了農(nóng)村農(nóng)業(yè)廢棄物面源污染的困難問 題。本發(fā)明的一種用于制備生物菌肥的復合菌劑，特征在于由中國普通微生物菌 種保藏管理中心(CGMCC)菌種目錄中公開的編號為1.2352的沼澤紅假單胞菌(Rhodop seudanonas palustris)、編號為 2. 1180 的產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、編號為 1. 1854的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus )、編號為1. 1630的枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)和編號為4. 0891的細黃鏈霉菌乳糖變種(放線菌)(Sti^ptomyces microflavus var. lactosus)培養(yǎng)而成，其中沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿 菌枯草芽孢桿菌的重量比為1:0. 5:0. 5:0. 1。所述制備生物菌肥的復合菌劑的制備方法包括各種菌種的培養(yǎng)和復合菌劑的制 備，特征在于具體步驟如下
步驟1、各種菌的的純化培養(yǎng)，使用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度分別如下 (1)沼澤紅假單胞菌的培養(yǎng)基為0259ATYP瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方=KH2PO4 1. Og 、 CaCl2 0. Ig 、NaHCO3 3. Og 、乙酸鈉 l.Og、NH4Cl2 0. 5g、NaCl l.Og、微量元素溶液 1. Oml和維生素溶液1. Oml ；
其中微量元素溶液配方FeCl2 · 4H20 1. 8g 、CoC12 · 6H20 0. 25g 、NiCl2 · 6H20 CuCl · 2H20 0. Olg、MnCl2 · 4H20 0. 70g、ZnCl2 0. Ig、H3BO3 0. 5g、NaMoO4 · 2H20 0. 03g 、Na2SeO3 ·5Η20 0. Olg 、瓊脂 15. Og 和蒸餾水 1. OL ；
4維生素溶液配方生物素0. Ig、煙酸0.35g、鹽酸硫胺素0.3g 、對氨基苯甲酸 0. 2g 、鹽酸吡哆胺0. Ig、泛酸鈣0. Ig、維生素B12O. 05g和蒸餾水1. OL
培養(yǎng)溫度為30°C ；
(2)嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，配方為酪蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、 檸檬酸二銨2. 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、瓊脂15g、乙酸鈉5. 0g、CaCO3 20. 0g、牛肉提取物 10. 0g、葡萄糖 5. 0g、Tween80 1. 0g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸溜水 1000ml、K2HPO4 2. Og PH 值6. 8，培養(yǎng)溫度為37°C ；
(3)產(chǎn)朊假絲酵母的培養(yǎng)基為0013麥芽汁培養(yǎng)基，配方為12Brix.麥芽汁1.0L和瓊 脂15. Og ，PH值自然，培養(yǎng)溫度為25-28°C ；
(4)枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基為0032BPY瓊脂，配方葡萄糖5g、酵母提取物5.0g、蛋白胨 10. 0g、氯化鈉5. 0g、牛肉膏5. 0g、瓊脂15. Og和蒸餾水1000ml、PH7. 0，培養(yǎng)溫度為37°C ；
(5)細黃鏈霉菌乳糖變種(放線菌)的培養(yǎng)基為0012高氏合成一號瓊脂，配方為可溶 性淀粉20g、硝酸鉀lg、氯化鈉0. 5g、磷酸氫二鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、硫酸亞鐵0. 01g、瓊 脂20g和蒸餾水1000ml，PH值7. 2-7. 4，先經(jīng)過121°C高壓蒸汽滅菌30分鐘，培養(yǎng)溫度為 23 37°C ；
上述各種菌的培養(yǎng)時間大于48小時；
步驟2、復合菌肥菌種的擴大培養(yǎng)
將五類純化的菌種分別傳斜面，培養(yǎng)3飛天，溫度為3(T34°C ；
然后再選擇生長良好的斜面，分別挖塊轉(zhuǎn)入已消毒好的50ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按照 步驟1中的配方配制，溫度為3(T35°C，培養(yǎng)5 7天；
步驟3、菌種的再繼代培養(yǎng)
將五類純化的液體菌種按2%的接種量轉(zhuǎn)入已消毒的500ml玻璃瓶，2%的接種量是指液 體菌種與培養(yǎng)瓶容積的體積比為2:100，同時加入消好的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按步驟1中的配方 配制，溫度為30 35°C，培養(yǎng)5 7天；
步驟4、復合菌劑的制備
(1)將材料按照下列重量比準備糖蜜水沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿 菌枯草芽孢桿菌=6 200 1 0. 5 0. 5 0. 1，接種前將含糖量85%的糖蜜消毒融化，然后加入 水攪拌均勻，水溫控制在22-30°C ；
(2)將沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿菌枯草芽孢桿菌投入糖蜜水中進行 接種，接種后發(fā)酵溫度控制在26-30°C，培養(yǎng)7-10天，檢驗達到標準棕色液體，酸甜氣味， PH值介于3. (Γ3.8之間，活菌數(shù)> 2. Ox IO8個/ml ；
(3)將檢驗合格的液體過濾，然后按照濾液和細黃鏈霉菌乳糖變種重量比100:1，將細 黃鏈霉菌乳糖變種加到發(fā)酵好的液體中，最后進行分裝。 本發(fā)明的復合菌劑是由沼澤紅假單胞菌、產(chǎn)朊假絲酵母、嗜酸乳桿菌和枯草芽孢 桿菌等多種微生物組合而成的多功能菌群，其中各菌種的主要功能如下
1、沼澤紅假單胞菌(Rhodop seudanonas palustris)屬于光合菌的一種，光合細菌 簡稱PSB，復合菌肥中的光合菌群屬于獨立營養(yǎng)微生物，它能利用土壤接受的太陽熱能或以 紫外線為能源，將土壤中的硫化氫和碳氫化合物中的氫分離出來，變有害物質(zhì)為無害物質(zhì)， 并以植物根部的分泌物、有機物、有害氣體(硫化氫等)及二氧化碳、氮等為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸、維生素類、氮素化合物和生理活性物質(zhì)等，是肥沃土壤和促進動植物生長的主力部 隊，光合菌的代謝物質(zhì)或者被植物直接吸收，或者成為其它微生物繁殖的養(yǎng)分，光合細菌如 果能夠增殖，其它的有益微生物也會增殖。2、產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)酵母菌的一種，酵母菌群為真核微生物，均 為兼氧性微生物，在有氧環(huán)境中進行有氧呼吸，以糖作為基質(zhì)合成自身細胞物質(zhì)，在缺氧條 件下，以糖為基質(zhì)，發(fā)酵生成乙醇。酵母細胞含有豐富的蛋白質(zhì)，在生長代謝過程中能形成 多種B族維生素，有助于促進其它微生物和動植物的營養(yǎng)吸收與生長。酵母菌細胞中超氧 化物歧化酶(簡稱S O D)的含量高于其它微生物，是其它微生物細胞S O D含量的3 10 倍，S O D是生物體內(nèi)銅、鋅或錳和鐵的金屬酶，它催化超氧陰離子自由基(O 2一)轉(zhuǎn)化為H 2 O 2和0 2的歧化反應，從而消除體內(nèi)多余的O 2一，解除O 2 一對生物體的毒性作用，利用氨 基酸、糖類及其它有機物質(zhì)，通過發(fā)酵，產(chǎn)生出促進細胞分裂的活性化物質(zhì)。酵母菌在EM 集團軍中對于促進其它的有效微生物增殖所需要的基質(zhì)(食物)的生產(chǎn)提供重要的營養(yǎng)保 障。3、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus )乳酸菌的一種，它以攝取光合 細菌酵母菌產(chǎn)生的糖類等物質(zhì)為基礎，產(chǎn)生乳酸。乳酸具有很強的殺菌能力，能有效抑制有 害微生物的活動，以及有機物的急劇腐敗分解。乳酸菌能夠使常態(tài)下不易分解的木質(zhì)素和 纖維素等變得容易分解，并且消除未分解有機物產(chǎn)生的種種弊端，在有機物發(fā)酵分解上發(fā) 揮突擊隊的重要作用，它將未腐熟的有機物質(zhì)轉(zhuǎn)化成對動植物有效的養(yǎng)分。乳酸菌還能有 效抑制連作障礙產(chǎn)生的致病菌增殖。4、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)是一種嗜溫、好氧、產(chǎn)芽孢的桿狀細菌，其 生理特征多樣，分布廣泛，極易分離培養(yǎng)。該菌在自然界中廣泛存在，對人畜無毒無害，不污 染環(huán)境，能產(chǎn)生多種抗菌素和酶，具有廣譜抗菌活性和極強的抗逆能力?？莶菅挎邨U菌不僅 可以在土壤、植物根際體表等外界環(huán)境中廣泛存在，而且是植物體內(nèi)常見內(nèi)生細菌，尤其 是在植物的根、莖部。目前該菌已經(jīng)在水稻、大豆、棉花、小麥、辣椒、番茄、玉米等農(nóng)作物上 顯示出很好的病害防治效果。5、細黃鏈霉菌乳糖變種(放線菌)(Sti^ptomyces microflavus var. lactosus) 主要是鏈霉菌屬(Str印tomyces)。產(chǎn)生紡錘菌素；產(chǎn)生螺旋霉素，對革蘭氏陽性及陰性細 菌、絲狀真菌等有害菌都有抑制作用。常用于農(nóng)業(yè)上防病保苗；同時可作菌肥，能轉(zhuǎn)化土壤 中氮磷元素提高土壤肥力，并有刺激作物生長作用。它從光合細菌中獲取氨基酸、氮素等作為基質(zhì)，產(chǎn)生出各種抗生物質(zhì)、維生素及 酶，可以直接抑制病原菌。它提前獲取有害霉菌和細菌增殖所需要的基質(zhì)，從而抑制它們的 增殖，并創(chuàng)造出其它有益微生物增殖的生存環(huán)境。放線菌和光合細菌混合后的凈菌作用比 放線菌單兵作戰(zhàn)的殺傷力要大得多。它對難分解的物質(zhì)，如木質(zhì)素、纖維素、甲殼素等具有 降解作用，并容易被動植物吸收，增強動植物對各種病害的抵抗力和免疫力。放線菌也會促 進固氮菌和VA菌根菌增殖。放線菌能產(chǎn)生抗生素物質(zhì)，抑制有害菌的生長，防止病蟲害 的發(fā)生，部分放線菌能產(chǎn)生纖維素酶、半纖維素酶、木質(zhì)素酶，可以分解秸稈中的粗纖維。在 生長繁殖過程中能產(chǎn)生的高溫有利于有機肥腐熟。由上可見，各類微生物都各自發(fā)揮著重要作用，核心作用是光合細菌和嗜酸性乳 桿菌為主導，其合成能力支撐著其他微生物的活動，同時也利用其他微生物產(chǎn)生的物質(zhì)，形成共生共榮的關(guān)系，保證復合菌肥多效活性液狀態(tài)穩(wěn)定，功能齊全，發(fā)揮出集團軍作戰(zhàn)的強 大能量。復合菌肥多效活性液的主要功能是造就良性生態(tài)，只要施用恰當，它就會與所到 之處的良性力量迅速結(jié)合，產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)，清除氧化物質(zhì)，消除腐敗，抑制病原菌，形成適 于植物生長的良好環(huán)境，同時，它還產(chǎn)生大量易為植物吸收的有益物質(zhì)，如氨基酸、有機酸、 多醣類、各種維生素、各種生化酶、促生長因子、抗生素和抗病毒物質(zhì)等，提高植物的免疫功 能，促進健康生長，從而在減輕勞動、降低成本、提高產(chǎn)量、改善品質(zhì)，提前上市，使人們吃上 無污染的高質(zhì)量農(nóng)產(chǎn)品的前提下，提高全社會的生產(chǎn)水平和生活質(zhì)量，保護地球環(huán)境和人 類美好的家園。
具體實施例方式實施例1 通過向中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)購買獲得菌種
目錄中公開的編號為1.2352的沼澤紅假單胞菌(Rhodop seudanonas palustris)、編號為 2. 1180的產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、編號為1. 1854的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus )、編號為1. 1630的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和編號為4. 0891的 細黃鏈霉菌乳糖變種(放線菌)(Streptomyces microflavus var. lactosus)；
步驟1、各種菌的的純化培養(yǎng)，使用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)的時間分別如下
(1)沼澤紅假單胞菌的培養(yǎng)基為0259ATYP瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方KH2PO4l.Og、 CaCl2 0. lg、NaHCO3 3. Og、乙酸鈉 1. Og ,NH4Cl2 0. 5g ,NaCl 1. Og、微量元素溶液 1. Oml 和維生素溶液1. Oml ；
其中微量元素溶液:FeCl2 ·4Η20 1. 8g、CoC12 · 6H20 0. 25g、NiCl2 ·6Η20 CuCl · 2H20 0. 01g、MnCl2 · 4H20 0. 70g、ZnCl2 0. lg、H3BO3 0. 5g、NaMoO4 · 2H20 0. 03g、Na2SeO3 · 5H20 O.Olg、瓊脂15. Og和蒸餾水1.0L ；
其中維生素溶液生物素0. lg、煙酸0.35g、鹽酸硫胺素0.3g、對氨基苯甲酸0.2g、 鹽酸吡哆胺0. Ig、泛酸鈣0. lg、維生素B12O. 05g和蒸餾水1. OL ；
培養(yǎng)溫度為30°C ；
(2)嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，配方為酪蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、 檸檬酸二銨2. 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、瓊脂15g、乙酸鈉5. 0g、CaCO3 20. 0g、牛肉提取物 10. 0g、葡萄糖 5. 0g、Tween80 1. 0g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸溜水 1000ml 和 K2HPO4 2. Og PH 值6. 8，培養(yǎng)溫度為37°C ；
(3)產(chǎn)朊假絲酵母的培養(yǎng)基為0013麥芽汁培養(yǎng)基，配方為12Brix.麥芽汁1.0L和瓊 脂15. Og PH值自然，培養(yǎng)溫度為25-28°C ；
(4)枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基為0032BPY瓊脂，配方葡萄糖5g、酵母提取物5.0g、蛋白胨 10. 0g、氯化鈉5. 0g、牛肉膏5. 0g、瓊脂15. 0g、蒸餾水1000ml、PH7. 0，培養(yǎng)溫度為37°C ；
(5)細黃鏈霉菌乳糖變種(放線菌)的培養(yǎng)基為0012高氏合成一號瓊脂，配方為可溶 性淀粉20g、硝酸鉀lg、氯化鈉0. 5g、磷酸氫二鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、硫酸亞鐵0. 01g、瓊 脂20g、蒸餾水1000ml，PH值7. 2-7. 4，先經(jīng)過121 °C高壓蒸汽滅菌30分鐘，培養(yǎng)溫度為 23 37°C ；
上述各種菌的培養(yǎng)時間大于48小時；
步驟2、復合菌肥菌種的擴大培養(yǎng)將五類純化的菌種分別傳斜面，培養(yǎng)3飛天，溫度為3(T34°C ； 然后再選擇生長良好的斜面，分別挖塊轉(zhuǎn)入已消毒好的50ml液體培養(yǎng)液，3(T35°C培 養(yǎng)51天；
步驟3、菌種的再繼代培養(yǎng)
將五類純化的液體菌種按2%的接種量轉(zhuǎn)入已消毒的500ml玻璃瓶，同時加入消好的培 養(yǎng)液，在3(T35°C溫度，培養(yǎng)5 7天； 步驟4、復合菌劑的制備
(1)將材料按照下列重量比準備糖蜜水沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿 菌枯草芽孢桿菌=6 200 1 0. 5 0. 5 0. 1，接種前將含糖量85%的糖蜜消毒融化，然后加入 水攪拌均勻，水溫控制在22-30°C ；
(2)將光和菌、酵母菌、乳酸菌、芽孢桿菌投入糖蜜水中進行接種，接種后發(fā)酵溫度控制 在26-30°C，培養(yǎng)7-10天，檢驗達到標準棕色液體，酸甜氣味，PH值介于3. (Γ3. 8之間，活 菌數(shù)> 2. Ox IO8 個 /ml ；
(3)將檢驗合格的液體過濾，然后按照濾液和放線菌100:1的重量比將細黃鏈霉菌乳 糖變種按加到發(fā)酵好的液體中，進行分裝。實施例2、使用實施例1中得到的復合菌劑制備生物有機肥，準備褐煤200kg、禽畜 糞便500kg以及秸稈粉300kg、復合菌劑3kg。按照下列步驟生產(chǎn)
(1)將200kg褐煤、500kg禽畜糞便、300kg的秸稈粉混合均勻，攪拌過程中添加復合菌 肥3kg，在發(fā)酵車間發(fā)酵48小時；
(2)待溫度上升到72°C時用自動翻堆機開始翻堆，在以后的8天內(nèi)，每隔12小時翻堆 一次；
(3)翻堆過程中微生物發(fā)酵產(chǎn)生的高溫將水蒸發(fā)，同時進行好氧發(fā)酵，當堆肥中的水份 含量下降到20%時，進行產(chǎn)品檢測；
(4)對檢測合格，達到NY884-2004國際標準的產(chǎn)品進行定量包裝即成。根據(jù)檢驗報告表可知，這種生物有機肥達到NY884-2004標準要求，總養(yǎng)分含量， 氮、磷以及鉀元素達到4%，有機肥營養(yǎng)元素豐富，有效活菌數(shù)0. 2，游離水含量14. 4%，含 量低，水分流失少，蛔蟲卵死亡率高達100%，完全死亡，鎘、汞、鉛、鉻、砷等對人體要害的元 素，含量遠遠低于NY884-2004標準要求。使用這種生物有機肥能夠調(diào)理土壤，激活土壤中微生物活躍率，克服土壤板結(jié)，增 加土壤空氣通透性，起到增加產(chǎn)量的作用，并且有效解決了農(nóng)村農(nóng)業(yè)廢棄物面源污染的困 難問題。
8
權(quán)利要求
一種用于制備生物菌肥的復合菌劑，特征在于由中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)菌種目錄中公開的編號為1.2352的沼澤紅假單胞菌(Rhodop seudanonas palustris)、編號為2.1180的產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、編號為1.1854的嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus )、編號為1.1630的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) 和編號為4.0891的細黃鏈霉菌乳糖變種(放線菌)(Streptomyces microflavus var. lactosus)培養(yǎng)而成，其中沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿菌枯草芽孢桿菌的重量比為1:0.5:0.5:0.1。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的復合菌劑的制備方法，包括各種菌種的培養(yǎng)和復合菌劑 的制備，其特征在于具體步驟如下步驟1、各種菌的的純化培養(yǎng)，使用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度分別如下(1)沼澤紅假單胞菌的培養(yǎng)基為0259ATYP瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方=KH2PO41. Og 、 CaCl2 0. Ig 、NaHCO3 3. Og 、乙酸鈉 l.Og、NH4Cl2 0. 5g、NaCl l.Og、微量元素溶液 1. Oml和維生素溶液1. Oml ；其中微量元素溶液配方FeCl2 · 4H20 1. 8g 、CoC12 · 6H20 0. 25g 、NiCl2 · 6H20 CuCl · 2H20 0. Olg、MnCl2 · 4H20 0. 70g、ZnCl2 0. Ig、H3BO3 0. 5g、NaMoO4 · 2H20 0. 03g 、Na2SeO3 ·5Η20 0. Olg 、瓊脂 15. Og 和蒸餾水 1. OL ；維生素溶液配方生物素0. Ig、煙酸0.35g、鹽酸硫胺素0.3g 、對氨基苯甲酸 0. 2g 、鹽酸吡哆胺0. Ig、泛酸鈣0. Ig、維生素B12O. 05g和蒸餾水1. OL ；培養(yǎng)溫度為30°C ；(2)嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，配方為酪蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、 檸檬酸二銨2. 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、瓊脂15g、乙酸鈉5. 0g、CaCO3 20. 0g、牛肉提取物 10. 0g、葡萄糖 5. 0g、Tween80 1. 0g、MnSO4 · H2O 0. 05g、蒸溜水 1000ml、K2HPO4 2. Og PH 值6. 8，培養(yǎng)溫度為37°C ；(3)產(chǎn)朊假絲酵母的培養(yǎng)基為0013麥芽汁培養(yǎng)基，配方為12Brix.麥芽汁1.0L和瓊 脂15. Og ，PH值自然，培養(yǎng)溫度為25-28°C ；(4)枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基為0032BPY瓊脂，配方葡萄糖5g、酵母提取物5.0g、蛋白胨 10. 0g、氯化鈉5. 0g、牛肉膏5. 0g、瓊脂15. Og和蒸餾水1000ml、PH7. 0，培養(yǎng)溫度為37°C ；(5)細黃鏈霉菌乳糖變種的培養(yǎng)基為0012高氏合成一號瓊脂，配方為可溶性淀粉20g 、硝酸鉀lg、氯化鈉0. 5g、磷酸氫二鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、硫酸亞鐵`0. 01g、瓊脂20g和蒸餾 水1000ml，PH值7. 2-7. 4，先經(jīng)過121 °C高壓蒸汽滅菌30分鐘，培養(yǎng)溫度為23 37°C ；上述各種菌的培養(yǎng)時間大于48小時；步驟2、復合菌肥菌種的擴大培養(yǎng)將五類純化的菌種分別傳斜面，培養(yǎng)3飛天，溫度為3(T34°C ；然后再選擇生長良好的斜面，分別挖塊轉(zhuǎn)入已消毒好的50ml液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按照 步驟1中的配方配制，溫度為3(T35°C，培養(yǎng)5 7天；步驟3、菌種的再繼代培養(yǎng)將五類純化的液體菌種按2%的接種量轉(zhuǎn)入已消毒的500ml玻璃瓶，2%的接種量是指液 體菌種與培養(yǎng)瓶容積的體積比為2:100，同時加入消好的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按步驟1中的配方配制，溫度為30 35°C，培養(yǎng)5 7天； 步驟4、復合菌劑的制備(1)將材料按照下列重量比準備糖蜜水沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿 菌枯草芽孢桿菌=6 200 1 0. 5 0. 5 0. 1，接種前將含糖量85%的糖蜜消毒融化，然后加入 水攪拌均勻，水溫控制在22-30°C ；(2)將沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿菌枯草芽孢桿菌投入糖蜜水中進行 接種，接種后發(fā)酵溫度控制在26-30°C，培養(yǎng)7-10天，檢驗達到標準棕色液體，酸甜氣味， PH值介于3. (Γ3.8之間，活菌數(shù)> 2. Ox IO8個/ml ；(3)將檢驗合格的液體過濾，然后按照濾液和細黃鏈霉菌乳糖變種重量比100:1，將細 黃鏈霉菌乳糖變種加到發(fā)酵好的液體中，最后進行分裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及微生物復合菌劑及其制備方法，尤其是用于制備生物菌肥的微生物復合菌劑。由中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)菌種目錄中公開的編號為1.2352的沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudanonaspalustris)、編號為2.1180的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis)、編號為1.1854的嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、編號為1.1630的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)和編號為4.0891的細黃鏈霉菌乳糖變種(Streptomycesmicroflavusvar.lactosus)培養(yǎng)而成，其中沼澤紅假單胞菌產(chǎn)朊假絲酵母嗜酸乳桿菌枯草芽孢桿菌的重量比為1∶0.5∶0.5∶0.1。利用這種復合菌劑制備生物菌肥時能把秸稈和禽畜糞便中的粗纖維及其它營養(yǎng)成分有效分解、釋放，制備出的生物有機肥能夠調(diào)理土壤，激活土壤中微生物活躍率，克服土壤板結(jié)，增加土壤空氣通透性，起到增加產(chǎn)量的作用，并且有效解決了農(nóng)村農(nóng)業(yè)廢棄物面源污染的困難問題。
文檔編號C12R1/23GK101892157SQ201010256228
公開日2010年11月24日 申請日期2010年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月18日
發(fā)明者孫廷震 申請人:孫廷震