專(zhuān)利名稱(chēng)：一種新的hla-a2限制性表位多肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體地涉及一種HLA-A2限制性表位多肽，以及該表位及其相關(guān)的重組蛋白、編碼核苷酸序列、抗原遞呈細(xì)胞、組合物在表達(dá)人磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白(hPEBP4蛋白)腫瘤治療及預(yù)防中的用途。
背景技術(shù)：
人磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白 4 (human phosphatidylethanolamine (PE) -bindingpro tein 4，hPEBP4)，其核苷酸序列和氨基酸可參見(jiàn)中國(guó)專(zhuān)利CN02136556. 3。它是通過(guò)從正常成人骨髓細(xì)胞體外原代培養(yǎng)獲得骨髓基質(zhì)細(xì)胞(Bone marrowstromal cell, BMSC)并構(gòu)建 BMSC cDNA文庫(kù)，利用cDNA文庫(kù)大規(guī)模測(cè)序的手段，從BMSC cDNA文庫(kù)中分離到的一種全長(zhǎng)基因，屬于磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白(PEBP)家族，在GenBank/EMBL數(shù)據(jù)庫(kù)中登錄(序列號(hào)為 AY037148)。hPEBP4蛋白包含227個(gè)氨基酸，其氨基酸序列在75-195位為典型的磷脂酰乙醇胺結(jié)合保守區(qū)域(PBP)。功能研究發(fā)現(xiàn)，hPEBP4能通過(guò)抑制Ras/Raf/MEK/ERK途徑、JNK活化和PE外翻來(lái)抑制TNFa誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，這些功能均由其PE結(jié)合保守區(qū)域(PBP)介導(dǎo)。hPEBP4表達(dá)下調(diào)后能夠促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞凋亡，提示hPEBP4很可能是治療hPEBP4高表達(dá)腫瘤的一個(gè)新的作用靶點(diǎn)。研究者通過(guò)組織芯片和免疫組化證實(shí)，在臨床腫瘤標(biāo)本中，hPEBP4蛋白高表達(dá)于 50%以上的乳腺癌腫瘤組織中，而僅表達(dá)于4%的正常乳腺組織中。在人前列腺癌組織和卵巢癌組織中也發(fā)現(xiàn)hPEBP4蛋白的優(yōu)勢(shì)表達(dá)模式，提示hPEBP4很可能是一個(gè)相對(duì)特異性表達(dá)于腫瘤組織的腫瘤特異性/腫瘤相關(guān)抗原。因此，如果以hPEBP4為靶標(biāo)，對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫，將會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)hPEBP4蛋白的特異性免疫應(yīng)答，從而使機(jī)體能有效地抑制、清除腫瘤細(xì)胞，為相關(guān)腫瘤的預(yù)防及治療提供措施。據(jù)此，本發(fā)明人前期已鑒定出來(lái)自hPEBP4的腫瘤抗原表位肽p40-48 (TLFCQGLEV) (SEQ ID N0:1)，其氨基酸序列見(jiàn)中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)CN200510030532. 0。該表位肽在HLA-A2. 1/ Kb轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)和HLA-A2. 1陽(yáng)性乳腺癌病人外周血中有較強(qiáng)的免疫原性，其誘導(dǎo)出的效應(yīng)細(xì)胞能特異性殺傷表達(dá)hPEBP4+/HLA-A2. I+的腫瘤細(xì)胞。細(xì)胞免疫在抗腫瘤和抗病毒免疫中起關(guān)鍵作用。T細(xì)胞識(shí)別的抗原是與細(xì)胞表面的MHC-I類(lèi)或II類(lèi)分子結(jié)合的肽，其長(zhǎng)度約為8-12個(gè)氨基酸。而作為殺傷腫瘤細(xì)胞的主要效應(yīng)細(xì)胞CTL(細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞，Cytotoxic TLymphocytes)則識(shí)別與MHC-I類(lèi)分子結(jié)合的內(nèi)源性肽。但是，許多能被CTL識(shí)別的天然腫瘤抗原肽的免疫原性都相對(duì)較弱。免疫原性的強(qiáng)弱與肽和MHC-I類(lèi)分子親和力的高低有關(guān)。在一定程度上，親和力越高，其免疫原性越強(qiáng)。為了增強(qiáng)肽的免疫原性，可對(duì)肽序列中的某些位點(diǎn)的氨基酸進(jìn)行置換以改善、優(yōu)化其與MHC-I類(lèi)分子的親和力。經(jīng)過(guò)氨基酸置換后，應(yīng)保持表位肽的抗原特異性(即對(duì)野生型肽的特異性識(shí)別能力)不改變，但增強(qiáng)其免疫原性(即誘導(dǎo)體內(nèi)特異性CTL的殺傷能力)。氨基酸置換后的抗原肽已經(jīng)被用于癌癥病人，以改善了病人的抗腫瘤免疫應(yīng)答。然而，由于多肽氨基酸內(nèi)部的微小變化就會(huì)對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能造成巨大的影響，甚至于使得多肽失去原有的活性(例如結(jié)合親和力)，并且對(duì)多肽序列中氨基酸的修飾和改變方式和組合紛繁蕪雜，要從眾多修飾中篩選獲得具有增強(qiáng)的活性(例如免疫活性)的修飾多肽并非易事。因此，本領(lǐng)域中仍然迫切需要在已知表位多肽的序列的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)出具有增強(qiáng)的免疫原性的修飾表位多肽。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種具有高免疫原性的合成肽及其應(yīng)用。在本發(fā)明的第一方面中，提供了一種HLA-A2限制性表位多肽，所述多肽具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞殺傷活性，且所述的多肽具有FLFCQGFEV(SEQ IDNO 2)的序列。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述多肽的序列為FLFCQGFEV(SEQ IDNO 2)。在本發(fā)明的第二方面中，提供一種重組蛋白，所述的重組蛋白含有如前所述的 HLA-A2限制性表位多肽。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述重組蛋白的序列如SEQ ID NO 2所示。在本發(fā)明的第三方面中，涉及一種敏化的抗原遞呈細(xì)胞，所述的抗原遞呈細(xì)胞是被如前所述的HLA-A2限制性表位多肽致敏的。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述抗原遞呈細(xì)胞選自下組樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。在本發(fā)明的第四方面中，提供了一種制備敏化的抗原遞呈細(xì)胞的方法，所述方法包括用本發(fā)明的HLA-A2限制性表位多肽致敏抗原遞呈細(xì)胞。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述抗原遞呈細(xì)胞選自下組樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。在本發(fā)明的第五方面中，提供了一種組合物，所述的組合物含有(a)0. 001-99. 99wt%如前所述的HLA-A2限制性表位多肽或如前所述的敏化的抗原遞呈細(xì)胞；和(b)免疫學(xué)或藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述的組合物是藥物組合物，并且所述的載體、稀釋劑或賦形劑是藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組分(a)的含量為0. 001-99. 99wt%，優(yōu)選0. 1-99. Owt %, 更優(yōu)選l_90wt%。在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物還包含一種或多種治療腫瘤的其它藥物，優(yōu)選所述藥物選自烷化劑、抗代謝藥、抗腫瘤抗生素、植物類(lèi)抗癌藥、激素、或免疫制劑，更優(yōu)選 抗腫瘤抗生素，如阿霉素。在本發(fā)明的第六方面中，提供了一種用本發(fā)明的HLA-A2限制性表位多肽或敏化的抗原遞呈細(xì)胞的用途，其用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述腫瘤選自下組前列腺癌、乳腺癌、肝癌、膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、子宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、或膀胱癌、或卵巢癌。在本發(fā)明的第七方面，提供了本發(fā)明所述的HLA-A2限制性表位多肽的用途，它被用于制備包含該限制性表位多肽的重組蛋白(如融合蛋白)，或用于制備致敏的抗原提呈細(xì)胞。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。
以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述。

圖1 :1F7F肽致敏的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)體內(nèi)誘導(dǎo)HLA-A2. 1/Kb轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞毒T 淋巴細(xì)胞的殺傷活性。圖2 1F7F肽致敏的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)體內(nèi)誘導(dǎo)HLA-A2. 1/Kb轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞毒T 淋巴細(xì)胞IFN-γ分泌細(xì)胞情況。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人在對(duì)hPEBP4來(lái)源的表位肽P40-48進(jìn)行分析(例如計(jì)算機(jī)模擬分析等) 的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)表位肽P40-48的氨基酸進(jìn)行置換，選擇性地合成了眾多候選抗原肽，以期從中篩選出與HLA-A*0201高親和力結(jié)合并能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更強(qiáng)的特異性CTL應(yīng)答的抗原肽。具體而言，發(fā)明人最初通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬分析獲得了可能的候選序列。然而，通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬預(yù)測(cè)所獲得的候選多肽的數(shù)量少則數(shù)百條，多則上千條。并且，發(fā)明人通過(guò)試驗(yàn)證明了 在已知序列的不同位置、甚至包含部分相同位置進(jìn)行置換的計(jì)算機(jī)模擬分析候選表位肽，其免疫原性與野生型相比可能并未得到有效的提高，甚至反而明顯降低，這就提示了在復(fù)雜的生物體系中計(jì)算機(jī)模擬預(yù)測(cè)的較高不確定性。因此，要從數(shù)量如此眾多、且生物效應(yīng)具有較高不確定性的候選多肽中篩選獲得高親和力、高免疫原性、能夠誘導(dǎo)更強(qiáng)的hPEBP4特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答的多肽序列并非易事。發(fā)明人進(jìn)一步通過(guò)T2肽結(jié)合實(shí)驗(yàn)，從眾多序列中篩選出與HLA-A*0201具有強(qiáng)親合力的表位肽，并對(duì)其免疫原性進(jìn)行評(píng)價(jià)，終于發(fā)現(xiàn)置換優(yōu)化后的表位肽1F7F是 HLA-A0201限制性的hPEBP4抗原特異性的T細(xì)胞表位，其在體內(nèi)、外均可誘導(dǎo)出明顯強(qiáng)于野生肽(P40-48)的細(xì)胞毒性T效應(yīng)細(xì)胞。作為免疫原性提高而抗原特異性不變的氨基酸修飾的肽，表位肽1F7F在乳腺癌或其他高表達(dá)hPEBP4的腫瘤的免疫治療中有著潛在的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)也為制備更高效力的腫瘤疫苗提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)其腫瘤疫苗以及治療制劑的研制有重要的意義。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。HLA-A2限制性表位多肽如本文所用，“本發(fā)明多肽”、“ 1F7F肽”、“置換的特異性多肽”等可互換使用，指將已鑒別的HLA-A2限制性表位多肽的氨基酸序列P40-48 (SEQ IDNO 1)的第1位和第7位氨基酸殘基置換為“F”所得的特異性多肽，該多肽序列入SEQ ID N0:2所示，即FLFCQGFEV。此外，該術(shù)語(yǔ)還包括在其C末端和/或N末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)(通常為20個(gè)以內(nèi)，較佳地為10個(gè)以內(nèi)，更佳地為5個(gè)以內(nèi))氨基酸所形成的序列。例如，在本領(lǐng)域中，在C末端和/ 或N末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸通常也不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能。一種優(yōu)選的衍生多肽是在1F7F肽的上游添加對(duì)應(yīng)于hPEBP4中第36_39位的1個(gè)或2個(gè)或3個(gè)或4個(gè)氨基酸(如D、ED、DED或LDED)，和/或在其下游添加對(duì)應(yīng)于hPEBP4 中第49-52位的1個(gè)或2個(gè)或3個(gè)或4個(gè)氨基酸(如F、FY、FYP或FYPE)。本發(fā)明多肽可用常規(guī)方法人工合成，也可用重組方法生產(chǎn)。本發(fā)明多肽也可用于與BSA等分子量的蛋白偶聯(lián)，從而形成多肽偶聯(lián)物。通常，所述的偶聯(lián)物由多肽、交聯(lián)劑、和BSA構(gòu)成，其中所述的交聯(lián)劑優(yōu)選戊二醛、EDAC。組合物本發(fā)明的多肽和偶聯(lián)物還可用于制備治療性的藥物組合物或預(yù)防性及治療性的疫苗組合物。因此，另一方面，本發(fā)明還提供了一種組合物，它含有(a)安全有效量的本發(fā)明多肽、偶聯(lián)物或其組合物；以及(b)藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。本發(fā)明多肽的數(shù)量通常為 10微克-100毫克/劑，較佳地為100-1000微克/劑。本文所用的術(shù)語(yǔ)“有效量”指治療劑治療、緩解或預(yù)防目標(biāo)疾病或狀況的量，或是表現(xiàn)出可檢測(cè)的治療或預(yù)防效果的量。對(duì)于某一對(duì)象的精確有效量取決于該對(duì)象的體型和健康狀況、病癥的性質(zhì)和程度、以及選擇給予的治療劑和/或治療劑的組合。因此，預(yù)先指定準(zhǔn)確的有效量是沒(méi)用的。然而，對(duì)于某給定的狀況而言，可以用常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定該有效量，臨床醫(yī)師是能夠判斷出來(lái)的。為了本發(fā)明的目的，有效的劑量為給予個(gè)體約0. 01毫克/千克至50毫克/千克， 較佳地0. 05毫克/千克至10毫克/千克體重的本發(fā)明多肽。此外，本發(fā)明的多肽還可與其他治療劑一起使用。藥物組合物還可含有藥學(xué)上可接受的載體。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”指用于治療劑給藥的載體。該術(shù)語(yǔ)指這樣一些藥劑載體它們本身不誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)接受該組合物的個(gè)體有害的抗體，且給藥后沒(méi)有過(guò)分的毒性。這些載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在 Remington' s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. ,N. J. 1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。這類(lèi)載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐劑、及其組合。治療性組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外， 這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑或乳化劑、PH緩沖物質(zhì)等。此外，免疫組合物中還可以含有免疫佐劑。通常，可將治療性組合物制成可注射劑，例如液體溶液或懸液；還可制成在注射前適合配入溶液或懸液中、液體載體的固體形式。一旦配成本發(fā)明的組合物，可將其直接給予對(duì)象。待預(yù)防或治療的對(duì)象可以是動(dòng)物；尤其是人。本發(fā)明的含本發(fā)明多肽的治療或預(yù)防性藥物組合物(包括疫苗)，可以經(jīng)口服、皮下、皮內(nèi)、靜脈注射等方式應(yīng)用。治療劑量方案可以是單劑方案或多劑方案。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明的表位肽是在已知HLA-A2限制性的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞表位肽的基礎(chǔ)上經(jīng)氨基酸置換而得的，其與已知的表位肽相比，可更為有效地引起針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答，這不僅對(duì)進(jìn)一步深入研究腫瘤發(fā)病機(jī)制具有重要意義，而且對(duì)更強(qiáng)有效的腫瘤治療性疫苗以及治療制劑的研制均有重要的意義。實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York =Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例1. HLA-A * 0201高親和力肽的篩選本實(shí)施例通過(guò)肽結(jié)合實(shí)驗(yàn)篩選出與HLA-A*0201具有高親和力的表位肽。試驗(yàn)步驟首先，收集T2細(xì)胞(一種缺失抗原加工能力的細(xì)胞，購(gòu)買(mǎi)自ATCC :CRL_1991)，用無(wú)血清1640培養(yǎng)基(購(gòu)自^witrogen公司)洗三次后，調(diào)細(xì)胞濃度至2 X IO5個(gè)/ml，鋪于對(duì)孔板中，0. 5ml/孔。然后，加入50 μ M的候選多肽，2.5 μ g/ml的β 2微球蛋白(購(gòu)自R&D 公司)于37°C，5% CO2孵箱中共孵育18h。孵育后的細(xì)胞用冰PBS (pH7. 2，PBS為緩沖液， 自配)洗三遍,加入 FITC 標(biāo)記的 HLA-A2 特異性的 mAb BB7. 2 (Sterotec Ltd, Oxford,UK), 冰浴45分鐘，PBS洗后用流式細(xì)胞儀(Beckton Dickinson公司FACSCalibur)檢測(cè)平均熒光強(qiáng)度。以陽(yáng)性已知肽CEA HLA-A2限制性表位多肽CAP-I (SEQ ID NO :8，序列為 YLSGANLNL)作為陽(yáng)性對(duì)照，未加肽刺激的單純T2細(xì)胞作為背景對(duì)照。檢測(cè)方法免疫熒光法檢測(cè)肽與HLA_A*0201分子的結(jié)合情況，該方法基于外源性多肽與T2 細(xì)胞表面MHC-I類(lèi)分子的結(jié)合可使其表面的MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)量增加的，兩者結(jié)合越穩(wěn)固，則可檢測(cè)到的MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)量越多，以平均熒光強(qiáng)度為檢測(cè)指標(biāo)。結(jié)果以熒光系數(shù)(FI)作為衡量指標(biāo)。
權(quán)利要求
1.一種HLA-A2限制性表位多肽，其特征在于，所述多肽具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞殺傷活性，且所述的多肽的序列如SEQ ID NO 2所示，為FLFCQGFEV。
2.一種重組蛋白，其特征在于，它包含權(quán)利要求1所述的HLA-A2限制性表位多肽。
3.一種敏化的抗原遞呈細(xì)胞，其特征在于，所述抗原遞呈細(xì)胞是被權(quán)利要求1所述的 HLA-A2限制性表位多肽致敏的。
4.如權(quán)利要求3所述的抗原遞呈細(xì)胞，其特征在于，所述的抗原遞呈細(xì)胞選自下組樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。
5.一種制備敏化的抗原遞呈細(xì)胞的方法，所述方法包括用權(quán)利要求1所述的HLA-A2 限制性表位多肽致敏抗原遞呈細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的抗原遞呈細(xì)胞選自下組樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。
7.一種組合物，其特征在于，它含有(a)0.001-99. 99襯％權(quán)利要求1所述的HLA-A2限制性表位多肽或權(quán)利要求3所述的敏化的抗原遞呈細(xì)胞；和(b)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于，所述的組合物是藥物組合物，并且所述的載體、稀釋劑或賦形劑是藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
9.一種權(quán)利要求1所述的HLA-A2限制性表位多肽或權(quán)利要求3所述的敏化的抗原遞呈細(xì)胞的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。
10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述腫瘤選自下組前列腺癌、乳腺癌、肝癌、膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、子宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、或膀胱癌。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的HLA-A2限制性表位多肽及其應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明涉及序列為FLFCQGFEV的HLA-A2限制性表位多肽(即1F7F肽)，以及該表位及其相關(guān)的重組蛋白、編碼核苷酸序列、抗原遞呈細(xì)胞、組合物在表達(dá)人磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白4(hPEBP4)的腫瘤治療及預(yù)防中的用途。
文檔編號(hào)C12N5/0781GK102250206SQ201010176998
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2010年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月18日
發(fā)明者孫偉紅, 曹雪濤, 李楠 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)