專利名稱：：輔助鑒定具有優(yōu)良性狀的小麥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種輔助鑒定具有優(yōu)良性狀的小麥的方法。
背景技術(shù)：
：長期以來，小麥產(chǎn)量一直是育種家改良和培育品種中最為重要的目標(biāo)，但產(chǎn)量總體上受環(huán)境影響較大，尤其是水肥條件的影響較大，因此培育廣適性品種則成為提高小麥產(chǎn)量的主要運(yùn)用手段。近些年，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，與產(chǎn)量性狀相關(guān)的多個(gè)QTL位點(diǎn)也逐漸被發(fā)現(xiàn)和定位。Groos等(GroosC,RobertN,BervasE,CharmetG.Geneticanalysisofgrainprotein-content,grainyieldandthousand—kernelweightinbreadwheat.Theor.Appl.Genet.2003，106:1032_1040)在小麥的7D染色體上發(fā)現(xiàn)了控制小麥產(chǎn)量的QTL，而在染色體7A和7D上則發(fā)現(xiàn)了控制籽粒千粒重的QTL。Quarrie等(QuarrieSA,SteedA,CalestaniC,etal.Ahighdensitygeneticmapofhexaploidwheat(TriticumaestivumL.)fromthecrossChineseSpringxSQ1anditsusetocompareQTLsforgrainyieldacrossarangeofenvironments.Theor.Appl.Genet.2005,110865-880；QuarrieSA,PekicQuarrieS,RadosevicR,etal.DissectingawheatQTLforyieldpresentinarangeofenvironments:fromtheQTLtocandidategenes,JExp.Botany2006，57:2627_2637)則在一個(gè)DH群體中發(fā)現(xiàn)了多個(gè)控制產(chǎn)量性狀的QTL位點(diǎn)，其中7AL和7BL上的QTL貢獻(xiàn)最大，尤其是對(duì)小麥穗粒數(shù)的貢獻(xiàn)率最高，他還在7AL上發(fā)現(xiàn)了控制小麥粒重的QTL。Wilkinson^(WilkinsonM,WanY,TosiP,etal.Identificationandgeneticmappingofvariantformsofpuroindolinebexpressedindevelopingwheatgrain.JCerealSci，2008，48:722_728)在小麥的cDNA中發(fā)現(xiàn)了三種與puroindolineb基因相似性達(dá)72%的基因，并將其定位在7A染色體的長臂上，進(jìn)一步分析表明，該基因可能能夠調(diào)控硬質(zhì)小麥SKCS硬度5-7左右。Chen等(ChenF，BrianB,MorrisCF.Puroindolineb~2inwheat.Theoreticalandappliedgenetics,2009,D0I10.1007/s00122-009-1195-y)對(duì)上述三個(gè)基因進(jìn)行了命名，分別為Pinb_2vl、Pinb_2v2和Pinb-2v3，并發(fā)現(xiàn)了一種新的基因類型，命名為Pinb-2v4，利用非整倍體進(jìn)行物理定位后發(fā)現(xiàn)，Pinb-2vl位于7DL染色體上，Pinb_2v2位于7BL染色體上，Pinb_2v3位于7B染色體上，Pinb-2v4則位于7AL染色體上，且Pinb_2vl和Pinb_2v4出現(xiàn)在調(diào)查的所有品種中，而Pinb-2v2和Pinb-2v3則分別出現(xiàn)在不同的品種中。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種輔助鑒定具有優(yōu)良性狀的小麥的方法。本發(fā)明提供了輔助鑒定具有不同性狀小麥的方法，包括如下步驟以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；2)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；3)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；4)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；5)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；6)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥。1)至6)中，所述DNA片段具體可為401bp的DNA片段。本發(fā)明還保護(hù)序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對(duì)。所述引物對(duì)在制備輔助鑒定具有不同性狀小麥的試劑盒中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；所述性狀為千粒重、粒徑、穗粒數(shù)、每穗粒重(穗粒重)、旗葉面積和旗葉寬度中的至少一種。本發(fā)明還保護(hù)一種輔助鑒定具有不同性狀小麥的試劑盒，包括所述引物對(duì)；所述性狀為千粒重、粒徑、穗粒數(shù)、每穗粒重、旗葉面積和旗葉寬度中的至少一種。本發(fā)明提供的另一種輔助鑒定具有不同性狀小麥的方法，是檢測(cè)待測(cè)小麥的基因組DNA中是否具有序列表的序列2所示核苷酸，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；2)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；3)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；4)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；5)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；6)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥。本發(fā)明提供的第三種輔助鑒定具有不同性狀小麥的方法，是檢測(cè)待測(cè)小麥的基因組DNA中是否具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)基因組DNA中具有序列表的序列2自5，端第34至434位所示核苷酸的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；2)基因組DNA中具有序列表的序列2自5，端第34至434位所示核苷酸的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；3)基因組DNA中具有序列表的序列2自5，端第34至434位所示核苷酸的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；4)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；5)基因組DNA中具有序列表的序列2自5，端第34至434位所示核苷酸的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；6)基因組DNA中具有序列表的序列2自5，端第34至434位所示核苷酸的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥。以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的DNA片段即為序列表的序列2自5’端第34至434位所示DNA。所述方法，所述引物對(duì)，所述試劑盒，均可應(yīng)用于小麥育種。本發(fā)明還保護(hù)一種蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與小麥生產(chǎn)性狀相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。所述蛋白質(zhì)的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述編碼基因具體可為如下1)或2)或3)或4)的DNA分子1)序列表中序列2所示的DNA分子；2)序列表中序列2自5，端第34至434位核苷酸所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼小麥生產(chǎn)性狀相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與1)或2)或3)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼小麥生產(chǎn)性狀相關(guān)蛋白的DNA分子。本發(fā)明公開了一個(gè)與小麥產(chǎn)量性狀相關(guān)基因Pinb-2v2的功能及其在小麥產(chǎn)量性狀改良中的應(yīng)用，含有Pinb-2v2基因的小麥品種主要表現(xiàn)為與產(chǎn)量性狀密切相關(guān)的性狀總體表現(xiàn)不良，分別體現(xiàn)在千粒重低、粒徑小、穗粒重低、穗粒數(shù)少、旗葉較窄和旗葉面積較小等特點(diǎn)。具有Pinb-2v3基因的普通小麥品種千粒重平均值40.3克、粒徑平均值2.36毫米、穗粒數(shù)平均值45.5個(gè)、每穗粒重平均值1.86克、旗葉面積平均值25.2平方厘米、旗葉寬度平均值1.72厘米。因此，通過沉默Pinb-2v2基因，消除其對(duì)產(chǎn)量性狀的負(fù)面影響將對(duì)利用基因工程技術(shù)改良小麥農(nóng)藝性狀和培育高產(chǎn)小麥品種起到十分重要作用，同時(shí)也有助于產(chǎn)量性狀的遺傳和分子生物學(xué)的進(jìn)一步研究。本發(fā)明提供的方法可以應(yīng)用于小麥的育種，實(shí)現(xiàn)早期篩選，節(jié)省時(shí)間和資源。具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。下述實(shí)施例中的％，如無特殊說明，均為質(zhì)量百分含量。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。實(shí)施例中所用引物均由上海生物工程公司合成。小麥材料為來自黃淮麥區(qū)的169份有代表性的農(nóng)家小麥品種和當(dāng)?shù)卮笠?guī)模種植的普通小麥品種和高代品系，具體如下(ZM編號(hào)為國家種質(zhì)資源庫編號(hào))1、錢交麥河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)趙亮，田紀(jì)春.山東省不同年代小麥推廣品種遺傳多樣性的AFLP分析.分子植物育種，2007，5:403_411。2、晉麥50河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)劉新月，張久剛，衛(wèi)云宗.優(yōu)質(zhì)抗旱小麥新品種晉麥78號(hào)的選育.山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，4:35-37。3、慶豐1號(hào)ZM010038。4、江東門河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)田夢(mèng)雨，李丹丹，戴廷波，姜東，荊奇，曹衛(wèi)星.水分脅迫下不同基因型小麥苗期的形態(tài)生理差異.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，21:41-47。5、晉麥49河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)劉志峰，張曉鵬.山西南部高水肥地冬麥豐產(chǎn)技術(shù).山西農(nóng)業(yè)，2003，12:20-21。6、合作2號(hào)ZM009681。7、晉麥54:ZM010378o8、蚰包ZM009411。9、隴麥157河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)任根深.豐產(chǎn)多抗冬小麥新品系隴麥157選育報(bào)告.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2007，5:3-4。10、冀麥26河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)傅滿良，馬炳義.冀麥26在和田的種植表現(xiàn)及其栽培要點(diǎn).新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，1993，1:8-8。11、豫麥47河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)林作輯，雷振生，吳政卿，楊會(huì)民，章家長，劉嬡媛.豫麥47號(hào)選育與開發(fā)中的經(jīng)驗(yàn)與問題.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2001,6:7-8。12、魯麥19河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)曹學(xué)昌.旱地小麥新品種魯麥19號(hào)的選育及配套技術(shù).山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，1993，4:23-23。13、西農(nóng)6028河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)張小燕，宋哲民，嚴(yán)威凱.陜西小麥品種生態(tài)亞型的分類1994，3:23-26。14、松花江1號(hào)ZM009687。15、紅蚰子河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)黃惠主編。河南省及黃淮麥區(qū)小麥種質(zhì)資源目錄。黃河水利出版社，2003，1-117。16、昌樂5號(hào):ZM009419o17、豫麥13河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)林作楫，王勝軍.豫麥13小麥高產(chǎn)栽培技術(shù)河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，1992，1:8-12。18、藁麥9415河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)張清海，范濂，崔黨群，牛云生。黃淮南片小麥主要審定推廣小麥品種及其選育(2008修訂版)。中國農(nóng)業(yè)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iāo)記。遺傳，2001，23:2001，23:60。165、光頭麥河南農(nóng)業(yè)大學(xué)；參考文獻(xiàn)龍玲，劉紅梅，馮明義，陸紹炎，莫純碧，姜府文，岳朝能。不同小麥品種對(duì)條銹病的抗性評(píng)價(jià)。貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37:92-95。實(shí)施例1、不同品種小麥性狀的測(cè)定每個(gè)品種隨機(jī)選用10株材料，結(jié)果為10株的平均值。一、產(chǎn)量性狀測(cè)定種子收獲前，調(diào)查如下指標(biāo)每株的旗葉長度和旗葉寬度；旗葉面積=旗葉長度χ最大葉寬X0.75。收獲后，調(diào)查每穗粒數(shù)和每穗粒重。測(cè)定結(jié)果見表1。二、籽粒千粒重和粒徑測(cè)定測(cè)定小麥樣品千粒重和粒徑。測(cè)定結(jié)果見表1。實(shí)施例2、小麥Pinb-2v2基因與性狀的相關(guān)性一、用PCR技術(shù)鑒定puroindolineb_2基因類型1、提取小麥籽?；蚪MDNA提取小麥籽?；蚪MDNA，具體方法為1)用錘子砸碎后放入1.5mL離心管中，力口入ImL樣品提取液(含288mMNaCl,200mMTris-HCl,25mMEDTA，0.5%SDS)，搖30分鐘，使其充分混勻；2)在4°C、12，OOOrpm下離心15分鐘，移上清至另一2mL離心管中，加入等體積的酚/氯仿(11；體積比)；3)12，OOOrpm離心15分鐘，移上清至另一2mL離心管中，力口入0.5倍上清體積的氯仿/異戊醇(241;體積比)，充分搖勻；4)12，OOOrpm離心10分鐘，移上清至另一新的2mL離心管中，加入1/10體積的3MNaAC水溶液(pH=5.2)和0.6倍上清體積的異丙醇沉淀DNA，輕輕混勻；5)12，OOOrpm離心15分鐘，棄上清，加入0.5mL70%(體積百分含量)乙醇水溶液，靜置5min;6)12，000離心5min，棄上清。真空干燥后加入IOOyLTE溶解沉淀，沉淀即為小麥籽粒基因組DNA。最后，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)小麥籽?；蚪MDNA的濃度，-20°C下保存?zhèn)溆谩?、PCR鑒定l)Puroindoline基因型鑒定由于Puroindolineb_2基因與puroindoline基因核苷酸序列相似性高達(dá)70%左右，因此為保證該實(shí)驗(yàn)不受puroindoline基因影響，本發(fā)明對(duì)puroindoline基因型進(jìn)行了鑒定。小麥中發(fā)現(xiàn)的puroindoline基因型分為三種，Pina-Dla/Pinb-Dla，Pina-Dla/Pinb-Dlb和Pina-Dla/Pinb-Dlp。以小麥籽?；蚪MDNA為模板，鑒定Pinb-Dlb突變型的特異引物為引物1(上游)5，-ATGAAGACCTTATTCCTCCTA-3，；引物2(下游)5，-CTCATGCTCACAGCCGCT-3，。以小麥籽?；蚪MDNA為模板，將其余硬質(zhì)類型小麥采用Pinb基因全長引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，共有Pinb-Dlp材料12份。Pinb基因全長引物如下引物5(上游)5，-GAGCCTCAACCCATCTATTCATC-3，；引物6(下游)5，-CAAGGGTGATTTTATTCATAG-3，。2)Puroindolineb_2基因型鑒定鑒定Pinb-2v2所用引物如下引物3(上游)5，-CTTGTAGTGAGCACAACCTTTGCA-3，；引物4(下游)5，-GTATGGACGAACTTGCAGCTGGAG-3，。以小麥籽?；蚪MDNA為模板，用上述引物分別對(duì)所有小麥品種進(jìn)行puroindolineb-2基因型鑒定。步驟1)和步驟2)中=PCR反應(yīng)體系的組成均為1.5mmol/LMgCl2,0.3mmol/LdNTP，上、下游引物各lOpmol，模板DNA200ng，0.5UTaq酶，加1XPCR緩沖液(含IOmmol/LTris-HCl,pH9.0,50mmol/LKCl,1.0%TritonX-100)，定容至25μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)橄?4°C預(yù)變性5min；然后94°C變性lmin，58°C退火45sec，72°C延伸lmin，共35個(gè)循環(huán)；最后，72°C延伸5min。PCR擴(kuò)增結(jié)束后，取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μL，進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳(采用IXTAE緩沖液；溴化乙錠(EB)染色，160V,1.5小時(shí))，電泳結(jié)束后用凝膠成像系統(tǒng)(MultiGeniusGelDocumentationandAnalysisSystem)掃描成像并用計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析。檢測(cè)結(jié)果見表1。表1不同品種小麥性狀的測(cè)定結(jié)果和基因型檢測(cè)結(jié)果編千粒11粒徑~~穗粒數(shù)~~每穗粒重旗葉寬旗葉長~旗葉面積是否具有號(hào)(mg)(mm)(個(gè))(g)(cm)(cm)(cm2)PCR產(chǎn)物~3672391738Τθ625ΙθΓθ^~~2347Zl337172821202^~~33579Ζ243Γδθ173321209^~27ΛΓδ43Τθ8Τ37222Ζ6^~~5499Ζ839ΓθL4217Τ^~~6292Γδ40096L4334365^~~7502O45Ζ04L441819Λ^~~836762Λ421722L4517ΙδΓδ^~~93179252L78L4521228^~10429Ζ5371763L4914ΙδΓβ^~Π342Ζ230Τθ8ΠΙ16Τ^~12δΤΓθO411795175318207^~13295L766ΓδθUEl273L2^~14267Γδ36086Γδβ27βΤΓβ^~1537^4251L49Τ5720236^~163772Λ46LTJΤ5724283^~174782Λ492731Τβ17205^~1837501769Τβ182L7^~195042839ΓδΤβ22266^<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>有40份材料的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳顯示具有條帶，將所有得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，發(fā)現(xiàn)PCR產(chǎn)物的核苷酸序列均如序列表的序列2自5’端第34至434位核苷酸所示。將PCR產(chǎn)物的核苷酸序列如序列表的序列2自5’端第34至434位核苷酸所示的小麥的基因型命名為Pinb-2v2基因型?？傮w上，擁有Pinb-2v2基因的小麥品種千粒重、粒徑、穗粒數(shù)、每穗粒重、旗葉面積和旗葉寬度均顯著低于不含Pinb-2v2的品種。為消除puroindoline基因?qū)π←湲a(chǎn)量性狀的可能影響，進(jìn)一步增強(qiáng)數(shù)據(jù)可靠性，分別對(duì)屬于相同puroindoline基因型不同puroindolineb_2基因型的樣本進(jìn)行比較，擁有Pinb_2v2的小麥品種千粒重、粒徑、穗粒數(shù)、每穗粒重、旗葉面積和旗葉寬度均顯著低于不含Pinb-2v2的品種(見表2)。表2小麥Pinb-2v2基因型與其它基因型產(chǎn)量性狀比較表<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>注不同字母差異表明差異達(dá)5%顯著水平。權(quán)利要求一種輔助鑒定具有不同性狀小麥的方法，包括如下步驟以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；2)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；3)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；4)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；5)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；6)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于1)至6)中，所述DNA片段為401bp的DNA片段。3.序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對(duì)。4.權(quán)利要求3所述引物對(duì)在制備輔助鑒定具有不同性狀小麥的試劑盒中的應(yīng)用；所述性狀為千粒重、粒徑、穗粒數(shù)、每穗粒重、旗葉面積和旗葉寬度中的至少一種。5.輔助鑒定具有不同性狀小麥的試劑盒，包括權(quán)利要求3所述引物對(duì)；所述性狀為千粒重、粒徑、穗粒數(shù)、每穗粒重、旗葉面積和旗葉寬度中的至少一種。6.一種輔助鑒定具有不同性狀小麥的方法，是檢測(cè)待測(cè)小麥的基因組DNA中是否具有序列表的序列2所示核苷酸，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；2)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；3)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；4)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；5)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥；6)基因組DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麥。7.一種輔助鑒定具有不同性狀小麥的方法，是檢測(cè)待測(cè)小麥的基因組DNA中是否具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；2)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；3)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；4)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；5)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥；6)基因組DNA中具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于基因組DNA中不具有序列表的序列2自5’端第34至434位所示核苷酸的小麥。8.權(quán)利要求1或2所述方法，權(quán)利要求3所述引物對(duì)，權(quán)利要求5所述試劑盒，權(quán)利要求6所述方法或權(quán)利要求7所述方法在小麥育種中的應(yīng)用。9.一種蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與小麥生產(chǎn)性狀相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。10.編碼權(quán)利要求1所述蛋白的基因，優(yōu)選如下1)或2)或3)或4)的DNA分子1)序列表中序列2所示的DNA分子；2)序列表中序列2自5，端第34至434位核苷酸所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼小麥生產(chǎn)性狀相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與1)或2)或3)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼小麥生產(chǎn)性狀相關(guān)蛋白的DNA分子。全文摘要本發(fā)明公開了一種輔助鑒定具有優(yōu)良性狀的小麥的方法。本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行如下1)至6)中任一所述的判斷1)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的千粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；2)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的粒徑在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；3)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的穗粒重在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；4)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的穗粒數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；5)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的旗葉面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥；6)能擴(kuò)增出DNA片段的小麥的旗葉寬度在統(tǒng)計(jì)學(xué)小于不能擴(kuò)增出DNA片段的小麥。本發(fā)明提供的方法可以應(yīng)用于小麥的育種，實(shí)現(xiàn)早期篩選，節(jié)省時(shí)間和資源。文檔編號(hào)C12N15/29GK101798597SQ201010129598公開日2010年8月11日申請(qǐng)日期2010年3月19日優(yōu)先權(quán)日2010年3月19日發(fā)明者崔黨群,程西永,董中東,詹克慧,許海霞,陳鋒申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)