專利名稱：固定化基底及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及固定化基底和制備所述固定化基底的方法。
背景技術(shù)：
最近，在臨床檢驗等中正在進行利用諸如免疫反應(yīng)的分子間相互作用的大量測量。在這些中，優(yōu)選使用的幾種技術(shù)不需要復(fù)雜的操作或標(biāo)記物質(zhì)，但能夠以高靈敏度檢測測試物質(zhì)的結(jié)合量變化。此類技術(shù)的實例包括表面等離子共振(SPR)測量技術(shù)，石英晶體微天平OiCM)測量技術(shù)，和使用功能表面的測量技術(shù)，所述功能表面的范圍從膠體金顆粒至超微顆粒。在這些技術(shù)中的任一種中，其上固定有待測量物質(zhì)的表面是重要的。以下，表面等離子共振(SPR)測量技術(shù)將作為實例進行描述。通常，用于測量靶物質(zhì)的測量芯片包括其中蒸鍍金屬膜和具有能夠固定靶物質(zhì)的官能團的薄膜以此順序在透明基底(例如，玻璃)上形成的芯片。靶物質(zhì)經(jīng)所述官能團固定在所述金屬膜的表面上。通過測量所述靶物質(zhì)和測試物質(zhì)之間的特異性結(jié)合反應(yīng)來分析物質(zhì)之間的相互作用。然而，靶物質(zhì)和測試物質(zhì)之間的相互作用僅當(dāng)存在促進所述靶物質(zhì)和所述測試物質(zhì)之間的相互作用的物質(zhì)時發(fā)生，此相互作用不能通過上述方法直接檢測到。為了檢測所述靶物質(zhì)和所述測試物質(zhì)之間的此相互作用，需要將所述測試物質(zhì)和輔助物質(zhì)同時提供至所述靶物質(zhì)，使得該輔助物質(zhì)與所述測試物質(zhì)或所述靶物質(zhì)接觸。為此，不僅需要大量的輔助物質(zhì)，而且如果難以獲得所述輔助物質(zhì)則測量成本將受到影響。另外，由于輔助物質(zhì)、測試物質(zhì)和靶物質(zhì)需要彼此靠近地定位，因此也存在著反應(yīng)效率下降的問題。此外，輔助物質(zhì)不僅包括本身與靶物質(zhì)不相互作用的物質(zhì)，而且包括的確與靶物質(zhì)相互作用的物質(zhì)。為此，在所述輔助物質(zhì)與靶物質(zhì)相互作用的情況下，還存在著難以檢測所述靶物質(zhì)和所述測試物質(zhì)之間的精確相互作用的問題。為了解決這些問題，例如，JOURNAL OF MOLECULARRECOGNITION (分子識別雜志)1999，第12卷，第316-321頁公開了一種制備和固定IL-12受體復(fù)合物的方法，其中 IL-2受體亞基的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與卷曲螺旋(亮氨酸拉鏈)結(jié)構(gòu)域整合在一起。此文件還公開這樣的復(fù)合物顯示比單獨的所述亞基更高的親和力。然而，在此方法中存在著所需融合物質(zhì)的表達水平低的問題，這是因為需要通過重組技術(shù)引入允許受體的卷曲螺旋反應(yīng)的標(biāo)簽。另外，還存在著卷曲螺旋反應(yīng)位點抑制受體與測試物質(zhì)的結(jié)合活性和此方法的通用性低的問題。作為采用多種分子俘獲一種測試物質(zhì)的技術(shù)，在日本專利號3527239和4036961 和日本專利申請公開(JP-A)號2006-137805中公開了一種稱為分子印記(molecular imprinting)的技術(shù)。此分子印記是一種制備人工分子識別物質(zhì)的方法，其中使用有機聚合物將靶分子固定在基底上，接著去除該靶分子，從而與該靶分子的分子形狀相對應(yīng)的結(jié)構(gòu)被作為多孔體留下。
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然而，在分子印記中，由于抗體通過聚合作用固定在基底上，因此抗原必須穿透到交聯(lián)的凝膠基質(zhì)結(jié)構(gòu)中以便接觸抗體。因此對于抗原與抗體反應(yīng)需要一定時間，從而為了使物質(zhì)確實地被識別，需要高度濃縮的抗原。此外，通過洗滌去除抗原的能力和抗原在去除后再次應(yīng)用時的反應(yīng)性往往會下降。JP-ANo. 10-78436公開了一種測量抗原濃度的方法，其中VH-區(qū)多肽或VL-區(qū)多肽被固定在固相上，該方法利用Fv區(qū)(抗體的識別位點)的穩(wěn)定性隨著與抗體的結(jié)合而變化的現(xiàn)象。

發(fā)明內(nèi)容
當(dāng)在靶物質(zhì)、測試物質(zhì)和輔助物質(zhì)的存在下進行檢測時，需要可以以穩(wěn)定的結(jié)合性質(zhì)精確地檢測到一種類型的測試物質(zhì)和兩種或更多種類型的物質(zhì)之間的相互作用的固定化基底。另外，當(dāng)將固定化基底用于生物反應(yīng)器或生物傳感器時，從生產(chǎn)成本的角度來看需要具有更高通用性的制備方法。本發(fā)明是在考慮到上述情況下完成的。本發(fā)明提供了一種具有更高通用性的固定化基底，其可以以穩(wěn)定的結(jié)合性質(zhì)精確地檢測到一種類型的測試物質(zhì)和兩種或更多種類型的物質(zhì)之間的相互作用。本發(fā)明包括下列方面<1> 一種固定抗體片段的基底，包括基底和至少一組抗體片段，其中每組抗體片段包括至少兩種類型的分開的抗體片段，所述至少兩種類型的分開的抗體片段能夠識別一種類型的抗原并且以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的每種抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。<2>根據(jù)<1>所述的固定抗體片段的基底，其中所述至少兩種類型的抗體片段包括VH-區(qū)多肽和VL-區(qū)多肽。<3>根據(jù)<1>或<2>所述的固定抗體片段的基底，還包括聚合物層并且所述至少兩種類型的抗體片段固定在所述聚合物層上。<4>根據(jù)<1>所述的固定抗體片段的基底，其中所述聚合物層的厚度為Inm至 0. 5mmο<5>根據(jù)<3>或<4>所述的固定抗體片段的基底，其中所述聚合物層通過自組裝單分子層結(jié)合至所述基底。<6>根據(jù)<5>所述的固定抗體片段的基底，其中所述自組裝單分子層的厚度為 0. 2nm 至 10 μ m。<7>根據(jù)<1>_<6>中任一項所述的固定抗體片段的基底，其用于基于所述至少兩種類型的抗體片段和所述抗原之間的結(jié)合反應(yīng)的生物反應(yīng)器或生物傳感器。<8>根據(jù)<1>_<7>中任一項所述的固定抗體片段的基底，其用于表面等離子共振分析。<9> 一種制備固定抗體片段的基底的方法，包括使能夠識別一種類型抗原的至少兩種類型的分開的抗體片段與所述抗原接觸以形成復(fù)合物，從而使每種所述抗體片段結(jié)合所述抗原；使所述復(fù)合物經(jīng)由所述復(fù)合物中的所述抗體片段固定在基底上；以及
從所述復(fù)合物中去除所述抗原，以獲得所述固定抗體片段的基底，其中所述抗體片段以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許每種所述抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。<10>根據(jù)<9>所述的制備固定抗體片段的基底的方法，其中所述至少兩種類型的抗體片段包括VH-區(qū)多肽和VL-區(qū)多肽。<11>根據(jù)<9>或<10>所述的制備固定抗體片段的基底的方法，其中所述接觸包括混合所述抗體片段和所述抗原，使得抗原的數(shù)目與由抗體片段組合形成的分子價的比率為 0. 1 1 至 10 1。<12>根據(jù)<9>_<11>中任一項所述的制備固定抗體片段的基底的方法，其中所述去除在減小所述復(fù)合物中所述抗體片段和所述抗原的親和力的條件下進行。根據(jù)本發(fā)明，可以提供具有更高通用性的固定抗體片段的基底，其可以以穩(wěn)定的結(jié)合性質(zhì)精確地檢測到一種類型的測試物質(zhì)和兩種或更多種類型的物質(zhì)之間的相互作用。


圖1是圖示根據(jù)本發(fā)明的固定化基底的實例的示意圖。(A)表示缺少抗原時固定化基底的示意圖。(B)表示存在抗原時固定化基底的示意圖。圖2是制備根據(jù)本發(fā)明中所述的實施例的表達載體的圖解。
具體實施例方式根據(jù)本發(fā)明的固定化基底是一種固定抗體片段的基底，其包括基底和至少一組抗體片段，其中每組抗體片段包括至少兩種類型的分開的抗體片段，所述抗體片段能夠識別一種類型的抗原并且以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的每種抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的固定化基底是一種固定抗體片段的基底，其包括基底和至少一組抗體片段，其中每組抗體片段包括至少兩種不同的分開的抗體片段，所述至少兩種不同的分開的抗體片段能夠識別一種抗原并且以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的每種抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。例如，本發(fā)明提供了一種固定化基底，在其上能夠識別一種類型的抗原的至少兩種類型的分開的抗體片段以一定的位置關(guān)系被獨立地固定，所述位置關(guān)系允許每種抗體片段結(jié)合所述抗原。更具體地，固定抗體片段的基底可以包括，例如，基底和至少一個(例如，兩個或多個)抗體片段組，所述抗體片段組由能夠識別一種抗原的兩種或更多種不同的和分開的抗體片段組成，并且以一定的位置關(guān)系獨立地固定在基底上使得所述兩種或更多種抗體片段的每一種均能夠結(jié)合相同的所述抗原分子或形成單個抗原攜帶實體的任何物質(zhì)。因此， 本發(fā)明的固定抗體片段的基底可以包括兩個或多個這樣的抗原片段組，其可以結(jié)合相同的抗原呈遞實體或分別結(jié)合不同的抗原呈遞實體。在此，“分開的抗原片段”表示彼此不(例如，通過二硫鍵)連接的抗體片段。在本發(fā)明的固定抗體片段的基底中，由于能夠識別一種抗原的至少兩種分開的抗體片段以一定的位置關(guān)系被獨立地固定在基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的所述至少兩種分開的抗體片段結(jié)合相同的所述抗原，所以一組中的抗體片段彼此獨立并且放置在基底上彼此相鄰的位置處。協(xié)作地(cooperatively)識別抗原的此類抗體片段可以顯示比隨機固定的抗原片段更高的親和力。另外，由于每種抗體片段以一定的位置關(guān)系獨立地固定在基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的至少兩種分開的抗體片段結(jié)合相同的抗原，并且由于每個抗體片段通過抗體的一部分結(jié)合于基底，所以允許具有抗體識別位點的結(jié)構(gòu)部分以可以結(jié)合抗原的程度移動。因此，當(dāng)抗原存在時，一組中的每種抗原片段可以容易地接近抗原并且可以協(xié)作地與抗原結(jié)合。因此，當(dāng)抗原作為測試物質(zhì)存在時，至少兩種類型的分開的抗體片段可以以高親和力和高穩(wěn)定性與抗原結(jié)合。另外，由于通過使用抗原將抗體片段固定，所以一組中的至少兩種類型的抗體片段被固定在基底上相鄰的位置處，即使當(dāng)每一種抗體片段對抗原具有弱親和力。此外，由于抗體片段彼此獨立，所以當(dāng)它們之間的親和力弱時，抗體片段不會彼此締合并且可以容易地彼此獨立地改變它們的角度。因此，本發(fā)明的固定化基底可以應(yīng)用于其中柔性是至關(guān)重要的催化反應(yīng)和/或序列反應(yīng)中。下面進一步描述本發(fā)明。(I)固定化基底(1)基底本發(fā)明的基底的優(yōu)選實例包括其中將官能團添加至任一種下列物質(zhì)上的基底金屬氧化物，諸如玻璃、二氧化硅、氧化鋁、氧化鈦、氧化鋯和氧化銦錫(ITO)；金屬氮化物，諸如氮化硅、氮化鎵、氮化鋁和氮化銦；和合成樹脂，具體地諸如瓊脂糖凝膠(kpharose)(商品名)、聚乙烯、聚苯乙烯、聚(甲基)丙烯酸、聚(甲基)丙烯酰胺、聚(甲基)丙烯酸甲酯、聚對苯二甲酸乙二醇酯或聚碳酸酯或環(huán)烯烴聚合物的樹脂。所述官能團的實例包括氨基、羧基、馬來酰亞胺基、醛基、琥珀酰亞胺基、硫醇基、胼基、異氰酸酯基、環(huán)氧基、乙烯基砜基、乙烯基和氰基。添加這些官能團的方法的實例包括處理表面的已知方法，諸如等離子處理、臭氧處理、使用酸和/或堿的蝕刻處理，或使用自組裝單分子層的方法。從生產(chǎn)適合性的角度來看，優(yōu)選使用自組裝單分子層的方法。形成自組裝單分子層的方法的實例包括(1-1)使用硅烷偶聯(lián)劑的方法和(1-2)使用烷基硫醇的方法。下面說明各種方法。(1-1)使用硅烷偶聯(lián)劑的方法在使用硅烷偶聯(lián)劑的方法中，通過向上述的基底提供下述的硅烷偶聯(lián)劑，可以通過硅烷偶聯(lián)劑形成自組裝單分子層，從而向基底提供官能團。作為可以用于本發(fā)明中的硅烷偶聯(lián)劑，由下式A-I表示的含硅化合物可以用來形成共價鍵，諸如基底-氧-硅-碳，從而向基底表面提供官能團。在式A-I中，Xa表示官能團；La表示接頭結(jié)構(gòu)部分，諸如直鏈、支鏈或環(huán)狀碳鏈；Ra表示氫或具有1-6個碳原子的烷基；Ya表示可水解基團；m和η各自獨立地表示0-3的整數(shù)，且m和η的總和為3。Xa-La-Si-Ram) Yan 式 A-I可水解基團(Ya)的實例包括烷氧基、鹵素基團和酰氧基。更具體地，可水解基團 (Ya)的實例包括甲氧基、乙氧基和氯。硅烷偶聯(lián)劑的具體實例包括Y-氨基丙基三甲氧基硅烷、Ν-β_(氨基乙基)-Y-氨基丙基三甲氧基硅烷、Y-氨基丙基甲基二乙氧基硅烷、Y-巰基丙基三甲氧基硅烷和Y-環(huán)氧丙氧丙基三乙氧基硅烷。硅烷偶聯(lián)劑的反應(yīng)方法的實例包括諸如在〃 Effects and usages of si lane coupling agents (硅燒偶聯(lián)劑的作用和使用)“(Science&Technology Co.，Ltd.)中所述方法的一般方法。硅烷偶聯(lián)劑的官能團(Xa)的實例不受限制，只要官能團(Xa)可以結(jié)合下面所述的聚合物和/或復(fù)合物。官能團的實例包括諸如氨基、羧基、羥基、醛基、硫醇基、異氰酸酯基、 異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、氰基、胼基、酰胼基、乙烯基砜基、乙烯基和馬來酰亞胺基的官能團。 也可以使用官能團或其衍生物的組合。在這些中，官能團(Xa)優(yōu)選為氨基或環(huán)氧基。(1-2)使用烷基硫醇的方法在使用烷基硫醇的方法中，將金屬膜布置在上述的基底的表面上，然后在其上提供烷基硫醇。在此，“布置在基底的表面上”是指金屬膜布置在基底的表面上使得其與基底直接接觸的情況，以及金屬膜經(jīng)由另一層布置而不直接接觸基底的表面的情況。當(dāng)將金屬膜用于表面等離子共振生物傳感器時，構(gòu)成金屬膜的金屬不特別地受限制，只要生成表面等離子共振。金屬的優(yōu)選實例包括自由電子金屬，諸如金、銀、銅、鋁和鉬。 在這些中，特別優(yōu)選金。這些金屬可以單獨使用或以它們中的兩種或更多種的組合使用。此外，考慮到與上述基底的可附著性，可以在基底和金屬層之間提供包括鉻等的中間層。不特別地限制金屬膜的膜厚度。當(dāng)將金屬膜用于表面等離子共振生物傳感器時， 膜厚度優(yōu)選為0. lnm-500nm,且更優(yōu)選lnnHBOOnm。當(dāng)膜厚度超過500nm時，不能充分地檢測到介質(zhì)的表面等離子現(xiàn)象。此外，當(dāng)提供包括鉻等的中間層時，中間層的厚度優(yōu)選為 0.Inm-IOnm0使用烷基硫醇涂敷金屬膜的方法已經(jīng)由哈佛大學(xué)的Whitesides教授進行了深入的研究，并且其細(xì)節(jié)描述在例如，Chemical Review (化學(xué)綜述),105,1103-1169 (2005)中。 當(dāng)將金用作金屬時，由下式A-2 (其中η表示3-20的整數(shù)，且Xb表示官能團)表示的烷基硫醇可以用作形成有機層的化合物，從而可以基于烷基鏈之間的Au-S鍵和范德華力以自組裝方式形成具有一個取向的單分子膜。自組裝單分子層可以通過極為容易的方法產(chǎn)生，該方法包括將金基底浸沒在烷基硫醇衍生物的溶液中。更具體地，官能團可以提供至基底的表面，例如，通過使用其中式Α-2中的Xb表示氨基、羧基、羥基、醛基、硫醇基、異氰酸酯基、 異硫氰酸酯基、環(huán)氧基、氰基、胼基、酰胼基、乙烯基砜基、乙烯基和馬來酰亞胺基的化合物形成自組裝單分子層來提供。HS (CH2)nXb Α-2在式Α-2中，亞烴基的重復(fù)次數(shù)η優(yōu)選為3_16的整數(shù)，且更優(yōu)選為4_8的整數(shù)。亞烴基結(jié)構(gòu)部分可以用多個鍵或諸如氮或氧的雜原子來取代。當(dāng)烷基硫醇衍生物的烷基鏈太短時，難以形成自組裝單分子層。當(dāng)烷基硫醇衍生物的烷基鏈太長時，水溶性下降并且因此難以對其進行處理。自組裝單分子層可以用單種類型的式Α-2的烷基硫醇形成，S卩，具有一種類型的官能團Xb的烷基硫醇。自組裝單分子層也可以由兩種或更多種類型的此類烷基硫醇的混合物形成。不特別地限制自組裝單分子層的膜厚度。當(dāng)將自組裝單分子層用于表面等離子共振生物傳感器時，膜厚度優(yōu)選為0. 2nm-10 μ m,更優(yōu)選lnm-500nm，且還更優(yōu)選lnnHBOOnm。 當(dāng)膜厚度為10 μ m以下時，測試物質(zhì)可以容易地在單層中擴散。當(dāng)膜厚度為0. 2nm以上時，
7要固定在基底上的物質(zhì)的固定量可能會增加。在本發(fā)明中，抗體片段可以直接固定于自組裝單分子層。然而，為了改善抗體片段的抗原結(jié)合效率，優(yōu)選在自組裝單分子層上形成聚合物層以便提供用于將抗體片段固定在基底表面上的官能團。本發(fā)明中使用的聚合物優(yōu)選為親水聚合物，并且其實例包括明膠、瓊脂糖、殼聚糖、葡聚糖、角叉菜膠、海藻酸、淀粉、纖維素，或它們的衍生物，諸如羧甲基衍生物，或可吸水膨脹的有機聚合物(例如，聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇和它們的衍生物)。可用于本發(fā)明中的親水聚合物的優(yōu)選實例包括含羧基的合成聚合物和含羧基多糖。含羧基的合成聚合物的實例包括聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和它們的共聚物。更多的實例包括甲基丙烯酸共聚物、丙烯酸共聚物、衣康酸共聚物、巴豆酸共聚物、馬來酸共聚物、部分酯化的馬來酸共聚物，和其中已經(jīng)添加了酸酐的含羥基聚合物，諸如，例如 JP-ANo. 59-53836，第3頁右上欄第2行至第6頁左下欄第9行，和JP-A No. 59-71048，第3 頁左下欄第1行至第5頁左上欄第3行中公開的那些。含羧基多糖的實例包括選自下列的任一種來自天然植物的提取物，通過微生物發(fā)酵獲得的產(chǎn)物，通過酶獲得的合成產(chǎn)物和化學(xué)合成產(chǎn)物。它們的具體實例包括透明質(zhì)酸、 硫酸軟骨素、肝素、硫酸皮膚素、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素、纖維素糖醛酸(cellouronic acid)、羧甲基甲殼質(zhì)、羧甲基葡聚糖和羧甲基淀粉。作為含羧基多糖，也可以使用商購產(chǎn)品。它們的具體實例包括羧甲基葡聚糖，諸如CMD，CMD-L和CMD-D40 (商品名，均由Meito Sangyo Co.，Ltd.制造)，羧甲基纖維素鈉(由 Wako Pure Chemicallndustries, Ltd.制造)和海藻酸鈉(由 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.制造)。不特別地限制本發(fā)明中使用的親水聚合物的分子量。通常，重均分子量優(yōu)選為 2X IO2至5X 106，且更優(yōu)選為1 X IO4至2X 106。當(dāng)重均分子量小于上述范圍時，抗體片段在基底上的固定量可能會減小。大于上述范圍的重均分子量導(dǎo)致高溶液粘度，從而使得其難以進行處理。聚合物層在水溶液中的厚度優(yōu)選為lnm-0. 5mm，更優(yōu)選Inm-I μ m，且還更優(yōu)選 100nm-500nm。當(dāng)厚度小于上述范圍時，生理活性物質(zhì)的固定量變小，使得該生理活性物質(zhì)與測試物質(zhì)的相互作用不太可能發(fā)生。當(dāng)膜厚度超過上述范圍時，不能保持聚合物層的均勻性，并且可能抑制測試物質(zhì)擴散進聚合物膜中。特別地，當(dāng)從傳感器基底的一側(cè)檢測到相互作用時，所述一側(cè)與所述傳感器基底的固定親水聚合物的表面相反，由于從檢測表面至形成相互作用的部分的距離長，可能導(dǎo)致檢測靈敏度下降。親水聚合物在水溶液中的厚度可以通過例如，AFM或橢圓光度法來評估。當(dāng)使用含羧基聚合物時，復(fù)合物可以通過官能團固定在基底上，所述官能團通過活化聚合物的羧基而提供至基底表面上?；罨然酆衔锏姆椒ǖ膶嵗ㄒ阎椒?， 例如，其中通過使用水溶性碳二亞胺諸如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC) 和N-羥基琥珀酰亞胺(MB)來活化含羧基聚合物的方法，和其中通過單獨使用EDC活化含羧基聚合物的方法。具有通過使用這些方法活化的羧基的聚合物可以與具有氨基的物質(zhì)反應(yīng)，從而將親水聚合物附著在基底上?；罨然酆衔锏姆椒ǖ膶嵗€包括使用含氮化合物的方法。含氮化合物的具
8體實例包括由下式(Ia)或式(Ib)表示的化合物(其中，R1和R2各自獨立地表示未取代的或取代的羰基，可以具有取代基的碳原子，或可以具有取代基的氮原子；R1和R2可以彼此連接形成5元或6元環(huán)；A表示具有取代基的碳原子，或具有取代基的磷原子；M表示形成總體上(n-1)-價抗衡離子的元素；且X表示鹵素原子)。
權(quán)利要求
1.一種固定抗體片段的基底，包括基底和至少一組抗體片段，其中每組抗體片段包括至少兩種類型的分開的抗體片段，所述至少兩種類型的分開的抗體片段能夠識別一種類型的抗原并且以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的每種抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。
2 根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定抗體片段的基底，其中所述至少兩種類型的抗體片段包括VH-區(qū)多肽和VL-區(qū)多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的固定抗體片段的基底，還包括聚合物層并且所述至少兩種類型的抗體片段被固定在所述聚合物層上。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的固定抗體片段的基底，其中所述聚合物層的厚度為Inm至 0. 5mmο
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的固定抗體片段的基底，其中所述聚合物層通過自組裝單分子層結(jié)合至所述基底上。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的固定抗體片段的基底，其中所述自組裝單分子層的厚度為 0. 2nm 至 10 μ m。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的固定抗體片段的基底，其用于基于所述至少兩種類型的抗體片段和所述抗原之間的結(jié)合反應(yīng)的生物反應(yīng)器或生物傳感器。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的固定抗體片段的基底，其用于表面等離子共振分析。
9.一種制備固定抗體片段的基底的方法，包括使能夠識別一種類型的抗原的至少兩種類型的分開的抗體片段與所述抗原接觸以形成復(fù)合物，由此每種所述抗體片段與所述抗原結(jié)合；使所述復(fù)合物經(jīng)由所述復(fù)合物中的所述抗體片段固定在基底上；以及從所述復(fù)合物中去除所述抗原，獲得所述固定抗體片段的基底，其中所述抗體片段以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許每種所述抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備固定抗體片段的基底的方法，其中所述至少兩種類型的抗體片段包括VH-區(qū)多肽和VL-區(qū)多肽。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的制備固定抗體片段的基底的方法，其中所述接觸包括 混合所述抗體片段和所述抗原，使得抗原的數(shù)目與由抗體片段的組合形成的分子價的比率為 0. 1 1 至 10 1。
12.根據(jù)權(quán)利要求9-11中任一項所述的制備固定抗體片段的基底的方法，其中在減小所述復(fù)合物中所述抗體片段和所述抗原的親和力的條件下進行所述去除。
全文摘要
固定抗體片段的基底包括基底和至少一組抗體片段，其中每組抗體片段包括至少兩種類型的分開的抗體片段，所述至少兩種類型的分開的抗體片段能夠識別一種類型的抗原并且以一定的位置關(guān)系獨立地固定在所述基底上，所述位置關(guān)系允許一組中的每種抗體片段結(jié)合相同的所述抗原。
文檔編號C12N15/09GK102197306SQ20098014205
公開日2011年9月21日 申請日期2009年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月24日
發(fā)明者上田宏, 伊原正喜, 南高一, 都筑博彥 申請人:國立大學(xué)法人東京大學(xué), 富士膠片株式會社