專利名稱：：一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于微生物菌株的分離純化領域，特別涉及一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法。
背景技術：
：自20世紀70年代以來，隨著農(nóng)村人口的快速增長和農(nóng)村經(jīng)濟的不斷發(fā)展，農(nóng)業(yè)綜合開發(fā)規(guī)模和鄉(xiāng)鎮(zhèn)工業(yè)對資源的利用強度日益擴大，使我國農(nóng)村本來就已經(jīng)短缺的資源和脆弱的生態(tài)環(huán)境面臨著越來越大的壓力。中國的區(qū)域和人口重點在農(nóng)村，農(nóng)村生態(tài)環(huán)境惡化趨勢不從根本上扭轉(zhuǎn)，將不僅嚴重影響和制約農(nóng)業(yè)穩(wěn)產(chǎn)增收、農(nóng)民脫貧致富和農(nóng)村現(xiàn)代化進程，使“三農(nóng)問題”變成越來越難解的癥結(jié)所在，而且也將直接影響我國社會經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展，嚴重威脅廣大人民群眾的身體健康，關乎食品安全和社會穩(wěn)定。因此，加強農(nóng)村生態(tài)環(huán)境保護不僅是當前農(nóng)村經(jīng)濟社會發(fā)展中一項緊迫而又艱巨的任務，而且也成為我國新時期生態(tài)環(huán)境保持工作的重中之重。微生物針對不同的污染物會分泌不同的酶參與反應，從而改變污染物的結(jié)構(gòu)，降低其不利影響。本發(fā)明借助生物強化技術的思想，從農(nóng)村生活污水中經(jīng)馴化、富集分離、純化后，得到一株高效脫氮降解的細菌。由于微生物對環(huán)境適應性強，且污染過程經(jīng)歷一段自然馴化期，因而可以通過馴化從自然環(huán)境中篩選到目的菌株。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，該方法從農(nóng)村生活污水的泥水中直接提取脫氮菌，種源易得且分離純化方法簡便快捷，成本低，對環(huán)境友好；提取到的菌種脫氮率可達90%以上，具有良好的應用前景。本發(fā)明的一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，包括(1)提取馴化培養(yǎng)后的水樣從上海市崇明區(qū)農(nóng)村生活污水處理工程生物凈化槽_生態(tài)強化浮床中提取馴化了7個月后的泥水混合樣；(2)菌株的富集分離和純化將馴化了7個月后的泥水混合樣靜置30min，取上層水樣ImL作10—1IO,的梯度稀釋，然后每種稀釋濃度分別取ImL菌液于接種到專性脫氮固體培養(yǎng)基進行富集純化培養(yǎng)，確保長出單一菌株，再接種到斜面培養(yǎng)基，于4°C下保存，備用；(3)菌株的篩選將上述菌株按10%的接種量接種于無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3034°C、110120r/min的條件下培養(yǎng)1216小時，然后按20%接種量加入到篩選培養(yǎng)基進行唯一碳源的選擇實驗，最后通過NO3-N的檢測得到脫氮率為90.的菌株。所述步驟(2)中的專性脫氮分離培養(yǎng)基為KN032g/L，K2HPO4O.5g/L，MgSO4·7Η200·2g/L，蒸餾水1000ml,pH7.27.4，乙酸鈉50mmol/L；固體培養(yǎng)基需另加1.8%ff/V的瓊脂；所述步驟(2)中的富集純化培養(yǎng)是指將菌液于接種到專性固體培養(yǎng)基后于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，挑取形態(tài)清晰的單一菌落，編號，在固體培養(yǎng)基上劃線，將培養(yǎng)皿倒置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，，在電子顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，反復24次，確保長出純的單一菌株；所述步驟(3)中無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基為牛肉膏3.0g/L，蛋白陳10.0g/L，NaCl5.Og/L，蒸餾水lOOOmL，pH=7.07.2，斜面培養(yǎng)基為將固體培養(yǎng)基加熱溶化，取干凈的試管，試管中倒入46mL固體培養(yǎng)基，將試管口端放在玻璃棒上，使管內(nèi)培養(yǎng)基形成斜面而形成；所述步驟(3)中的篩選培養(yǎng)基是以專性固氮培養(yǎng)基為基礎，加入3g/L的乙酸鈉、丙酸鈉、乙醇、谷氨酸鈉、檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、甲醇、硫代硫酸鈉、葡萄糖、碳酸氫鈉中的一種作為唯一碳源，調(diào)節(jié)PH至7.7。所述的脫氮菌經(jīng)16SrDNA序列測定，基因全序列如下GATCAAGGTCAAAGGGAAAGTGAATTGAGTGCAAAGGGGCATTAATTCTCAATCTTTATCAAGAAGTACTCTCATATCTATTGCTGTCCGCCATGTTTGAAACACCTGACTCGAGCCACAACATCGAAAATAGTTTAAAGAAGTATAGAAGCTGATAATTAGTACTTTTTATCTGTGGGGTGCGCTTGGGTAGACAGAACGATACTAGGCGATTACACAGGTGCCCGGGATACTACTCCGAACATGCACTCACTGTACGTGCATACTGCTGCTAGCTTCCTAATAATAAAGCTCAAAGCAATTAGATCACAAAGGTAAGTCCGCGTTACTATTGTCTTCGATTGAGATTATCCCTCTGGCAACTTTCCGAAATCCAACGTGTCCAACGTCACCGATTCTTACTTCAACACAAGGTCTCCGATACAACACCTGTCTTGTCCCGTCCCGTCCCCTGACCCCATTCTCCGGACCGGCTCCTGGTTCCGTGGAAGATCCTGAATCCAGCACCTGCCACTATTCGAAGACGAGCTTTCTTGCTGTCAATATTATTGACAGAGCCAAGCAGATAAACTCAGTGAAGTGAAGCTTTGGTTCCAGTCAATACCAAATTGTCGAGAAACCATAAGCGGGACCGGAAGGGATAGGAGAAAAGAGAGGGGGCACGCAAGACCAACAGAGGGAGAGGGGAGAATAACGTCAGACCCAACTAAGACGATTATCGAGCAGGGGCCAGCACAACGCAGAACTTGAGTCACTATCACGGCTATTATCCCTCGCCCTCTGTTTACCTCGAGTCTGCAACAACAAAGATGGCTGGTACAAGGAACTACGACTTTCTGGTAAGTATTGACTAAACTCCCAAGAAACCATAAGCTAAATGTCGGTCTTTGTAGATCAAGTTACTACTTATTGGGGACTCTGGGGTGGGAAAGTCATGCTGTCTATTGCGATTCAGTGAAGACTCGTTCACTCCGTCGTTCATTACTACCATCGGAATCGACTTCAAAATACGTACCATCGAATTGGACGGTAAAAGAGTAAAGCTCCAGATATGGGATACAGCTGGGCAAGAGCGATTTAGAACTATCACTACTGCTTACTACAGAGGAGCCATGGGCATTCTTCTTGTATACGATGTCACTGATGAAAGATCATTCCAAAGTGAGAAACGCCTTCCTTAAACCCGAGGTGGGTCATAAGATAATTTGATGCTAATGCCCAATCACCTTAGACATTCGCACCTGGTTCTCAAATGTCGAACAACATGCGAGCGAAGGCGTTCACAAGATCCTTATTGGCAACAAATGTGATTGGGAAGAGAAGAGGGCTGTGTCAACCGAGCAAGGGCAGCAATTGGCTAATGAGCTGGGAATACCATTCCTTGAAGTATCGGCTAAGAACAACATCAACATCGAGAAAGCGTTTTATGATCTCGCATCCGACATCAAAAAAGGAATGGATACGTCGAAGTCTGAACAGGTCGGCTCTCAGGGCGTGAGCATAGACCAGCAAGGTTCCGGGTTGAATGGCAGCGCAGGTGGGAAGTGCTGTTGAATAGATAGTGCACCCTCATTTGGTCTTCGGGTTATATCTTTCCATCATGACTCTATGTCTTTGCGCGTTACAGGTTTGTGTCATGGCTTCAGTACATCATTACGTTCACGGTTCGAATAGATGCTGGGAAGCTAATTGGCTGATTCTGCTCCTATCCTATGTATGTTGATAATGATGGCAGGGGCTTATGGTTTTCGTGATTGCCTTTATCCTTCTTTCTGTTCTGTCTTGGGTTCTCATCCATTTACTGCGATCGAACTTTCCCAGGTGGCGTTATTCTGTTATATTCATAACTGTGCAAATGATATTCGGTATGGCCATAAACAGTCTTCTGGAAGTGCGGTATACATCACCCTCCAGAATCCCCTTATAAACATGAGGAAACATGGGGCATGTCCGTTTTTAAATGATCTTGGCAAGAGTT；菌株16SrDNA的基因全序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中分析比較，鑒定為門多薩假單胞菌，命名為PseudomonasMedocinaA-5；菌株的菌落呈淡黃色，圓形，菌落成油滴狀有爬延現(xiàn)象。革蘭氏染色后用電子顯微鏡以及掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，菌株為桿菌，革蘭氏染色反應陰性，單極生鞭毛，半透明；該門多薩假單胞菌(PseudomonasMedocina)A_5質(zhì)粒檢測結(jié)果表明該菌不攜帶質(zhì)粒，因此降解基因編碼于染色體上。這一特性使得在利用質(zhì)粒進行水平基因轉(zhuǎn)移的過程中，避免了質(zhì)粒的不相容性，是構(gòu)建具備多種降解能力的基因工程菌的良好材料，且對一般抗生素均無抗性，且易于滅活，保證了使用的生態(tài)安全性。有益效果(1)本發(fā)明所提供的門多薩假單胞菌(PseudomonasMedocina)A-5的種源為處理農(nóng)村生活污水的生物凈化槽中的泥水混合物，種源易得且分離純化方法簡便快捷，成本低，對環(huán)境友好；(2)本發(fā)明所提供的門多薩假單胞菌(PseudomonasMedocina)A-5可以有效地脫氮，脫氮率可達90%以上，該菌株能適應復雜的實際條件，這使得該菌的應用前景廣闊。圖1為(PseudomonasMedocina)A-5的系統(tǒng)進化樹；圖2為(PseudomonasMedocina)A—5的掃描電鏡；圖3為(PseudomonasMedocina)A-5的革蘭氏染色效果圖；圖4為(PseudomonasMedocina)A-5在不同溫度下A-5的生長曲線；圖5為(PseudomonasMedocina)A-5在不同pH下A-5的生物量；圖6為(PseudomonasMedocina)A-5在不同接種量下A-5的生物量；圖7為(PseudomonasMedocina)A-5降解能力的測定。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實施例1高效脫氮菌的分離篩選與鑒定(1)從上海市崇明區(qū)農(nóng)村生活污水處理工程生物凈化槽_生態(tài)強化浮床中提取馴化了7個月后的泥水混合樣；(2)將馴化了7個月后的泥水混合樣靜置30min，取上層水樣ImL作10—110_1Q的梯度稀釋，然后每種稀釋濃度分別取ImL菌液于接種到專性脫氮固體培養(yǎng)基(專性脫氮選擇培養(yǎng)基P/(g·Γ1)為:KN032g,K2HPO4O.5g，MgSO4·7H200.2g，蒸餾水1000ml，pH7·27.4，乙酸鈉50mmol/L(固體培養(yǎng)基另外加1.8%(W/V)瓊脂)進行富集純化培養(yǎng)，將培養(yǎng)皿放在桌上，來回轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿后，將培養(yǎng)皿倒置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。挑取形態(tài)清晰的單一菌落，編號，在固體培養(yǎng)基上劃線，將培養(yǎng)皿倒置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，再觀察結(jié)果。反復2-4次，并在電子顯微鏡下觀察，確保是純的單一菌株后，將分離出的菌種接種到斜面培養(yǎng)基上，4°C下保存于冰箱中待后續(xù)進行降解試驗；(3)將上述菌株按10%的接種量接種于無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(牛肉膏3.Og/L，蛋白陳10.Og/L,NaCl5.Og/L，蒸餾水lOOOmL，pH=7.07.2，斜面培養(yǎng)基為將固體培養(yǎng)基加熱溶化，取干凈的試管，試管中倒入46mL固體培養(yǎng)基，將試管口端放在玻璃棒上，使管內(nèi)培養(yǎng)基形成斜面而形成)中，于3034°C、110120r/min的條件下培養(yǎng)1216小時，然后以20%的接種量提取菌液加入到篩選培養(yǎng)基(以專性脫氮選擇培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，再用3g/L的乙酸鈉、丙酸鈉、乙醇、谷氨酸鈉、檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、甲醇、硫代硫酸鈉、葡萄糖和碳酸氫鈉作為唯一碳源，調(diào)節(jié)PH至7.7)進行唯一碳源的選擇實驗，最后將最佳碳源培養(yǎng)下的菌株接種到含有定量NO3-N培養(yǎng)基中，測試各菌株在不同碳源中3(TC、110r/min培養(yǎng)12h時的脫氮率，篩選出反硝化性能良好的菌株，結(jié)果如表1所示。(4)對菌體進行革蘭氏染色和電鏡掃描，觀察菌株的外部形態(tài)特征。菌株的菌落呈淡黃色，圓形，菌落成油滴狀有爬延現(xiàn)象。革蘭氏染色后用電子顯微鏡以及掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，菌株為桿菌，革蘭氏染色反應陰性，單極生鞭毛。菌體的掃描電鏡結(jié)果和革蘭氏染色效果見圖1，2。再對分離純化得到的單一菌株用接種環(huán)條菌落2-3次加入到無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中進行液體培養(yǎng)，再送至上?；瞪锛夹g公司測定全序列，確定菌種類型為門多薩假單胞菌(PseudomonasMedocina)A-5。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例2高效脫氮菌的最佳條件(1)不同溫度下，在pH值7.7的脫氮試驗培養(yǎng)基(KN032g/L,K2HPO4O.5g/L，MgSO4·7Η200·2g/L，蒸餾水1000ml,pH7.28.2，加入12g/L的乙酸鈉作為唯一碳源，其中NO3-N質(zhì)量濃度為100mg/L，NO3-N由硝酸鉀提供，接入20%的含菌株A-5的培養(yǎng)液，培養(yǎng)測定菌株A-5的脫氮速率和脫氮率，可知30°C時菌株A-5的脫氮效率最大，從應用角度考慮，生物脫氮宜選用在30°C左右條件下進行。(2)將菌株A-5接種于不同初始pH值的試驗培養(yǎng)基中，接種量為20%，30°C培養(yǎng)20h，測定脫氮率知脫氮適宜在偏堿條件下(pH*7.28.2)進行，菌株A_5在pH值為7.7的培養(yǎng)基中生長情況最好，此時其對數(shù)生長期最短，最后得到菌株的濃度最大。因此，菌株A-5的最適生長pH值為7.7。pH低于7.0和高于9.0脫氮速率下降幅度很大。(3)將菌株A-5接種在裝有100ml，pH值為7.7的試驗培養(yǎng)基的250ml錐形瓶中，以不同的接種量接種30°C、110r/min培養(yǎng)20h，測定脫氮率，可見接種量從20%增加到80%，脫氮率增加不大，由于接種量加大，雖然硝酸還原酶量增加，但其達到飽和量時，增加酶量對脫氮影響不大，所以菌株A-5的最佳接種量為20-30%。通過生長條件優(yōu)化得出A-5的最適生長條件為在乙酸鈉為唯一碳源下，30°C，最適培養(yǎng)基初始PH值為7.7，最適接種量為20%。實施例3高效脫氮菌的降解分析在試驗培養(yǎng)基(KN032g，K2HPO4O.5g，MgS04·7H200.2g，蒸餾水1000ml，加入乙酸鈉12g，初始pH值調(diào)為7.7，NO3-N質(zhì)量濃度為IOOmg·L—1，接種量為20%，在30°C下培養(yǎng)，間隔4h取樣測定培養(yǎng)基中殘留的NO3-N濃度。經(jīng)分析測定在最適生長條件下，A-5去除NO3-N的能力顯著，當培養(yǎng)液初始NO3-N濃度為IOOmg化―1時，24h內(nèi)降解率達90.1%。結(jié)果表明，應用該微生物去除農(nóng)村生活污水中NO3-N,改善環(huán)境是可行的。SEQUENCELISTING<110>東華大學<120>一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法<140>2009101991918<141>2009-11-20<160>1<170>PatentInversion3.3<210>1<211>1978<212>DNA<213>門多薩假單胞菌(PseudomonasMedocina)<400>1gatcaaggtcaaagggaaagtgaattgagtgcaaaggggcattaattctcaatctttatc60aagaagtactctcatatctattgctgtccgccatgtttgaaacacctgactcgagccaca120acatcgaaaatagtttaaagaagtatagaagctgataattagtactttttatctgtgggg180tgcgcttgggtagacagaacgatactaggcgattacacaggtgcccgggatactactccg240aacatgcactcactgtacgtgcatactgctgctagcttcctaataataaagctcaaagca300attagatcacaaaggtaagtccgcgttactattgtcttcgattgagattatccctctggc360aactttccgaaatccaacgtgtccaacgtcaccgattcttacttcaacacaaggtctccg420atacaacacctgtcttgtcccgtcccgtcccctgaccccattctccggaccggctcctgg480ttccgtggaagatcctgaatccagcacctgccactattcgaagacgagctttcttgctgt540caatattattgacagagccaagcagataaactcagtgaagtgaagctttggttccagtca600ataccaaattgtcgagaaaccataagcgggaccggaagggataggagaaaagagaggggg660cacgcaagaccaacagagggagaggggagaataacgtcagacccaactaagacgattatc720gagcaggggccagcacaacgcagaacttgagtcactatcacggctattatccctcgccct780ctgtttacctcgagtctgcaacaacaaagatggctggtacaaggaactacgactttctgg840taagtattgactaaactcccaagaaaccataagctaaatgtcggtctttgtagatcaagt900tactacttattggggactctggggtgggaaagtcatgctgtctattgcgattcagtgaag960actcgttcactccgtcgttcattactaccatcggaatcgacttcaaaatacgtaccatcg1020aattggacggtaaaagagtaaagctccagatatgggatacagctgggcaagagcgattta1080gaactatcactactgcttactacagaggagccatgggcattcttcttgtatacgatgtca1140ctgatgaaagatcattccaaagtgagaaacgccttccttaaacccgaggtgggtcataag1200ataatttgatgctaatgcccaatcaccttagacattcgcacctggttctcaaatgtcgaa1260caacatgcgagcgaaggcgttcacaagatccttattggcaacaaatgtgattgggaagag1320aagagggctgtgtcaaccgagcaagggcagcaattggctaatgagctgggaataccattc1380cttgaagtatcggctaagaacaacatcaacatcgagaaagcgttttatgatctcgcatcc1440gacatcaaaaaaggaatggatacgtcgaagtctgaacaggtcggctctcagggcgtgagc1500atagaccagcaaggttccgggttgaatggcagcgcaggtgggaagtgctgttgaatagat1560agtgcaccctcatttggtcttcgggttatatctttccatcatgactctatgtctttgcgc1620gttacaggtttgtgtcatggcttcagtacatcattacgttcacggttcgaatagatgctg1680ggaagctaattggctgattctgctcctatcctatgtatgttgataatgatggcaggggct1740tatggttttcgtgattgcctttatccttctttctgttctgtcttgggttctcatccattt1800actgcgatcgaactttcccaggtggcgttattctgttatattcataactgtgcaaatgat1860attcggtatggccataaacagtcttctggaagtgcggtatacatcaccctccagaatccc1920cttataaacatgaggaaacatggggcatgtccgtttttaaatgatcttggcaagagtt1978權(quán)利要求一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，包括(1)提取馴化培養(yǎng)后的水樣取生活污水處理工程生物凈化槽-生態(tài)強化浮床中提取馴化了7個月后的泥水混合樣；(2)菌株的富集分離和純化將馴化了7個月后的泥水混合樣靜置30min，取上層水樣1mL作10-1～10-10的梯度稀釋，然后每種稀釋濃度分別取1mL菌液于接種到專性脫氮固體培養(yǎng)基進行富集純化培養(yǎng)，確保長出單一菌株，再接種到斜面培養(yǎng)基，于4℃下保存，備用；(3)菌株的篩選將上述菌株按10％的接種量接種于無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于30～34℃、110～120r/min的條件下培養(yǎng)12～16小時，然后按20％的接種量加入到篩選培養(yǎng)基進行唯一碳源的選擇實驗，最后通過NO3-N的檢測得到脫氮率為90.1％的菌株。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，其特征在于所述步驟⑵中的專性脫氮分離培養(yǎng)基為KN032g/L，K2HPO4O.5g/L，MgSO4·7Η200.2g/L，蒸餾水1000ml,pH7.27.4，乙酸鈉50mmol/L；固體培養(yǎng)基需另加1.8%W/V的瓊脂。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，其特征在于所述步驟(2)中的富集純化培養(yǎng)是指將菌液于接種到專性固體培養(yǎng)基后于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，挑取形態(tài)清晰的單一菌落，編號，在固體培養(yǎng)基上劃線，將培養(yǎng)皿倒置于30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，，在電子顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，反復24次，確保長出純的單一菌株。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，其特征在于所述步驟(3)中無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基為牛肉膏3.Og/L，蛋白胨10.Og/L，NaCl5.0g/L，蒸餾水1000mL,pH=7.07.2，斜面培養(yǎng)基為將固體培養(yǎng)基加熱溶化，取干凈的試管，試管中倒入46mL固體培養(yǎng)基，將試管口端放在玻璃棒上，使管內(nèi)培養(yǎng)基形成斜面而形成。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，其特征在于所述步驟(3)中的篩選培養(yǎng)基是以專性固氮培養(yǎng)基為基礎，加入3g/L的乙酸鈉、丙酸鈉、乙醇、谷氨酸鈉、檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、甲醇、硫代硫酸鈉、葡萄糖、碳酸氫鈉中的一種作為唯一碳源，調(diào)節(jié)PH至7.7。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，其特征在于所述的脫氮菌經(jīng)16SrDNA序列測定和分析比較，鑒定該菌株為門多薩假單胞菌，命名為PseudomonasMedocinaA-5；菌株的菌落呈淡黃色，圓形，菌落成油滴狀有爬延現(xiàn)象。革蘭氏染色后用電子顯微鏡以及掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，菌株為桿菌，革蘭氏染色反應陰性，單極生鞭毛，半透明。全文摘要本發(fā)明涉及一種用門多薩假單細胞菌株的提取方法，包括將馴化后的泥水混合樣靜置30min，取上層水樣1mL作10-1～10-10的梯度稀釋，然后每種稀釋濃度分別取1mL菌液于接種到專性脫氮固體培養(yǎng)基進行富集純化培養(yǎng)，確保長出單一菌株；將菌株接種于無菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于30～34℃、110～120r/min的條件下培養(yǎng)12～16小時，加入到篩選培養(yǎng)基進行唯一碳源的選擇實驗，最后通過NO3-N的檢測得到脫氮率為90.1％的菌株。該方法從組合工藝中凈化槽內(nèi)的泥水中直接提取脫氮菌，種源易得且分離純化方法簡便快捷，成本低，對環(huán)境友好；提取到的菌種脫氮率可達90％以上，具有良好的應用前景。文檔編號C12R1/38GK101812416SQ20091019919公開日2010年8月25日申請日期2009年11月20日優(yōu)先權(quán)日2009年11月20日發(fā)明者江晨舟,趙曉祥,鈄晨,魏俊虎申請人:東華大學