專利名稱：環(huán)阿烷化合物用于治療骨關(guān)節(jié)炎之用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系關(guān)于治療骨關(guān)節(jié)缺損之技術(shù)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明系提供一種在個體 中治療骨關(guān)節(jié)缺損之醫(yī)藥組合物，其包括環(huán)阿烷化合物。黃耆，一種生長于中國本方的多年生植物，植株高度為20英尺。根部的物質(zhì)能刺 激免疫系統(tǒng)。在醫(yī)學(xué)古籍中，取用其根莖入藥能補(bǔ)益脾肺。除了用于補(bǔ)氣升陽外，亦有利水 退腫、治盜汗及促進(jìn)傷口愈合的功用。骨關(guān)節(jié)炎，或被稱為退化性關(guān)節(jié)炎，是一種特征為在關(guān)節(jié)的軟骨慢性退化的疾 病，有強(qiáng)烈的疼痛感。骨關(guān)節(jié)炎常發(fā)生于手部、腰部、膝部及脊椎骨的關(guān)節(jié)處。骨關(guān)節(jié) 炎的發(fā)生原因有很多，例如年齡、性別、遺傳性、壓力或是過重。請參David et al., Arthritis&Rheumatism，1998，41(8) 1343—1355 ;BAGGE et al. , Age Ageing,1992,21 160-67 ；Van SaaseJLCM, et al.，Ann Rheum Dis 1989 ；48 :271_80。此外，基質(zhì)金屬蛋白水 解酵素，屬于鋅_依賴內(nèi)勝酶的家族一員，已被發(fā)現(xiàn)與骨關(guān)節(jié)炎的產(chǎn)生相關(guān)。傳統(tǒng)上，骨關(guān)節(jié)炎以環(huán)氧酶抑制劑，如止痛劑(例乙酰水楊酸)或非類固醇類抗 發(fā)炎藥物治療。減緩?fù)纯鄡H能舒緩骨關(guān)節(jié)炎的癥狀但不能防止疾病的進(jìn)程。另一方面，非類 固醇類抗發(fā)炎藥物被發(fā)現(xiàn)有許多副作用，例如對腸胃道具有毒性，對心血管有不好的作用。 請參 ManAthip et al.，ArthritisCare&Research 1999，12 (5) 351-362 ；Hinz B et al.， Nat Clin PractRheumatol. 20070ct ；3 (10) :552_60。因此目前仍有骨關(guān)節(jié)炎藥物的開發(fā)需 求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明系發(fā)現(xiàn)某些從黃耆(Astragalus membranaceus)純化之環(huán)阿烷化合物，能 抑制基質(zhì)金屬蛋白水解酵素-1 (MMPl)的表現(xiàn)，因此能夠有治療骨關(guān)節(jié)炎的效果。因此，本發(fā)明提供治療與骨關(guān)節(jié)缺損相關(guān)疾病，如骨關(guān)節(jié)炎，的方法，包含投予受 試者治療有效量之具有式I結(jié)構(gòu)的環(huán)阿烷化合物式 I其中R1由下列組成之群中選出，包括氫、氫氧化物、0-乙烯、0-吡喃木糖基、 0-(2-乙烯吡喃木糖基)、0-(3-乙烯吡喃木糖基)、0-(2，3-二乙烯吡喃木糖基)、0-(2， 4- 二乙烯吡喃木糖基)、0-(2，3，4_ 二乙烯吡喃木糖基)、0-吡喃木糖基-(1-2)-β -D-吡
背景技術(shù)：
5喃葡萄糖基及0-吡喃木糖基-(1-2)-α -吡喃樹膠糖基；R2由下列組成之群中選出，包括 氫、氫氧化物、0-乙烯、0-吡喃葡萄糖基及0-吡喃木糖基；R3由下列組成之群中選出，包括 氫、氫氧化物及0-乙烯；R4由下列組成之群中選出，包括 在一具體實(shí)施例中，Rl為氫氧化物，R2為0-吡喃葡萄糖基，R3為氫氧化物，R4為 在另一具體實(shí)施例中，本發(fā)明提供具有式II結(jié)構(gòu)的化合物 式II其中，Ra為由下列組成之群中選出，包括氫、乙烯基(Ac)及吡喃葡萄糖基(Glc)； Rb及Rc分別為由下列組成之群中選出，包括氫及乙烯基；Rd為由下列組成之群中選出，包括 氫、乙烯基及吡喃葡萄糖基。本文所使用的“治療”一詞是指投予具有骨關(guān)節(jié)缺損相關(guān)疾病或有該疾病癥狀或 頃向的受試者一種或多種有治療活性的化合物，該化合物具有治療、治愈、舒緩、減輕、改 變、改善、改良該疾病、該疾病癥狀或阻止該疾病的進(jìn)程。本文所使用的“治療有效量”一詞 是指對于受試者具有上述治療效果的有治療活性的化合物的量，不論是單一投予或是于其 他有治療活性的化合物共同投予。如同本領(lǐng)域具有通常知識的技術(shù)人員所知，治療有效量 會隨著投予途徑、賦形劑使用量以及與其他治療活性化合物共同給予的變化而改變。在一具體實(shí)施例中，一種環(huán)阿烷化合物的治療有效量為能降低受試者體內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白水解酵 素-I(MMPl)的表現(xiàn)或抑制受試者體內(nèi)軟骨流失。本發(fā)明亦提供一種由具有式I結(jié)構(gòu)的環(huán)阿烷化合物用于制備治療骨關(guān)節(jié)缺失相 關(guān)疾病的藥品的用途。本發(fā)明之其它特色和優(yōu)點(diǎn)將在下列說明中分別提出，且可從說明中分別顯見，或 可通過本發(fā)明之實(shí)行而得知，而通過所述之要素和組合將能了解并達(dá)成本發(fā)明之特色和優(yōu)
點(diǎn)ο應(yīng)了解前述之發(fā)明內(nèi)容和下列實(shí)施方式僅為示例和解釋，并非為本發(fā)明之限制。


前文的所述以及實(shí)施方式可藉由附圖達(dá)到更好的說明效果。為了加強(qiáng)本發(fā)明的說 明，將適當(dāng)?shù)膶?shí)施例的圖式列舉于此。要注意的是，本發(fā)明并不受限于列舉于此的說明。圖IA顯示經(jīng)由24小時以不同濃度AS4培養(yǎng)后細(xì)胞增生的相對倍數(shù)。*代表ρ < 0. 05 ；**代表ρ <0.01； “ C"代表控制組。圖IB顯示經(jīng)由48小時以不同濃度AS4培養(yǎng)后細(xì)胞增生的相對倍數(shù)。*代表ρ < 0. 05 ；**代表ρ <0.01； “ C"代表控制組。圖2A顯示經(jīng)由PMA誘導(dǎo)后，以西方墨點(diǎn)法觀察不同濃度的AS4對于基質(zhì)金屬蛋白 水解酵素-1的影響?！癈"代表控制組。圖2B顯示經(jīng)由PMA誘導(dǎo)后，以西方墨點(diǎn)法觀察不同時間點(diǎn)中AS4對于基質(zhì)金屬蛋 白水解酵素-1的影響。“C"代表控制組。圖3顯示經(jīng)由IL-I β、PMA及TNF- α誘導(dǎo)24小時后。圖4Α為聚合酶連鎖反應(yīng)的結(jié)果，其顯示AS4對于非誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白水解酵素-1 及金屬蛋白水解酵素抑制因子-1的訊息RNA表現(xiàn)的影響?！癈"代表控制組。圖4Β為聚合酶連鎖反應(yīng)的結(jié)果，其顯示經(jīng)由PMA誘導(dǎo)后，AS4對于非誘導(dǎo)基質(zhì)金 屬蛋白水解酵素-I(MMPl)及金屬蛋白水解酵素抑制因子-I(TIMPl)的訊息RNA表現(xiàn)的影 響?！癈"代表控制組。圖5Α顯示經(jīng)由PMA誘導(dǎo)后，以西方墨點(diǎn)法觀察ΡΙ3Κ激酶抑制劑(LY)、ΜΕΚ1_專一 性抑制劑(UO)、JNK-專一性抑制劑(SP)、以及Ρ38-專一性抑制劑(SB)表現(xiàn)情形。“C" 代表控制組。圖5B顯示經(jīng)由PMA誘導(dǎo)后，以熒光酶分析PI3K激酶抑制劑(LY) ,MEKl-專一性抑 制劑(UO)、JNK-專一性抑制劑(SP)、以及P38-專一性抑制劑(SB)表現(xiàn)情形?！癈"代表 控制組。*代表ρ <0.05廣代表ρ <0.01。圖5C顯示經(jīng)由PMA誘導(dǎo)后，以西方墨點(diǎn)法分析AS4對于基質(zhì)金屬蛋白水解酵素-1 表現(xiàn)的訊息路徑的影響。“C"代表控制組。圖6顯示葡萄糖胺攝入實(shí)驗(yàn)的結(jié)果?！癈"代表控制組?！包S耆水不溶區(qū)分〃系 指黃耆第一次以醇類萃取得到的萃取物，再接著以水萃取得到的區(qū)分?！包S耆醇類區(qū)分" 系指由醇類萃取得到的區(qū)分。*代表P <0.05。圖7顯示脯氨酸攝入實(shí)驗(yàn)的結(jié)果?！癈"代表控制組?！包S耆水不溶區(qū)分〃系指 黃耆第一次以醇類萃取得到的萃取物，再接著以水萃取得到的區(qū)分?！包S耆醇類區(qū)分"系指由醇類萃取得到的區(qū)分。*代表P < 0. 05廣代表p < 0. 01 ；***代表p < 0. 005。
具體實(shí)施例方式除非另外定義，本文中所用之所有技術(shù)及科學(xué)詞匯具有所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員 所通常明了之相同意義。在本文中，冠詞“一”是指一個或一個以上(亦即，至少一個)之該冠詞之文法客 體。舉例而言，“一組件”意謂一個組件或一個以上之組件。在一方面，本發(fā)明提供一種骨關(guān)節(jié)缺損相關(guān)疾病，例如骨關(guān)節(jié)炎，的治療方法，包 括對病患投予上述之有效量的具有式I結(jié)構(gòu)的環(huán)阿烷化合物。使用于本發(fā)明的環(huán)阿烷化合物具有如下式II結(jié)構(gòu) 式II其中，Ra、Rb、Rc及Rd分別為 本發(fā)明所使用的環(huán)阿烷化合物系由天然黃耆純化并分離制備，或是藉由化學(xué)合成制備。在一具體實(shí)施例中，環(huán)阿烷化合物是黃耆醇類萃取物中的一個成分。本文所使用的 “黃耆醇類萃取物”一詞是指一萃取物系藉由黃耆以醇類(甲醇或乙醇)萃取而得，或是藉 由一溶劑含有10% (v/v)或更高比例的醇類萃取而得。包含環(huán)阿烷化合物的黃耆萃取物以 下列萃取步驟獲得。黃耆的根部干燥后，并在適當(dāng)?shù)臏囟认?例如20-70°C)浸泡在乙醇 中一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如1_72小時)，之后以過濾的方式去除雜質(zhì)以獲得完全液狀的黃耆 萃取物。另可選擇性地將黃耆乙醇萃取物進(jìn)一步與水混合，并搜集黃耆水不溶區(qū)分以獲得 黃耆水不溶萃取物。本發(fā)明亦可使用黃耆水不溶萃取物中所含有的一種或多種環(huán)阿烷化合 物。在一具體實(shí)施例中，本發(fā)明所使用的環(huán)阿烷化合物系以下列步驟獲得。干燥的 黃耆根莖部位在室溫下以95%乙醇(5升)萃取。該萃取物藉由降低壓力的方式進(jìn)行濃 縮，以獲得一棕色糖漬。該棕色糖漬溶于水后，接著以正丁醇(1 1)進(jìn)行分層，獲得正丁 醇區(qū)分與水可溶區(qū)分。正丁醇區(qū)分置入介質(zhì)壓力液相層析儀(medium-pressure liquid chromatography,MPLC) (C8管柱；70%甲醇/水)得到三個區(qū)分。其中，第二區(qū)分進(jìn)一步使 用管柱層析法，以硅膠(70-230篩網(wǎng))及三氯甲烷-甲醇-水(10 5 1)梯度純化出分 別含有黃耆皂苷I、黃耆皂苷II、黃耆皂苷III、黃耆皂苷IV、異黃耆皂苷I以及異黃耆皂苷 II的區(qū)分。選擇性地，可進(jìn)一步將黃耆皂苷IV以柚苷酶(naringinase)水解以產(chǎn)生其他環(huán) 阿烷化合物，例如環(huán)黃耆醇-6-0-0 -D-吡喃葡萄糖基(以下稱AA)，其結(jié)構(gòu)為具有式I結(jié)構(gòu) 的環(huán)阿烷化合物，其中R1為氫氧化物，R2為0-吡喃葡萄糖基，R3為氫氧化物，R4為 本發(fā)明所提供的環(huán)阿烷化合物可用于治療骨關(guān)節(jié)缺損相關(guān)的骨關(guān)節(jié)炎或關(guān)節(jié)疾 病及癥狀。本文所使用的“骨關(guān)節(jié)缺損” 一詞是指在關(guān)節(jié)部位的軟骨有缺損或是有缺損的 危險存在的情況。許多因素會造成骨關(guān)節(jié)缺損，包括外傷、骨壞死、骨軟骨炎、年齡及退化性 關(guān)節(jié)炎。不論是何種生理機(jī)制下，本發(fā)明所提供的環(huán)阿烷化合物能抑制基質(zhì)金屬蛋白水解 酵素-l(MMPl)的表現(xiàn)，及增加金屬蛋白水解酵素-l(TIMPl)的表現(xiàn)，其能專一性地抑制基 質(zhì)金屬蛋白水解酵素-1。如實(shí)施例2-7所示，許多例示的環(huán)阿烷化合物有效抑制MMP1的產(chǎn) 生及活化TIMP1的表現(xiàn)，因此達(dá)到防止軟骨退化的功效。本發(fā)明所提供的由環(huán)阿烷化合物制備的醫(yī)藥組合物，可由口服或是直接關(guān)節(jié)內(nèi)注 射方式投予至受試者體內(nèi)。本文所使用的“關(guān)節(jié)內(nèi)注射(intra-articular) ”一詞是指直接 將黃耆萃取物或由其所制備的醫(yī)藥組合物直接注射至受試者的關(guān)節(jié)區(qū)域。本領(lǐng)域的技術(shù)人 員將了解如何選擇適當(dāng)?shù)挠糜谧⑸涞木彌_液，且注射體積及注射有效量將可由本文說明及 反復(fù)試驗(yàn)確認(rèn)得知。此外，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可使用其他已知的活性藥物與環(huán)阿烷化合物 共同注射，以加強(qiáng)療效。用于注射的滅菌組合物，例如滅菌的可用于注射的水溶液或油質(zhì)的懸浮物，能由 本領(lǐng)域的技術(shù)人員以適當(dāng)?shù)姆稚┘皾駶檮?例如Tween 80)及懸浮物質(zhì)所制備。用于注 射的緩沖液或稀釋劑可為甘露醇、水、Ringer' s溶液或等張液體。此外，油質(zhì)的懸浮物可
9使用脂肪酸，例如油酸(oleic acid)及其甘油脂衍生物以制備用于注射的組合物。用于口服的組合物可為任何適于口服的形式，例如但不限于，溶液、懸浮液、錠劑、 丸劑、膠囊或粉末。若為錠劑，則可包含已知的賦形劑，例如乳糖或玉米淀粉。潤滑劑，例如 硬脂酸鎂，亦可通常性添加。若為膠囊型式，可使用的稀釋劑包括乳糖或玉米淀粉。若為水 溶液或乳化劑型式，有效成分可懸浮、乳化或溶于油層中。可進(jìn)一步選擇性地添加甜味劑、 風(fēng)味劑或著色劑。醫(yī)藥組合物中可另外含有醫(yī)藥可接受之載體。本文所使用的“醫(yī)藥可接受之載體” 一詞是指是指任何公知類型之無毒固體、半固體或液體之填充劑、稀釋劑、包膠囊材料、調(diào) 配物輔助劑或賦形劑。醫(yī)藥可接受之載體系在所用之劑量及濃度下，對接受者無毒性，且可 與該調(diào)配物之其它成分兼容。醫(yī)藥可接受之載體一般均可由公眾輕易取得。此外，醫(yī)藥可 接受之輔助物質(zhì)，諸如，PH調(diào)節(jié)及緩沖劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、安定劑、濕潤劑及類似物，亦皆可 由公眾取得。適當(dāng)之載體包括，但不限于，水、葡萄糖、甘油、鹽水、乙醇及其組合。載體可含有額 外之試劑，諸如，濕潤及乳化劑、PH緩沖劑或是佐劑，其可增強(qiáng)該調(diào)配物之有效性。局部性載 體包括液體石油、棕櫚酸異丙酯、聚乙二醇、乙醇(95% )、溶于水中的聚氧乙烯單月桂酸酯 (5%)或是溶于水中的十二烷基硫酸鈉(5%)。可視需要加入其它材料，諸如，抗氧化劑、 保濕劑、黏度穩(wěn)定劑及類似試劑。本發(fā)明所提供的環(huán)阿烷化合物可用于制備食品或食品添加物(例如營養(yǎng)補(bǔ)充品 或草本產(chǎn)品)。上述食品可由以食品業(yè)中任何一般程序所得之黃耆醇類萃取物而制備。本發(fā)明之各個具體實(shí)施例的細(xì)節(jié)說明如后。本發(fā)明之其它特征將會經(jīng)由以下各個 具體實(shí)施例中的詳細(xì)說明及權(quán)利要求而清楚呈現(xiàn)。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可了解本發(fā)明 具有各種實(shí)施方法，下述具體實(shí)施例僅用以說明而非作為本發(fā)明之限制。實(shí)施例實(shí)施例1 黃耆皂苷IV對于人類SW1353細(xì)胞株細(xì)胞存活率的效果人類SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C，5% C02及濕度95%的環(huán)境中，培養(yǎng)基為DMEM培 養(yǎng)液添加10%胎牛血清。培養(yǎng)基每天更換。在控制組中，人類SW1353細(xì)胞株加入二甲基亞風(fēng)(DMS0)共同培養(yǎng)。在控制組中 未觀察到DMS0有促進(jìn)細(xì)胞增生或分化的效果。在實(shí)驗(yàn)組中，人類SW1353細(xì)胞株先以培養(yǎng) 基培養(yǎng)24小時，接著以不添加胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時。接著，人類SW1353細(xì)胞株 以lOOng/ml PMA或lOng/ml IL-1 ^處理24小時引發(fā)發(fā)炎反應(yīng)，并用于以下的藥物測試實(shí)驗(yàn)。上述人類SW1353細(xì)胞株以每孔5，000細(xì)胞的濃度繼代培養(yǎng)于96孔微盤中24小 時，接著以 0. OluM.O. 1 iiM、l iiM、2iiM、5iiM、10iiM 或 20 u M AS4 處理 24 小時或 48 小 時。每孔的細(xì)胞加入10ml細(xì)胞計數(shù)套組溶液(購自Dojindo molecular technologies, Gaithersburg，MD，USA)，并置于37VM 5% C02的濃度中1-4小時。最后，人類SW1353細(xì) 胞株以EIA讀機(jī)在450nm波長下偵測其吸收試劑程度，藉由與控制組比較來分析實(shí)驗(yàn)組的 細(xì)胞存活率。如圖1A所示，在處理黃耆皂苷IV (AS4) 24小時后實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞生長率與控制組沒 有顯著性的差異。如圖1B所示，在處理AS448小時后實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞生長率與控制組亦沒有顯著性的差異。此結(jié)果顯示AS4對于人類SW1353細(xì)胞株沒有毒性。實(shí)施例2 經(jīng)PMA誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中黃耆皂苷IV對于MMP1表現(xiàn)的影響人類SW1353細(xì)胞株如上所述培養(yǎng)于37°C，5% C02及濕度95%的環(huán)境中。人類 SW1353細(xì)胞株以每孔平均2X 105細(xì)胞密度培養(yǎng)于六孔微盤24小時后，加入0. 0001 u M、 0. 0005 uM,0. 001 u M、0. 005 ii M、0. 01 ii M、或 0. 1 ii M AS4 處理 24 小時。相對地，控制組加 入 0. 的 DMS0。每孔以 100ng/ml 丙二醇甲醚醋酸酯(phorbol myristate acetate, PMA) 處理24小時，再搜集培養(yǎng)基以西方墨點(diǎn)法進(jìn)行分析。西方墨點(diǎn)法以下列步驟進(jìn)行分析。細(xì)胞以0. 2ml溶解液(1 % NP-40, 50mM Tris-HCl, pH 7. 4，180mM NaCl, ImM EDTA, ImM PMSF, ImM NaF, lOmM Na3V04)清洗并溶解 30 分鐘，處理溫度為4°C。以17500g離心15分鐘后，搜集細(xì)胞溶解的上清液。樣本的蛋白質(zhì) 濃度以二金雞鈉酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白質(zhì)測試套組(購自Pierce,Rockford, IL，USA)測定濃度。含有相同濃度的蛋白質(zhì)(100 yg或相同的上清液溶解細(xì)胞(50iig)的 樣本與適當(dāng)體積的四倍SDS樣本緩沖液混合，并以8 %的SDS-PAGE膠體分離。經(jīng)SDS-PAGE 分離的蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜。在室溫下， 經(jīng)轉(zhuǎn)印的PVDF膜浸泡在含有0. 1% Tween-20及7%奶粉的Tris緩沖液中兩小時。接著在 4°C中加入抗MMP1的初級抗體反應(yīng)18小時。加入適當(dāng)?shù)亩壙贵w后，在X光感光底片上觀 察顯影結(jié)果。根據(jù)圖2A所示，未處理AS4的實(shí)驗(yàn)組的MMP1的表現(xiàn)量設(shè)定為1。在處理0. 01 u M、 0. liiM及l(fā)iiMAS4的實(shí)驗(yàn)組中其MMP1的表現(xiàn)量分別為0. 77、0. 64及0. 55。因此，本發(fā)明 發(fā)現(xiàn)在共同處理AS4后，MMP1蛋白的表現(xiàn)量減少了。在其他的測試中，人類SW1353細(xì)胞株以0. 1 u MAS4處理24小時后，于每孔加入 100ng/ml PMA。培養(yǎng)6、12、18及24小時后，搜集培養(yǎng)基以西方墨點(diǎn)法進(jìn)行分析。結(jié)果如圖2B所示，在不同時間點(diǎn)搜集的培養(yǎng)基中都可觀察到MMP1蛋白表現(xiàn)的降 低。因此，此結(jié)果顯示出AS4能夠降低經(jīng)由PMA誘導(dǎo)的發(fā)炎反應(yīng)。實(shí)施例3 經(jīng)不同因子誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中黃耆皂苷IV對MMP1表現(xiàn)的影 響本實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞培養(yǎng)條件皆同于實(shí)施例2。人類SW1353細(xì)胞株以每孔平均2 X 105細(xì) 胞密度培養(yǎng)于六孔微盤24小時后，加入0. 01 ii M、0. 1 ii M或1 ii M AS4處理24小時。相對 地，控制組加入0. 的DMS0。實(shí)驗(yàn)組中，每孔以100ng/ml PMAU0ng/ml IL-1 3或10ng/ ml TNF-a處理24小時，再搜集培養(yǎng)基以西方墨點(diǎn)法進(jìn)行分析。結(jié)果如圖3所示，以AS4處理的細(xì)胞能夠降低經(jīng)由不同促進(jìn)因子，如PMA、IL_1 3 或TNF-a，所誘導(dǎo)產(chǎn)生的MMP1蛋白的量。實(shí)施例4 經(jīng)PMA誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中黃耆皂苷IV對MMP1及TIMP1的訊 息RNA表現(xiàn)量的影響首先，先針對人類SW1353細(xì)胞株單獨(dú)以AS4進(jìn)行處理后對于MMP1及TIMP1的訊 息RNA表現(xiàn)量的影響。人類SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C，5% C02及濕度95%的環(huán)境中，培 養(yǎng)基如上述實(shí)驗(yàn)相同。人類SW1353細(xì)胞株以每孔平均2 X 105細(xì)胞密度培養(yǎng)于六孔微盤24 小時后，加入0. 01iiM、0. liiM或liiM AS4處理24小時。搜集人類SW1353細(xì)胞株進(jìn) 聚 合酶連鎖反應(yīng)。
在第二個實(shí)驗(yàn)中，則加入PMA進(jìn)行誘導(dǎo)并研究AS4處理后造成的變化。人類SW1353 細(xì)胞株以每孔平均2X 105細(xì)胞密度培養(yǎng)于六孔微盤24小時后，加入0. 01 u M、0. 1 ii M或 1 U M AS4處理24小時。每孔以100ng/mlPMA處理24小時，接著搜集人類SW1353細(xì)胞株進(jìn) 行聚合酶連鎖反應(yīng)。所有培養(yǎng)的人類細(xì)胞的RNA由NucleoSpin RNAII套組(購自Macherey-Nagel Inc. ,PA,USA)分離得到，并以反轉(zhuǎn)錄酶將分離的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。聚合酶連鎖反應(yīng)中所 使用的引子列舉如下。(1)MMP1 正向引子5' -ACT CTG GAG TAA TGT CAC ACC T_3' (SEQID N0:1)，以 及逆向引子5' -GTT GGT CCA CCT TTC ATC TTC A_3' (SEQID NO 2)；(2)TIMP1 正向引子5' -AAT TCC GAC CTC GTC ATC AG_3' (SEQ IDNO :3)，以及 逆向引子5' -TGC AGT TTT CCA GCA ATG AG_3' (SEQ IDNO 4)；(3)GAPDH正向引子5' -TGG TAT CGT GGA AGG ACT CA_3' (SEQID NO :5)，以及 逆向引子5' -AGT GGG TGT CGC TGT TAT AAAGC-3' (SEQ ID NO :5)。此外，MMP1訊息RNA的聚合酶連鎖反應(yīng)的條件如下95°C五分鐘，接著94°C三十 秒，60°C三十秒，以及72°C三十秒進(jìn)行35次循環(huán)，最后72°C十分鐘并保存在4°C中。同樣 地，TIMP1訊息RNA的聚合酶連鎖反應(yīng)的條件如下95°C五分鐘，接著94°C三十秒，60 V三十 秒，以及72°C三十秒進(jìn)行35次循環(huán)，最后72°C十分鐘并保存在4°C中。GAPDH訊息RNA的 聚合酶連鎖反應(yīng)的條件如下95°C五分鐘，94°C三十秒，54°C三十秒，以及72°C三十秒進(jìn)行 18次循環(huán)，最后72°C十分鐘并保存在4°C中。PCR的結(jié)果以1.5%膠體進(jìn)行電泳。僅以AS4處理的人類SW1353細(xì)胞株的結(jié)果如圖4A所示。GAPDH訊息RNA的表 現(xiàn)量設(shè)定為1，MMP1及TIMP1訊息RNA的量以與GAPDH訊息RNA的相對表現(xiàn)量表示。僅 以0. 01iiM、0. liiM或liiMAS4的MMP1訊息RNA表現(xiàn)量分別為0. 97，1. 07及0. 93 ；僅以 0. 01 ii M、0. 1 ii M 或 1 ii MAS4 的 TIMP1 訊息 RNA 表現(xiàn)量分別為 0. 87，0. 90 及 0. 84。因此，此 實(shí)驗(yàn)可得知僅以AS4處理人類SW1353細(xì)胞株并不影響MMP1及TIMP1訊息RNA表現(xiàn)。以AS4處理后再經(jīng)由lOOng/ml PMA誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株的結(jié)果如圖4B所 示。以 0. 01iiM、0. 111] 或111]\1 AS4 的 MMP1 訊息 RNA 表現(xiàn)量分別為 0. 98，0. 84 及 0. 53 ；僅 以 0. 01iiM、0. liiM 或 liiM AS4 的 TIMP1 訊息 RNA 表現(xiàn)量分別為 1. 36，1. 34 及 1. 31。此實(shí) 驗(yàn)結(jié)果顯示，以AS4處理人類SW1353細(xì)胞株能降低經(jīng)由PMA誘導(dǎo)產(chǎn)生的MMP1訊息RNA的 表現(xiàn)量。實(shí)施例5 經(jīng)PMA誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中黃耆皂苷IV對MMP1蛋白質(zhì)表現(xiàn)的 訊息路徑的影響人類SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C，5% C02及濕度95 %的環(huán)境中，培養(yǎng)基如上述 實(shí)驗(yàn)相同。人類SW1353細(xì)胞株以每孔平均2X 105細(xì)胞密度培養(yǎng)于六孔微盤24小時后， 加入 10 y M U0126 (MEK-1-專一性抑制劑)、5 y MSP600125 (JNK-專一性抑制劑)、5 y M SB203580 (p28-專一性抑制劑)或20 y M LY294002 (PI3激酶-專一性抑制劑)，并繼續(xù)培 養(yǎng)24小時。最后，SW1353細(xì)胞株進(jìn)行溶解，以進(jìn)行西方墨點(diǎn)法和熒光酶分析。熒光酶分析進(jìn)行完實(shí)驗(yàn)的SW1353細(xì)胞株繼代培養(yǎng)至24孔微盤中并培養(yǎng)24小時。在室溫 下，將 1 y gDNA 與 25 ii 1150mM NaCl 混合得到管 1，同時將 1 P gjetPEI (購自 CationicPolymer Transfection, USA)與25 ii 1 150mM NaCl混合得到管2。在室溫下將管1和管2 的溶液混合，并進(jìn)行反應(yīng)15-30分鐘。50 u 1混合反應(yīng)液加入每孔中的培養(yǎng)基，于37°C，5% C02的環(huán)境下培養(yǎng)隔夜。搜集細(xì)胞后，以20000g在4°C下離心細(xì)胞30分鐘，并轉(zhuǎn)移至1. 5微 管中。接著 100 u 1 溶液 A (0. ImM 熒光酶)與 350 ii 1 溶液 B (1M MgS04,1M Hepes (pH 7. 8)， 0. 1M ATP) 一起加入微管中。30秒后偵測熒光酶活性。根據(jù)圖5A西方墨點(diǎn)法結(jié)果所示，MEKl(UO)及JNK(SP)蛋白表現(xiàn)量降低，顯示MEK1 及JNK與PMA誘導(dǎo)MMP1產(chǎn)生的訊息路徑有關(guān)。根據(jù)圖5B熒光酶結(jié)果所示，當(dāng)與控制組(設(shè)定為1倍)以及僅加入PMA(相較于 控制組MMP1產(chǎn)生8倍)相比時，MEK1表現(xiàn)量(U0126)下降2. 6倍，JNK表現(xiàn)量(SB203580) 下降2倍，顯示MEK1及JNK與PMA誘導(dǎo)MMP1產(chǎn)生的訊息路徑有關(guān)。在另外一個實(shí)驗(yàn)中，人類SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C，5% C02及濕度95%的環(huán)境 中，培養(yǎng)基如上述實(shí)驗(yàn)相同。人類SW1353細(xì)胞株以每孔平均5 X 104細(xì)胞密度培養(yǎng)于六孔微 盤24小時后，加入100ng/ml PMA培養(yǎng)2小時。接著，加入lyM AS4再繼續(xù)培養(yǎng)24小時， 最后搜集細(xì)胞進(jìn)行西方墨點(diǎn)法分析。結(jié)果如圖5C所示，ERK1(P44)及ERK2 (P42)分別下降2. 7及1. 7，顯示ERKs與PMA 誘導(dǎo)MMP1產(chǎn)生的訊息路徑有關(guān)?？刂平M使用0. 1% DMS0處理。實(shí)施例6 經(jīng)PMA或IL-1 ^誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中其他黃耆皂苷對MMP蛋 白質(zhì)表現(xiàn)的影響人類SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C，5 % C02及濕度95 %的環(huán)境中，培養(yǎng)基如上述實(shí)驗(yàn) 相同。人類SW1353細(xì)胞株以每孔平均IX 106細(xì)胞密度培養(yǎng)于6公分培養(yǎng)盤24小時后。實(shí) 驗(yàn)開始時，細(xì)胞以100ng/ml PMA及10ng/ml IL-1 ^預(yù)先處理24小時。細(xì)胞接著以0. lyM 皮質(zhì)類固醇激素(dexamethasone，DEX)或各種黃耆皂苷(0. 1 u M)或黃耆萃取物(1 U g/ml) 處理48小時?？刂平M加入0. 1%DMS0作為負(fù)控制。實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞的培養(yǎng)基離心后，進(jìn)行兩倍 濃縮后，搜集被分泌至培養(yǎng)基中的膠原蛋白和MMPs。如以下所示的表1-4，經(jīng)PMA或IL-1 0誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中，本發(fā)明的黃 耆皂苷化合物抑制其MMPs的產(chǎn)生，不論是細(xì)胞內(nèi)或是分泌至培養(yǎng)基。此結(jié)果顯示，MMPs的 表現(xiàn)所引起的對組織有傷害作用的發(fā)炎反應(yīng)，能藉由本發(fā)明的黃耆皂苷化合物的給予而降 低。表1西方墨點(diǎn)法結(jié)果(PMA預(yù)先處理的SW1353細(xì)胞株溶解物) 表2西方墨點(diǎn)法結(jié)果(PMA預(yù)先處理的SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)基) 表3西方墨點(diǎn)法結(jié)果(IL-1 0預(yù)先處理的SW1353細(xì)胞株溶解物) 表4西方墨點(diǎn)法結(jié)果(IL-1 0預(yù)先處理的SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)基) 酶譜法(zymography)人類SW1353細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C，5% C02及濕度95%的環(huán)境中，培養(yǎng)基如上述實(shí) 驗(yàn)相同。實(shí)驗(yàn)開始時，細(xì)胞以lOOng/ml PMA及l(fā)Ong/mlIL-13預(yù)先處理24小時。細(xì)胞接 著以0. 1 P M皮質(zhì)類固醇激素(dexamethasone，DEX)或各種黃耆皂苷(0. 1 u M)或黃耆萃取 物(1 U g/ml)處理24小時?？刂平M加入0. 1% DMS0作為負(fù)控制。實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞的培養(yǎng)基離 心后，進(jìn)行兩倍濃縮后，搜集被分泌至培養(yǎng)基中的膠原蛋白和MMPs。由SW1353細(xì)胞株所得的MMPs的蛋白切割活性，其檢測方法如先前文獻(xiàn)中 所述(Circ Res, 1999 ；85 906-911)。搜集的細(xì)胞先以溶解液(1 % Triton X-100， 50mM Tris-HCl, pH 7. 4,180mM NaCl,lmM EDTA)打破，樣本的蛋白質(zhì)濃度以二金雞鈉酸 (bicinchoninic acid, BCA)蛋白質(zhì)測試套組測定濃度。濃縮的培養(yǎng)基和細(xì)胞溶解物與非 還原電泳加載緩沖液混合，并在非還原環(huán)境下進(jìn)行電泳。電泳膠體為10% SDS-PAGE，并與 2mg/ml明膠及干酪素一起共聚。在前驅(qū)-MMP2及活化的MMP2實(shí)驗(yàn)中，20 y g培養(yǎng)基用于電 泳分析中。電泳后，蛋白的還原反應(yīng)為在室溫下將膠體浸泡于25g/L Triton X-100中兩次，各十分鐘。接著，在室溫下膠體浸泡于50mMTris-HCl(0. 2M NaCl,0. 02% Bri j35,10mM CaCl2)中 18 小時。膠體以考馬斯亮藍(lán) R-250(Coomassie Brilliant Blue R-250)染色，在 染色的膠體上蛋白分解活性區(qū)域會形成透明條帶。為了得到較高的敏感度，膠體另外以 Triton X-100退染1至2小時。本步驟包含增加訊息對噪訊比，觀察92kD，125Kd及大于 200kD的條帶。同功效酶功效圖采用Molecular Dynamics(購自Sunnyvale，CA，USA)讀取 數(shù)值并以Image Quant軟件定量。如以下表5及表6所示，經(jīng)PMA或IL-10誘導(dǎo)的人類SW1353細(xì)胞株中MMP蛋白 質(zhì)表現(xiàn)被本發(fā)明的黃耆化合物所抑制。此結(jié)果顯示本發(fā)明的黃耆化合物可以降低發(fā)炎反應(yīng) 所造成的組織傷害。表5酶譜法結(jié)果(PMA預(yù)先處理的SW1353細(xì)胞株) 表6酶譜法結(jié)果(IL-1 0預(yù)先處理的SW1353細(xì)胞株) 實(shí)施例7 經(jīng)PMA或IL-1 0誘導(dǎo)的人類軟骨細(xì)胞(HCH)中其他黃耆皂苷化合物對 MMP蛋白質(zhì)及膠原蛋白表現(xiàn)的影響初級培養(yǎng)的人類軟骨細(xì)胞培養(yǎng)于軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中(C-27101，PromoCell, GmbH, Heidelberg, Germany)。培養(yǎng)基另外添加10%胎牛血清，100IU/ml青霉素，100 u g/ml鏈霉 素。繼代培養(yǎng)至第4-10代的細(xì)胞使用于本實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)基每天更換。實(shí)驗(yàn)開始時，將細(xì)胞 以IX 105的密度繼代培養(yǎng)至6孔微盤中培養(yǎng)24小時，接著再以lOOng/ml PMA或lOng/ml IL-13預(yù)先處理24小時。細(xì)胞接著以0. 1 ii M皮質(zhì)類固醇激素(dexamethasone，DEX)或各 種黃耆皂苷(0. 1 u M)或黃耆萃取物(1 U g/ml)處理48小時?？刂平M加入0. 1 % DMS0作為 負(fù)控制。DMS0在本實(shí)驗(yàn)中并未觀察到有促進(jìn)細(xì)胞增生或分化的功效。最后搜集細(xì)胞并以西 方墨點(diǎn)方分析。如以下表7-9所示，經(jīng)PMA或IL-10誘導(dǎo)細(xì)胞中，本發(fā)明的黃耆皂苷化合物抑制其MMPs的表現(xiàn)，不論是細(xì)胞內(nèi)或是分泌至培養(yǎng)基。此外，第二型膠原蛋白，其為軟骨細(xì)胞專 一性表現(xiàn)的膠原蛋白，亦增加表現(xiàn)。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示本發(fā)明的黃耆皂苷化合物除了能降低 因MMPs引起的發(fā)炎反應(yīng)的組織傷害，并能增加膠原蛋白的產(chǎn)生以保護(hù)軟骨細(xì)胞受到傷害。表7西方墨點(diǎn)法結(jié)果(PMA預(yù)先處理的HCH細(xì)胞溶解物) 表8西方墨點(diǎn)法結(jié)果(PMA預(yù)先處理的HCH細(xì)胞培養(yǎng)基) 表9西方墨點(diǎn)法結(jié)果(IL-10預(yù)先處理的HCH細(xì)胞培養(yǎng)基) 實(shí)施例8 黃耆皂苷化合物對于人類軟骨細(xì)胞葡萄糖胺和脯氨酸攝入的影響葡萄糖胺攝入實(shí)驗(yàn)人類軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)方法如實(shí)施例7。實(shí)驗(yàn)開始時，人類軟骨細(xì)胞以3X 104細(xì)胞 密度培養(yǎng)于24孔微盤中24小時。接著在細(xì)胞培養(yǎng)基中不加入(控制組)或加入黃耆皂苷 (0. 1 u M)或黃耆萃取物(1 U g/ml)處理24小時。處理后的細(xì)胞以PBS沖洗兩次后，培養(yǎng) 于含有葡萄糖但不含胎牛血清的培養(yǎng)基中(GSFM)。培養(yǎng)兩小時后，細(xì)胞改至于新鮮的GSFM 中，其含有 0. 2Ci 的 C14-葡萄糖胺(購自 American Radiolabelled Chemicals Inc, ARC, St. Louis, MO, USA)。在指定的時間間隔里，細(xì)胞以GSFM清洗兩次并以200 u 1 2% SDS溶
16解。細(xì)胞溶解物以15000g離心15分鐘。攝入胞內(nèi)的葡萄糖胺量藉由將10 yl細(xì)胞溶解物 置入UniFilter盤中(PerkimElmer)計算而得到。累積于胞內(nèi)的葡萄糖胺的蛋白質(zhì)濃度標(biāo) 準(zhǔn)化后，計算其攝入速率cpm/min/ii g。葡萄糖胺是玻尿酸建構(gòu)的基底構(gòu)造，其為一種組織保護(hù)物質(zhì)。藉由定量葡萄糖胺 的攝入量可了解人類細(xì)胞中玻尿酸產(chǎn)生的情況。如表10及圖6所示，本發(fā)明的黃耆皂苷 化合物能夠促進(jìn)葡萄糖胺的攝入，因此表示能夠增加玻尿酸的產(chǎn)生達(dá)到保護(hù)軟骨組織的功 效。表10葡萄糖胺攝入實(shí)驗(yàn)結(jié)果 脯氨酸攝入實(shí)驗(yàn)脯氨酸攝入實(shí)驗(yàn)的方法系參考先前公開文獻(xiàn)Biochim Biophys Acta. 1104 283-292,1992。簡單來說，人類軟骨細(xì)胞以3X104細(xì)胞密度培養(yǎng)于24孔微盤中24小時。接 著在細(xì)胞培養(yǎng)基中不加入(控制組)或加入黃耆皂苷(0. 1 u M)或黃耆萃取物(1 u g/ml)處 理24小時。處理后的細(xì)胞以PBS沖洗一次后，培養(yǎng)于不含任何氨基酸的培養(yǎng)基中(AAFM)。 培養(yǎng)30分鐘后，細(xì)胞改至于新鮮的AAFM中，其含有50 u g/ml抗壞血酸鹽，總濃度為0. 5mM L-脯氨酸包含 1 P Ci 的 H3-脯氨酸(購自 American RadiolabelledChemicals Inc, ARC, St. Louis, MO, USA)。在指定的時間間隔里，細(xì)胞以AAFM清洗并以200 u 1 2% SDS溶解。 細(xì)胞溶解物以15000g離心15分鐘。攝入胞內(nèi)的脯氨酸量藉由將10 yl細(xì)胞溶解物置入 UniFilter盤中(PerkimElmer)計算而得到。累積于胞內(nèi)的脯氨酸的蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)化后， 計算其攝入速率cpm/min/ii g。脯氨酸系為產(chǎn)生膠原蛋白的必要氨基酸。檢測攝入胞內(nèi)脯氨酸的量可視為細(xì)胞內(nèi) 可能產(chǎn)生的膠原蛋白的量。結(jié)果如表11及圖7所示，本發(fā)明的黃耆皂苷化合物能夠促進(jìn)脯 氨酸的攝入，因此表示能夠增加膠原蛋白的表現(xiàn)量。此結(jié)果顯示本發(fā)明的黃耆皂苷化合物 具有防止膠原蛋白流失并治療因發(fā)炎反應(yīng)造成的骨關(guān)節(jié)炎。表11脯氨酸攝入實(shí)驗(yàn)結(jié)果 所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解，在不悖離其廣泛的發(fā)明概念下，上述具體實(shí)例 可做改變。因此應(yīng)了解，本發(fā)明并不受限于本文中所揭示之特定具體實(shí)例，但希望將上述這 些修正涵蓋在如權(quán)利要求定義之本發(fā)明的精神和范疇內(nèi)。序列表<110>仲華國際股份有限公司<120>環(huán)阿烷化合物用于治療骨關(guān)節(jié)炎之用途<130>9P05033-Tff<150>US 12/253, 779<151>2008-10-17<160>6<170>PatentIn 3. 3 版<210>1<211>22<212>DNA<213>人工合成<220><223> 引子<400>1Actctggagt aatgtcacac ct22<210>2<211>22<212>DNA<213>人工合成<220><223> 引子<400>2gttggtccac ctttcatctt ca22<210>3<211>20<212>DNA<213>人工合成<220><223> 引子<400>3aattccgacc tcgtcatcag20<210>4<211>20<212>DNA<213>人工合成
<220><223> 引子<400>4tgcagttttc cagcaatgag20<210>5<211>20<212>DNA<213>人工合成<220><223> 引子<400>5tggtatcgtg gaaggactca20<210>6<211>23<212>DNA<213>人工合成<220><223> 引子<400>6agtgggtgtc gctgttataa age2權(quán)利要求
一種由環(huán)阿烷化合物用于制備治療受試者骨關(guān)節(jié)缺損疾病之醫(yī)藥組合物之用途，其特征是該環(huán)阿烷化合物是式I之環(huán)阿烷化合物式I其中R1由下列組成之群中選出，包括氫、氫氧化物、O 乙烯、O 吡喃木糖基、O (2 乙烯吡喃木糖基)、O (3 乙烯吡喃木糖基)、O (2，3 二乙烯吡喃木糖基)、O (2，4 二乙烯吡喃木糖基)、O (2，3，4 二乙烯吡喃木糖基)、O 吡喃木糖基 (1 2) β D 吡喃葡萄糖基及O 吡喃木糖基 (1 2) α 吡喃樹膠糖基；R2由下列組成之群中選出，包括氫、氫氧化物、O 乙烯、O 吡喃葡萄糖基及O 吡喃木糖基；R3由下列組成之群中選出，包括氫、氫氧化物及O 乙烯；R4由下列組成之群中選出，包括F2009101781962C00011.tif,F2009101781962C00012.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求2所述之用途，其特征為環(huán)阿烷化合物存在于黃耆醇類萃取物中。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述之用途，其特征為該黃耆醇類萃取物系由乙醇萃取。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述之用途，其特征為該黃耆醇類萃取物由下列步驟萃取 (i)以乙醇萃取黃耆以獲得黃耆醇類萃取區(qū)分；( )搜集黃耆醇類萃取區(qū)分；(iii)將黃耆醇類萃取需分以水萃取，以獲得黃耆水不溶區(qū)分。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其特征為環(huán)阿烷化合物式II之環(huán)阿烷化合物 其中，Ra為由下列組成之群中選出，包括氫、乙烯基(Ac)及吡喃葡萄糖基(Glc) ;RB及 Rc分別由下列組成之群中選出，包括氫及乙烯基；Rd為由下列組成之群中選出，包括氫、乙 烯基及吡喃葡萄糖基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為乙烯基(Ac)，Rb為乙烯基(Ac)，Rc為氧 以及Rd為吡喃葡萄糖基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為乙烯基(Ac)，Rb為氧，R。為氫以及Rd為 吡喃葡萄糖基。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為吡喃葡萄糖基，Rb為氫，Rc為氫以及Rd為氫。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為氫，Rb為氫，Rc為氫以及Rd為吡喃葡萄糖基。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為吡喃葡萄糖基，Rb為氫，Re為氫以及Rd 為吡喃葡萄糖基。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為乙烯基，Rb為氫，Rc為乙烯基以及Rd為吡喃葡萄糖基。
12.根據(jù)權(quán)利要求5所述之用途，其特征為Ra為氫，Rb為乙烯基，Re為氫以及Rd為吡喃葡萄糖基。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其特征為Rl為氫氧化物，R2為O-吡喃葡萄糖基，R3 為氫氧化物，R4為
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其特征為該醫(yī)藥組合物系為口服投予。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其特征為該醫(yī)藥組合物系為直接關(guān)節(jié)內(nèi)注射在關(guān)節(jié) 炎區(qū)域。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其特征為該骨關(guān)節(jié)缺損疾病為退化性關(guān)節(jié)炎。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述之用途，其特征為該骨關(guān)節(jié)缺損疾病系由于基質(zhì)金屬金屬蛋白水解酵素-1在關(guān)節(jié)區(qū)域表現(xiàn)增加造成的骨關(guān)節(jié)缺損。
全文摘要
本發(fā)明提供一種環(huán)阿烷化合物用于制備治療骨關(guān)節(jié)缺損之醫(yī)藥組合物之用途。
文檔編號A23L1/29GK101926814SQ20091017819
公開日2010年12月29日 申請日期2009年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月17日
發(fā)明者張溫良, 張自忠, 楊淵, 林漢欽, 黃淑芬 申請人:仲華國際股份有限公司