專(zhuān)利名稱(chēng)：毛細(xì)管電泳中的連續(xù)樣品注射的制作方法
毛細(xì)管電泳中的連續(xù)樣品注射
背景技術(shù)：
核酸測(cè)序和從測(cè)序反應(yīng)中分離多核苷酸過(guò)程的自動(dòng)化使得多種目的 核酸的快速和大規(guī)才莫測(cè)序得以實(shí)現(xiàn)。通常，核酸測(cè)序通過(guò)在測(cè)序反應(yīng)中 摻入標(biāo)記有焚光基團(tuán)或染料的鏈終止核苷酸來(lái)進(jìn)行。不同大小的核酸產(chǎn) 物通過(guò)凝膠電泳分離，并在自動(dòng)測(cè)序儀上檢測(cè)。正在進(jìn)行的大規(guī)模核酸 測(cè)序項(xiàng)目要求核酸測(cè)序過(guò)程盡可能高效。然而，現(xiàn)有的核酸測(cè)序方法受 到電泳步驟的限制。
現(xiàn)有的方法不能使通過(guò)自動(dòng)化電泳技術(shù)分離和檢測(cè)的測(cè)序多核苷酸
產(chǎn)生的有用數(shù)據(jù)量最大化。使用毛細(xì)管電泳一般需要15到40分鐘才能 使樣品中的第一個(gè)核酸片段分離，生成峰形式的有用數(shù)據(jù)。沒(méi)有有用數(shù) 據(jù)產(chǎn)生的這段起始時(shí)間被稱(chēng)為"樣品死時(shí)間"，時(shí)間長(zhǎng)度隨核酸片段的大小 和電泳進(jìn)行的條件而異。
另一個(gè)對(duì)現(xiàn)有的基于毛細(xì)管凝膠電泳的多核香酸測(cè)序方法產(chǎn)生有用 數(shù)據(jù)的限速因素是，凝膠在每個(gè)樣品通過(guò)電泳被分離和鑒定后需要沖洗 和替換新的凝膠。在通常的自動(dòng)化毛細(xì)管凝膠電泳系統(tǒng)中，每個(gè)完整的 循環(huán)中沖洗步驟需大約10分鐘。因此，電泳運(yùn)行一次需進(jìn)行35到150 分鐘，而有用的凄t據(jù)只在該電泳運(yùn)行的約10到100分鐘內(nèi)收集。
需要降〗氐樣品死時(shí)間和提高核酸樣品電泳效率的電泳方法，來(lái)使大 規(guī)模核酸測(cè)序項(xiàng)目得以更迅速而且全面低成本的進(jìn)行。
發(fā)明概述
本發(fā)明滿(mǎn)足上述需要。本發(fā)明是進(jìn)行電泳的方法，其能增加樣品通量并通過(guò)提高自動(dòng)化毛細(xì)管凝膠電泳的負(fù)載循環(huán)而增加多核苷酸分析的 效率和速度。該方法包括提供毛細(xì)管電泳體系。該毛細(xì)管電泳體系包括 有上樣端和洗脫端的毛細(xì)管電泳凝膠。選擇一個(gè)以上的樣品。每個(gè)樣品 通常含有不同大小的多核苷酸的混合物，各個(gè)多核苷酸有與其大小相應(yīng) 的電泳遷移率。樣品中最小的多核苷酸有最快的電泳遷移率，而最大的
多核苷酸有最慢的電泳遷移率。第 一 樣品在時(shí)刻T 。上樣到凝膠的上樣端， 當(dāng)進(jìn)行電泳時(shí)在該第一樣品中電泳遷移率最快的多核普酸在時(shí)刻TV通過(guò) -險(xiǎn)測(cè)窗口 ，而電泳遷移率最慢的多核苦酸在Ts時(shí)刻之前通過(guò)檢測(cè)窗口 。 對(duì)該第 一樣品進(jìn)行電泳。第二樣品在(TS-TF)時(shí)刻上樣到凝膠的上樣端， 對(duì)第二樣品進(jìn)行電泳以使第 一 樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第二 樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)電泳體系的檢測(cè)窗口 。第三樣 品在2(Ts-TF)時(shí)刻上樣到凝膠的上樣端，對(duì)第三樣品進(jìn)行電泳以使第二樣 品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第三樣品中電泳遷移率最快的多核苷 酸早通過(guò)電泳體系的沖企測(cè)窗口 。該方法還包括在n(Ts-IV)時(shí)刻連續(xù)上樣另 外的樣品到凝膠的上樣端的步驟，其中n為3-25的整數(shù)。來(lái)自各樣品的多 核芬酸當(dāng)其通過(guò)^r測(cè)窗口時(shí)祐j企測(cè)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法同時(shí)在 一個(gè)以上毛細(xì)管凝膠中對(duì)一個(gè)以上樣品進(jìn)行。
附圖
本發(fā)明的這些特征、方面和優(yōu)勢(shì)，結(jié)合下面的說(shuō)明書(shū)、權(quán)利要求書(shū) 和附圖將可以更好地理解，其中


圖1測(cè)序反應(yīng)運(yùn)行的帶有大小從54到294個(gè)石威基長(zhǎng)度的標(biāo)記片段的 PCR產(chǎn)物的電泳-潛圖2圖示本發(fā)明實(shí)施方案的含復(fù)合的數(shù)個(gè)樣品運(yùn)行的單個(gè)電泳譜
圖3對(duì)圖l所述的PCR產(chǎn)物在一個(gè)毛細(xì)管中運(yùn)^f亍的12個(gè)連續(xù)注射產(chǎn)生 的電泳i普?qǐng)D；以及
圖4圖示本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)通常方法相比效率的提高。
發(fā)明詳述下述的討論描述本發(fā)明的實(shí)施方案和這些實(shí)施方案的一些變體。本 討論不應(yīng)視為將本發(fā)明限制在這些特定實(shí)施方案。本領(lǐng)域的技術(shù)人員還 會(huì)認(rèn)可若干其他的實(shí)施方案。在這里描述的所有實(shí)施方案中，被指稱(chēng)為 優(yōu)選或特別優(yōu)選的這些實(shí)施方案盡管其可能是優(yōu)選的，但并不是必不可 少的。
本發(fā)明是提高樣品通量和允許更多的樣品在給定的時(shí)間段內(nèi)被處理 的電泳方法。該方法的第一步驟是提供帶有電泳凝膠的電泳體系。在優(yōu) 選的實(shí)施方案中，電泳凝膠是毛細(xì)管凝月交。該毛細(xì)管電泳凝膠包括上樣
端和洗脫端。在示例性的實(shí)施方案中，毛細(xì)管凝膠長(zhǎng)度約10cm到約1 OOcm， 凝膠的含量為1 %到10%的聚丙烯酰胺聚合物。
選擇一個(gè)以上的樣品。每個(gè)樣品通常含有不同大小的多核苷酸，并 具有與多核普酸大小對(duì)應(yīng)的電泳遷移率。樣品中最小的多核苷酸有最快 的電泳遷移率，而最大的多核苷酸有最慢的電泳遷移率。
含多核苷酸的樣品通常包含DNA片段。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，多核
苷酸是測(cè)序反應(yīng)的產(chǎn)物。在該實(shí)施方案中，不同大小的多核苷酸通常通
過(guò)測(cè)序反應(yīng)中的鏈終止核苷酸產(chǎn)生。鏈終止核苷酸標(biāo)記有對(duì)各核苷酸特
異的染料或熒光基團(tuán)。其他的多核苷酸，包括RNA和修飾的核酸也可使
用。通常，DNA片段的長(zhǎng)度范圍為約20到約800個(gè)核苷酸。或者，樣品還
可以包含其他的生物分子，如蛋白質(zhì)，其能通過(guò)電泳被分離。用PCR擴(kuò)增 子作為模板產(chǎn)生的測(cè)序反應(yīng)產(chǎn)物通過(guò)毛細(xì)管電泳分離的實(shí)例見(jiàn)于圖1 。
本方法的下一步驟是在T。時(shí)刻將第 一樣品上樣到凝膠的上樣端。這一 步驟可以通過(guò)自動(dòng)化手段進(jìn)行，例如包括動(dòng)電注射。在第二樣品上樣到 凝膠的上樣端之前的預(yù)定時(shí)刻，對(duì)第一樣品進(jìn)行電泳。第二樣品和所有 后續(xù)樣品的注射時(shí)間通常是預(yù)知的或在通過(guò)在設(shè)定的電泳運(yùn)行條件下試 運(yùn)行和考慮樣品中多核苷酸大小的差異而預(yù)定的，該試驗(yàn)運(yùn)行。對(duì)第一 樣品進(jìn)行電泳，第 一樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸在TV時(shí)刻通過(guò)檢測(cè)窗口 ，而第一樣品中電泳遷移率最慢的多核香酸在Ts時(shí)刻之前通過(guò)檢 測(cè)窗口(圖2)。
在第二樣品上樣到凝膠上樣端前的預(yù)定時(shí)刻，對(duì)第 一樣品進(jìn)行電泳。 第一樣品的多核苦酸向毛細(xì)管凝膠的洗脫端遷移，在那里被檢測(cè)器檢測(cè)。 第二樣品上樣到凝膠的上樣端的步驟在某時(shí)刻進(jìn)行，該時(shí)刻使第 一樣品 中遷移率最慢的多核苷酸比第二樣品中遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)電 泳體系的檢測(cè)窗口。對(duì)第二樣品進(jìn)行電泳，以使第一樣品中遷移率最慢 的多核苷酸比第二樣品中遷移率最快的多核苦酸早通過(guò)電泳體系的檢測(cè) 窗口。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二樣品在(Ts-TF)時(shí)刻上樣，或在等同于 (TS-TF)時(shí)刻后檢測(cè) 一個(gè)峰寬的時(shí)刻進(jìn)行，以防止第 一樣品的最后峰和第 二樣品的第一個(gè)峰共同遷移。因此，第二樣品通常在(Ts-IV)時(shí)刻上樣或 (TS-TF)時(shí)刻加等同于檢測(cè) 一 個(gè)峰寬的時(shí)間上樣。等同于檢測(cè) 一 個(gè)峰寬的 時(shí)間根據(jù)樣品和電泳運(yùn)行條件而異，例如在l-30秒，及更通常的在1-10秒， 及更更通常在l-5秒。這些時(shí)間可根據(jù)樣品的大小和運(yùn)行條件而變化。時(shí) 間點(diǎn)T。， TF, Ts等的微小變動(dòng)是可接受的，只要防止樣品在檢測(cè)時(shí)重疊的整 體目標(biāo)沒(méi)有被損害。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本方法包括在2(Ts-TF)時(shí)刻將第三樣品上樣到 凝膠上樣端的下一步驟。對(duì)第三樣品進(jìn)行電泳，并使第二樣品中遷移率 最慢的多核苷酸比第三樣品中遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)電泳體系的 ;險(xiǎn)測(cè)窗口 。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本方法還包括連續(xù)地在n(Ts-TF)時(shí)刻上樣另外 的樣品到凝膠的上樣端的其他步驟，其中n是3到25的整數(shù)，(n+l)代表樣 品 數(shù)。通常，n在3到12。
本方法的最后步驟是檢測(cè)各樣品的多核苷酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中， 電泳在自動(dòng)化的系統(tǒng)中進(jìn)行，如Beckman CEQ 2000 DNA分析系統(tǒng) (Beckman Coulter, Inc., Fullerton)。 Beckman CEQ 2000 DNA分析系統(tǒng)在多核苷酸通過(guò)才企測(cè)窗口時(shí);f企測(cè)多核香酸。第 一樣品的多核普酸的^r測(cè)與 第二樣品的多核苦酸的電泳同時(shí)進(jìn)行。類(lèi)似的，第二樣品的多核香酸的 卩險(xiǎn)測(cè)與第三樣品的多核苦酸的電泳同時(shí)進(jìn)行。
因此，本發(fā)明的方法消除了第一樣品之外的所有樣品的死時(shí)間。這 可以使多個(gè)樣品在每個(gè)樣品單獨(dú)運(yùn)行所需時(shí)間的一^卜部分內(nèi)進(jìn)行電泳。
在示例性的實(shí)施方案中，在同一毛細(xì)管電泳凝膠中不經(jīng)沖洗或替換 毛細(xì)管凝膠最多可進(jìn)行總計(jì)25次運(yùn)行，以致同一毛細(xì)管聚丙烯酰胺凝膠 可對(duì)所有樣品進(jìn)行電泳。更通常的，12到16個(gè)樣品，或8到12個(gè)樣品，連 續(xù)地在同一毛細(xì)管凝膠中不經(jīng)沖洗或替換毛細(xì)管凝膠進(jìn)行電泳。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在多個(gè)毛細(xì)管凝膠中對(duì)多個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行電 泳。該方法包括下列步驟a)提供含毛細(xì)管電泳凝膠的電泳體系，凝膠具 有上樣端和洗脫端；b)選擇一種以上的樣品，每個(gè)樣品包含不同大小的多 核苷酸，并具有與其大小相對(duì)應(yīng)的電泳遷移率，其中樣品中最小的多核 苷酸電泳遷移率最快而最大的多核普酸電泳遷移率最慢；c)將第一樣品上 樣到凝膠的上樣端；d)對(duì)第一樣品進(jìn)行電泳以分離多核苷酸；在步驟d后， 在某時(shí)刻將第二樣品上樣到凝膠的上樣端，該時(shí)刻使得第 一 樣品中電泳 遷移率最慢的多核苷酸比第二樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸早通過(guò) 電泳體系的檢測(cè)窗口 ；及f)對(duì)第二樣品進(jìn)行電泳；g)檢測(cè)來(lái)自各樣品的多 核苷酸。在示例性實(shí)施方案中，電泳體系包括約2到約100個(gè)毛細(xì)管電泳 凝膠，電泳在2個(gè)或更多的毛細(xì)管凝膠上同時(shí)進(jìn)行。不過(guò)，包含超過(guò)IOO 個(gè)毛細(xì)管電泳凝膠的電泳體系仍屬于本發(fā)明的范圍。
載循環(huán)能降低樣品死時(shí)間和提高電泳過(guò)程速度和效率的電泳方法。 實(shí)施例I
每個(gè)毛細(xì)管凝膠進(jìn)行12個(gè)連續(xù)樣品注射利用Beckman CEQ 2000 DNA分沖斤系統(tǒng)(Beckman Coulter, Inc., Fullerton)在8個(gè)不同的毛細(xì)管凝膠上進(jìn)行電泳。每個(gè)毛細(xì)管凝膠被連續(xù)上 樣12個(gè)由測(cè)序反應(yīng)產(chǎn)生的DNA片段樣品。該片段通過(guò)Beckman Coulter染 料標(biāo)記的雙脫氧-終止子循環(huán)測(cè)序試劑盒，零件編號(hào)608000，(Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA)，產(chǎn)生。該模板是從人乳頭瘤病毒產(chǎn)生的294 個(gè)堿基對(duì)的PCR復(fù)制子。
分離介質(zhì)由高分子量的聚丙烯酰胺聚合物的30mM TRIS和100mM TAPS(p-羥基-l，1雙[輕甲基]乙基]氨基)l-丙烷磺酸)緩沖液組成。
樣品以動(dòng)電方式在2kV下注射到30 cm長(zhǎng)的充滿(mǎn)凝月交的毛細(xì)管中15 秒，而分離在6kV下進(jìn)行?？偣?6個(gè)樣品在8個(gè)毛細(xì)管凝膠中分析。 一個(gè) 毛細(xì)管的電泳譜圖見(jiàn)于圖3。在電泳譜圖上4種核苷酸各自表示為不同顏 色，179分鐘內(nèi)96個(gè)樣品被分析和檢測(cè)產(chǎn)生大約23，040個(gè)被叫堿基(called base){12x8x(294-54)}。該凝膠沒(méi)有用新的凝膠替換，且毛細(xì)管凝膠在樣 品運(yùn)行時(shí)沒(méi)有重新排列。通過(guò)常規(guī)的方法進(jìn)行相似的分析需進(jìn)行大約432 分鐘。因此，對(duì)該樣品而言，本方法只用了現(xiàn)有技術(shù)方法4全測(cè)和分析多 核苷酸所需時(shí)間的42%。
實(shí)施例II
每個(gè)凝膠超過(guò)12個(gè)連續(xù)樣品注射的預(yù)計(jì)通量增加
圖4顯示圖1和圖3中示例的通量最高達(dá)每個(gè)毛細(xì)管25個(gè)連續(xù)樣品注 射的預(yù)計(jì)增加。利用常規(guī)的方法對(duì)n個(gè)樣品進(jìn)行電泳分析的時(shí)間量為36n, 其中36是系統(tǒng)預(yù)熱時(shí)間13分鐘，死時(shí)間13分鐘，及樣品時(shí)間13分鐘的總 和?？偟乃罆r(shí)間是23n，其包括每個(gè)樣品10分鐘系統(tǒng)預(yù)熱時(shí)間和13分鐘死 時(shí)間。反之，利用本發(fā)明的方法，對(duì)每個(gè)毛細(xì)管樣品而言，隨著運(yùn)行次 數(shù)增加，死時(shí)間和樣品準(zhǔn)備時(shí)間接近零，而通量時(shí)間只為13n。計(jì)算的通 量增加因子(TIF)為36N/13N =約2.8。因此，對(duì)大量的注射而言，建議 的方法比常規(guī)方法快2.8倍。圖2顯示本發(fā)明方法與常規(guī)方法比較進(jìn)行多 樣品注射預(yù)計(jì)的時(shí)間。根據(jù)如上描述的本發(fā)明，顯而易見(jiàn)，在不偏離如上所述和如下文權(quán) 利要求所述的本發(fā)明的范圍和本意的情況下可采取很多的修飾和調(diào)整。
盡管本發(fā)明以相當(dāng)詳細(xì)的程度參照其特定的優(yōu)選形式進(jìn)行了描述， 其他的形式也是可行的。因此權(quán)利要求書(shū)的實(shí)質(zhì)和范圍不應(yīng)限于此處描 述的優(yōu)選形式。
在說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的所有特征，包括權(quán)利要求書(shū)、摘要和附圖，及公開(kāi)的 任何方法中的所有步驟，可以以任何組合方式組合，除了至少一些這樣的特 征和/或步驟是相互排斥的組合之外。除非另有說(shuō)明，說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的每個(gè)特 征，包括權(quán)利要求書(shū)、摘要和附圖可以用實(shí)現(xiàn)相同、等同或相似目的的替代 特征替換。因此，除非另有說(shuō)明，公開(kāi)的每個(gè)特征只是一系列等同或相似特
;[正的一個(gè)示例。
權(quán)利要求
1.一種進(jìn)行電泳的方法，該方法包括下列步驟a)提供含毛細(xì)管電泳凝膠的電泳體系，該凝膠具有上樣端和洗脫端；b)選擇一種以上樣品，每個(gè)樣品包含不同大小的多核苷酸，并具有與其大小相對(duì)應(yīng)的電泳遷移率，其中樣品中最小的多核苷酸電泳遷移率最快而最大的多核苷酸電泳遷移率最慢；c)在To時(shí)刻將第一樣品上樣到凝膠的上樣端，其中當(dāng)進(jìn)行電泳時(shí)，在該第一樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸在TF時(shí)刻通過(guò)檢測(cè)窗口，而電泳遷移率最慢的多核苷酸在TS時(shí)刻之前通過(guò)檢測(cè)窗口；d)對(duì)第一樣品進(jìn)行電泳；e)第二樣品在(TS-TF)時(shí)刻上樣到凝膠的上樣端，對(duì)第二樣品進(jìn)行電泳以使第一樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第二樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)電泳體系的檢測(cè)窗口；f)第三樣品在時(shí)刻2(TS-TF)上樣到凝膠的上樣端，對(duì)第三樣品進(jìn)行電泳以使第二樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第三樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)電泳體系的檢測(cè)窗口；g)在n(TS-TF)時(shí)刻連續(xù)上樣更多的樣品到凝膠的上樣端，其中n是4到25的整數(shù)，以及其中對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行電泳，以使每個(gè)在前樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比每個(gè)后續(xù)樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)檢測(cè)窗口；和h)當(dāng)各樣品的多核苷酸通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。
2. —種進(jìn)行電泳的方法，該方法包括下列步驟a) 提供含毛細(xì)管電泳凝膠的電泳體系，該凝膠具有上樣端和洗脫端；b) 選擇一種以上樣品，每個(gè)樣品包含不同大小的多核普酸，并具有與其 大小相對(duì)應(yīng)的電泳遷移率，其中樣品中最小的多核苷酸電泳遷移率最快而最 大的多核苷酸電泳遷移率最慢；c) 將第 一樣品上樣到凝膠的上樣端；d) 對(duì)第一樣品進(jìn)行電泳以分離多核苷酸；e) 在步驟d之后，將第二樣品在某時(shí)刻上樣到凝膠的上樣端，該時(shí)刻使 得第一樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第二樣品中電泳遷移率最快的 多核苷酸早通過(guò)電泳體系的檢測(cè)窗口 ；f) 對(duì)第二樣品進(jìn)行電泳；g) 檢測(cè)每個(gè)樣品的多核苷酸。
3. —種進(jìn)行電泳的方法，該方法包括下列步驟a) 提供含一個(gè)以上毛細(xì)管電泳凝膠的電泳體系，每個(gè)凝膠具有上樣端和 洗脫端；b) 對(duì)每個(gè)毛細(xì)管電泳凝膠選擇一種以上樣品，每個(gè)樣品包含不同大小的 多核苷酸，并具有與其大小相對(duì)應(yīng)的電泳遷移率，其中樣品中最小的多核苷 酸電泳遷移率最快而最大的多核苷酸電泳遷移率最l曼；c) 在T。時(shí)刻將一個(gè)以上第一樣品上樣到一個(gè)以上凝膠的上樣端，其中 當(dāng)進(jìn)行電泳時(shí)，在該第一樣品中電泳遷移率最快的多核苷酸在Tp時(shí)刻通過(guò) 檢測(cè)窗口 ，而電泳遷移率最慢的的多核苷酸在Ts時(shí)刻之前通過(guò)檢測(cè)窗口 。d) 對(duì)第 一樣品進(jìn)行電泳；e) 將一個(gè)以上第二樣品在(Ts-TF)時(shí)刻上樣到凝膠的上樣端，并對(duì)第二樣 品進(jìn)行電泳，以致第一樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第二樣品中電泳 遷移率最快的多核苷酸早通過(guò)電泳體系的才全測(cè)窗口 ；f) 第三樣品在2(Ts-TF)時(shí)刻上樣到凝膠的上樣端，對(duì)第三樣品進(jìn)行電泳 以使第二樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比第三樣品中電泳遷移率最快 的多核普酸早通過(guò)電泳體系的檢測(cè)窗口 ；g) 在n(Ts-TF)時(shí)刻連續(xù)上樣更多的樣品到凝膠的上樣端，其中n是4到 25的整數(shù)；h) 當(dāng)各樣品的多核普酸通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)進(jìn)行4企測(cè)。
4. 權(quán)利要求1的方法，其中對(duì)一個(gè)以上樣品在一個(gè)以上毛細(xì)管凝膠中同 時(shí)進(jìn)行電泳。
5. 權(quán)利要求1， 2或3的方法，其中樣品含有包括DNA片段的多核苷酸。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中DNA片段的大小為20到800個(gè)核苷酸長(zhǎng)。
7. 權(quán)利要求l， 2或3的方法，其中該方法在自動(dòng)化系統(tǒng)中進(jìn)行。
8. 權(quán)利要求1的方法，其中總共有4到16個(gè)樣品在同一毛細(xì)管電泳凝 膠中連續(xù)進(jìn)行電泳。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中總共有6到12個(gè)樣品在同一毛細(xì)管電泳凝 膠中連續(xù)進(jìn)行電泳。
10. 權(quán)利要求1, 2或3的方法，其中電泳體系還包括2到約100個(gè)毛細(xì) 管電泳凝膠，且電泳在2個(gè)或更多個(gè)毛細(xì)管凝膠上同時(shí)進(jìn)行。
11. 權(quán)利要求2的方法，其中步驟f)后該方法還包括單獨(dú)且連續(xù)地將3 到12個(gè)樣品上樣到凝膠的上樣端，并對(duì)各個(gè)樣品進(jìn)行電泳，以致每個(gè)在前 的樣品中電泳遷移率最慢的多核苷酸比每個(gè)后續(xù)樣品中電泳遷移率最快的 多核苷酸早通過(guò)沖全測(cè)窗口 。
12. 權(quán)利要求2的方法，其中在第二樣品上樣前對(duì)第一樣品的電泳進(jìn)行 預(yù)定的最少時(shí)間(TJ。
13. 權(quán)利要求2的方法，其中第二樣品在預(yù)定的最少時(shí)間(Tx)之后及預(yù) 定的最多時(shí)間(Ty)之前上樣。
14. 權(quán)利要求2的方法，其中該方法在自動(dòng)化系統(tǒng)中進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種電泳方法，其能增加樣品通量和提高多核苷酸電泳分析的效率和速度。該方法為在每個(gè)毛細(xì)管凝膠中上樣和運(yùn)行多個(gè)連續(xù)的樣品，無(wú)需在樣品之間進(jìn)行沖洗或替換凝膠。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101581696SQ20091014699
公開(kāi)日2009年11月18日 申請(qǐng)日期2003年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月25日
發(fā)明者克拉倫斯·盧, 斯特芬·L·小彭托尼, 楊大偉 申請(qǐng)人:貝克曼考爾特公司