專利名稱：一種越橘組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及工廠化育苗過程中一種越橘組織培養(yǎng) 的生根培養(yǎng)基配方。
背景技術(shù)：
越橘是近幾年世界上發(fā)展最為迅速的薪一代水果，具有獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)保健功能，可鮮食、 加工成果醬果酒等、提取天然花青素以及作為藥物的原料。目前已經(jīng)證明越橘果實(shí)內(nèi)的生 物活性物質(zhì)具有明目、消除眼睛疲勞、增強(qiáng)視力的功能；對(duì)多種惡性腫瘤如直腸癌有有明 顯的治療作用；具有促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的功能，有兒童增智，預(yù)防老年癡呆癥的作用；可 降低體內(nèi)膽固醇水平，調(diào)節(jié)血糖濃度，防治心血管病和II型糖尿?。豢梢栽鰪?qiáng)人體的免疫 功能，延緩衰老。越橘適應(yīng)溫帶及亞熱帶地區(qū)氣候，在我國(guó)南方具有廣泛的發(fā)展前景，需 苗量巨大。越橘的扦插繁殖所需生根時(shí)間長(zhǎng)，約60天，管理成本高，而且繁殖系數(shù)低， 因此組織培養(yǎng)工廠化繁殖是一條保證種苗供應(yīng)的有效途徑。目前越橘的組織培養(yǎng)研究資料 偶見國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)記載組織培養(yǎng)越橘苗釆用瓶外扦插生根，但要求的環(huán)境條件 嚴(yán)格，控制較為困難，生根情況不理想。未見有效的適用于工廠化生產(chǎn)的生根培養(yǎng)基配方 的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種越橘組織培養(yǎng)過程中生根培養(yǎng)基配方，以提高越橘的生根率，
將其命名為K2培養(yǎng)基。每L該培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下
*大量元素翻3 700 mg. L_1; (NH4) 2S04 400 mg. L-1; MgS04 185 mg. I/1; Ca(N03) 2 '訓(xùn)20 3 00 mg. L_1; KH2P04 85 mg. L_'
*微量元素Mn S(V4H2。 11. 1 mg. L—'; Zn S04'7H20 4. 3 mg. L—、 H3B03 3. 1 mg. L-、 KI 0. 41 mg. L—'; Na2Mo04'2H20 0. 13 mg. L—1; Cu S04'5H20 0. 0 1 3 mg. L-'; CoCl2*6H20 0. 0 1 3 mg. L—'
*鐵鹽Na2-EDTA 18.7 mg. L-'; FeS04 13.9 mg. L/'
*有機(jī)成分甘氨酸1,0 mg. L一1 ; VB6 0.25 mg. L—1; V BI 0. 05 mg. L—';煙酸0.25 mg. L—';肌醇50 mg. L—1*蔗糖15 g丄一1，卡拉膠6.25 g.L—1，吲哚丁酸IBA 0.75 mg. L、 其余為水，pH 5.5。 . 本發(fā)明越橘工廠化生產(chǎn)過程中生根培養(yǎng)基的配制方法為
(1) 20倍大量元素母液的配制分別稱取脂03， 28 g; (NH4) 2S04, 16 g ; KH2P04, 3. 4 g用純水溶解后定容至1000 ml,配成母液I ;稱取Ca(NO》2 *4H20 12 g,用純水溶解后 定容至1000 ml成為母液II;稱取MgS(X 7. 4 g用純水溶解后定容至1000 ml為母液III; 使用時(shí)配制每升培養(yǎng)基取母液I 、母液II、母液m各25m;
(2) 1000倍的微量元素母液的配制稱取Mn S04*4H20 2 2 3 00 mg; Zn S04*7H20 8 6 00 mg; H:,B0:, 6200mg; KI 830 mg; Na2Mo04'2H20 250 mg; Cu S04'5H20 25 mg; CoCl2'6H20
25 mg，用純水溶解后定容至1000 ml保存，使用時(shí)配制每升培養(yǎng)基取0. 5 ml;
(3) EDTA-鐵鹽母液的配制稱取5. 57g FeS04 7H20和7. 5 g Na-EDTA試劑分別溶解，
混合定容至1L;使用時(shí)配制每升培養(yǎng)基取2. 5ml;
(4) 有機(jī)成分母液的配置稱取IOO mg甘氨酸，5 mg Vhl ,25 mg Vb6， 25 mg煙酸， 5000 mg肌醇溶解后混合定容至500 ml，使用時(shí)配制每升培養(yǎng)基取5 ml;
(5) 激素母液的配置稱取25 mg IBA先用少量乙醇溶解，然后加水定容至50 ml， 使用時(shí)配制每升培養(yǎng)基取1. 5 ml;
(6) 按上述1-4項(xiàng)所述各成分用量加入后，再加入卡拉膠6.5 g、蔗糖15 g，定容至1 L，在微波爐內(nèi)加熱3-5分鐘使卡拉膠充分熔化，加入IBA母液，用lmol丄'1 HCl調(diào)pH至 5.5，分裝后滅菌。
本發(fā)明的K2培養(yǎng)基越橘生根方法為
將經(jīng)過增殖培養(yǎng)30天的無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的生根培養(yǎng)基K2上， 在光照強(qiáng)度〈1000 Lex的條件下培養(yǎng)7-10天，再轉(zhuǎn)移至光照強(qiáng)度〉1500 Lex的條件下培養(yǎng) 1周即可進(jìn)行移栽，生根率達(dá)到95%以上，平均根數(shù)3-8條，根系長(zhǎng)度0. 5-2厘米。培養(yǎng) 條件為溫度25-3(TC，光暗周期各為12小時(shí)。
越橘增殖培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基為現(xiàn)有技術(shù)(本發(fā)明申請(qǐng)人同時(shí)申請(qǐng)了專利，并要求了提前 公丌，發(fā)明名稱為 一種越橘組織培養(yǎng)中的增殖培養(yǎng)基配方)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是
1. 組成培養(yǎng)基的成分來源普通，無特殊形態(tài)化合物。
2. 培養(yǎng)基配制容易。
3. 生根效率高，可以達(dá)到95%以上；所需生根培養(yǎng)的時(shí)間短，20天不到便可移栽，
4且無需進(jìn)行煉苗，移栽后管理簡(jiǎn)單，成活率高于95%。 4.生根培養(yǎng)時(shí)無需專門管理。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
將經(jīng)過增殖培養(yǎng)30天的越橘sharpblue (目前生產(chǎn)用品種)的3_4 cm高的增殖苗在 超凈工作臺(tái)內(nèi)切去下部愈傷，接種至配制好的滅菌k2培養(yǎng)基上，每瓶接種20根左右，置 弱光下(光照強(qiáng)度〈1000Lex)培養(yǎng)7-10天，即可見到95°/。以上增殖苗長(zhǎng)出2-5根白色須根， 根長(zhǎng)0. 2-lcm，然后再將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至光照強(qiáng)度超過1500 Lex的培養(yǎng)架上進(jìn)行光照培養(yǎng)， 7天后白色須根長(zhǎng)度0.5-2cm，明顯增粗，葉色濃綠，此時(shí)即可將生長(zhǎng)健壯的生根苗取出 移栽，此前無需煉苗。
實(shí)施例2:
將經(jīng)過增殖培養(yǎng)30天的越橘Darrow (目前生產(chǎn)用品種)的3-4 cm高的增殖苗在超凈 工作臺(tái)內(nèi)切去下部愈傷，接種至配制好的滅菌k2培養(yǎng)基上，每瓶接種20根左右，置弱光 下(光照強(qiáng)度〈1000Lex)培養(yǎng)7-10天，即可見到95%以上增殖苗長(zhǎng)出2-5根白色須根，根 長(zhǎng)0. 2-lcm，然后再將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至光照強(qiáng)度超過1500 Lex的培養(yǎng)架上進(jìn)行光照培養(yǎng)，7 天后白色須根長(zhǎng)度0.5-2cm，明顯增粗，葉色濃綠，此時(shí)即可將生長(zhǎng)健壯的生根苗取出培 養(yǎng)瓶移栽，此前無需煉苗。
權(quán)利要求
1、一種越橘組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基配方，其特征在于，每L該培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下*大量元素KNO3700mg.L-1；(NH4)2SO4400mg.L-1；MgSO4185mg.L-1；Ca(NO3)2·4H2O 300mg.L；KH2PO485mg.L-1*微量元素Mn SO4·4H2O 11.1mg.L-1；Zn SO4·7H2O 4.3mg.L-1；H3BO3 3.1mg.L-1；KI 0.41mg.L-1；Na2MoO4·2H2O 0.13mg.L-1；Cu SO4·5H2O 0.013mg.L-1；CoCl2·6H2O 0.013mg.L-1*鐵鹽Na2-EDTA 18.7mg.L-1；FeSO4 13.9mg.L-1*有機(jī)成分甘氨酸1.0mg.L-1；VB60.25mg.L-1；VB1 0.05mg.L-1；煙酸0.25mg.L-1；肌醇50mg.L-1*蔗糖15g. L-1，卡拉膠6.25g.L-1，吲哚丁酸IBA0.75mg.L-1；其余為水，pH5. 5。
全文摘要
一種越橘組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基配方，由不同組分及濃度的大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分等組成，使用該培養(yǎng)基生根效率高，可以達(dá)到95％以上；所需生根培養(yǎng)的時(shí)間短，20天不到便可移栽，且無需進(jìn)行煉苗，移栽后管理簡(jiǎn)單，成活率高于95％。同時(shí)，組成培養(yǎng)基的成分來源普通，無特殊形態(tài)化合物，培養(yǎng)基配制容易。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101531992SQ20091010367
公開日2009年9月16日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者凌 李, 政 李 申請(qǐng)人:西南大學(xué)