專利名稱：一種runx3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用的制作方法
一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)
用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說關(guān)于一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒及 其檢測方法和應(yīng)用
背景技術(shù)：
胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率居各類腫瘤的首位。中國的胃 癌發(fā)病率以西北最高東北及內(nèi)蒙古次之華東及沿海又次之中南及西南最低每年約有17萬 人死于胃癌，幾乎接近全部惡性腫瘤死亡人數(shù)的1/4，且每年還有2萬以上新的胃癌病人產(chǎn) 生出來，胃癌確實是一種嚴重威脅人民身體健康的疾病。RUNX3 是抑癌基因，序列號 NM-OO10316804340bp mRNAcds :440…..1729bp，在染 色體1ρ36"位點上。RUNX3基因的表達降低或缺失是造成胃腸道癌的元兇，同時RUNX3基 因的表達降低與肺癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌等發(fā)病密切相關(guān)。有人通過篩查肝細胞癌(HCC) RUNX3遺傳學(xué)和表遺傳學(xué)異常，擬明確RUNX3基因在HCC發(fā)病過程中的作用。采用聚合酶鏈 反應(yīng)(PCR)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性、雜合缺失(LOH)分析、測序以及DNA甲基化特異化的PCR技 術(shù)對90例HCC RUNC3基因突變、LOH及甲基化狀念進行檢測，對RUNX3基因缺失、甲基化結(jié) 果與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系進行分析。結(jié)果未發(fā)現(xiàn)突變病例；但發(fā)現(xiàn)3個單核苷酸多念性 分別存在于外顯子1和4 ；LOH分析表明30.6% (11/36)的病例存在LOH ；54. 4% (49/90) 的病例存在RUNX3基因高甲基化；RUNX3L0H與HCC門靜脈癌栓、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和微血管受侵差 異有顯著性(x2值分別為4. 729,4. 581,4. 581，P值均< 0. 05)。結(jié)論HCC RUNX3基因存在 高頻率的LOH和高甲基化；RUNX3基因的異?？赡艽嬖贖CC發(fā)病過程中起重要作用。同樣研 究人員為探討Rimx3抑癌基因與胃癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及其在胃癌中沉默機制，該基因表 達降低或缺失是其基因沉默的主要機制，為胃癌等惡性腫瘤的診療提供新的策略和方案。 Rimx3基因是一個腫瘤抑制基因，其功能缺失與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。自2002年 日本學(xué)者Li等首先報道Rimx3有調(diào)節(jié)胃上皮細胞的增生與凋亡平衡的作用以來，Rimx3與 胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)研究已成為胃癌研究領(lǐng)域的熱點。Runx3來自Rimt結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子， 是轉(zhuǎn)錄因子Runx家族成員之一，Rimt區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子也稱PEBP2/CBF，是TGF- β超家族信號 重要的靶目標，在哺乳動物生長過程中扮演重要角色。該基因家族在哺乳動物有3個成員 RunXl、RunX2、RunX3，它們的產(chǎn)物都是由α和β亞單位構(gòu)成的異二聚體，具有不同生物學(xué) 功能，Runxl與造血功能有關(guān)，Rimx2是重要的骨生成調(diào)節(jié)因子，Rimx3對脊神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)發(fā) 育及胃黏膜上皮細胞的增生調(diào)控和T細胞的分化起重要作用。RunX3基因位于人染色體的 1ρ36〃 . 1，基因全長約67kb，含有Pl和P2兩個啟動子，6個外顯子和1290bp的開放閱讀 框，內(nèi)含子1跨越了整條基因全長的一半。兩個啟動子區(qū)域均含數(shù)個分離的轉(zhuǎn)錄起始點，其 中Runx3 mRNA主要來自于P2啟動子的轉(zhuǎn)錄。兩個啟動子的GC含量不同，P2啟動子GC含 量高。在外顯子2相當(dāng)于啟動子P2的位置和外顯子6的起始部位有兩個大CpG島。人類 Runx3蛋白是α、β兩個亞單位構(gòu)成的異二聚體，包含415個氨基酸殘基，α亞單位含有一個RD保守域，RD位于Runx蛋白的氨基酸末端，由128個氨基酸組成，介導(dǎo)Runx蛋白與DNA 結(jié)合以及蛋白質(zhì)之間的相互作用。α亞單位介導(dǎo)RD與靶DNA結(jié)合，β亞單能增強RD與靶 DNA的結(jié)合力。Rimx蛋白的羧基端富含脯氨酸和絲氨酸，對基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控起重要作用。有 人研究發(fā)現(xiàn)敲除Runx3的小鼠胃黏膜明顯增厚，Runx3-/-小鼠培養(yǎng)細胞對TGF-β誘導(dǎo)的 生長抑制和凋亡作用不敏感，且Runx3-/-小鼠胃組織中半胱天冬酶3無活性。Fukamachi 等研究發(fā)現(xiàn)Rimx3缺失時胃黏膜細胞處于低分化狀態(tài)。這些觀察表明Rimx3是胃黏膜上皮 主要生長調(diào)控因子，是胃上皮細胞中重要的致凋亡因素。癌中Runx3表達情況研究發(fā)現(xiàn)，胃 癌中Runx3的表達明顯下調(diào)或缺失。Li等應(yīng)用RT-PCR、Southernblot和原位雜交方法對 15株胃癌細胞系和46例胃癌組織標本的RimX3mRNA表達進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)47%的胃癌 細胞系中Runx3零或低表達；60. 9%的胃癌組織中Runx3零表達或低表達，Runx3的表達率 與胃癌臨床分期呈負相關(guān)。所以認為Rimx3基因與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有著極其密切的關(guān)系， 并且隨著胃癌分期的增高表達進一步降低。隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開，至 今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成(單克隆 時)就能做到早期預(yù)測診斷。原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)是將分子生物學(xué)與細胞化學(xué)技術(shù)結(jié)合起 來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術(shù)。其原理是使含 有特異序列、經(jīng)過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈 即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學(xué)方法對標記探針進行探測，從而在細 胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種RUNX3基因的原位雜交檢測試 劑盒的用途。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒。本發(fā)明的另一的目的是，提供一種RUNX3基因的原位雜交檢測方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測胃癌疾病藥物中的應(yīng)用，所述 的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。 所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P中的一種。所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素 中的一種。所述的非放射性標記物優(yōu)選自地高辛。所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其中所述的雜交 探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。
為實現(xiàn)上述第三個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種RUNX3基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟a、將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測a步驟得到的雜交復(fù)合體。所述的a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的 時間為16-24小時，所述的底物選用血液細胞標本或組織細胞標本。本發(fā)明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組成。本試 劑盒的核酸雜交原理是分子生物學(xué)業(yè)內(nèi)人士均熟知，具體操作步驟是標本處理、預(yù)雜交、雜 交、免疫組化染色、鏡下進行定量分析、結(jié)果報告，其中雜交的具體步驟包括儀器操作1).將待測標本放入反應(yīng)槽中；2).儀器自動棄去液體，自動加消化液；3).儀器自動棄去液體，自動后固定；4).儀器自動棄去液體，自動預(yù)雜交(42°C )；5).儀器自動棄去液體，自動清洗；6).儀器自動棄去液體，自動雜交(42°C )；7).儀器自動棄去液體，自動清洗；8).儀器自動棄去液體，自動與DIG抗體培養(yǎng)(室溫)；9).儀器自動棄去液體，自動清洗，顯色；10).取出封片鏡檢。本發(fā)明優(yōu)點在于1、本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點。2、本發(fā)明的檢測方法操作方便、簡單，能在區(qū)級以上醫(yī)院普遍使用推廣。3、本發(fā)明的臨床意義是更早期跟蹤檢測胃癌發(fā)生動態(tài)過程，以及用于胃癌預(yù)防醫(yī) 學(xué)的檢測和篩選工具。本發(fā)明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測癌胚蛋白標志物，以及影像 醫(yī)學(xué)檢查有顯著不同。本發(fā)明可以在基因水平上檢測RUNX3異常表達，在影像醫(yī)學(xué)檢查及 其它檢查未發(fā)現(xiàn)占位性胃癌病灶之前，癌癥生化指標未產(chǎn)生異常之前，亦未形成腫塊之前， 能及早做到以上基因表達異常的信息采集，給臨床胃癌病患一個真正的預(yù)后早期診斷。這 樣才有可能實施胃癌的早期診斷、早期預(yù)防、早期治療，有可能從源頭上徹底根治胃癌惡 疾。

圖1是本發(fā)明實施例中胃癌病人RUNX3基因表達圖片。圖2是正常人RUNX3基因表達圖片。
具體實施方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實施方式
作詳細說明。實施例1一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物、增效劑，其中，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示。雜交探針用地高辛標記。試劑盒中的其它液體和
標本組成如下
消化液100 μ 1/管1管/盒無色透明液體
保護液100 μ 1/管1管/盒無色透明液體
預(yù)雜交液1300 μ 1/ 管2管/盒無色透明液體
正義雜交液10μ 1/管1管/盒無色透明液體
反義雜交液10μ 1/管1管/盒無色透明液體
封閉液1000 μ 1/ 管1管/盒無色透明液體
堿性磷酸酶抗體 μ /管1管/盒無色透明液體
顯色劑A175 μ 1/ 管1管/盒黃色液體
顯色劑B320 μ 1/ 管1管/盒無色透明液體
緩沖液I IOx90ml/ 瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液II IOx80ml/ 瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液III IOx20m/瓶3瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液IV IOx90ml/ 瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體
固定液90ml/ 瓶1瓶/盒無色透明液體
陽性對照標本6片/盒
上述試劑成分說明(所有試劑購自SIGMA)
1、消化液:20mg/ml 蛋白酶 K，IOOmg 蛋白酶 K，加 DEPC-H2O 5ml ；
2、保護液0. 2g的glycine加入Iml的IX緩沖液I ；
3、預(yù)雜交液1 X緩沖液II 75ml
50XD 3ml
10mg/ml yest t--RNA 750ul
llmg/ml SALMONTESTES DNA682ul
0. 04M EDTA 3ml
50% formamide15ml
4、封閉液0.03g的bloking(購買自羅氏公司)加入Iml IX緩沖液III
5、10x緩沖液I (PH7. 1-7. 4)
NaCl 80g
Na2HPO4. 12H20 360g
KCl 2g
KH2PO4 2g
加三蒸水至11，并高壓滅菌；
6、IOx緩沖液II(PH7. 0)
NaCl 175.3g
檸檬酸鈉88. 2g
HCl 幾滴
加三蒸水至11，并高壓滅菌；
7、緩沖液 III (PH7. 9)
Tris 121. IgNaCl 87. 66gHCl 60ml 左右加三蒸水至11，并高壓滅菌；8、緩沖液 IV:IM Tris-HCl (PH9. 5) =Tirs 121. Ig 加 HCl 3ml 左右，加水 900ml，調(diào) PH 至 9. 5，加 水至11，并高壓滅菌；IM NaCl =NaCl 58. 44 加水至 11，并高壓滅菌；0. 5M MgCl2 101. 65g MgCl2. 6H20 加水至 11，并高壓滅菌；9、固定液多聚甲醛40g加IX緩沖液I至11，稍加熱(約50_60度)攪拌至溶 解；10、顯色劑 A =NBT Ig 加 70% DMFl 1. 44ml ；11、顯色劑 B =BCIP Ig 加 100% DMF30ml。本發(fā)明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。實施例2一種RUNX3基因原位雜交檢測方法及其試劑盒應(yīng)用一、標本處理1、用IOml的離心管，裝4. 5ml淋巴細胞分離液，再將3ml抗凝血緩慢加入含有淋 巴細胞分離液(血淋巴細胞分離液=1 1.5)的離心管中，2000r/min離心IOmin ；2、吸取中間層白細胞至另一離心管中，再在此管中加入約兩倍的IX緩沖液I，混 勻，1500g/min 離心 IOmin ；3、棄上清.沉淀加入約兩倍的1 X緩沖液I，混勻，1500g/min離心IOmin ；4、棄上清，并把試管口多余的液體用擦手紙吸去。再將沉淀制成懸液，滴在玻片上 推片，自然干燥。(有條件的醫(yī)院可以用制片機制片。)3ml血，可以做4張片子；5、用40ml 4%固定液，在玻璃缸中，固定30min，再用1 X緩沖液I洗5min。每缸 可以放16片；6、標本可保存在_20°C，或繼續(xù)做實驗。二、將試劑盒中試劑配制成使用濃度1、將IOX緩沖液I用三蒸水按1 10稀釋成IX緩沖液I ；2、將20X緩沖液II用三蒸水按1 10稀釋成2X緩沖液II ；按1 100稀釋成0. 2X緩沖液II ；按1 200稀釋成0. 1 X緩沖液II ；3、將IOX緩沖液III用三蒸水按1 10稀釋成1 X緩沖液III ；4、10 X緩沖液IV用三蒸水按1 10稀釋成X緩沖液IV (取1#，2#，3#各10ml， 加水至IOOml既可)。三、實驗步驟1、取每位待檢者標本兩張，(另外兩張留作復(fù)查用)及陽性對照標本兩張(每次 實驗做一對陽性對照)；2、在玻璃缸里加消化液(消化液IOOul加IX緩沖液199.9ml，即為使用濃 度)20ml。37°C水浴預(yù)熱10分鐘。放進16張玻片，37°C處理12min，再用1 X緩沖液1洗5min ；3、用0. 2%的保護液(保護液Iml加IX緩沖液I99ml即為使用濃度)洗IOmin, 三蒸水洗5min，以上過程都在玻璃缸進行。玻片自然干燥；4、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加預(yù)雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在 42°C恒溫水浴箱中3h以上；5、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)，用70%，90%，95%的乙醇各洗 2min,自然干燥；6、將玻片放入保濕盒內(nèi)，每位病人標本兩張，一張加正義雜交液20ul/片，另一張 加反義雜交液20ul/片，蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在42°C恒溫水浴箱中16-24h ；7、取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)在42°C恒溫水浴箱中用2 X緩沖液II洗兩次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 2X緩沖液II洗一次，每次15min在42°C恒溫水浴箱中用0. 1 X緩沖液II洗兩次，每次15min ；8、用IX緩沖液III洗30s，取出玻片，自然干燥；9、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加0.5% 1封閉液(Iml封閉液加5ml IX緩沖液 III) IOOul/片，蓋緊保濕盒，在室溫下作用30min ；10、取出玻片，用IX緩沖液III洗30s，自然干燥；11、將玻片放入保濕盒內(nèi)，加堿性磷酸酶抗體(加入1.8ml 1 X緩沖液III) IOOul/ 片，蓋緊保濕盒在室溫下作用30min ；12、取出玻片，用IX緩沖液III洗3次，每次15min;13、IX緩沖液IV洗2min，加顯色劑(顯色劑A73. 3ul，顯色劑B157. 5ul加到30ml 1 X緩沖液IV中，混勻)，室溫避光12h以上；14、用三蒸水洗5min，自然干燥，(用甘油加10%的IX緩沖液I混勻)封片鏡檢。四、結(jié)果判斷在光鏡下計數(shù)100-300個細胞，計算染上紫色細胞的百分比。陽性對照標本加反義雜交液的應(yīng)該80%以上染上紫色。所有加正義雜交液的陰性內(nèi)對照應(yīng)無色。地高辛標記的cDNA、RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標記優(yōu)點，還克 服了生物素標記的探針在原位雜交過程中受組織內(nèi)源性生物素干憂等缺點)，將該雜交探 針與人體血液白細胞的待測RNA核酸進行雜交，再用免疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察 mRNA的存在和定位，根據(jù)染色的細胞數(shù)，判斷目的基因的表達量。本發(fā)明方法是目前常用的核酸原位雜交技術(shù)，該方法通過檢測底物細胞中的 RUNX3基因表達量，用來確定胃癌的預(yù)后。臨床研究表明，RUNX3基因在胃癌中低表達，因為 RUNX3基因在正常人高表達，RUNX3基因的低表達說明胃癌，RUNX3基因的表達程度與胃癌 的預(yù)后有關(guān)，屬負相關(guān)，表達愈低預(yù)后愈差。從而獲得胃癌的診斷信息。如上所述，當(dāng)檢測 RUNX3基因表達時，可預(yù)測受試者為胃癌情況。本發(fā)明實施例采樣為胃癌病人5名，正常對照組5名。抽所有待檢人的外周血 3-5毫升(分離白細胞)做原位雜交。結(jié)果表示，所有癌癥轉(zhuǎn)移病人RUNX3基因不表達，細 胞無染色；正常對照組RUNX3基因有過度表達，細胞染色。具體結(jié)果請見圖1，圖2。
SEQUENCE LISTING<110>芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司<120> 一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應(yīng)用<130>/<160>1<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>4340<212>DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400>1attcattcat tccccgtggc actggaggcg gcccactctg ctctgtcagc ttcggagctc 60ctccaccctg gctgccgaaa gccccttccc gccatctaat gatacactct gcatacgctt 120ctgttgagaa tttgtggcta gacattcctg tgggaccggg aatccaaatt cttgggtaca 180aacagaaact tactttcctt ggggattttt ttctctctct cactcacaca cactctcgcg 240ttctttcctt ttttcttttt cgtagcagca ggggggaaaa aagagacaaa aacaaaacaa 300aaaacaacaa aaagcaacac cccccccttt tattttcaaa agtagctaga ggaaaaaaaa 360ataaaacaac agccaaccaa gtgaatccca acccaacccc ctgaagggct gaaaattctc 420gccttcttca gagcggggca tggcatcgaa cagcatcttc gactccttcc cgacctactc 480gccgaccttc atccgcgacc caagcaccag ccgccgcttc acacctccct ccccggcctt 540cccctgcggc ggcggcggcg gcaagatggg cgagaacagc ggcgcgctga gcgcgcaggc 600ggccgtgggg cccggagggc gcgcccggcc cgaggtgcgc tcgatggtgg acgtgctggc 660ggaccacgca ggcgagctcg tgcgcaccga cagccccaac ttcctctgct ccgtgctgcc 720ctcgcactgg cgctgcaaca agacgctgcc cgtcgccttc aaggtggtgg cattggggga 780cgtgccggat ggtacggtgg tgactgtgat ggcaggcaat gacgagaact actccgctga 840
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權(quán)利要求
一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒在制備檢測胃癌疾病藥物中的應(yīng)用，所述的試劑盒包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的雜交探針序列如SEQID NO. 1所 示的RNA序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的標記物選自放射性核素或非 放射性標記物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的放射性核素選自3H、35S、125I或32P 中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標記物選自生物素、地高 辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標記物優(yōu)選自地高辛。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的試劑盒還包括增效劑，所述的 增效劑是堿性磷酸酶抗體。
8.一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，其特征在于，所述 的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的標記物選自放射性核素或非放射性標記物。
9.一種RUNX3基因的原位雜交檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a、將權(quán)利要求8所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；b、檢測a步驟得到的雜交復(fù)合體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其特征在于a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為 核酸雜交的溫度為42°C ；核酸雜交的時間為16-24小時，所述的底物選用血液細胞標本或 組織細胞標本。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種RUNX3基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還提供了一種RUNX3基因原位雜交檢測方法。另外，本發(fā)明還提供了試劑盒在制備檢測胃癌疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點在于本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點。本發(fā)明的檢測方法操作方便、簡單，能在區(qū)級以上醫(yī)院普遍使用和推廣。
文檔編號C12Q1/68GK101988099SQ20091005608
公開日2011年3月23日 申請日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月7日 公開號200910056083.發(fā)明者張云福, 裘建英 申請人:芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司