專利名稱：具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌菌株、其制備和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬枯草芽孢桿菌菌株及其應用領域，特別是涉及具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢 桿菌菌株、其制備和應用。
背景技術：
苧麻(Ramie)的學名是萬oe/w^/a "/wa (Linn.) Gaudich，屬于蕁麻科的多年生宿根性 草本植物。干燥后的原麻含有60 70%纖維素和30 35%非纖維素膠質成份。這些高分子 膠質化合物主要是果膠、半纖維素、木質素及少量的脂肪類蠟質和灰分等。作為紡織面 料原料，苧麻纖維既具有良好的吸熱、散濕、透氣等其它纖維無法比擬的優(yōu)點，也有彈性 差、抗皺性及耐磨性不理想，有穿著刺癢感等缺陷。為了滿足人們回歸自然、追求綠色的 廣泛需求，苧麻纖維的高檔化開發(fā)一直是紡織材料研究領域的熱點。
目前，國內苧麻脫膠多數沿用的化學法，用水量大，能耗高，周期長，環(huán)境污染嚴重， 不利于節(jié)能減排?；瘜W法對苧麻纖維結構也有一定損傷，影響苧麻服用性能。苧麻生物脫 膠主要是利用微生物產生的高度特異性果膠酶，甘露聚糖酶等生物酶類水解苧麻中的果 膠、半纖維素類物質，而不損傷麻纖維結構。作為環(huán)境友好的苧麻脫膠方法，利用有效微
生物菌株及其產生的生物酶完成苧麻的脫膠，既避免了化學法對麻類纖維的損傷破壞，也 因不使用強酸、強堿性原料而避免了對環(huán)境的污染。
微生物脫膠就是把經過篩選的具脫膠能力的微生物菌種擴大培養(yǎng)后接種到生苧麻上， 在適宜環(huán)境條件下，進行"膠養(yǎng)菌，菌產酶，酶脫膠"的生化反應，即微生物菌株先以生苧 麻上的膠質為營養(yǎng)源，在大量生長繁殖過程中分泌出混合酶系分解膠質，實現纖維的有效 分離。
相對于苧麻的酶法脫膠，微生物法脫膠存在一個顯著不同，即將培養(yǎng)好的微生物菌種 直接接種于生苧麻上，使苧麻脫膠與細菌的生長繁殖相伴進行。微生物脫膠的關鍵是具有 脫膠能力的菌株篩選和培養(yǎng)。菌株篩選涉及到菌株分布的廣泛性、生長的快速性、營養(yǎng)特 異性及脫膠高效性。近幾年內，國內外均有微生物脫膠菌種篩選的報道。中國農業(yè)科學院 麻類研究所彭源德等人篩選了一株脫膠菌株T85-260 ，可在pH5.0 9.0范圍內生長，最適 生長pH6.5 7.0，生長溫度范圍是27 °C 42 °C 。Zheng等人篩選了 3株嗜堿性菌株NT-39， NT-53， NT-76用于苧麻脫膠，不僅降低了苧麻的殘膠率，而且還提高了苧麻纖維光澤度。 國外Fredi等人篩選出一株嗜堿性細菌Jm3;c0/ato sp.。在苧麻脫膠過程中，該菌株產生的
5果膠裂解酶作用在纖維膠質上的效率遠遠高于它所產生的木聚糖酶的作用效率。何紹江等人利用亨氏厭氧技術從漚麻塘泥、麻地和菜園土采集的土樣中分離得到苧麻厭氧脫膠菌。胡國全等從麻廠污泥和沼氣池的污泥中優(yōu)選出8株厭氧脫膠性能較好的桿菌，測定其代謝特性并對有效菌株進行了組合，4個組合的脫膠率為33.6% 38.98%。國外也有利用黑曲霉等絲狀真菌進行麻類脫膠的報道，然而真菌脫膠普遍存在生長速度慢，脫膠周期長，酸性生長條件，真菌會產生纖維素酶，纖維強力容易受到損害，殘膠率高，脫膠效果并不是十分理想。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌菌株、其制備和應用，該菌同時高產果膠酶和半纖維素酶，且對苧麻脫膠效果良好。
根據Blast及聚類分析結果(表l)，該菌與枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)相似性為96%,結合生理生化試驗結果和鏡檢分析，命名此菌株為Bacillus subtilisDZs。
該菌株具有在適當的培養(yǎng)和發(fā)酵條件下，以高產率產生果膠酶和木聚糖酶的能力，從而，以對苧麻中的果膠類物質的有效去除實現苧麻的微生物深層浸沒脫膠。
本發(fā)明的具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)已于2009年6月8日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址在北京市朝陽區(qū)大屯路，中科院微生物研究所)，保藏號為CGMCCNo.3091,其16S rRNA序列見表1 。
本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌菌株(Bacillus subtilis)DZs特征如下呈橢圓或桿形，細胞直徑〉lym,菌落圓形，凸起，表面光滑濕潤，邊緣整齊，呈奶白色不透明狀；呼吸類型為好氧呼吸，在有氧條件下生長良好；革蘭氏染色陽性，側生鞭毛，內生孢子呈橢圓形(圖4)，過氧化氫酶陽性；在葡萄糖、蔗糖、木糖發(fā)酵試驗中可產酸，但不產氣；在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上產堿；該菌株能水解明膠、淀粉和油脂；還原石蕊牛奶，迅速消化酪素而凝塊少；V-P測定陽性；吲哚反應陰性；甲基紅測定陽性。
提取菌株的DNA然后進行PCR擴增，擴增結果見圖1，之后的測序工作由上海生工生物技術有限公司完成。測定菌株16SrRNA全序列(見附表1)，用Molecular EvolutionaryGenetics Analysis(version 3)進行系統(tǒng)發(fā)育聚類分析(菌株的16S rRNA全序列)，得到圖2所示的種系進化樹。
在構建的培養(yǎng)條件下，該菌株培養(yǎng)條件粗放，耐熱性好，生長繁殖快，產果膠酶和木聚糖酶活性高，且酶活穩(wěn)定，菌、酶均無毒性。該菌株及培養(yǎng)系統(tǒng)能夠直接用于苧麻脫膠。本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌菌株的(B^^M^^rifo)DZ5培養(yǎng)方法，包括-
(1) 在富集培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)基中，培養(yǎng)獲得自野生型脫膠優(yōu)勢菌株；
(2) 將步驟(1)中得到的菌株依次培養(yǎng)在含果膠的營養(yǎng)培養(yǎng)基和含半纖維素的營養(yǎng) 培養(yǎng)基中進行定向馴化；
(3) 通過透明圈法從上述培養(yǎng)基中選擇出具有產果膠酶和半纖維素酶能力的菌株。 所述步驟(1)分離培養(yǎng)基含有苧麻粉、氮源以及無機鹽，使用NaOH將pH調節(jié)到
7.2-7.4;碳源來自果膠和半纖維素，氮源來自硫酸銨，無機鹽選自氯化鉀、磷酸氫二鉀、 硫酸鎂和硫酸亞鐵。
所述步驟(2)營養(yǎng)培養(yǎng)基分別以果膠作為唯一碳源的果膠透明圈培養(yǎng)基和半纖維素 作為唯一碳源的半纖維素透明圈培養(yǎng)基。 以該菌株為基礎涉及的培養(yǎng)方法-
(O菌種的制備菌種保存用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(W/VW):牛肉膏0.5g，蛋白胨lg,
氯化鈉0.5g (pH7.4-7.6)， 37°C 200rpm培養(yǎng)過夜，添加凍存緩沖液；
(2)菌種活化劑種子擴大培養(yǎng)將營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基分裝于250mL容器中，每個容器 中50mL，封口包扎后，于121 "C滅菌20min;冷卻后接入斜面培養(yǎng)24 h的菌一環(huán)，在轉 速200 r/min、溫度40 'C條件下?lián)u瓶培養(yǎng)24 h;
G)發(fā)酵體系苧麻發(fā)酵培養(yǎng)基(w/v。/。)苧麻原麻5g， KC10.05g，磷酸氫二鉀0.1g， MgSO4 0.05g， FeSO4 0.001g， (NH4) 2S04 0.5g， 脫膠在250ml容器中進行，每個容器中 裝液量為100ml (含有5g苧麻)，浴比為1: 20，加熱煮沸30min后，調節(jié)pH值至8， 121°C 滅菌20min后，以5%的接種量接入種子液，將三角瓶置于4(TC條件下200rpm搖床培養(yǎng)， 直至96h后脫膠結束，除去脫膠液，沸水浴中煮沸5min，用自來水沖洗數次以去除苧麻上 的細菌，停止脫膠。
所述步驟(1)凍存緩沖液由磷酸二氫鉀0.0627g，磷酸氫二鉀0.0177g，檸檬酸鈉 0.0588g，七水合硫酸鎂0.02645g，甘油10ml，加水定容至100ml制得。
苧麻脫膠培養(yǎng)體系酶活測定-
果膠酶和木聚糖酶活測定方法如下
果膠酶、木聚糖酶用DNS比色法測定，并在此基礎上稍作修改。將該菌接種于苧麻 發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。酶活測定底物分別為0.25%的果膠，1%木聚糖(均用pH4.8的醋酸緩 存液配制)。酶活性測定方法如下d. 取25ml比色管，先加底物1.8ml，再取經8000rpm， 4'C離心15min后的發(fā)酵液上清液0.2ml (稀釋倍數分別為IOO倍、5倍)，加塞搖勻，50。C水浴保溫30min，取出；
e. 加1.5mlDNS顯色液并搖勻，立即置沸水中顯色5min，取出流水冷卻。加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻；
f. 用滅活處理過的酶液作對照，用UNICO VU2100型分光光度分別在520nm和540nm波長下，計測定果膠酶和木聚糖酶酶活力。
其中，酶活單位定義
每小時酶催化果膠分解生成1毫克游離半乳糖醛酸的酶量定為一個酶活力單位。每分鐘催化半纖維素水解生成1微克木糖的酶量定為一個酶活力單位。測得其果膠酶酶活力為169.88U/mL，木聚糖酶酶活力為134.96U/ml，其在pH6.5-9.0，
40'C以下酶活較穩(wěn)定。
有益效果
(1) 本發(fā)明提供菌株及培養(yǎng)系統(tǒng)能夠直接用于苧麻脫膠，具有脫膠周期短，纖維分散率達100%，脫膠效率達95%，菌種不易被污染，處理成本低，纖維質量好，脫膠條件溫，抗污染能力強，耐熱性能好，無環(huán)境污染等優(yōu)點；
(2) 本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌經檢測可同時高產果膠酶和半纖維素酶，且對苧麻脫膠效果良好；
(3) 本發(fā)明具有工藝簡單、適合大規(guī)模工業(yè)化生產等特點。利用該體系進行苧麻脫膠具有脫膠時間短，苧麻纖維分散率達到100%，脫膠率達到卯％以上，精干麻質量達到化學脫膠水平。


圖1菌株16S rRNA基因組PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳圖譜；
圖2菌株16S rRNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹；
圖3正交試驗結果；
圖4莢膜染色照片(油鏡)。
具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內容之后，本領域技術人
8員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。
實施例1
脫膠優(yōu)勢菌株的篩選及鑒定 1)將腐爛苧麻原徑剪成1.5-2cm的小段，充分混勻后取5g依次放入裝有200mL富 集培養(yǎng)基的250mL錐形瓶中，(富集培養(yǎng)基l:牛肉膏0.3g蛋白胨lgNaCl 0.5g水1000ml， pH7.4-7.6; 富集培養(yǎng)2: K2HP04 0.15g，檸檬酸鐵銨0.15g， MgS04 0.15g，甘油6g，檸 檬酸0.6g， L-谷氨酸1.2g，水1000ml， pH 7.4)室溫下靜置富集培養(yǎng)一個月后，稀釋 10-3，10-4,10-5,10-6梯度后,涂布于苧麻分離培養(yǎng)基(苧麻15g, (NH4)2S045g， K2HP04 lg， MgSO40.5g， KC10.5g， FeSO40.01，瓊脂20g，水1000mL， pH自然，約7.0-7.2)上28。C， 培養(yǎng)5天后挑取單菌落于苧麻培養(yǎng)基上劃線分離。待菌落形成后，觀察記錄菌落的色澤， 表面形狀，隆起狀況，邊緣形狀，透明感等形態(tài)特征，結合細胞形態(tài)，革蘭氏染色等鏡檢 結果進行分析，挑取單菌落，劃線分離，純化后保存。將初篩獲得的菌種點種于果膠培養(yǎng) 基(果膠2g， NAN03 3g， K2HP04 0.5g， MgS04 lg，瓊脂20g,水1000mL)和半纖維 素培養(yǎng)基(半纖維素(自制)20g， NH4N032g， K2HP042g， MgS04 0.2g，酵母膏5g， 瓊脂20g，水lOOOmL)平板上，細菌用濾紙片接種，霉菌點種，放線菌劃線接種，每株 個點3個重復，28"C培養(yǎng)72h，帶菌落形成后，用0.2。/。剛果紅水溶液染色4h，倒去表面剩 余剛果紅溶液，加入少量蒸餾水蕩去薄層表面剛果紅，對光即可見明顯的絳紅色水解圈。 在菌落周圍出現絳紅色水解圈者即為果膠分解菌。測量果膠瓊脂平板上菌周圍的透明圈直 徑和菌落直徑，水解圈與菌落直徑之比大者一般有較高果膠酶活力。半纖維素水解圈不需 要染色可直接測得。 2) 16SrRNA測定
參考試劑盒的使用說明提取細菌基因組DNA。
PCR擴增選用細菌16S rRNA基因通用引物，正向引物BSF8/20 ， 5/-AGAGTTTGATCCTGGCTAAG-3/ (E.coli對應位置為8 27);反向引物BSR1541/20, 5/-AAGGAGGTGATCCAGCCG-3/ (E.coli對應位置為1541 1522)。 PCR反應在50(il反 應體系中進行，其中含有Taq酶0.3^1， 10xBuffer 5^1， dNTP4pl，引物2pl，模板DNA 2^1。 PCR擴增條件為94。C預變性4min后，接著以94。C變性lmin， 53。C退火30s， 72°C 延伸1.5min，經35個循環(huán)后72'C延伸10min，后將系統(tǒng)穩(wěn)定在4°C。取3pL的PCR產物，在1。/。的瓊脂糖凝膠100V。下電泳30min，電極緩沖液為0.5xTAE，然后用溴化乙錠(EB) 染色檢驗擴增產物(結果見圖2)。序列的常規(guī)分析使用DNAMAN、 DNASTAR等軟件進 行。序列同源性搜索使用Blast在NCBI (http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)中進行。并應 用Molecular Evolutionary Genetics Analysis(version 3)對其進行進化樹的構建，GenBank中 的相近序列用clustalW程序進行多序列匹配排列(multiple alignments)分析，最后形成一 個多重序列匹配排列陣，用Neighbor-Joining法構建系統(tǒng)進化樹，使用Kimura 2-parameter 法，系統(tǒng)樹各分枝的置信度經重抽樣法(Bootstrap) 1000次重復檢測，得到圖3所示的種 系進化樹。
實例2
苧麻脫膠過程及其結果
苧麻微生物脫膠在250ml三角瓶中進行，每個三角瓶中裝液量為100ml (含有5g苧麻 原麻)，浴比為1: 20，加熱煮沸30min后，調節(jié)pH值，121。C滅菌20min后，將三角瓶 至于不同條件下?lián)u床培養(yǎng)。直至脫膠結束，除去脫膠液，沸水浴中煮沸5min，用自來水沖 洗數次以去除苧麻上的細菌，停止脫膠。
該菌株接種于含滅菌處理過的苧麻發(fā)酵培養(yǎng)基(苧麻原麻5%， (NH4)2S04 0.5%， MgS04 0.05%, KC10.05%， K2HPO40.1%， FeS04 0廁％)中，40°C， 200rpm進行搖床發(fā) 酵培養(yǎng)，1天后即可見苧麻纖維有明顯的分散，發(fā)酵液顏色變深變渾濁；發(fā)酵2天后原本 成束的苧麻已完全分散成纖維狀，發(fā)酵液明顯變稠， 經過4天發(fā)酵后苧脫膠率達到90%以 上，這表明此菌株具有較強的脫膠能力。表l 16SrRNA序列
ATGCTATCTGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTA
GCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGAT
AACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGT
TCAAACATAAAAGGTGGCTTTGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCG
CATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCC
GACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTC
CTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACG
GAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTG
TTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCT
AACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAG
GTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTT
TCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGA
AACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTACACGTGTAGCG
GTGAAATGCGTAAAGATGTGGAGGAACACCAGTGTCGAAGGCGACTCTCT
GGTCTGTAACTGACGCTGAAGAGCGAATACGTGGGGAGCGAACAGGATCA
AATACCCCGGGTAGTCCACGCCGATACGATGATTTCTTTGTGTTAGGGGT
TTCCGCCCCTTTTGCTGCAGATACGCTCAAGCTCTCCGCCAGGGTAGTGG
TTGGCTGACATAATCTCCACGACTGAGGGGAAT
1權利要求
1.具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DZ5CGMCC No.3091，其16S rRNA序列如下ATGCTATCTG CAAGTCGAGC GGACAGATGG GAGCTTGCTC CCTGATGTTAGCGGCGGACG GGTGAGTAAC ACGTGGGTAA CCTGCCTGTA AGACTGGGATAACTCCGGGA AACCGGGGCT AATACCGGAT GGTTGTTTGA ACCGCATGGTTCAAACATAA AAGGTGGCTT TGGCTACCAC TTACAGATGG ACCCGCGGCGCATTAGCTAG TTGGTGAGGT AACGGCTCAC CAAGGCAACG ATGCGTAGCCGACCTGAGAG GGTGATCGGC CACACTGGGA CTGAGACACG GCCCAGACTCCTACGGGAGG CAGCAGTAGG GAATCTTCCG CAATGGACGA AAGTCTGACGGAGCAACGCC GCGTGAGTGA TGAAGGTTTT CGGATCGTAA AGCTCTGTTGTTAGGGAAGA ACAAGTACCG TTCGAATAGG GCGGTACCTT GACGGTACCTAACCAGAAAG CCACGGCTAA CTACGTGCCA GCAGCCGCGG TAATACGTAGGTGGCAAGCG TTGTCCGGAA TTATTGGGCG TAAAGGGCTC GCAGGCGGTTTCTTAAGTCT GATGTGAAAG CCCCCGGCTC AACCGGGGAG GGTCATTGGAAACTGGGGAA CTTGAGTGCA GAAGAGGAGA GTGGAATTAC ACGTGTAGCGGTGAAATGCG TAAAGATGTG GAGGAACACC AGTGTCGAAG GCGACTCTCTGGTCTGTAAC TGACGCTGAA GAGCGAATAC GTGGGGAGCG AACAGGATCAAATACCCCGG GTAGTCCACG CCGATACGAT GATTTCTTTG TGTTAGGGGTTTCCGCCCCT TTTGCTGCAG ATACGCTCAA GCTCTCCGCC AGGGTAGTGGTTGGCTGACA TAATCTCCAC GACTGAGGGG AAT
2. 具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌菌株的(^"C77/MW^'fo)DZ5培養(yǎng)方法，包括(1) 在富集培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)基中，培養(yǎng)獲得自野生型脫膠優(yōu)勢菌株；(2) 將步驟(1)中得到的菌株依次培養(yǎng)在含果膠的營養(yǎng)培養(yǎng)基和含半纖維素的營養(yǎng) 培養(yǎng)基中進行定向馴化；(3) 通過透明圈法從上述培養(yǎng)基中選擇出具有產果膠酶和半纖維素酶能力的菌株。
3. 根據權利要求2所述的具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌菌株的(S^!7/r^ rato'to)DZ5培 養(yǎng)方法，其特征在于所述步驟(1)分離培養(yǎng)基含有苧麻粉、氮源以及無機鹽，使用NaOH 將pH調節(jié)到7,2-7.4;碳源來自果膠和半纖維素，氮源來自硫酸銨，無機鹽選自氯化鉀、 磷酸氫二鉀、硫酸鎂和硫酸亞鐵。
4. 根據權利要求2所述的具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌菌株的(Bacillus subtilis)DZ5培養(yǎng)方法，其特征在于所述步驟(2)營養(yǎng)培養(yǎng)基分別以果膠作為唯一碳源的果膠透明圈培養(yǎng)基和半纖維素作為唯一碳源的半纖維素透明圈培養(yǎng)基。
5. 具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌的應用，具體過程如下(1) 菌種保存用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基w/vy。牛肉膏0.5g，蛋白胨lg，氯化鈉0.5g， 37°C 200rpm培養(yǎng)過夜，添加凍存緩沖液；(2) 將營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基分裝于250mL容器中，每個容器中50mL，封口包扎后，于121 。C滅菌20min;冷卻后接入斜面培養(yǎng)24 h的菌一環(huán)，在轉速200 r/min、溫度4(TC條件下 搖瓶培養(yǎng)24h;(3) 苧麻發(fā)酵培養(yǎng)基w/v。/。苧麻原麻5g， KC10.05g，磷酸氫二鉀0.1g， MgS04 0.05g， FeSO4 0.001g， (NH4) 2SO40.5g， 脫膠在250ml容器中進行，每個容器中裝液量為100ml 含有5g苧麻，浴比為l: 20，加熱煮沸30min后，調節(jié)pH值至8， 121。C滅菌20min后， 以5%的接種量接入種子液，將三角瓶S于40t:條件下200rpm搖床培養(yǎng)，直至96h后脫膠 結束，除去脫膠液，沸水浴中煮沸5min，用自來水沖洗數次以去除苧麻上的細菌，停止脫 膠。
6. 根據權利要求5所述的具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌的應用，其特征在于所述步 驟(1)凍存緩沖液由磷酸二氫鉀0.0627g，磷酸氫二鉀0.0177g，檸檬酸鈉0.0588g，七水 合硫酸鎂0.02645g，甘油10ml，加水定容至100ml制得。
7. 根據權利要求5所述的具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌的應用，其特征在于苧麻脫 膠培養(yǎng)體系果膠酶和木聚糖酶活測定方法如下-果膠酶、木聚糖酶用DNS比色法測定，并在此基礎上稍作修改；將該菌接種于苧麻 發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)；酶活測定底物分別為0.25%的果膠，1%木聚糖，酶活性測定方法如下-a. 取25ml比色管，先加底物1.8ml，再取經8000rpm， 4'C離心15min后的發(fā)酵液上 清液0.2ml，加塞搖勻，5(TC水浴保溫30min,取出；b. 力Q1.5mlDNS顯色液并搖勻，立即置沸水中顯色5min,取出流水冷卻。加蒸餾水 稀釋至刻度，搖勻；c. 用滅活處理過的酶液作對照，用UNICO VU2100型分光光度分別在520nm和 540nm波長下，計測定果膠酶和木聚糖酶酶活力。
8.根據權利要求7所述的具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌的應用，其特征在于測得其果膠酶酶活力為169.88U/mL，木聚糖酶酶活力為134.96U/ml，其在pH6.5-9.0， 40。C以下 酶活較穩(wěn)定。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有苧麻脫膠活性的枯草芽孢桿菌菌株、其制備和應用，利用以該菌株為核心的體系用于苧麻脫膠。該體系菌種繁殖速度快，果膠酶和木聚糖酶產率高，生產周期短，抗污染能力強，耐熱性能好。體系及培養(yǎng)過程操作安全，無毒性、無環(huán)境污染。與現有技術相比，本發(fā)明具有工藝簡單、適合大規(guī)模工業(yè)化生產等特點。利用該體系進行苧麻脫膠具有脫膠時間短，苧麻纖維分散率達到100％，脫膠率達到90％以上，精干麻質量達到化學脫膠水平。
文檔編號C12N1/20GK101654660SQ20091005478
公開日2010年2月24日 申請日期2009年7月14日 優(yōu)先權日2009年7月14日
發(fā)明者張興群, 曹張軍, 陳楊棟 申請人:東華大學