專(zhuān)利名稱(chēng)：有機(jī)鉀肥菌種劑及生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種有機(jī)肥菌種劑，特別是一種有機(jī)鉀肥菌種劑；本發(fā)明還 涉及一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法。
技術(shù)背景鉀肥是農(nóng)業(yè)三大肥料之一，對(duì)絕大多數(shù)作物都有明顯的增產(chǎn)效果，鉀肥 的原料為鉀鹽類(lèi)物質(zhì)，鉀鹽是含鉀礦物的總稱(chēng)。按其可溶性可分為可溶性鉀 鹽礦物和不可溶性含鉀的鋁硅酸鹽礦物。前者是自然界可溶性的含鉀鹽類(lèi)礦 物堆積構(gòu)成的可被利用的礦產(chǎn)資源；它包括含鉀水體經(jīng)過(guò)蒸發(fā)濃縮、沉積形 成的可溶性固體鉀鹽礦床(如鉀石鹽、光鹵石、雜鹵石等)和含鉀鹵水。鋁硅 酸類(lèi)巖石是不可溶性的含鉀巖石或富鉀巖石(如明礬石、霞石、鉀長(zhǎng)石及富鉀 頁(yè)巖、砂巖、富鉀泥灰?guī)r等)。目前，世界范圍內(nèi)開(kāi)發(fā)利用的主要對(duì)象是可溶 性鉀鹽資源。目前，我國(guó)已查明的可溶性鉀鹽資源儲(chǔ)量不大，尚難滿(mǎn)足農(nóng)業(yè)對(duì)鉀肥的 需求。因此，鉀鹽礦被國(guó)家列入急缺礦種之一。許多研究人員開(kāi)始著手從海 水、含鉀鹵水中提取氯化鉀、硫酸鉀等，但是傳統(tǒng)工藝工藝復(fù)雜，耗能較高。膠質(zhì)芽孢桿菌("aw77^ 7K/^7^7V7M"SJ是生產(chǎn)有機(jī)肥料的重要菌種， 能夠應(yīng)用于微生物鉀肥的生產(chǎn)，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)作物的生長(zhǎng)。但該菌的耐鹽行較差， 在較高鹽濃度的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)受到顯著抑制。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種含鉀量高 的有機(jī)鉀肥菌種劑。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供了生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法。 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是 一種有機(jī)鉀肥菌劑，其特點(diǎn)是，其制備方法如下(1) 將膠質(zhì)芽孢桿菌(Sac2'"^ yK/c^agi7 osiA^在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接于抑制莢膜生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心收集菌體；用稀釋后的海水或者含鉀鹵水懸浮菌體，并將菌體濃度稀釋至106 108個(gè)/ml，得菌體懸浮液，將菌體懸浮液用輻射誘變或者化學(xué)誘變方法 進(jìn)行誘變，將誘變后的菌體懸浮液離心，獲得誘變菌體；取誘變菌體進(jìn) 行篩選、復(fù)篩，獲得耐鹽性菌株；方法如下-1) 用篩選培養(yǎng)基懸浮誘變菌體，調(diào)整誘變菌體濃度至105 K)6個(gè)/ml，充 分搖勻后，分裝于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 20(H4;2) 25 32。C培養(yǎng)5 7天，用分光光度計(jì)檢測(cè)96孔培養(yǎng)板中的誘變菌吸 光值，選取96孔培養(yǎng)板中的吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體進(jìn)行復(fù)篩；3) 將吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體稀釋至102 103個(gè)/ml，取100 200W 誘變菌體稀釋液涂布于復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，25 32X:培養(yǎng)3 5天，重復(fù)3 5 次，出現(xiàn)黃色暈圈菌落為目標(biāo)菌落，將目標(biāo)菌落在復(fù)篩培養(yǎng)平板上進(jìn)行2 3 次單菌落純化后獲得耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；(2) 將耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，離心收集菌體，再加入等量的硅藻土、活性炭或者草木灰作吸附劑， 低溫干燥，即得有機(jī)鉀肥菌種劑。在以上所述的有機(jī)鉀肥菌劑技術(shù)方案中，還可以按照步驟(1)所述的方 法循環(huán)進(jìn)行四 五級(jí)誘變、篩選、復(fù)篩，獲得在不同濃度的海水或者含鉀鹵 水中保持活力的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；其中一級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或者含鉀鹵水蒸餾水=1: 100;二級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 25;三級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 10;四級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 5;五級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 1;一級(jí)誘變、二級(jí)誘變、三級(jí)誘變、四級(jí)誘變、五級(jí)誘變所產(chǎn)生的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌依次命名為HLS-1、 HLS-2、 HLS-3、 HLS-4、 HLS-5。在以上所述的有機(jī)鉀肥菌劑技術(shù)方案中，步驟(2)所述的液體培養(yǎng)基可 以由海水、海鹽鹵水或含鉀鹵水制備，優(yōu)選用鹵水制備；所述的海鹽卣水為 海水經(jīng)蒸發(fā)濃縮，析出大部分NaCl后的鹵水，以海水濃縮到30 30.5。 Be' (濃度單位)為宜；所述的含鉀鹵水可以為鹽湖鹵水、鹽井鹵水或者陸地礦 產(chǎn)含鉀鹵水。本發(fā)明步驟(1)所述的輻射誘變或者化學(xué)誘變的誘變方法可以采用常規(guī) 的誘變方法。如1) Co6G誘變，誘變劑量為l 8kGy;2) 將菌液濃度為稀釋至104 106萬(wàn)個(gè)/1111，經(jīng)化學(xué)誘變處理、紫外線照射 處理。處理要點(diǎn)是a、紫外線照射3 8分鐘，再用日光照射3 8分鐘；b、 以濃度為0.2 2mg/ml的亞硝基胍處理28 30分鐘；c、以1.0 1.2%的硫酸 二乙酯處理30 35分鐘；d、硫酸二乙加紫外線處理，紫外線處理5分鐘以 后，加硫酸二乙酯(1%)處理15 20分鐘。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明還 公開(kāi)了一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，其特點(diǎn)是，取以上所述的有機(jī)鉀肥菌劑技術(shù)方案的步驟(2)所述的有機(jī)鉀肥菌種劑加入基肥中，或者加入經(jīng)其他固 氮菌、解磷菌、木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中，混勻，發(fā)酵 處理10天以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。由于耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌的液體培養(yǎng)基由海水、海鹽鹵水或含鉀鹵水制 備而成，含有豐富的鉀鹽、鎂鹽等，因此基肥中無(wú)需另外加入鉀鹽和鎂鹽或 者僅加入少量鎂鉀等礦物質(zhì)。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明還 公開(kāi)了另一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，其特點(diǎn)是，取有機(jī)鉀肥菌劑技術(shù)方案 的步驟(1)所述的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接于液體 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25"C 3(TC、通入空氣或者氧氣的條件培養(yǎng)3 5天，得培 養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)液噴入基肥中，或者噴入經(jīng)其他固氮菌、解磷菌、木霉菌 和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中，發(fā)酵處理10天以上后，經(jīng)干燥、制 粒后即得生物有機(jī)肥。在本發(fā)明技術(shù)方案中所涉及的各培養(yǎng)基如下1、 無(wú)氮培養(yǎng)基-甘露醇5.0 10.0g ; K2HP040 . 5 2. 0g; MgS04 7H20 0. 2 0. 5g ;瓊脂 粉15. 0 20. 0g ;蒸餾水1000ml; pH為7. 0 7. 5。2、 抑制莢膜生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基-麥芽糖10. 0 20. 0g; (NH4)2S04 0. 5 2. 0g;酵母粉0. 1 1. 0g; MgS04 ■ 0. 2 1.0g; K2HP040. 5 2. 0g;蒸餾水1000ml， pH為7. 0 7. 5。3、 篩選培養(yǎng)基蔗糖5. 0 10. 0g，稀釋后的海水或者含鉀鹵水1000ml， pH為7. 0 7. 5。4、 復(fù)篩培養(yǎng)基-蔗糖5.0 10.0g，瓊脂粉15. 0 20. 0g;溴酚藍(lán)或甲基紅指示劑0.002 0.005g*L-l，稀釋后的海水或者含鉀鹵水1000ml， pH7.0 7. 5。5、液體培養(yǎng)基蔗糖5. 0 10. 0g，海水、海鹽鹵水或者含鉀鹵水稀釋液1000ml， pH7. 0 7.5。適用于HLS-1、 HLS-2、 HLS-3、 HLS-4、 HLS-5的培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基中還可以根據(jù)需要加入l-10g的雜魚(yú)蟲(chóng)下勻漿與/或0. 5 2g的 酵母粉與/或者0.5 2g骨粉。所述的雜魚(yú)蝦勻漿可以用雜魚(yú)蝦和海水、海鹽 鹵水或者含鉀鹵水稀釋液制成，二者的重量體積比為l: 1-3左右，也可以用 市售產(chǎn)品，所述的骨粉和酵母粉可以為常規(guī)的市售產(chǎn)品。本發(fā)明有機(jī)鉀肥菌劑是通過(guò)采用海水或者鹵水制備的培養(yǎng)基結(jié)合化學(xué)誘 變或輻射誘變、定向誘變出可以適應(yīng)一定濃度的海水和含鉀鹵水的耐鹽性膠 質(zhì)芽孢桿菌制備而成。經(jīng)實(shí)驗(yàn)對(duì)比，本發(fā)明有機(jī)鉀肥菌劑含鉀量較高，與普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的未誘導(dǎo)變異的膠質(zhì)芽孢桿菌(^s"'W^ /^cW^7'/7C^A^相比，鉀含量平均分別高出5.4%、 7.8%、 11.0%、 13. 2%、 15. 0% (HLS-1、 HLS-2、 HLS-3、 HLS-4、 HLS-5)，它可以作為生物有機(jī)肥直接施用于普通土壤和鹽堿 性土壤，促進(jìn)植物對(duì)土壤和菌劑本身鉀的吸收。也可以作為有機(jī)肥菌劑，生 產(chǎn)有機(jī)鉀肥和復(fù)合鉀肥。
具體實(shí)施方式
以下進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一 步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對(duì)其權(quán)利的限制。實(shí)施例l。
一種有機(jī)鉀肥菌劑，其制備方法如下(1)將膠質(zhì)芽孢桿菌(勘ci^"s搬c^艱i/7oms;)在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接于抑制莢膜生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心收集菌體；用稀釋后的海水或者含鉀鹵水懸浮菌體，并將菌體濃度稀釋至106 108個(gè)/ml，得菌體懸浮液，將菌體懸浮液用輻射誘變或者化學(xué)誘變方法 進(jìn)行誘變，將誘變后的菌體懸浮液離心，獲得誘變菌體；取誘變菌體進(jìn) 行篩選、復(fù)篩，獲得耐鹽性菌株；方法如下1) 用篩選培養(yǎng)基懸浮誘變菌體，調(diào)整誘變菌體濃度至105 106個(gè)/1111，充 分搖勻后，分裝于96孔培養(yǎng)板中，每孔100W;2) 25'C培養(yǎng)5天，用分光光度計(jì)檢測(cè)96孔培養(yǎng)板中的誘變菌吸光值， 選取96孔培養(yǎng)板中的吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體進(jìn)行復(fù)篩；3) 將吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體稀釋至102 103個(gè)/1111，取10(￥1誘 變菌體稀釋液涂布于復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，25。C培養(yǎng)3 5天，重復(fù)3次，出現(xiàn) 黃色暈圈菌落為目標(biāo)菌落，將目標(biāo)菌落在復(fù)篩培養(yǎng)平板上進(jìn)行2次單菌落純 化后獲得耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；(2)將耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，離心收集菌體，再加入等量的硅藻土、活性炭或者草木灰作吸附劑， 低溫干燥，即得有機(jī)鉀肥菌種劑。 實(shí)施例2。 一種有機(jī)鉀肥菌劑，其制備方法如下(1)將膠質(zhì)芽孢桿菌(SaC^^A 7Z7"C^a《i'/70^/W在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接于抑制莢膜生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心收集菌 體；用稀釋后的海水或者含鉀鹵水懸浮菌體，并將菌體濃度稀釋至106 108個(gè)/1111，得菌體懸浮液，將菌體懸浮液用輻射誘變或者化學(xué)誘變方法 進(jìn)行誘變，將誘變后的菌體懸浮液離心，獲得誘變菌體；取誘變菌體進(jìn) 行篩選、復(fù)篩，獲得耐鹽性菌株；方法如下1) 用篩選培養(yǎng)基懸浮誘變菌體，調(diào)整誘變菌體濃度至105 106個(gè)/1111，充 分搖勻后，分裝于96孔培養(yǎng)板中，每孔200W;2) 32。C培養(yǎng)7天，用分光光度計(jì)檢測(cè)96孔培養(yǎng)板中的誘變菌吸光值， 選取96孔培養(yǎng)板中的吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體進(jìn)行復(fù)篩；3) 將吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體稀釋至102 103個(gè)/1111，取200W誘 變菌體稀釋液涂布于復(fù)篩培養(yǎng)基平板上32C培養(yǎng)5天，重復(fù)5次，出現(xiàn)黃色 暈圈菌落為目標(biāo)菌落，將目標(biāo)菌落在復(fù)篩培養(yǎng)平板上進(jìn)行3次單菌落純化后獲得耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌； (2)將耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，離心收集菌體，再加入等量的硅藻土、活性炭或者草木灰作吸附劑， 低溫干燥，即得有機(jī)鉀肥菌種劑。 實(shí)施例3。
一種有機(jī)鉀肥菌劑，其制備方法如下(1) 將膠質(zhì)芽孢桿菌(&ci"M鵬Ci7艱i加^A^在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后， 轉(zhuǎn)接于抑制莢膜生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心收集菌體；用稀釋后的海水或者含鉀鹵水懸浮菌體，并將菌體濃度稀釋至106 1()8個(gè)/ml，得菌體懸浮液，將菌體懸浮液用輻射誘變或者化學(xué)誘變方法 進(jìn)行誘變，將誘變后的菌體懸浮液離心，獲得誘變菌體；取誘變菌體進(jìn) 行篩選、復(fù)篩，獲得耐鹽性菌株；方法如下1) 用篩選培養(yǎng)基懸浮誘變菌體，調(diào)整誘變菌體濃度至105 106個(gè)/1111，充 分搖勻后，分裝于96孔培養(yǎng)板中，每孔150W;2) 28'C培養(yǎng)6天，用分光光度計(jì)檢測(cè)96孔培養(yǎng)板中的誘變菌吸光值， 選取96孔培養(yǎng)板中的吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體進(jìn)行復(fù)篩；3) 將吸光值為0. 2 0. 5的誘變菌體稀釋至102 103個(gè)/1111，取誘 變菌體稀釋液涂布于復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，28。C培養(yǎng)4天，重復(fù)4次，出現(xiàn)黃 色暈圈菌落為目標(biāo)菌落，將目標(biāo)菌落在復(fù)篩培養(yǎng)平板上進(jìn)行3次單菌落純化 后獲得耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；(2) 將耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，離心收集菌體，再加入等量的硅藻土、活性炭或者草木灰作吸附劑， 低溫干燥，即得有機(jī)鉀肥菌種劑。實(shí)施例4。實(shí)施例1或2或3所述的有機(jī)鉀肥菌劑中，按照步驟(1)所 述的方法循環(huán)進(jìn)行四 五級(jí)誘變、篩選、復(fù)篩，獲得在不同濃度的海水或者 含鉀鹵水中保持活力的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；其中一級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 100;二級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 25;三級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 10;四級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 5;五級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 1;一級(jí)誘變、二級(jí)誘變、三級(jí)誘變、四級(jí)誘變、五級(jí)誘變所產(chǎn)生的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌依次命名為HLS-1、 HLS-2、 HLS-3、 HLS-4、 HLS-5。實(shí)施例5。實(shí)施例1-4任何一項(xiàng)所述的有機(jī)鉀肥菌劑中，步驟(2)所述 的液體培養(yǎng)基由海水、海鹽鹵水或含鉀鹵水制備；所述的海鹽鹵水為海水經(jīng) 蒸發(fā)濃縮，析出大部分NaCl后的鹵水；所述的含鉀鹵水為鹽湖鹵水、鹽井卣 水或者陸地礦產(chǎn)含鉀鹵水。實(shí)施例6。實(shí)施例1-5任何一項(xiàng)所述的有機(jī)鉀肥菌劑中，步驟(2)所述 的液體培養(yǎng)基為蔗糖5.0 10.0g，海水、海鹽鹵水或者含鉀鹵水稀釋液 1000ml， pH7. 0 7. 5。實(shí)施例7。實(shí)施例6所述的有機(jī)鉀肥菌劑中，在液體培養(yǎng)基中還加入以下三種成分中的一種雜魚(yú)蝦勻漿l 10g;酵母粉0.5 2g;骨粉0. 5 2g。實(shí)施例8。實(shí)施例6所述的有機(jī)鉀肥菌劑中，在液體培養(yǎng)基中還加入以下三種成分中的任意二種雜魚(yú)蝦勻漿l 10g;酵母粉O. 5 2g;骨粉0. 5 2g。實(shí)施例9。實(shí)施例6所述的有機(jī)鉀肥菌劑中，在液體培養(yǎng)基中還加入以下三種成分雜魚(yú)蝦勻漿l 10g;酵母粉0.5 2g;骨粉0. 5 2g。實(shí)施例10。 一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，取實(shí)施例1-9任何一項(xiàng)所述的 有機(jī)鉀肥菌劑中的步驟(2)所述的有機(jī)鉀肥菌種劑加入基肥中，或者加入經(jīng) 其他固氮菌、解磷菌、木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中，混勻， 發(fā)酵處理10天以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。實(shí)施例ll。 一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，取實(shí)施例1-4任何一項(xiàng)所述的 有機(jī)鉀肥菌劑中的步驟(1)所述的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化 后，轉(zhuǎn)接于實(shí)施例5-9任何一項(xiàng)中所述的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25"C、通入 空氣或者氧氣的條件培養(yǎng)3天，得培養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)液噴入基肥中，或者 噴入經(jīng)其他固氮菌、解磷菌、木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中， 發(fā)酵處理10天以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。實(shí)施例12。 一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，取實(shí)施例1-4任何一項(xiàng)所述的 有機(jī)鉀肥菌劑中的步驟(1)所述的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化 后，轉(zhuǎn)接于實(shí)施例5-9任何一項(xiàng)中所述的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在30"C、通入 空氣或者氧氣的條件培養(yǎng)5天，得培養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)液噴入基肥中，或者 噴入經(jīng)其他固氮菌、解磷菌、木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中， 發(fā)酵處理10天以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。實(shí)施例13。 一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，取實(shí)施例1-4任何一項(xiàng)所述的 有機(jī)鉀肥菌劑中的步驟(1)所述的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化 后，轉(zhuǎn)接于實(shí)施例5-9任何一項(xiàng)中所述的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在28'C、通入 空氣或者氧氣的條件培養(yǎng)4天，得培養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)液噴入基肥中，或者 噴入經(jīng)其他固氮菌、解磷菌、木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中， 發(fā)酵處理10天以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。
權(quán)利要求
1、一種有機(jī)鉀肥菌劑，其特征在于，其制備方法如下(1)將膠質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接于抑制莢膜生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心收集菌體；用稀釋后的海水或者含鉀鹵水懸浮菌體，并將菌體濃度稀釋至106～108個(gè)/ml，得菌體懸浮液，將菌體懸浮液用輻射誘變或者化學(xué)誘變方法進(jìn)行誘變，將誘變后的菌體懸浮液離心，獲得誘變菌體；取誘變菌體進(jìn)行篩選、復(fù)篩，獲得耐鹽性菌株；方法如下1)用篩選培養(yǎng)基懸浮誘變菌體，調(diào)整誘變菌體濃度至105～106個(gè)/ml，充分搖勻后，分裝于96孔培養(yǎng)板中，每孔100～200μl；2)25～32℃培養(yǎng)5～7天，用分光光度計(jì)檢測(cè)96孔培養(yǎng)板中的誘變菌吸光值，選取96孔培養(yǎng)板中的吸光值為0.2～0.5的誘變菌體進(jìn)行復(fù)篩；3)將吸光值為0.2～0.5的誘變菌體稀釋至102～103個(gè)/ml，取100～200μl誘變菌體稀釋液涂布于復(fù)篩培養(yǎng)基平板上，25～32℃培養(yǎng)3～5天，重復(fù)3～5次，出現(xiàn)黃色暈圈菌落為目標(biāo)菌落，將目標(biāo)菌落在復(fù)篩培養(yǎng)平板上進(jìn)行2～3次單菌落純化后獲得耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；(2)將耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，離心收集菌體，再加入等量的硅藻土、活性炭或者草木灰作吸附劑，低溫干燥，即得有機(jī)鉀肥菌種劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的有機(jī)鉀肥菌劑，其特征在于，按照步驟(1)所 述的方法循環(huán)進(jìn)行四 五級(jí)誘變、篩選、復(fù)篩，獲得在不同濃度的海水 或者含鉀鹵水中保持活力的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌；其中一級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或者含鉀鹵水蒸餾水=1: 100;二級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 25;三級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 10;四級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 5;五級(jí)誘變時(shí)懸浮菌體所用的稀釋后的海水或者含鉀鹵水濃度為海水或 者含鉀鹵水蒸餾水=1: 1;一級(jí)誘變、二級(jí)誘變、三級(jí)誘變、四級(jí)誘變、五級(jí)誘變所產(chǎn)生的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌依次命名為HLS-1、 HLS-2、 HLS-3、 HLS-4、 HLS-5。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的有機(jī)鉀肥菌劑，其特征在于，步驟(2)所述的 液體培養(yǎng)基由海水、海鹽鹵水或含鉀鹵水制備；所述的海鹽鹵水為海水 經(jīng)蒸發(fā)濃縮，析出大部分NaCl后的鹵水；所述的含鉀卣水為鹽湖卣水、 鹽井鹵水或者陸地礦產(chǎn)含鉀鹵水。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的有機(jī)鉀肥菌劑，其特征在于，步驟(2) 所述的液體培養(yǎng)基為蔗糖5.0 10.0g，海水、海鹽鹵水或者含鉀鹵水 稀釋液1000ml， pH7. 0 7. 5。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的有機(jī)鉀肥菌劑，其特征在于，在液體培養(yǎng)基中還加入以下三種成分中的至少一種雜魚(yú)蝦勻漿1 10g;酵母粉O. 5 2g;骨粉0.5 2g。
6、 一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，其特征在于，取權(quán)利要求1的步驟(2) 所述的有機(jī)鉀肥菌種劑加入基肥中，或者加入經(jīng)其他固氮菌、解磷菌、 木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中，混勻，發(fā)酵處理10天 以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。
7、 一種生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法，其特征在于，取權(quán)利要求1的步驟(1)所述的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接于權(quán)利要求5 所述的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在25。C 30'C、通入空氣或者氧氣的條件培 養(yǎng)3 5天，得培養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)液噴入基肥中，或者噴入經(jīng)其他固 氮菌、解磷菌、木霉菌和發(fā)酵菌發(fā)酵5天以上的有機(jī)肥基肥中，發(fā)酵處 理10天以上后，經(jīng)干燥、制粒后即得生物有機(jī)肥。
全文摘要
本發(fā)明是一種有機(jī)鉀肥菌劑，其特征在于，其制備方法如下將耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌在無(wú)氮培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，離心收集菌體，再加入等量的硅藻土、活性炭或者草木灰作吸附劑，低溫干燥，即得有機(jī)鉀肥菌種劑。本發(fā)明還步及生物有機(jī)肥的生產(chǎn)方法。本發(fā)明有機(jī)鉀肥菌劑是通過(guò)采用海水或者鹵水制備的培養(yǎng)基結(jié)合化學(xué)誘變或輻射誘變、定向誘變出可以適應(yīng)一定濃度的海水和含鉀鹵水的耐鹽性膠質(zhì)芽孢桿菌制備而成，其含鉀量較高，它可以作為生物有機(jī)肥直接施用于普通土壤和鹽堿性土壤，促進(jìn)植物對(duì)土壤和菌劑本身鉀的吸收。也可以作為有機(jī)肥菌劑，生產(chǎn)有機(jī)鉀肥和復(fù)合鉀肥。
文檔編號(hào)C12R1/07GK101608168SQ20091003169
公開(kāi)日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2009年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月24日
發(fā)明者溫扶輝, 程昌林, 君 肖 申請(qǐng)人:君 肖