專利名稱：紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術領域，主要是一種紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的 方法。
背景技術：
石蒜屬(Z^cw^Ker6)是世界公認的著名球根花卉，被譽為"中國郁金香"。它是一類 具地下鱗莖的多年生草本植物，具有豐富的花型與色彩。本屬全世界共有20個種。我國石蒜 屬植物有15種，占全球總數(shù)的四分之三。
紅藍石蒜(i^on^;w戸flW"')是石蒜屬中一種自然雜交后代，自然界中分布很少，其花 為淡紫玫瑰色，花瓣頂端為深藍色，顏色極為亮麗。開花時間在7 9月，花期適逢夏秋高溫 少花時節(jié)，是一種難得的高溫季節(jié)賞花品種；其葉深綠色，葉脈具灰白色條帶，挺拔直立、 叢生，形似蘭草，姿態(tài)幽雅，從出葉到葉長成為最佳觀葉期，還是一種冬季優(yōu)良的賞葉植物。
石蒜在我國已有1500多年的栽培歷史，但在園林綠化及鮮切花中一直沒有得到廣泛的應 用和重視。主要原因是石蒜屬植物以自然分球繁殖為主，具開花能力的母球平均一年僅產(chǎn)生 1~2個子球，繁殖系數(shù)相當?shù)停皇夥N子特別是紅藍石蒜不易正常結實，通過種子繁殖系數(shù) 也不高，且實生苗從發(fā)育到開花需4 5年時間，這就極大制約了這一優(yōu)良花卉品種的規(guī)?；?開發(fā)和應用。近年來，石蒜的組織培養(yǎng)工作在國內(nèi)逐歩展開，但僅局限在石蒜，忽地笑，長 筒石蒜等常見種中，未發(fā)現(xiàn)有對在園林及鮮切花領域發(fā)展?jié)摿薮蟮募t藍石蒜進行系統(tǒng)的組 織培養(yǎng)和快速繁殖技術研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決上述現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方 法，通過收集了大量紅藍石蒜的種質(zhì)資源，通過現(xiàn)代生物技術，用植物組織培養(yǎng)方法來進行 無性繁殖，為保護紅藍石蒜種質(zhì)資源，同時滿足在園林及鮮切花領域對其日益增大的需求量。
本發(fā)明解決其技術問題采用的技術方案。這種紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方 法，該方法按以下步驟進行
1)、培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為
(1)基本培養(yǎng)基:MS，其中蔗糖20 40g/L,瓊脂8g/L， pH5.8;
(2)誘導培養(yǎng)基-MS+TDZ0.2 1.0mg/L;
(3)增殖培養(yǎng)基-MS+6-BA3 7mg/L+NAA0.5 2.5 mg/L;
(4)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BAd.5 2.5mg/L+NAA0.5 1.0 mg/L;
(5)生根培養(yǎng)基:l/2MS+KT0.5 2.5mg/L+IBA0.5 2.5 mg/L+活性炭2g/L;
2) 、外植體的選取與滅菌處理選用生長健壯的紅藍石蒜鱗莖進行滅菌處理，外植體取 樣放在4 5月份，石蒜花葶抽出前2個月；滅菌處理后將鱗莖切留距鱗莖基盤0.8-1.3厘米 的高度，每個鱗莖平均對切為4塊，后將每片分內(nèi)外兩層切開，每塊有3 5層鱗片；
3) 、誘導培養(yǎng)將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分，接入誘導培養(yǎng)基 上進行誘導培養(yǎng)，外植體誘導培養(yǎng)3天后鱗片膨脹巻曲，12~15天后鱗片間可見有米粒狀突 起
4) 、增殖培養(yǎng)誘導培養(yǎng)15天后，將生長于誘導培養(yǎng)基上外植體轉接于增殖培養(yǎng)上進行 增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)15 20天后分化出叢芽；每隔15 20天，將分化的叢芽切成單株再接種在增 殖培養(yǎng)基上，再分化叢芽；
5) 、壯苗培養(yǎng)將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養(yǎng)基上，15~20天后小芽基部膨 大成小鱗莖，直徑為0.3~0.8厘米；
6) 、生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)后的小鱗莖接種到生根培養(yǎng)基上，10~15天小鱗莖基部生出 2~7根根系；
7) 、組培苗的馴化與移栽當生根培養(yǎng)20天時，將生根小鱗莖移至常溫下適應3 5天， 打開培養(yǎng)瓶蓋再適應3~5天，洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到裝有細紗泥炭珍珠巖的體積比為 2: 1: l基質(zhì)的穴盤中，澆透水。
所述的滅菌處理是將紅藍石蒜鱗莖清洗，切除根部及鱗莖頸部，剝除褐變部分及鱗莖外
部2層鱗片，用洗潔精浸泡10 20分鐘后流水沖洗2小時，后用體積比為75%的酒精消毒1 分鐘，體積比為0.1%的升汞溶液浸泡10~15分鐘，無菌水沖洗4 5次。
所述的培養(yǎng)基，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為
(1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS，其中蔗糖20g或40g/L，瓊脂8g/L, pH5.8;
(2) 誘導培養(yǎng)基MS+TDZ0.4mg/L+活性炭2g/L，庶糖40g;
(3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA5mg/L+NAA1.0mg/L，蔗糖40g;
(4) 壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA2mg/L+NAA0.5 mg/L，蔗糖40g;
(5) 生根培養(yǎng)基1/2MS+KT1.0mg/L+IBA2mg/L+活性炭2g/L，蔗糖20g。
所述的各組織培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)室溫度為24±2°<:，光照時間為12h/d、光照 強度為25001x~3000Lx。
本發(fā)明的有益效果是
1)提出的紅藍石蒜組培快繁的方法，采用適合紅藍石蒜組培的誘導培養(yǎng)基、增殖培
養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基及練苗和移栽的方法，紅藍石蒜小芽的誘導率達90%以 上；每個周期的增殖率在500%以上；
2) 經(jīng)加設的壯苗培養(yǎng)，使紅藍石蒜小芽生長速度加快，15~20天后小芽基部膨大成 直徑為0.3~0.8cm的小鱗莖，為下一步的生根培養(yǎng)奠定堅實的基礎
3) 在誘導培養(yǎng)階段加入活性炭有效防止了外植體褐變現(xiàn)象，而在生根培養(yǎng)階段加入 活性炭，在防止小鱗莖褐變的同時還促進了組培苗的生根，使生根率達到100%;
4) 在誘導、增殖、壯苗三階段適當增加蔗糖的用量，為紅藍石蒜組培小芽及小鱗莖 的快速生長增殖提供保障。
具體實施例方式
通過以下實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。 實施例l:本實施例1中，紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖的技術方法按以下步驟進行 1)、培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量
為-
(1)基本培養(yǎng)基MS,其中蔗糖20 40g/L,瓊脂8g/L， pH5.8;
(2)誘導培養(yǎng)基MS+TDZ0.2 1.0mg/L+活性炭2g/L;
(3)增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA3 7mg/L+NAA0.5~2.5 mg/L;
(4)壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA0.5 2.5mg/L+NAA0.5~ 1.0 mg/L;
(5)生根培養(yǎng)基-l/2MS+KT0.5 2.5mg/L+IBA0.5 2,5 mg/L+活性炭2g/L;
2) 、外植體的選取與滅菌處理選用生長健壯的紅藍石蒜鱗莖進行滅菌處理，外植 體取樣放在4 5月份，石蒜花葶抽出前2個月；滅菌處理是將紅藍石蒜鱗莖清洗，切除 根部及鱗莖頸部，剝除褐變部分及鱗莖外部2層鱗片，用洗潔精浸泡10 20分鐘后流水 沖洗2小時，后用體積比為75%的酒精消毒1分鐘，體積比為0.1 %的升汞溶液浸泡10~15 分鐘，無菌水沖洗4 5次；滅菌處理后將鱗莖切留距鱗莖基盤0.8 1.3厘米的高度，每個 鱗莖平均對切為4塊，后將每片分內(nèi)外兩層切開，每塊有3 5層鱗片；
3) 、誘導培養(yǎng)將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分，接入誘導培 養(yǎng)基上進行誘導培養(yǎng)，外植體誘導培養(yǎng)3天后鱗片膨脹巻曲，12~15天后鱗片間可見有米 粒狀突起；
4) 、增殖培養(yǎng)誘導培養(yǎng)15天后，將生長于誘導培養(yǎng)基上外植體轉接于增殖培養(yǎng)上 進行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)15~20天后分化出叢芽每隔15 20天，將分化的叢芽切成單株再 接種在增殖培養(yǎng)基上，再分化叢芽；
5) 、壯苗培養(yǎng)將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養(yǎng)基上，15 20天后小芽基部
膨大成小鱗莖，直徑為0.3~0.8厘米；
6) 、生根培養(yǎng).*將壯苗培養(yǎng)后的小鱗莖接種到生根培養(yǎng)基上，10 15天小鱗莖基部生 出2 7根根系；
7) 、組培苗的馴化與移栽當生根培養(yǎng)20天時，將生根小鱗莖移至常溫下適應3~5 天，打開培養(yǎng)瓶蓋再適應3~5天，洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到裝有細紗泥炭珍珠巖的 體積比為2: 1: l基質(zhì)的穴盤中，澆透水。
所述的各組織培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)室溫度為24土2。C，光照時間為12h/d、光照 強度為25001x 3000Lx。
實施例2:本實施例2中的紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，按以下步驟進
行
1) 、培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量
為
(1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS，其中蔗糖20g或40g/L，瓊脂8g/L, pH5.8;
(2) 誘導培養(yǎng)基MS+TDZ0.4mg/L+活性炭2g/L，蔗糖40g;
(3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA5mg/L+NAA1.0mg/L，蔗糖40g;
(4) 壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA2mg/L+NAA0.5 mg/L，蔗糖40g;
(5) 生根培養(yǎng)基1/2MS+KT1.0mg/L+IBA2mg/L+活性炭2g/L，蔗糖20g。
2) 、外植體的選取與滅菌處理選用生長健壯的紅藍石蒜鱗莖進行滅菌處理，外植 體取樣放在4 5月份，石蒜花葶抽出前2個月；滅菌處理是將紅藍石蒜鱗莖清洗，切除 根部及鱗莖頸部，剝除褐變部分及鱗莖外部2層鱗片，用洗潔精浸泡10 20分鐘后流水 沖洗2小時,后用體積比為75%的酒精消毒1分鐘，體積比為0.1%的升汞溶液浸泡10~15 分鐘，無菌水沖洗4 5次；滅菌處理后將鱗莖切留距鱗莖基盤0.8 1.3厘米的高度，每個 鱗莖平均對切為4塊，后將每片分內(nèi)外兩層切開，每塊有3 5層鱗片；
3) 、誘導培養(yǎng)將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分，接入誘導培 養(yǎng)基上進行誘導培養(yǎng)，外植體誘導培養(yǎng)3天后鱗片膨脹巻曲，12 15天后鱗片間可見有米 粒狀突起；
4) 、增殖培養(yǎng)誘導培養(yǎng)15天后，將生長于誘導培養(yǎng)基上外植體轉接于增殖培養(yǎng)上 進行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)15 20天后分化出叢芽；每隔15 20天，將分化的叢芽切成單株再 接種在增殖培養(yǎng)基上，再分化叢芽；
5) 、壯苗培養(yǎng)將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養(yǎng)基上，15-20天后小芽基部
膨大成小鱗莖，直徑為0.3~0.8厘米；
6) 、生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)后的小鱗莖接種到生根培養(yǎng)基上，10 15天小鱗莖基部生 出2~7根根系；
7) 、組培苗的馴化與移栽當生根培養(yǎng)20天時，將生根小鱗莖移至常溫下適應3~5 天，打開培養(yǎng)瓶蓋再適應3~5天，洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到裝有細紗泥炭珍珠巖的 體積比為2: 1: l基質(zhì)的穴盤中，澆透水。
所述的各組織培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)室溫度為24±2°C,光照時間為12h/d、光照 強度為25001x 3000Lx。
實施例3:本實施例3中的紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，按以下步驟進
行
1) 、培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量
為
(1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS，其中蔗糖20g或40g/L，瓊脂8g/L， pH5.8;
(2) 誘導培養(yǎng)基MS+TDZ1.0mg/L+活性炭2g/L，蔗糖40g;
(3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA7mg/L+NAA2.0 mg/L，蔗糖40g;
(4) 壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.5 mg/L，蔗糖40g;
(5) 生根培養(yǎng)基1/2MS+KT1.0mg/L+IBA1.5mg/L+活性炭2g/L，蔗糖20g。
2) 、外植體的選取與滅菌處理選用生長健壯的紅藍石蒜鱗莖進行滅菌處理，外植 體取樣放在4 5月份，石蒜花葶抽出前2個月；滅菌處理是將紅藍石蒜鱗莖清洗，切除 根部及鱗莖頸部，剝除褐變部分及鱗莖外部2層鱗片，用洗潔精浸泡10 20分鐘后流水 沖洗2小時，后用體積比為75%的酒精消毒1分鐘，體積比為0.1%的升汞溶液浸泡10-15 分鐘，無菌水沖洗4 5次；滅菌處理后將鱗莖切留距鱗莖基盤0.8 1.3厘米的高度，每個 鱗莖平均對切為4塊，后將每片分內(nèi)外兩層切開，每塊有3 5層鱗片
3) 、誘導培養(yǎng)將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分，接入誘導培 養(yǎng)基上進行誘導培養(yǎng)，外植體誘導培養(yǎng)3天后鱗片膨脹巻曲，12~15天后鱗片間可見有米 粒狀突起；
4) 、增殖培養(yǎng)誘導培養(yǎng)15天后，將生長于誘導培養(yǎng)基上外植體轉接于增殖培養(yǎng)上 進行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)15 20天后分化出叢芽；每隔15~20天，將分化的叢芽切成單株再 接種在增殖培養(yǎng)基上，再分化叢芽；
5) 、壯苗培養(yǎng)將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養(yǎng)基上，15 20天后小芽基部
膨大成小鱗莖，直徑為0.3~0.8厘米；
6) 、生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)后的小鱗莖接種到生根培養(yǎng)基上，10 15天小鱗莖基部生 出2 7根根系；
7) 、組培苗的馴化與移栽當生根培養(yǎng)20天時，將生根小鱗莖移至常溫下適應3 5 天，打開培養(yǎng)瓶蓋再適應3~5天，洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到裝有細紗泥炭珍珠巖的 體積比為2: 1: l基質(zhì)的穴盤中，澆透水。
所述的各組織培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)室溫度為24±2°C，光照時間為12h/d、光照 強度為25001x 3000Lx。
除上述實施例外，本發(fā)明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形成的技 術方案，均落在本發(fā)明要求的保護范圍。
權利要求
1.一種紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，其特征在于該方法按以下步驟進行1)、培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為(1)基本培養(yǎng)基MS或1/2MS，其中蔗糖20～40g/L，瓊脂8g/L，pH5.8；(2)誘導培養(yǎng)基MS+TDZ0.2～1.0mg/L+活性炭2g/L；(3)增殖培養(yǎng)基MS+6-BA3～7mg/L+NAA0.5～2.5mg/L；(4)壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA0.5～2.5mg/L+NAA0.5～1.0mg/L；(5)生根培養(yǎng)基1/2MS+KT0.5～2.5mg/L+IBA0.5～2.5mg/L+活性炭2g/L；2)、外植體的選取與滅菌處理選用生長健壯的紅藍石蒜鱗莖進行滅菌處理，外植體取樣放在4～5月份，石蒜花葶抽出前2個月；滅菌處理后將鱗莖切留距鱗莖基盤0.8～1.3厘米的高度，每個鱗莖平均對切為4塊，后將每片分內(nèi)外兩層切開，每塊有3～5層鱗片；3)、誘導培養(yǎng)將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分，接入誘導培養(yǎng)基上進行誘導培養(yǎng)，外植體誘導培養(yǎng)3天后鱗片膨脹卷曲，12～15天后鱗片間可見有米粒狀突起；4)、增殖培養(yǎng)誘導培養(yǎng)15天后，將生長于誘導培養(yǎng)基上外植體轉接于增殖培養(yǎng)上進行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)15～20天后分化出叢芽；每隔15～20天，將分化的叢芽切成單株再接種在增殖培養(yǎng)基上，再分化叢芽；5)、壯苗培養(yǎng)將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養(yǎng)基上，15～20天后小芽基部膨大成小鱗莖，直徑為0.3～0.8厘米；6)、生根培養(yǎng)將壯苗培養(yǎng)后的小鱗莖接種到生根培養(yǎng)基上，10～15天小鱗莖基部生出2～7根根系；7)、組培苗的馴化與移栽當生根培養(yǎng)20天時，將生根小鱗莖移至常溫下適應3～5天，打開培養(yǎng)瓶蓋再適應3～5天，洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到裝有細紗泥炭珍珠巖的體積比為211基質(zhì)的穴盤中，澆透水。
2、根據(jù)權利要求1所述的紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，其特征在于所述的滅菌處理是將紅藍石蒜鱗莖清洗，切除根部及鱗莖頸部，剝除褐變部分及鱗莖外部2層 鱗片，用洗潔精浸泡10 20分鐘后流水沖洗2小時，后用體積比為75%的酒精消毒1分鐘， 體積比為0.1%的升汞溶液浸泡10~15分鐘，無菌水沖洗4 5次。
3、 根據(jù)權利要求1所述的紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為(1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS，其中蔗糖20g或40g/L，瓊脂8g/L， pH5.8;(2) 誘導培養(yǎng)基MS+TDZ0.4mg/L+活性炭2g/L，蔗糖40g;(3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA5mg/L+NAA1.0mg/L，蔗糖40g;(4) 壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA2mg/L+NAA0.5 mg/L，蔗糖40g;(5) 生根培養(yǎng)基- 1/2MS+KT1.0mg/L+IBA2mg/L+活性炭2g/L，蔗糖20g。
4、 根據(jù)權利要求1或3所述的紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，其特征在于， 所述的各組織培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是，培養(yǎng)室溫度為24士2。C，光照時間為12h/d、光照強度 為25001x 3000Lx。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紅藍石蒜的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術的方法，步驟如下1)培養(yǎng)基的配制；包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為基本培養(yǎng)基MS或1/2MS，其中蔗糖20～40g/L，瓊脂8g/L，pH5.8；誘導培養(yǎng)基MS+TDZ0.2～1.0mg/L+活性炭2g/L；增殖培養(yǎng)基MS+6-BA3～7mg/L+NAA0.5～2.5mg/L；壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA0.5～2.5mg/L+NAA0.5～1.0mg/L；生根培養(yǎng)基1/2MS+KT0.5～2.5mg/L+IBA0.5～2.5mg/L+活性炭2g/L；2)外植體的選取與滅菌處理3)誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)4)組培苗的馴化與移栽。本發(fā)明的有益效果是紅藍石蒜小芽的誘導率達90％以上；每個周期的增殖率在500％以上；紅藍石蒜小芽生長速度加快；有效地防止了外植體褐變現(xiàn)象，在防止小鱗莖褐變的同時還促進了組培苗的生根。
文檔編號C12N5/04GK101366357SQ20081012101
公開日2009年2月18日 申請日期2008年9月17日 優(yōu)先權日2008年9月17日
發(fā)明者玲 吳, 張海珍, 敏 徐, 李志炎 申請人:杭州植物園;張海珍