專利名稱：切花百合組培種苗一次成苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及切花百合組培種苗快繁培養(yǎng)方法，屬于植物的組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
百合是百合科百合屬多年生草本鱗莖植物，是世界著名的觀賞花卉。近年來(lái)，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，百合已成為我國(guó)花卉市場(chǎng)中的重要高檔切花種類。關(guān)于百合的組織培養(yǎng)，國(guó)內(nèi)外不少研究者開(kāi)展了大量的工作。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，國(guó)內(nèi)外組織培養(yǎng)成功的百合種及品種超過(guò)幾百種，但均局限于對(duì)組培技術(shù)中某個(gè)環(huán)節(jié)(如外植體部位，培養(yǎng)基成分，培養(yǎng)條件，種質(zhì)保存等)的研究，未系統(tǒng)地進(jìn)行切花百合種苗組培技術(shù)研究及規(guī)?；a(chǎn)。光獨(dú)立(Photoautotrophic)培養(yǎng)，即無(wú)糖箱式組培技術(shù)的發(fā)明主要是解決植物組培快繁階段的環(huán)境調(diào)控問(wèn)題，所以在光獨(dú)立培養(yǎng)操作中，主要強(qiáng)調(diào)培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基質(zhì)、培養(yǎng)操作器具、通入的氣體、培養(yǎng)外界環(huán)境的無(wú)菌要求等等，而且其操作規(guī)程較為繁瑣，不易于種苗的規(guī)模化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能簡(jiǎn)化組培種苗的培養(yǎng)程序，并通過(guò)培養(yǎng)環(huán)境的控制，便于規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)切花百合組培種苗的一次成苗方法。
本發(fā)明所述切花百合組培種苗快繁培養(yǎng)方法的步驟是1、取材及滅菌將準(zhǔn)備接種的鱗莖在4～5℃溫度下處理6～8周，清洗，剝?nèi)[莖外皮及外部2～3層鱗片，用75％的酒精浸泡30～60秒，然后在0.1～0.2％的升汞(Hgcl2)溶液中處理15～20分鐘，1～2％的次氯酸鈉溶液中處理10～15分鐘，無(wú)菌水洗3～4次后，進(jìn)行切塊或段接種；2、誘導(dǎo)培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將處理好的外植體切塊或段接種到下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～25天，使切口產(chǎn)生白色的愈傷組織及小鱗莖突起即不定芽
MS基本培養(yǎng)液6-芐基氨基嘌呤(6-BA) 10～2.0mg/L萘乙酸(NAA) 0.1～0.5mg/L蔗糖 30000mg/L瓊脂 5500mg/L3、增殖培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將上述誘導(dǎo)出的愈傷組織及不定芽分切后轉(zhuǎn)入下列增殖培養(yǎng)基中，在溫度為26±2℃，光照時(shí)間10～12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1500～2000Lx的條件下，培養(yǎng)15～20天，使小鱗莖增殖，并抽出葉片，成為幼苗MS基本培養(yǎng)液6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.5～1.0mg/L萘乙酸(NAA) 0.2～0.5mg/L蔗糖30000mg/L瓊脂5500mg/L4、光獨(dú)立生根培養(yǎng)在常規(guī)室溫下，將增殖培養(yǎng)20天，具1對(duì)葉以上，高2.0cm的幼芽切下，插入下列培養(yǎng)基中MS改良培養(yǎng)液萘乙酸(NAA) 0～0.1mg/L蛭石∶培養(yǎng)液 2～3∶1通入氣流量為1-5L/min的CO2混合氣體，并保持CO2濃度在600～1000ppm，相對(duì)濕度80-90％，進(jìn)行光獨(dú)立生根培養(yǎng)，培養(yǎng)20天后可得切花百合種苗。
由于本發(fā)明的難點(diǎn)之一是在不同的培養(yǎng)階段，使用不同的培養(yǎng)基及不同的培養(yǎng)方法，因此，各培養(yǎng)基的配方是極其關(guān)鍵的技術(shù)，否則難于加快組織培養(yǎng)過(guò)程，也難于獲得優(yōu)質(zhì)種苗。
本發(fā)明所述各階段的培養(yǎng)基是快繁培養(yǎng)階段使用現(xiàn)有技術(shù)中的MS培養(yǎng)液；生根階段使用不添加有機(jī)物和維生素的MS改良培養(yǎng)液；外植體誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽階段使用的培養(yǎng)基為(單位mg/L)MS+(1.0～2.0)6-芐基氨基嘌呤+(0.1～0.5)萘乙酸+30000蔗糖+5500瓊脂；不定芽分化及增殖階段使用的培養(yǎng)基為(單位mg/L)MS+(0.5～1.0)6-芐基氨基嘌呤+(0.2～0.5)萘乙酸+30000蔗糖+5500瓊脂；單株生根培養(yǎng)階段使用的培養(yǎng)基為(單位mg/L)改良MS培養(yǎng)液+(0～0.1)萘乙酸+蛭石(2～3倍)。
由于本發(fā)明的難點(diǎn)之二是如何在解決切花百合組培快繁的基礎(chǔ)上，簡(jiǎn)化組培種苗的培養(yǎng)程序，從而為規(guī)?；a(chǎn)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。其關(guān)鍵是在種苗的生根階段采用光獨(dú)立培養(yǎng)方法，并通過(guò)培養(yǎng)環(huán)境調(diào)控，即控制CO2混合氣體濃度、通氣時(shí)間、光照強(qiáng)度，使培養(yǎng)出來(lái)的生根苗不需移栽，直接在室外過(guò)渡管理后即可一次成苗。所述光獨(dú)立培養(yǎng)的步驟是①種苗進(jìn)入光獨(dú)立培養(yǎng)的0～5天，保持相對(duì)濕度在95％以上；②6～10天開(kāi)始通入氣流量1L/min的CO2混合氣體，CO2濃度保持在600～800ppm，相對(duì)濕度85-90％；③11～15天，氣流量加至3L/min，CO2濃度保持在800～1000ppm，相對(duì)濕度在80-85％；④出苗前期，空氣流量可調(diào)至3～5L/min，20天后出室外繼續(xù)培養(yǎng)，20～30天后成苗；培養(yǎng)期間光照強(qiáng)度2000～2500Lx(兩只日光燈)，每天光照12小時(shí)，培養(yǎng)室溫度保持20±2℃。
本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果通過(guò)對(duì)切花百合外植體處理以及提供適宜的誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)基，優(yōu)化了百合組培快繁技術(shù)，并在種苗的生根階段采用光獨(dú)立培養(yǎng)技術(shù)，簡(jiǎn)化了組培種苗的培養(yǎng)程序及操作，組培無(wú)根苗的切取無(wú)需在超凈工作環(huán)境中進(jìn)行，通過(guò)對(duì)現(xiàn)有方法中的CO2混合氣體濃度、通氣時(shí)間、光照強(qiáng)度等關(guān)鍵因素的控制，使培養(yǎng)出的生根苗不需移栽，直接在室外過(guò)渡管理后即可一次成苗，在節(jié)約成本的前提下，產(chǎn)出的種苗健壯、整齊、品質(zhì)好，達(dá)到優(yōu)質(zhì)種苗的標(biāo)準(zhǔn)，適于花卉種苗的規(guī)?；a(chǎn)。
實(shí)施例1優(yōu)選生長(zhǎng)健壯、開(kāi)花性狀好的東方百合雜種系(Oriental hybrids)品種“Siberia”、“Sorbonne”的種球作為外植體，在取材前，將準(zhǔn)備接種的鱗莖在4～5℃的低溫下處理6周，然后經(jīng)洗衣粉水清洗，剝?nèi)[莖外皮及外部3層鱗片，切去少許頂部及基部，剝成帶部分基盤的單個(gè)鱗片，用75％的酒精浸泡60秒，然后在0.1％升汞溶液中處理15分鐘，2％的次氯酸鈉溶液處理10分鐘，無(wú)菌水洗3次，進(jìn)行無(wú)菌操作切塊接種；2、誘導(dǎo)培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將處理好的外植體切塊(段)接種到下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20天，使切口產(chǎn)生白色的愈傷組織及小鱗莖突起(不定芽)MS基本培養(yǎng)液6-芐基氨基嘌呤 1.0mg/L萘乙酸 0.5mg/L蔗糖 30000mg/L瓊脂 5500mg/L3、增殖培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將上述誘導(dǎo)出的愈傷組織及不定芽分切后轉(zhuǎn)入下列增殖培養(yǎng)基中，在溫度為26±2℃，光照時(shí)間12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1500Lx的條件下，培養(yǎng)20天，使小鱗莖增殖，并抽出葉片，成為幼苗MS基本培養(yǎng)液(同上)6-芐基氨基嘌呤 0.5mg/L萘乙酸 0.5mg/L蔗糖30000mg/L瓊脂5500mg/L上述2、3步驟中培養(yǎng)基的制作是將培養(yǎng)基各成分混勻后再進(jìn)行分裝、不透氣膜封口，經(jīng)110～125℃，8～12分鐘高壓滅菌，取出后在潔凈的房間內(nèi)冷卻待用；4、光獨(dú)立生根培養(yǎng)在常規(guī)室溫下，將增殖培養(yǎng)20天，具1對(duì)葉以上，高2cm左右的幼芽切下，插入下列培養(yǎng)基中MS改良培養(yǎng)液萘乙酸 0.1mg/L蛭石∶溶液＝3∶1培養(yǎng)基中的培養(yǎng)液和蛭石需分別滅菌，將培養(yǎng)液分裝到玻璃瓶中，封口，經(jīng)125℃，10分鐘高壓滅菌，冷卻待用；蛭石噴水后分裝，包扎封口后經(jīng)110℃，20分鐘高壓滅菌，冷卻待用。在使用時(shí)，將培養(yǎng)液與蛭石以1∶3的比例混勻，鋪在育苗盤中，厚度3～4cm；光獨(dú)立培養(yǎng)過(guò)程是①種苗進(jìn)入光獨(dú)立培養(yǎng)的當(dāng)天計(jì)為0天；②0～5天，培養(yǎng)箱內(nèi)不通氣，相對(duì)濕度保持在95％以上；③6～10天開(kāi)始通入氣流量1L/min的CO2混合氣體，CO2濃度保持在600～800ppm，相對(duì)濕度85-90％；④培養(yǎng)11～15天，氣流量3L/min，CO2濃度可在800～1000ppm保持不變，相對(duì)濕度在80-85％；⑤出苗前期在其它條件不變的情況下，空氣流量可調(diào)至3～5L/min，20天后可出室外繼續(xù)培養(yǎng)，不需移栽，20～30天后可成苗。
整個(gè)光獨(dú)立培養(yǎng)均在箱式容器內(nèi)進(jìn)行，培養(yǎng)基質(zhì)為蛭石，不加糖，培養(yǎng)期間光照強(qiáng)度2000～2500Lx(兩只日光燈)；12小時(shí)/天光照；為保證光照的均勻，每天交錯(cuò)開(kāi)日光燈；整個(gè)培養(yǎng)期間培養(yǎng)室溫度保持20±2℃(培養(yǎng)箱內(nèi)為26±2℃)；混和氣體消毒柱采用優(yōu)氯凈作為消毒水，需10～20天更換一次，濃度1/150～250；每出一批苗后，需用濃度為1/150～250的消毒水對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行清洗；⑩隨時(shí)保持培養(yǎng)室內(nèi)的清潔。
切花百合經(jīng)光獨(dú)立培養(yǎng)10天左右便可生根。培養(yǎng)20天后移到溫室大棚中繼續(xù)培養(yǎng)，不需移栽。前期注意保持濕度，20～30天后可成苗，進(jìn)行大田移栽。
實(shí)施例2優(yōu)選生長(zhǎng)健壯、開(kāi)花性戕好的亞洲百合雜種系(Asiatic hybrids)品種“Toro”、“Elle”的種球作為外植體，在取材前，然后經(jīng)洗衣粉水切去少許頂部及基部，將準(zhǔn)備接種的鱗莖在4～5℃的低溫下處理8周，清洗，剝?nèi)[莖外皮及外部2層鱗片，用75％的酒精浸泡30秒，然后在0.1％的汞溶液中處理20分鐘，2％的次氯酸鈉溶液中處理15分鐘，無(wú)菌水洗4次后，進(jìn)行切塊(段)接種；2、誘導(dǎo)培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將處理好的外植體切塊(段)接種到單位為mg/L的下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天，使切口產(chǎn)生白色的愈傷組織及小鱗莖突起(不定芽)；MS基本培養(yǎng)液(同上)6-芐基氨基嘌呤 2.0mg/L萘乙酸 0.1mg/L蔗糖 30000mg/L瓊脂 5500mg/L3、增殖培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將上述誘導(dǎo)出的愈傷組織及不定芽分切后轉(zhuǎn)入單位為mg/L的下列增殖培養(yǎng)基中，在溫度為26±2℃，光照時(shí)間10小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2000Lx的條件下，培養(yǎng)15天，使小鱗莖增殖，并抽出葉片，成為幼苗MS基本培養(yǎng)液(同上)6-芐基氨基嘌呤 1.0mg/L萘乙酸 0.2mg/L蔗糖 30000mg/L瓊脂 5500mg/L上述2、3步驟中培養(yǎng)基的制作是將培養(yǎng)基各成分混勻后再進(jìn)行分裝、不透氣膜封口，經(jīng)110℃，12分鐘高壓滅菌，取出后在潔凈的房間內(nèi)冷卻待用；4、光獨(dú)立生根培養(yǎng)在常規(guī)室溫下，將增殖培養(yǎng)20天，具1對(duì)葉以上，高2cm左右的幼芽切下，插入下列培養(yǎng)基中MS改良培養(yǎng)液(同上)蛭石∶溶液＝2∶1培養(yǎng)基中的培養(yǎng)液和蛭石需分別滅菌，將培養(yǎng)液分裝到玻璃瓶中，封口，經(jīng)125℃，10分鐘高壓滅菌，冷卻待用；蛭石噴水后分裝，包扎封口后經(jīng)110℃，20分鐘高壓滅菌，冷卻待用。在使用時(shí)，將培養(yǎng)液與蛭石以1∶2的比例混勻，鋪在育苗盤中，厚度3～4cm；光獨(dú)立培養(yǎng)過(guò)程及使用的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)出來(lái)的種苗處理等均與實(shí)施例1相同。
MS基本培養(yǎng)液成分見(jiàn)下表

MS改良培養(yǎng)液成分見(jiàn)下表

本發(fā)明經(jīng)試驗(yàn)研究，其結(jié)果報(bào)告如下一、組培快繁技術(shù)1.供試材料東方百合雜種系(Oriental hybrids)品種“Siberia”、“Sorbonne”；亞洲百合雜種系(Asiatic hybrids)品種“Toro”、“Elle”；2.試驗(yàn)方法同實(shí)施例1；3.試驗(yàn)結(jié)果3.1不同激素配比對(duì)外植體誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽形態(tài)發(fā)生的影響在供試的6個(gè)培養(yǎng)基配比處理中，總體誘導(dǎo)率在70％以上。從表1可見(jiàn)，BA濃度高時(shí)誘導(dǎo)愈傷組織的效果好，NAA與BA的濃度比例相當(dāng)時(shí)，有利于不定芽的產(chǎn)生。從總體上來(lái)看，在愈傷組織的誘導(dǎo)上處理2的誘導(dǎo)頻率最高，達(dá)到87.5％，其次為處理4，誘導(dǎo)頻率為73.7％；在不定芽的誘導(dǎo)上，處理1的誘導(dǎo)頻率最高，為82.4％；NAA濃度較高時(shí)(0.5mg/L)及BA濃度較低時(shí)有少量根的再生(11.8％)。
表1 不同激素配比對(duì)誘導(dǎo)率及形態(tài)發(fā)生的影響

表2 不同激素濃度對(duì)不定芽增殖和分化的影響

3.2愈傷組織和不定芽的增殖與分化，愈傷組織及不定芽在不同濃度培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況見(jiàn)表2(供試材料為亞洲百合“Toro”)。
表3 光獨(dú)立培養(yǎng)環(huán)境控制因子對(duì)切花百合培養(yǎng)效果的影響

(注種苗質(zhì)量評(píng)價(jià)依照百合組培苗出瓶標(biāo)準(zhǔn)(內(nèi)定)++++為好；+++為良；++為中；+為差)
從表3可見(jiàn)，最適宜不定芽增殖及正常分化的培養(yǎng)基配比為BA0.5～1.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L，激素的適用范圍較寬。但在規(guī)?；a(chǎn)中，主要以種苗的質(zhì)量為追求目標(biāo)，要求種苗的低(無(wú))變異性。較高濃度的BA可以提高增殖系數(shù)，但不定芽的分化呈叢生狀態(tài)，生長(zhǎng)多不正常，因此在不同的生產(chǎn)階段，宜適當(dāng)控制激素的濃度，在保證增殖率的同時(shí)保證種苗的質(zhì)量。
二、光獨(dú)立生根培養(yǎng)1.供試材料增殖培養(yǎng)20天的百合增殖瓶苗，具1對(duì)葉以上，高2cm左右的無(wú)根單株，品種為東方百合品種“Siberia”和“Sorbonne”。
2.方法在常規(guī)工作室內(nèi)(無(wú)需超凈工作臺(tái))將供試材料插入育苗盤，對(duì)以下幾個(gè)培養(yǎng)因子進(jìn)行試驗(yàn)研究(1)培養(yǎng)基MS大量元素+NAA0；MS大量元素+NAA0.1mg/L；MS大量元素+NAA0.5mg/L；pH均為5.8。(2)通氣初始時(shí)間第3天；第6天；第9天。每天通氣時(shí)間與光照時(shí)間同步。(3)CO2濃度600-800mg/L；800-1000mg/L；1100-1500mg/L。均在箱式容器內(nèi)培養(yǎng)；培養(yǎng)基質(zhì)蛭石，不加糖；整個(gè)培養(yǎng)期間室內(nèi)溫度20±2℃，光照12小時(shí)/天，光照條件2000-2500Lx(兩只日光燈)。
對(duì)照培養(yǎng)基MS+NAA 0.5mg/L+蔗糖3％+瓊脂0.6％，pH5.8；培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度25±2℃，光照12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度2000Lx(兩只日光燈)；每處理100株。觀察不同處理方法材料的生長(zhǎng)情況，20天后統(tǒng)計(jì)植株平均根數(shù)，平均根長(zhǎng)，大于2cm的平均葉片數(shù)，平均生根率。
3.試驗(yàn)結(jié)果3.1光獨(dú)立培養(yǎng)中培養(yǎng)基NAA濃度對(duì)植株生長(zhǎng)的影響百合在培養(yǎng)基質(zhì)中8天開(kāi)始有根的萌發(fā)，植株挺立，長(zhǎng)勢(shì)健壯。從表3可見(jiàn)，培養(yǎng)基質(zhì)中一定濃度的NAA對(duì)百合的生根有促進(jìn)作用。在適宜的條件下，生根率達(dá)90％以上。當(dāng)NAA濃度為0.1mg/L時(shí)，生根率最高，達(dá)97％，且根系正常；當(dāng)NAA濃度為0.5mg/L時(shí)，生根率略低，但平均生根數(shù)和根系長(zhǎng)度兩項(xiàng)指標(biāo)均比濃度為0.1mg/L時(shí)略高。在組培種苗的生產(chǎn)中，小植株的生根率是較為重要的因素，而且激素濃度的使用提倡在保證種苗質(zhì)量的前提下采用較低濃度，所以培養(yǎng)基質(zhì)中的NAA保持在0.1mg/L是較為適宜的。
3.2光獨(dú)立培養(yǎng)中通氣初始時(shí)間對(duì)植株生長(zhǎng)的影響百合無(wú)根苗進(jìn)入光獨(dú)立培養(yǎng)系統(tǒng)當(dāng)天計(jì)為第0天。由于培養(yǎng)基質(zhì)中不加常規(guī)組培中作為植株異養(yǎng)生長(zhǎng)碳源的糖，植株依靠培養(yǎng)箱中的CO2混合氣體進(jìn)行自養(yǎng)生長(zhǎng)，所以在照明開(kāi)始后，培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2濃度迅速下降，初始的通氣時(shí)間即CO2氣體的補(bǔ)給時(shí)間，直接影響植株的生長(zhǎng)。初始的通氣時(shí)間同時(shí)關(guān)系到培養(yǎng)箱中的濕度控制，是光獨(dú)立培養(yǎng)中較為關(guān)鍵的控制因子。從表3可見(jiàn)，最佳的初始通氣時(shí)間為培養(yǎng)的第6天。較早通氣(第0或第3天)的培養(yǎng)箱，小植株在培養(yǎng)后期普遍出現(xiàn)葉片發(fā)黃，植株生根率低等現(xiàn)象，培養(yǎng)的種苗基本無(wú)商品價(jià)值。這可能是因?yàn)槌踉缘男≈仓觊L(zhǎng)勢(shì)較弱，進(jìn)行光合作用的能力不強(qiáng)，較高的CO2濃度造成植株的生理代謝異常。同時(shí)氣體流動(dòng)導(dǎo)致培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度不易保持，小植株在培養(yǎng)過(guò)程中容易萎焉；通氣時(shí)間較晚(第9天)的培養(yǎng)箱，小植株的各項(xiàng)觀察指標(biāo)均較低，植株生長(zhǎng)緩慢，種苗質(zhì)量明顯較差。這可能與CO2混合氣體的補(bǔ)給不及時(shí)，小植株的光合成受到抑制有關(guān)。
3.3光獨(dú)立培養(yǎng)中CO2濃度對(duì)植株生長(zhǎng)的影響CO2濃度對(duì)小植株的生根及生長(zhǎng)有一定的影響。在保證適宜初始通氣時(shí)間的前提下，800-1000mg/L濃度的CO2最適于植株的生根及正常生長(zhǎng)，在不同處理中，其生根率及種苗狀況均優(yōu)于其它濃度的處理。較高濃度的CO2可能會(huì)促進(jìn)植株的光合作用，提高種苗的質(zhì)量，但試驗(yàn)結(jié)果表明，較高濃度的CO2并未取得預(yù)想的較好效果。這可能是因?yàn)?，在同一個(gè)光獨(dú)立培養(yǎng)系統(tǒng)中，人工補(bǔ)加的CO2氣體通過(guò)強(qiáng)制性通氣系統(tǒng)進(jìn)入箱式容器內(nèi)，其濃度由限制鋼瓶CO2氣體流速及各層的流量計(jì)來(lái)調(diào)控，在加大CO2濃度的同時(shí)也加大了通氣量，在培養(yǎng)初期降低了培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度，影響了小植株的生長(zhǎng)。另外，過(guò)高的CO2濃度(超過(guò)1100mg/L)，超過(guò)了小植株生長(zhǎng)的CO2飽和點(diǎn)，可能引起細(xì)胞原生質(zhì)中毒，或迫使植物葉片的氣孔關(guān)閉，一定程度上抑制了光合作用。在利用光獨(dú)立培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行百合組培種苗生產(chǎn)時(shí)，800-1000mg/L濃度的CO2已可滿足組培小植株正常生長(zhǎng)光合作用的需求。
三、光獨(dú)立生根培養(yǎng)與常規(guī)生根培養(yǎng)成苗率的比較從表4可見(jiàn)，與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法比較，光獨(dú)立培養(yǎng)的種苗生根率達(dá)到95％以上，且根系發(fā)達(dá)呈白色，對(duì)照植株根系生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，根短且呈黃黑色；植株健壯，過(guò)渡成活率達(dá)92.7％，較對(duì)照的成活率75.3％提高了17.4％；生根苗質(zhì)量顯著優(yōu)于常規(guī)組培生根苗。由于減少了由高溫、弱光等引起的組培種苗生理及形態(tài)異常，并減少了植株生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用，植株基本無(wú)畸形、變異等情況發(fā)生，植株生長(zhǎng)速度快，生長(zhǎng)發(fā)育均勻，在工廠化組培種苗的生產(chǎn)中可以減化或省略馴化過(guò)程，一次性成苗，提高了種苗質(zhì)量，更易于大田種植的馴化。在生產(chǎn)成本上具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
表4 常規(guī)與無(wú)糖組培苗成苗率的比較內(nèi)容常規(guī)組培技術(shù) 無(wú)糖組培技術(shù)種苗生根率(％) 86 96一級(jí)過(guò)渡成活率(％) 83.4 一次成苗二級(jí)過(guò)渡成活率(％) 90.3最終成活率(％) 75.3 92.權(quán)利要求
1.一種切花百合組培種苗一次成苗的方法，其特征在于它采用下列步驟A、取材及滅菌將準(zhǔn)備接種的鱗莖在4～5℃溫度下處理6～8周，清洗，剝?nèi)[莖外皮及外部2～3層鱗片，用75％的酒精浸泡30～60秒，然后在0.1～0.2％的升汞(Hgcl2)溶液中處理15～20分鐘，1～2％的次氯酸鈉溶液中處理10～15分鐘，無(wú)菌水洗3～4次后，進(jìn)行切塊或段接種B、誘導(dǎo)培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將處理好的外植體切塊或段接種到下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～25天，使切口產(chǎn)生白色的愈傷組織及小鱗莖突起即不定芽MS基本培養(yǎng)液6-芐基氨基嘌呤(6-BA)10～2.0mg/L萘乙酸(NAA) 0.1～0.5mg/L蔗糖30000mg/L瓊脂5500mg/LC、增殖培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將上述誘導(dǎo)出的愈傷組織及不定芽分切后轉(zhuǎn)入下列增殖培養(yǎng)基中，在溫度為26±2℃，光照時(shí)間10～12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1500～2000Lx的條件下，培養(yǎng)15～20天，使小鱗莖增殖，并抽出葉片，成為幼苗MS基本培養(yǎng)液6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.5～1.0mg/L萘乙酸(NAA) 0.2～0.5mg/L蔗糖30000mg/L瓊脂5500mg/LD、光獨(dú)立生根培養(yǎng)在常規(guī)室溫下，將增殖培養(yǎng)20天，具1對(duì)葉以上，高2.0cm的幼芽切下，插入下列培養(yǎng)基中MS改良培養(yǎng)液萘乙酸(NAA) 0～0.1mg/L蛭石∶培養(yǎng)液 2～3∶1通入氣流量為1-5L/min的CO2混合氣體，并保持CO2濃度在600～1000ppm，相對(duì)濕度80-90％，進(jìn)行光獨(dú)立生根培養(yǎng)，培養(yǎng)20天后可得切花百合種苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述光獨(dú)立培養(yǎng)的步驟是①種苗進(jìn)入光獨(dú)立培養(yǎng)的0～5天，保持相對(duì)濕度在95％以上；②6～10天開(kāi)始通入氣流量1L/min的CO2混合氣體，CO2濃度保持在600～800ppm，相對(duì)濕度85-90％；③11～15天，氣流量加至3L/min，CO2濃度保持在800～1000ppm，相對(duì)濕度在80-85％；④出苗前期，空氣流量可調(diào)至3～5L/min，20天后出室外繼續(xù)培養(yǎng)，20～30天后成苗；培養(yǎng)期間光照強(qiáng)度2000～2500Lx(兩只日光燈)，每天光照12小時(shí)，培養(yǎng)室溫度保持20±2℃。
全文摘要
本發(fā)明提供一種切花百合組培種苗一次成苗的方法，它采用取材及滅菌、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、光獨(dú)立生根培養(yǎng)的步驟，在相對(duì)應(yīng)的各培養(yǎng)基中進(jìn)行組培快繁增殖，用光獨(dú)立培養(yǎng)技術(shù)對(duì)分切的單株進(jìn)行生根培養(yǎng)。本發(fā)明能在培養(yǎng)過(guò)程中有效避免污染的發(fā)生，減少移苗次數(shù)，而且在工廠化組培種苗的生產(chǎn)中簡(jiǎn)化了組培技術(shù)的培養(yǎng)程序，一次成苗，成苗率高，同時(shí)由于生產(chǎn)的種苗在質(zhì)進(jìn)行組量及生產(chǎn)成本上具有明顯的優(yōu)勢(shì)，在花卉種苗的規(guī)模化生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1613297SQ200310110910
公開(kāi)日2005年5月11日 申請(qǐng)日期2003年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月7日
發(fā)明者屈云慧, 熊麗, 吳麗芳, 楊春梅, 張素芳, 蔣亞蓮 申請(qǐng)人:云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所