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一種復(fù)頻組合超聲強(qiáng)化雙酶提取肝素鈉技術(shù)的制作方法

文檔序號:598182閱讀:217來源:國知局

專利名稱::一種復(fù)頻組合超聲強(qiáng)化雙酶提取肝素鈉技術(shù)的制作方法一種復(fù)頻組合超聲強(qiáng)化雙酶提取肝素鈉技術(shù)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種肝素鈉技術(shù),尤其是一種復(fù)頻組合超聲強(qiáng)化雙酶提取肝素鈉技術(shù)
背景技術(shù)
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背景技術(shù)
:目前我國生產(chǎn)幾乎全部采用豬小腸為原料,在常規(guī)反應(yīng)器內(nèi)運(yùn)用鹽解法、堿解法和酶解法等幾種,其中鹽解法應(yīng)用最為普通,其生產(chǎn)工序是原料(腸黏膜)、常規(guī)反應(yīng)器內(nèi)鹽水提取、過濾、樹脂吸附、洗脫、乙醇沉淀、脫水、干燥、肝素鈉粗品。上述方法生產(chǎn)肝素鈉的工藝過程雖然比較簡單易于實(shí)現(xiàn),但存在的不足之處在于過程的精致,因?yàn)榇制犯嗡剽c經(jīng)反復(fù)的酸堿處理,不僅會(huì)使肝素鈉的收率減少,而且對肝素鈉的生物活性也影響很大,尤其效價(jià)很難達(dá)到90USPu/mg以上,并且時(shí)間較長。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是在于提供一種雙酶法提取肝素鈉的制備方法,利用雙酶組進(jìn)行酶促提取肝素納,通過選擇酶的種類、酶組合的比例、超聲場的強(qiáng)度、控制好時(shí)間以及其他幾道工序制成肝素鈉。該方法采用以下步驟(a)、將刮制好的小腸粘膜抽入常規(guī)酶解罐,在加溫前先加入重量比為2.3%-2.8%的精鹽,調(diào)PH值到9.0-9.2;(b)、將步驟(a)中的溶液加溫到4(TC-45'C時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10:0.5到10:5之間,雙酶在步驟(a)中溶液的重量比為0.3%-0.4%,繼續(xù)加溫到50°C-55°C,保溫酶解2h-5h,然后繼續(xù)加溫到80°C-85°C,保溫10-20分鐘后過濾;(C)、對步驟(b)中的過濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟后獲得肝素鈉產(chǎn)品。所述的步驟(a)中,還可將將刮制好的小腸粘膜抽入復(fù)頻超聲反應(yīng)罐,復(fù)頻超聲條件為20+40kHZ,選擇超聲強(qiáng)度在0.1W/m2到0.9W/m2。所述的步驟(b)中,所選擇的胰蛋白酶和脂肪酶的優(yōu)選比例為10:2。所述的步驟(b)中,所選擇保溫酶解的優(yōu)選時(shí)間在2h。復(fù)頻超聲反應(yīng)罐所選擇的超聲強(qiáng)度優(yōu)選為0.3W/m2到0.7W/m2。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比,具有如下優(yōu)點(diǎn)-1、整個(gè)工序的時(shí)間減少了大概33%;2、產(chǎn)品的收率提高了29.6%;3、效價(jià)穩(wěn)定在120以上(國內(nèi)先進(jìn)技術(shù)產(chǎn)品效價(jià)90-110)。具體實(shí)施例方式制小腸粘膜(IO副小腸),每根小腸與水混合后約4-6公斤,將刮制好的小腸抽入常規(guī)酶解罐,在加溫前先加入2.3-2.8%(體量)的精鹽,調(diào)PH值9.0-9.2;在42。C時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例為10:2),占總?cè)芤褐亓勘葹?.4%;繼續(xù)加溫至52t:,保溫3小時(shí)后進(jìn)行酶解,然后繼續(xù)加溫到80°C-85°C,保溫15分鐘后過濾,對上述步驟中的過濾溶液進(jìn)行吸附吸附水過濾,冷卻到58'C時(shí)加入樹脂吸附;洗滌收集樹脂,清水漂洗數(shù)次,再用清水加溫58-6(TC,調(diào)PH到7.5,到樹脂洗干凈為止,用1.2N鹽水溶液,調(diào)PH到8加入樹脂中,加溫到60°C,洗滌0.5h,去處洗滌溶液,濾干樹脂;洗脫用4M的NaCl溶液洗脫2次后,將兩次洗脫溶液合并,過濾;沉淀將一、二次洗脫液用85%的乙醇沉淀,體積比例是h1.5左右,兌好后的酒精混合液濃度大約是30-40度,沉淀后脫水干燥得肝素鈉產(chǎn)品。常規(guī)酶解罐內(nèi)酶解法雙酶的各比例F所得肝素鈉的比例圖<table>complextableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>常規(guī)酶解罐內(nèi)鹽解法(國內(nèi)通用方法)10副小腸可以制得5克肝素鈉。綜合成本考慮選擇胰蛋白酶和脂肪酶的比例10:2最優(yōu),該條件下相比鹽解法產(chǎn)率提高9.4%。實(shí)施例2刮制小腸粘膜(IO副小腸),每根小腸與水混合后約4-6公斤,將刮制好的小腸抽入復(fù)頻超聲反應(yīng)器(20+40kHZ),在加溫前先加入2.3-2.8%(體量)的精鹽,調(diào)PH值9.0-9.2;在42。C時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例為10:2),占總?cè)芤褐亓勘葹?.4%;繼續(xù)加溫至52。C,保溫3小時(shí)后進(jìn)行酶解,然后繼續(xù)加溫到8(TC-85。C,保溫15分鐘后過濾,對過濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟。對于不同超聲強(qiáng)度西的產(chǎn)品的得率比較表:<table>complextableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由此可以看出,僅需要2小時(shí)的酶解時(shí)間,相比常規(guī)反應(yīng)器鹽解法在時(shí)間上節(jié)省了大約33%。權(quán)利要求1、一種用雙酶法提取肝素鈉的制備方法,其特征在于,該方法包括以下步驟(a)、將刮制好的小腸粘膜抽入常規(guī)酶解罐,在加溫前先加入重量比為2.3%-2.8%的精鹽,調(diào)PH值到9.0-9.2;(b)、將步驟(a)中的溶液加溫到40℃-45℃時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10∶0.5到10∶5之間,雙酶在步驟(a)中溶液的重量比為0.3%-0.4%,繼續(xù)加溫到50℃-55℃,保溫酶解2h-5h,然后繼續(xù)加溫到80℃-85℃,保溫10-20分鐘后過濾;(c)、對步驟(b)中的過濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟后獲得肝素鈉產(chǎn)品。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于所述的步驟(a)中,還可將將刮制好的小腸粘膜抽入復(fù)頻超聲反應(yīng)罐,復(fù)頻超聲條件為20+40kHZ,選擇超聲強(qiáng)度在0.1W/m2到0.9W/m2。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于所述的步驟(b)中,所選擇的胰蛋白酶和脂肪酶的優(yōu)選比例為10:2。4、根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的制備方法,其特征在于所述的步驟(b)中,所選擇保溫酶解的優(yōu)選時(shí)間在2h。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于復(fù)頻超聲反應(yīng)罐所選擇的超聲強(qiáng)度優(yōu)選為0.3W/m2到0.7W/m2。全文摘要本發(fā)明涉及一種肝素鈉技術(shù),尤其是一種復(fù)頻組合超聲強(qiáng)化雙酶提取肝素鈉技術(shù);將(a)、將刮制好的小腸粘膜抽入常規(guī)酶解罐,在加溫前先加入重量比為2.3%-2.8%的精鹽,調(diào)pH值到9.0-9.2;(b)、將步驟(a)中的溶液加溫到40℃-45℃時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶,并且使其比例在10∶0.5到10∶5之間,雙酶在步驟(a)中溶液的重量比為0.3%-0.4%,繼續(xù)加溫到50℃-55℃,保溫酶解2h-5h,然后繼續(xù)加溫到80℃-85℃,保溫10-20分鐘后過濾;(c)、對步驟(b)中的過濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟后獲得肝素鈉產(chǎn)品。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比,具有如下優(yōu)點(diǎn)1.整個(gè)工序的時(shí)間減少了大概33%;2.產(chǎn)品的收率提高了29.6%;3.效價(jià)穩(wěn)定在120以上(國內(nèi)先進(jìn)技術(shù)產(chǎn)品效價(jià)90-110)。文檔編號C12P19/04GK101343645SQ20081010704公開日2009年1月14日申請日期2008年8月29日優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日發(fā)明者羅時(shí)通申請人:羅時(shí)通
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