專利名稱：：人參皂苷Rg1、Rh1和Ppt抗認(rèn)知、學(xué)習(xí)記憶功能障礙的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及人參皂苷Rg1的代謝產(chǎn)物Rh1和Ppt的改善學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)和提高神經(jīng)可塑性作用以及Rgl提高神經(jīng)可塑性作用。本發(fā)明涉及人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rh1和/或Ppt用于預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙如Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等疾病或癥狀的藥物或保健品的用途；還涉及含有所述人參皂苷Rg1和/或其代謝產(chǎn)物Rh1和/或Ppt用于制備預(yù)防、緩解和/或治療Alzheimer，sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等疾病或癥狀，特別是改善認(rèn)知功能和/或?qū)W習(xí)記憶功能的藥物和/或藥物組合物的用途；
背景技術(shù)：
：人參皂苷(ginsenoside)是人參的主要成分之一，目前從人參中分離提取到40多種人參皂苦單體，按其化學(xué)結(jié)構(gòu)分為三類20(s)-原人參二醇型(20s'—Protopanxadiol)，20(s)—原人參三酉孚型(20s—Protopanxatrio1)以及齊墩果酸型(oleanolicacid)。人參皂苷Rgl屬于20(s)-原人參三醇型皂苷，是人參的標(biāo)志性成份，也是人參最主要的有效成份，此成分可從人參和田七的根、莖、葉和西洋參提取，現(xiàn)有工藝方法已達(dá)到公斤級(jí)生產(chǎn)水平，但至今尚未能合成成功。其結(jié)構(gòu)及有關(guān)生物活性已廣泛報(bào)道于有關(guān)教科書和科學(xué)文獻(xiàn)中。人參皂苷Rgl在人胃腸道內(nèi)可代謝為人參皂苷Rhl和Ppt,結(jié)構(gòu)如圖l所示。人參皂苷Rg1具有廣泛的生物學(xué)活性，本發(fā)明人以往的工作證明人參皂苷Rgl是人參促智作用的主要有效成分。Rgl在老年鼠具有抗衰老作用，免疫增強(qiáng)作用，在幾種凋亡模型上有抗凋亡作用，在十幾種記憶障礙模型上證明有抗記憶缺失作用。神經(jīng)可塑性在調(diào)控腦功能及防治神經(jīng)系統(tǒng)疾病過(guò)程中起重要作用。真中突觸可塑性是最早發(fā)現(xiàn)也是最重要的神經(jīng)可塑性形式，如基礎(chǔ)突觸傳遞的增強(qiáng)、突觸長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)的誘導(dǎo)和維持與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)，被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)，被列為評(píng)價(jià)認(rèn)知功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。本發(fā)明人研究證明人參皂苷Rg1顯著改善學(xué)習(xí)記憶功能的機(jī)制便是提高基礎(chǔ)突觸傳遞、誘導(dǎo)LTP形成和增強(qiáng)HFS誘導(dǎo)的LTP的誘導(dǎo)相和維持相。本發(fā)明人已經(jīng)申請(qǐng)改善認(rèn)知功能的專利。本發(fā)明人已經(jīng)申請(qǐng)了人參皂香Rg1用于抗腦缺血和/或腦缺血引發(fā)的疾病或癥狀的用途以及用于改善認(rèn)知功能作用的專利，本次申請(qǐng)針對(duì)人參皂苷Rg1的代謝產(chǎn)物Rh1和Ppt的作用以及Rg1的提高神經(jīng)可塑性作用。但人參皂普Rg1的代謝產(chǎn)物Rh1和Ppt在調(diào)節(jié)突觸可塑性作用以及改善認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能方面的作用以及與原型Rgl作用強(qiáng)度的比較至今未見(jiàn)報(bào)道。另外，關(guān)于人參皂苷的研究，學(xué)術(shù)界一直存在一個(gè)有爭(zhēng)議的問(wèn)題，即人參皂苷是原型發(fā)揮作用還是其代謝產(chǎn)物發(fā)揮作用。一種看法認(rèn)為人參皂苷原型攜帶不同數(shù)目的糖分子(從一分子糖到五分子糖)，這些糖分子與生物學(xué)活性有重要的關(guān)聯(lián)；另一種看法認(rèn)為人參皂苷是一種前藥(pro-drug)，它在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成代謝產(chǎn)物后才發(fā)揮作用，究竟哪一種看法正確呢？本發(fā)明發(fā)現(xiàn)和提出的新結(jié)論。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)方面，涉及選自人參皂苷Rgl,特別是人參皂脊Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的活性成分提高哺乳動(dòng)物基礎(chǔ)突觸傳遞的用途。本發(fā)明中，所述提高基礎(chǔ)突觸傳遞作用是指增加哺乳動(dòng)物在基礎(chǔ)電生理刺激條件下(1/30Hz,強(qiáng)度采用引起最大PS幅值的l/2的電流強(qiáng)度作為測(cè)試刺激強(qiáng)度，并貫穿整個(gè)試驗(yàn)，刺激方波波龍為0.2ms。由計(jì)算機(jī)進(jìn)行自動(dòng)記錄分析，計(jì)算出PS幅值作為DG顆粒細(xì)胞群興奮性的指標(biāo))，PS幅值有所增加，但增加小于30%的用途。本發(fā)明的一個(gè)方面，涉及選自人參皂苷Rgl,特別是人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的活性成分誘導(dǎo)形成LTP的用途。本發(fā)明中，所述誘導(dǎo)形成LTP作用是指在基礎(chǔ)電生理刺激條件下(同上)，大鼠的PS幅值增加了30。/。或以上并維持至少30分鐘，即誘導(dǎo)形成LTP的用途。在本發(fā)明的一個(gè)方面，涉及選自人參皂苷Rgl、人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Ppt的活性成分用于增強(qiáng)并維持由高頻刺激(high-frequencystimulation,HFS)誘導(dǎo)的LTP維持相的用途。在本發(fā)明中，所述HFS很接近動(dòng)物海馬6節(jié)律自發(fā)活動(dòng)，能有效誘導(dǎo)海馬齒狀回LT的形成。增強(qiáng)并維持由HFS誘導(dǎo)的LTP的維持相是指在HFS誘導(dǎo)產(chǎn)生LTP并維持30min后，分別給予不同化合物(海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層LTP由10串100Hz的HFS誘導(dǎo)，每串刺激由5個(gè)波寬為0.2ms的方波刺激組成，刺激間隔為200ms),即可以更加增強(qiáng)HFS刺激產(chǎn)生的LTP維持相的PS幅值，并持續(xù)至少1.5小時(shí)。本發(fā)明人通過(guò)對(duì)人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Ppt進(jìn)一步研究出人意料的發(fā)現(xiàn)，上述代謝產(chǎn)物自身也分別具有增強(qiáng)基礎(chǔ)突觸傳遞作用，并且Ppt還能增強(qiáng)并鞏固由HFS誘導(dǎo)的LTP的維持相的作用。在本發(fā)明的一個(gè)方面，涉及一種用于提高基礎(chǔ)突觸傳遞的藥物組合物，其含有至少一種選自人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg1的代謝產(chǎn)物Rh1和人參皂苷Rg1的代謝產(chǎn)物Ppt的活性成分，以及任選的、藥學(xué)可接受的賦形劑。在本發(fā)明的一個(gè)方面，涉及一種用于鞏固HFS誘導(dǎo)的LTP維持相的藥物組合物，其含有至少一種選自人參皂苷Rgl和人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Ppt的活性成分，以及任選的、藥學(xué)可接受的賦形劑。在本發(fā)明中，所述哺乳動(dòng)物尤其優(yōu)選為人。本發(fā)明的一個(gè)方面，涉及人參皂苷Rg1和/或其代謝產(chǎn)物Rh1和/或Ppt在制備用于預(yù)防、纟差解和/或治療抗Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等疾病或癥狀以及抗能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙的藥物的用途。在本發(fā)明中，所述預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙如Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等的疾病或癥狀選自改善認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能障礙。在本發(fā)明中，所述預(yù)防是指在出現(xiàn)Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等疾病之前，抑制認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能障礙等病癥的發(fā)生。所述緩解是指在出現(xiàn)Alzheimer'sdisease(AD，阿爾茨海默氏病)等疾病發(fā)病過(guò)程中改善認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能障礙。所述治療是指出現(xiàn)Alzheimer'sdisease(AD，'阿爾茨海默氏病)等疾病之后或者發(fā)病過(guò)程中，實(shí)現(xiàn)臨床意義上的改善認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能障礙。更具體的，本發(fā)明所述預(yù)防、|￡解和/或治療如Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等的疾病或癥狀是預(yù)防、緩解和/或治療針對(duì)疾病導(dǎo)致的認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能障礙。本發(fā)明的另一方面，涉及一種用于預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙如Alzheimer'sdisease(AD，阿爾茨海默氏病)等的疾病或癥狀的藥物組合物，其含有預(yù)防或治療有效量的人參急苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt,以及任選的藥學(xué)可接受的載體和/或輔料。在本發(fā)明中，根據(jù)施用途徑，所述人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物可呈選自如下的劑型溶液、懸液、乳劑、丸劑、膠囊、粉末、控制釋放或裔續(xù)釋放制劑。本發(fā)明的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物可以用已知的方法配制，使用幾種途徑對(duì)受試者施用，包括但不限于腸胃外、經(jīng)口、局部、.皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)途徑。本發(fā)明中人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt可通過(guò)市售或已知方法制備得到。本發(fā)明的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物任選的可以通過(guò)任何常規(guī)方法用一種或多種藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑來(lái)配制。因此，人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt和它們的藥學(xué)可接受的鹽和溶劑化物可以特別配制為例如吸入或吹入(通過(guò)口或鼻)或經(jīng)口、含化、腸胃外或直腸給藥。人參皂普Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt可以采用帶電荷的、中性和/或其他藥學(xué)可接受的鹽的形式。藥學(xué)可接受的載體的例子包括但不限于Remington'sPharmaceuticalSciences(A.R.Gennaro,Ed.),20thedition,Williams&WilkinsPA，USA(2000)中所述的那些。人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物也可以采用溶液、懸液、乳劑、丸劑、膠囊、粉末、控制釋放或持續(xù)釋放制劑等形式。這些制劑將含有治療有效量的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt，優(yōu)選為純化形式，以及適量的載體，以提供對(duì)患者適當(dāng)給藥的形式。制劑應(yīng)當(dāng)適合給藥方式。在本發(fā)明中，所述純化形式的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt是指基本上純的人參皂苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt，尤其是純度大于80%,優(yōu)選的大于85%,特別優(yōu)選的大于90%,甚至更優(yōu)選的大于95%的人參惠普Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt。具體的，所述純化形式的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt純度范圍可以是例如90。/。-98%。腸胃外給藥人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物可以配制為通過(guò)注射例如通過(guò)推注來(lái)腸胃外給藥。用于注射的制劑可以以單位劑型存在于含有任選添加的防腐劑的安瓿或多劑量容器中。腸胃外制劑可以包含在由玻璃、塑料等制成的安瓿、一次性注射器或多劑量瓶中。制劑可以采用諸如在油性或水性載體中的懸液、溶液或乳劑的形式，并且可以含有輔劑，如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。例如，腸胃外制劑可以是在無(wú)毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌注射溶液或懸液(例如，1,3-丁二醇中的溶液)?？山邮艿妮d體和可以使用的溶劑包括水、林格液和等滲氯化鈉溶液。另外，常規(guī)使用無(wú)菌的不揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的可以使用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成的甘油一酯和甘油二酯。另外，在腸胃外制劑中也可以使用脂肪酸如油酸。此外，人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物也可以配制為粉末形式，在使用前用適合的載體如無(wú)熱原的無(wú)菌水重建。例如，適合腸胃外給藥的人參皂脊Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物可以包括無(wú)菌等滲鹽水溶液，其中含有每體積0.1%至9(W重量的人參皂苷Rgl和/或其代i射產(chǎn)物Rhl和/或Ppt。例如，容液可以含有約5°/。至約20°/。，更優(yōu)選地約5%至約17%,更優(yōu)選約8%至約14%，再更優(yōu)選約10y。的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt。溶液或粉末制劑也可含有增溶劑和局部麻醉劑如利多卡因，以便減輕注射部位的疼痛。其他腸胃外化合物給藥方法是本領(lǐng)域已知的，并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。經(jīng)口給藥對(duì)于經(jīng)口給藥，人參皂苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物可以釆用片劑或膠嚢的形式，其通過(guò)常規(guī)方法用藥學(xué)可接受的賦形劑如粘合劑、填料、潤(rùn)滑劑和崩解劑制備。A'.粘合劑粘合劑包括但不限于玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或其他淀粉、明膠、天然和合成樹膠如阿拉伯膠、藻酸鈉、藻酸、其他藻酸鹽、西黃蓍膠粉、瓜爾膠、纖維素及其衍生物(例如，乙基纖維素、乙酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉)、聚乙烯吡咯烷酮、曱基纖維素、預(yù)膠凝淀粉、羥丙基曱基纖維素(例如，Nos.2208，2906，2910)、微晶纖維素及其混合物。合適的微晶纖維素的形式包括，例如，以AVICEL-PH-lOl、AVICEL-PH-103和AVICEL-PH-105出售的材泮牛(可來(lái)自FMCCorporation,AmericanViscoseDivision,AvicelSales,MarcusHook,Pennsylvania,USA)。合適的粘合劑的一個(gè)例子是FMCCorporation以AVICELRC-581銷售的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的混合物。B.填料填料包括但不限于滑石、碳酸鈣(例如顆粒或粉末)、乳糖、微晶纖維素、粉狀纖維素、葡聚糖結(jié)合劑(dextrates)、高呤土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、預(yù)膠凝淀粉及其混合物。C.潤(rùn)滑劑潤(rùn)滑劑包括但不限于硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、礦物油、輕質(zhì)礦物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他乙二醇、硬脂酸、硫酸月桂酯鈉、滑石、氫化植物油(例如，花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油)、硬脂酸鋅、油酸乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂及其混合物。另外的潤(rùn)滑劑包括，例如，固態(tài)硅月交(AEROSIL200,Baltimore,Maryland,USA的W.R.GraceCo.生產(chǎn))、合成硅的凝結(jié)氣溶膠(DeaussaCo.ofPiano,Texas,USA銷售)、CAB-0-SIL(Boston,Massachusetts,USA的CabotCo.銷售的一種致熱二氧化硅產(chǎn)品)及其混合物。D.崩解劑崩解劑包括但不限于瓊脂-瓊脂、藻酸、碳酸鈣、微晶纖維素、交聯(lián)羧曱基纖維素鈉、交聚維酮、聚克立林鉀、淀粉雍乙酸鈉、馬鈴薯或木薯淀粉、其他淀粉、預(yù)膠凝淀粉、其他淀粉、粘土、其他藻膠、其他纖維素、樹膠及其混合物。片劑或膠嚢可以任選地用本領(lǐng)域公知的方法包衣。如果本發(fā)明的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物使用粘合劑和/或填料，則它們一般配制成約50%至約99%重量的化合物。一方面，約0.5%至約15%重量的崩解劑，特別是約1%至約5%重量的崩解劑，可以與人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt組合使用。任選地可以添加潤(rùn)滑劑，其量一般不到人參皂苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的約1%重量。制備周體口服劑型的技術(shù)和藥學(xué)可^妄受的添力口劑在Marshall,SolidOralDosageForms,ModernPharmaceutics(Banker和Rhodes,Eds.),7:359-427(1979)中描述。其他較不典型的制劑是本領(lǐng)域公知的。用于口服的液體制劑可以釆用溶液、糖漿或懸液的形式?；蛘撸后w制劑可以為千制品的形式，在使用前用水或合適的載體重建。這些液體制劑可以通過(guò)常規(guī)方法用藥學(xué)可接受的添加劑如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂)、乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠)、非水載體(例如，杏仁涵、油狀酯、乙醇或分餾植物油)、和/或防腐劑(例如，甲基或丙基對(duì)鞋基苯曱酸脂或山梨酸)來(lái)制備。這些制劑也可以含有適當(dāng)?shù)木彌_鹽、調(diào)味劑、著色劑、芳香劑和甜味劑。用于口服的制劑也可以配制為實(shí)現(xiàn)化合物的控制釋放?？诜苿﹥?yōu)選地含有10%至95%的化合物。另外，本發(fā)明的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物也可以用常規(guī)方法配制為用于含化給藥的片劑或錠劑。人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt藥物組合物的其他經(jīng)口給藥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？刂漆尫沤o藥為了延長(zhǎng)人參皂普Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的活性和減少給藥頻率，可以配制控制釋放(或持續(xù)釋放)制劑?？刂漆尫胖苿┮部梢杂脕?lái)影響起效時(shí)間或其他特征，如血液化合物水平，從而影響副作用的產(chǎn)生。控制釋放制劑可以設(shè)計(jì)為最初釋放產(chǎn)生所需療效的一定量的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt，逐漸且連續(xù)地釋放另外含量的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt,以便在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持療效水平。為了在體內(nèi)保持接近恒定的化合物水平，人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt可以以一定的速度從劑型中釋放出來(lái)，代替從體內(nèi)代謝和/或分泌出去的人參皂苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt。人參急苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的控制釋放可以由多種誘導(dǎo)因素來(lái)剌激，如，pH變化，溫度變化，酶，水，或其他生理?xiàng)l件或分子。控制釋放系統(tǒng)可以包括，例如，輸注泵，其可以用來(lái)以類似于向特定器官或肺瘤輸送胰島素或化療劑的方式施用化合物。使用這種系統(tǒng)，人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt—般與生物可降解的、生物相容的聚合植入體組合施用，其在選擇的部位在控制的時(shí)間內(nèi)釋放人參急苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt。聚合材料的例子包括聚酐、聚原酸酯、聚乙醇酸、聚乳酸、聚乙烯乙烯乙酸酯及其共聚物和組合。另外，控釋系統(tǒng)可以置于治療目標(biāo)附近，因此只需要全身劑量的一部分。本發(fā)明的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他控制釋放方法或給藥裝置來(lái)施用。包括，例如，輕丙基曱基纖維素、其他聚合基質(zhì)、凝膠、可透膜、滲透系統(tǒng)、多層包衣、微粒、脂質(zhì)體、微球等，或者任何上述的組合，以不同的比例提供所需的釋放譜。人參急苦Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的其他控制釋放給藥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，'并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。吸入給藥人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt也可以通過(guò)吸入直接向肺施用。對(duì)于吸入給藥，可以通過(guò)許多不同的裝置方便地將人參皂普Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt輸送到肺。例如，計(jì)量吸入器("MDI"),其使用的罐含有合適的低沸點(diǎn)拋射劑，例如，二氯二氟曱烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合適的氣體，可以用來(lái)直接向肺輸送化合物。MDI裝置可以從許多供應(yīng)者處獲得，例如3MCorporation、Aventis、BoehringerIngleheim、ForestLaboratories、Glaxo-Wellcome、ScheringPlough和Vectura。此外，也可以使用干粉吸入器(DPI)裝置向肺施用化合物。DPI裝置一般使用一種機(jī)構(gòu)，例如，爆發(fā)的氣體，在容器內(nèi)產(chǎn)生云狀干粉，然后可以被患者吸入。'DPI裝置也是本領(lǐng)域公知的，可以購(gòu)自許多供應(yīng)商，包括，例如，F(xiàn)isons、Glaxo-Wellcome、InhaleTherapeuticSystems、MLLaboratories、Qdose和Vectura。一種普及的變化形式是多劑量DPI("MDDPI")系統(tǒng)，它允許施用一個(gè)以上的治療劑量。MDDPI裝置可以從諸如AstraZeneca、GlaxoWellcome、IVAX、ScheringPlough、SkyePharma和Vectura這才羊的/>司獲4尋。例^口，用于吸入器和吹入器的明膠膠嚢和藥筒可以配制為含有人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt和適用于該系統(tǒng)的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物?？梢杂糜谙蚍问┯没衔锏牧硗庖环N類型的裝置是例如AradigmCorporation提供的液體噴霧裝置。液體噴霧系統(tǒng)使用極小的噴嘴來(lái)使液體化合物霧化，然后可以被直接吸入到肺中。例如，可以使用霧化器裝置向肺施用化合物。霧化器例如通過(guò)使用超聲能，由液體化合物制劑產(chǎn)生氣溶膠，形成易于吸入的細(xì)顆粒。霧化器的例子包括Sheffield/SystemicPulmonaryDeliveryLtd.、Aventis禾口BatellePulmonaryTherapeutics提供的裝置。在另外一個(gè)實(shí)施例中，可以使用電流體力學(xué)("EHD11)氣溶膠裝置向肺施用化合,。EHD氣溶膠裝置使用電能將液體化合物溶液或懸液霧化。當(dāng)用EHD氣溶膠裝置向肺施用該化合物時(shí)，化合物制劑的電化學(xué)性質(zhì)是將要優(yōu)化的重要參數(shù)。這種優(yōu)化由本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)進(jìn)行。人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的其他肺內(nèi)給藥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。適用于霧化器和液體噴霧裝置和EHD氣溶膠裝置的液體人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt制劑一般包含人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt和藥學(xué)可接受的載體。在一個(gè)代表性實(shí)施方案中，藥學(xué)可接受的載體是一種液體，如醇、水、聚乙二醇或全氟碳。任選地，可以加入另外一種物質(zhì)來(lái)改變化合物溶液或懸液的氣溶膠性質(zhì)。例如，這種物質(zhì)可以是液體，如醇、二醇、聚乙二醇或脂肪酸。配制適用于氣溶膠裝置的液體化合物溶液或懸液的其他方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。貯庫(kù)型給藥人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt也可以配制為貯庫(kù)型制劑。這樣的長(zhǎng)效制劑可以通過(guò)植入(例如皮下或肌肉內(nèi))或通過(guò)肌肉注射給藥。因此，化合物可以與合適的聚合或疏水性材料一起配制，如在可接受的油或離子交換樹脂中的乳劑，或者作為微溶性的衍生物如微溶性的鹽。人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的其他貯庫(kù)型給藥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。局部給藥對(duì)于局部給藥，人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt可以與載體組合，以便遞送有效劑量，根據(jù)所需活性，有效劑量為例如1.0(aM至1.OmM。在本發(fā)明的一個(gè)方面，局部給藥的藥物組合物可以應(yīng)用于皮膚。載體可以是，例如但不限于軟膏、乳膏、凝膠、糊狀物、泡沫、氣溶膠、栓劑、墊或膠凝棒的形式。局部制劑也可以在眼科可接受的賦形劑如緩沖鹽水、礦物油、植物油如玉米油或花生油、凡士林、Miglyol182、醇溶液或脂質(zhì)體或脂質(zhì)體樣產(chǎn)品中包含治療有效量的化合物。任何這些化合物也可以包含防腐劑、抗氧化劑、抗生素、免疫抑制劑和其他對(duì)該化合物沒(méi)有有害作用的生物學(xué)或藥學(xué)有效的藥劑。人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的其他局部給藥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。其他給藥系統(tǒng)各種其他給藥系統(tǒng)是本領(lǐng)域公知的，可以用來(lái)施用本發(fā)明的化合物。而且，這些和其他給藥系統(tǒng)可以聯(lián)合和/或改變，來(lái)優(yōu)化本發(fā)明的人參皂普Rgl和/或其代-浙產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的給藥。本發(fā)明的另一方面還涉及一種食品，其含有人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt。本發(fā)明的再一方面涉及一種預(yù)防、緩解和/或治療抗Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等疾病或癥狀以及抗能？1發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙的疾病或癥狀的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt或含有治療有效量的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的藥物組合物。在本發(fā)明中，所述治療有效量的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt可以為0.5-200mg/kg體重之間的任一量，優(yōu)選為1-150mg/kg體重，更優(yōu)選為2-100mg/kg體重，更優(yōu)選為3-50mg/kg體重，更優(yōu)選為4-35mg/kg體重，更優(yōu)選為5-20mg/kg體重之間的任一量。治療有效劑量的確定原則人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的毒性和療效可以通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中用于測(cè)定LD5。(50%群體致死劑量)和ED5。(50%群體有效治療劑量)的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法來(lái)確定。毒性和療效之間的劑量比是一個(gè)治療指數(shù)，可以表示為比值LD5。/ED5。從細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研究中獲得的數(shù)據(jù)可以在配制用于人類和其他哺乳動(dòng)物的劑量范圍中使用。人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的劑量?jī)?yōu)選地在具有極小毒性或沒(méi)有毒性的包括EDw的循環(huán)血漿或其他體液濃度的范圍內(nèi)。該劑量可能在該范圍內(nèi)變化，取決于所使用的劑型和給藥途徑。對(duì)于本發(fā)明的人參皂普Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt,治療有效劑量可以在開(kāi)始時(shí)根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)來(lái)估計(jì)。可以在動(dòng)物模型中設(shè)計(jì)劑量，以達(dá)到在細(xì)胞培養(yǎng)中測(cè)定的包括IC5。(達(dá)到半數(shù)最大癥狀抑制的測(cè)試化合物濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。可以利用這些信息更精確地確定在人類和其他哺乳動(dòng)物中有用的劑量。血漿中的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt水平例如可以通過(guò)高效液相層析來(lái)測(cè)定?？膳c藥學(xué)可接受的載體組合產(chǎn)生單劑型的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的量根據(jù)所治療的宿主和具體給藥模式而不同。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，每個(gè)劑型的個(gè)別劑量中所含的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt的單位含量不需要本身構(gòu)成治療有效量，因?yàn)榭梢酝ㄟ^(guò)施用多個(gè)個(gè)別劑量來(lái)達(dá)到需要的治療有效量。劑量的選擇取決于使用的劑型、所治療的疾病和根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的決定所要達(dá)到的具體目的。用本發(fā)明的人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt治療疾病或病癥的劑量方案根據(jù)多種因素來(lái)選擇，包括患者的類型、年齡、體重、性別、飲食和醫(yī)學(xué)狀況，給藥途徑，藥理學(xué)考慮因素，如活性、有效性、所使用的具體化合物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和毒理學(xué)分布，是否使用人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt給藥系統(tǒng)。因此，實(shí)際使用的劑量方案可能在受試者與受試者之間非常不同。圖1:人參皂普Rgl及其代謝產(chǎn)物RM和Ppt的結(jié)構(gòu)式。2:誘發(fā)電位的指標(biāo)測(cè)定a:刺激偽跡，b:EPSP的起始點(diǎn),c:b和d的中點(diǎn)，d:PS的起始點(diǎn)(第一個(gè)正相峰的端點(diǎn))，e:PS的峰端點(diǎn)(負(fù)相峰端點(diǎn))，f:第二個(gè)正相峰端點(diǎn)，g:經(jīng)過(guò)e的垂直線與切線df的交點(diǎn)，L,:PS的起始潛伏期，L2:PS的峰潛伏期。圖3.'小鼠水迷宮裝置圖示1、2、3、4為盲端1、2、3、4,迷宮的右下角有一組臺(tái)階為終點(diǎn)具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例具體顯示本發(fā)明的應(yīng)用。但本實(shí)施例不限定本發(fā)明的使用范圍。實(shí)施例1人參急香Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt提高基礎(chǔ)突觸傳遞及誘導(dǎo)形成LTP的作用目的觀察人參急苦Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt對(duì)基礎(chǔ)突觸傳遞及LTP誘導(dǎo)形成的作用。1.1.材料和方法l丄l.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雄性(體重250-300克)，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(合格證號(hào)SCXK(京)2005-0004),動(dòng)物飼養(yǎng)于明暗交替(12h:12h)清潔級(jí)動(dòng)物房中，自由進(jìn)食飲水。動(dòng)物在動(dòng)物房中適應(yīng)環(huán)境5天后開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1丄2.實(shí)驗(yàn)儀器SEN-7203三道電子刺激器(NihonKoMenCo.，日本)，VC-ll記憶示波器(同上)，SS-202J刺激隔離器(同上)，SR-6N立體定位儀(NarishigeCo.,曰本)。1.1.3.實(shí)驗(yàn)方法1.1.3.1.電極的埋置動(dòng)物以烏拉坦與水合氯醛(1:5體積比)麻醉并固定于立體定位儀上，以3%過(guò)氧化氫除去骨膜，參照Pellegrino大鼠腦立體定位圖譜確定刺激電極(兩枚間距0.5mm，外覆聚四氟乙烯絕緣層，尖端棵露0.2mm，直徑0.15mm的不銹鋼針構(gòu)成)、記錄電極(外覆絕緣層，尖端棵露0.2mm,直徑0.15mm的不銹鋼針構(gòu)成)以及側(cè)腦室注射部位的準(zhǔn)確位置。雙極刺激電極的位置為內(nèi)嗅區(qū)前穿質(zhì)通路(Perforantpath，PP)纖維間，其定位坐標(biāo)為AP-7.5mm,L4.2mm,H3.0mm，記錄電極埋藏在同側(cè)海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層，其坐標(biāo)為AP-3.8mm，L2.5mm,H3.5mm,側(cè)腦室給藥瘺管位于AP1.8mm,L0.8mm，H3.5mm。在上述定位點(diǎn)用骨鉆鉆成小孔，輕輕破碎腦膜，根據(jù)垂直坐標(biāo)放下記錄電極及瘺管。刺激電極則先放下2.5mm,然后再慢慢調(diào)整位置直到以一個(gè)固定強(qiáng)度的刺激誘發(fā)出最大群峰電位(Populationspike,PS)時(shí)將電極固定。1丄3.2.誘發(fā)電位的記錄及其幅值的計(jì)算方法采用細(xì)胞外記錄方法。測(cè)試刺激(波寬為0.2ms的方波刺激)由電子刺激器產(chǎn)生后，經(jīng)刺激隔離器和刺激電極輸向PP,誘發(fā)的動(dòng)作電位經(jīng)生物;故大器在記憶示波器上顯示，并同時(shí)輸入計(jì)算機(jī)進(jìn)行自動(dòng)記錄分析，以計(jì)算出的PS幅值作為DG顆粒細(xì)胞興奮性的指標(biāo)。測(cè)試刺激頻率為l/30Hz，刺激強(qiáng)度則采用引起最大PS所需刺激強(qiáng)度的l/2的電流強(qiáng)度作為測(cè)試刺激強(qiáng)度，并貫穿整個(gè)實(shí)驗(yàn)，不再改變。PS幅值的測(cè)量方法如圖2所示，取負(fù)向峰端點(diǎn)e至第l和第2個(gè)正向峰端點(diǎn)d和f連線的垂直距離(eg)。U.3.3.給藥方法與劑量本實(shí)驗(yàn)中為了直接且迅速地觀察化合物的藥理作用，我們通過(guò)植入側(cè)腦室的導(dǎo)管分別給予人參皂苦Rgl、Rhl和Ppt以及生理鹽水對(duì)照組。將連接微量注射器的細(xì)塑料管導(dǎo)入導(dǎo)管內(nèi)，穩(wěn)定一定時(shí)間再記錄30min的PS,代表給藥前的基礎(chǔ)突觸傳遞，然后于5min內(nèi)將10/al的藥物或生理鹽水溶劑緩慢注入側(cè)腦室。注射后，細(xì)塑料管留置于導(dǎo)管內(nèi)直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。注射后繼續(xù)記錄1■」、時(shí)以觀察藥物對(duì)于基礎(chǔ)突觸傳遞的影響以及誘導(dǎo)LTP形成的作用。藥物劑量是根據(jù)大鼠腦容積為2mL時(shí)，藥物在腦組織中的濃度計(jì)算出來(lái)的。這樣，叁給予IOuL的4x1(^mol/L的藥物時(shí)，其在腦組織中的終濃度則為2x10—7mol/L。U.3.4.數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)每個(gè)測(cè)試刺激都誘發(fā)一個(gè)PS，以連續(xù)5個(gè)PS幅值疊加后的平均值作為該時(shí)間點(diǎn)的PS幅值。以給藥前30min每隔5min記錄一個(gè)平均值，以記錄到的6個(gè)平均值為基礎(chǔ)突觸傳遞水平，之后每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的突觸傳遞水平以與基礎(chǔ)水平相比得出的相對(duì)幅值(％)表示。最后以時(shí)間為橫坐標(biāo)，PS相對(duì)幅值(。/0)為縱坐標(biāo)繪出PS幅值的動(dòng)態(tài)變化圖。所有數(shù)值均采用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)誤來(lái)表示(Mean士SEM)，分析方法采用方差分析(ANOVA)。1.2.結(jié)果人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物RM和/或Ppt對(duì)基礎(chǔ)突觸傳遞的影響及誘導(dǎo)形成LTP的作用由表1可見(jiàn)，麻醉大鼠腦室給藥前后的PS幅值變化，人參皂苦Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt(2xl(T7mol/L,/.c.v.)與對(duì)照組(N.S.)相比，都可以顯著增強(qiáng)基礎(chǔ)突觸傳遞，增強(qiáng)幅度均大于30%，并均持續(xù)至少30min,說(shuō)明三者均可以增強(qiáng)基礎(chǔ)突觸傳遞并且誘導(dǎo)產(chǎn)生LTP,并且代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt的作用均強(qiáng)于原型Rgl。n=6,Mean士SEM,*P<0.01w對(duì)照組。表1.人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt對(duì)勤出突觸傳遞的影響及誘導(dǎo)形成LTP的作_用(if6)_時(shí)間(min)、對(duì)照Rgl(2X10-7mol/L)(2X10-7mol/L)Ppt(2X10-7mol/L)-30101±18108±11102±2102±2'-20101±18101±3100±299士4-10100±1598±5103土4105±50102±15100±6102±6105±610105±19257±24*420±60*365+60*20100±16266±45*430±102*420±102*30102±17298±33*445±68*435±68*40104±18297±28*462±72*448±72*50100±12340±76*472±78*450+78*60103±20321±45*500±100*462±，1,3結(jié)論相同濃度的人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt均能夠提高基礎(chǔ)突觸傳遞并誘導(dǎo)形成LTP,即具有改善生理狀態(tài)下認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能的作用，又具有治療如Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和學(xué)習(xí)記憶功能障礙的疾病或癥狀的作用，且代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt的作用效強(qiáng)大于原型Rgl。實(shí)施例2人參皂苦Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt對(duì)高頻刺激誘導(dǎo)的LTP維持相的作用目的人參皂苦Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt對(duì)高頻刺激誘導(dǎo)的LTP維持相的鞏固作用2.1.材料和方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)儀器均同實(shí)施例1。實(shí)驗(yàn)方法電極的埋置、誘發(fā)電位的記錄及其幅值的計(jì)算方法及數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)均同實(shí)施例l。強(qiáng)直刺激參數(shù)海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層LTP由I0串100Hz的HFS所誘導(dǎo)，每串刺激由5個(gè)波寬0.21118,頻率為100Hz的方波組成，串刺激間隔為200ms,刺激強(qiáng)度與測(cè)試刺激相同。觀察藥物對(duì)于高頻刺激誘導(dǎo)的LTP的影響時(shí)，在插入細(xì)塑料管并穩(wěn)定30min后，給予高頻刺激，記錄30min后腦室注射分別給予兩個(gè)化合物以及生理鹽水。繼續(xù)記錄l.5小時(shí)觀察藥物對(duì)于高頻刺激誘導(dǎo)的LTP維持相的影響。2.2.結(jié)果人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt對(duì)高頻刺激誘導(dǎo)的LTP的影響由表2可見(jiàn),麻醉大鼠腦室給藥前后，高頻刺激誘導(dǎo)的LTP的PS幅值的變化，人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt(2x10-7mol/L,/.c.v.)與對(duì)照組(N.S,HFS)相比，都可以顯著增強(qiáng)高頻刺激誘導(dǎo)的LTP強(qiáng)度，并持續(xù)至少1.5小時(shí)，并且代謝產(chǎn)物Ppt的作用強(qiáng)于原型Rgl。n=6,Mean士SEM，#P<0.01raN.S.,*P<0.01w對(duì)照組(N.S,HFS)。表2.人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt對(duì)高頻刺激誘導(dǎo)的LTP維持相的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>-20101±16105±18102±697±14-10100±2098±2093±6106±210102±18100±25106±598±2110105±15200±36#198±36*210±35*20100±11190±28#202±33*205±40*30102±16180±42#185±62*200±41*40104士12170±17#250±80*463±90*50IOO士IO168±20#255±60*473±80*60100±12165±18#260±86*438±100*70105±6167±25#270±64*478±110*80106±8166士25#282±74*540±102*90102±10165±30#290±73*540±99*2.3結(jié)論相同濃度的人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt均能夠增強(qiáng)并鞏固高頻刺激誘導(dǎo)形成的LTP的維持相，具有改善認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能的作用，具有治療Alzheimer'sdisease(AD,阿爾茨海默氏病)等疾病或癥狀以及抗能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙的藥物疾病或癥狀的作用，且代謝產(chǎn)物Ppt的作用效強(qiáng)大于原型Rgl。從上述結(jié)果反映的電生理指標(biāo)可見(jiàn)，人參皂苷Rgl和/或其代謝產(chǎn)物Rhl和/或Ppt都可以顯著增強(qiáng)大鼠基礎(chǔ)突觸傳遞，誘導(dǎo)形成LTP,并且人參急苦Rgl及其代謝產(chǎn)物Ppt可以顯著增強(qiáng)HFS誘導(dǎo)的PS幅度，并鞏固其維持期作用。實(shí)施例3人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt對(duì)東莨菪堿引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用目的觀察人參皂苷Rgl及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt對(duì)東萊菪堿引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用3,1.材料和方法3丄1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM小鼠，雄性(體重18-22克)，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所(合格證號(hào)SCXK(京)2004-0001),動(dòng)物飼養(yǎng)于明暗交替(12h:12h)清潔級(jí)動(dòng)物房中，自由進(jìn)食飲水。動(dòng)物在動(dòng)物房中適應(yīng)環(huán)境3天后開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3丄2.實(shí)驗(yàn)儀器小鼠避暗實(shí)驗(yàn)記錄儀(型號(hào)PAM5，大正制藥林式會(huì)社，日本)。小鼠水迷宮裝置(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)。3.1.3.i式劑東莨菪堿購(gòu)自Sigma公司。人參皂苷Rgl、代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt均購(gòu)自吉林大學(xué)，純度均大于90%。3.1.4.實(shí)驗(yàn)方法3丄4丄給藥方案將KM小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、東t菪堿模型組、人參急苦Rgl5mg/kg組、10mg/kg組和20mg/kg組,每組16只小鼠，其中對(duì)照組、東莨菪石咸模型組每天早上固定時(shí)間灌胃給予蒸餾水，人參皂苦RglSmg/kg組、10mg/kg組和20mg/kg組分別按劑量灌胃給予人參皂香Rgl，共給藥8天。第3天東莨菪堿模型組、人參皂苷Rgl5mg/kg組、10mg/kg組和20mg/kg組分別在訓(xùn)練前20min給予東莨菪堿(lmg/kg)造成記憶障礙模型，然后進(jìn)行避暗實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練，24hr后(即給藥第4天)進(jìn)行正式測(cè)試，分別記錄各組各只小鼠潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)。第5天到第7天東莨菪堿模型組、人參皂苷Rgl5mg/kg組、10mg/kg組和^mg/kg組分別在訓(xùn)練前20min給予東萊菪堿(lmg/kg)造成記憶障礙模型，然后進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練，第8天進(jìn)行正式水迷宮測(cè)試，在水迷宮訓(xùn)練和測(cè)試的4天中(即給藥第5天到第8天)分別記錄各組各只小鼠潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)。將KM小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、東^菪堿模型組、人參皂香代謝產(chǎn)物Rhl5mg/kg組、10rag/kg組和Ppt5mg/kg組、10mg/kg組，每組16只小鼠，其中對(duì)照組、東萊菪堿模型組每天早上固定時(shí)間灌胃給予蒸餾水，Rhl5mg/kg組、10mg/kg組和PptSmg/kg組、10mg/kg組，分別按劑量灌胃給予Rhl和Ppt,共給藥3天。第3天東K菪堿沖莫型組、Rhl5mg/kg組、10mg/kg組和Ppt5mg/kg組、10mg/kg組分別在訓(xùn)練前20rain給予東莨菪堿(lmg/kg)造成記憶障礙模型，然后進(jìn)行避暗實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練，24hr后進(jìn)行正式測(cè)試，分別記錄各組各只小鼠潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)。3.1.4.2.小鼠避暗測(cè)試實(shí)驗(yàn)裝置為一條件反射箱，分為明暗兩部分，兩室中有一小孔洞使小鼠可自由通行，箱底有銅柵，其中暗室底部的銅柵通以36V電壓。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠放入明室并背向暗室，因小鼠有喜暗及鉆洞的習(xí)性，所以在實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練期間會(huì)多次鉆入暗室(此行為即為錯(cuò)誤反應(yīng))。當(dāng)小鼠一走入暗室四足接觸銅柵時(shí)就會(huì)受到電擊，它會(huì)馬上設(shè)法退出暗室。第一天訓(xùn)練時(shí)，記錄小鼠在2分鐘內(nèi)進(jìn)入暗室的次數(shù)及第一次進(jìn)入暗箱的時(shí)間(即為潛伏期)。24小時(shí)后再做實(shí)驗(yàn)，觀察5分鐘內(nèi)小鼠首次進(jìn)入暗箱的時(shí)間(即潛伏期)和小鼠進(jìn)入暗箱的次數(shù)(即錯(cuò)誤次數(shù))。3.1.4.3.小鼠水迷宮測(cè)試水迷宮由一黑色有枳」玻璃長(zhǎng)方體水槽(73cmx42cmx30cm)組成，其中有若干隔板組成迷宮，如圖3所示，其中1、2、3、4為盲端1、2、3、4,迷宮的一角有一組臺(tái)階為終點(diǎn)，迷宮中水深20cm，水溫(24士1)。C。在訓(xùn)練第一天用隔板將A點(diǎn)與B點(diǎn)的通道阻斷，小鼠首先被置于臺(tái)階上10s，使其了解此安全區(qū)域的存在，然后將小鼠放于起點(diǎn)A，讓其自由游泳，記錄其進(jìn)入盲端1的次數(shù)(即錯(cuò)誤次數(shù))以及首次爬上安全臺(tái)階的時(shí)間(即潛伏期)，如果在訓(xùn)練時(shí)間2min內(nèi)尚未找到臺(tái)階者，將會(huì)被引導(dǎo)到安全臺(tái)階處，其潛伏期記為2min。第一次訓(xùn)練后休息片刻按同樣方法訓(xùn)練第二次，每只小鼠共訓(xùn)練兩次。依次訓(xùn)練其它小鼠。在訓(xùn)練的第二天，將隔板置于B點(diǎn)，小鼠的游泳起點(diǎn)為B點(diǎn)，分別記錄2min內(nèi)小鼠進(jìn)入盲端1、2、3的錯(cuò)誤次數(shù)，首次爬上安全臺(tái)階的潛伏期，每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練2次。如果在2min內(nèi)找不到臺(tái)階者，將被引導(dǎo)到終點(diǎn),其潛伏期被記為2min。訓(xùn)練第三到第四天小鼠的游泳起點(diǎn)為C點(diǎn)，記錄2min內(nèi)小鼠進(jìn)入盲端1、2、3、4的錯(cuò)誤次數(shù)和找到安全臺(tái)階的潛伏期每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練二次。3丄4.4.數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)所有數(shù)值均釆用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示(Mean士SEM),分析方法采用T-test。3.2.結(jié)果3.2丄避暗實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rgl對(duì)東茛菪堿引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用表3.避暗實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rgl對(duì)東復(fù)菪堿引起的小鼠記憶障礙的改善作用。n=16,'Mean±SEM。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>由表3可見(jiàn)，人參皂苦Rgl三個(gè)劑量組與模型組相比，都可以顯著延長(zhǎng)進(jìn)入暗室的潛伏期，減少進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)，與陽(yáng)性藥多奈哌齊相比作用稍強(qiáng)，說(shuō)明在避暗實(shí)驗(yàn)中人參皂苷Rgl能改善由東茛菪堿引起的小鼠記憶障礙。3.2.2.水迷宮實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rgl對(duì)東^菪堿引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用表4.人參皂苷Rgl對(duì)東萊菪堿引起的記憶障礙的小鼠在水迷宮實(shí)驗(yàn)中潛伏期的影響。n=16,Mean士SEM。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注與對(duì)照組比較"P<0.01;與東茛菪堿組比較2)P<0.05,3)P<0.01表5.水迷宮實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rgl對(duì)東荒菪堿引起的記憶障礙小鼠錯(cuò)誤次數(shù)的影響。n=16,Mean±SEM。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>對(duì)照組1.7±1.14.1±1.53.5±2.02.1±2.1東鼠菪堿組lmg/kg1.2±0.816.0±6.4"13.7±4.96.8±2.5多奈哌齊5mg/kg1.5±1.111.5±5.211.3±4.33.4士1.6人參急脊Rgl組5mg/kg10mg/kg1.2±0.72.1±2.11.6±1.313.S±5.311.3±5.23'14.7±4,112.4±3.510.5±3.62)9.1±3.74.1±1.4.3±23.5±1.903'7"注與對(duì)照組比較oP<0,01;與東茛菪堿組比較2)P<0.05,3)P<0.01由表4、5可見(jiàn)，人參皂普Rgl三個(gè)劑量組與模型組相比，在水迷宮訓(xùn)練的第3天，人參皂苷Rgl20mg/kg組和多奈哌齊5mg/kg組都可以顯著縮短找到安全平臺(tái)的潛伏期，人參皂苷Rgl10mg/kg組減少進(jìn)入盲端的錯(cuò)誤次數(shù)；在水迷宮訓(xùn)練的第4天，人參皂苷Rgl三個(gè)劑量組和多奈哌齊5mgZkg組都可以顯著縮短找到安全平臺(tái)的潛伏期，人參皂苷Rgl10mg/kg組和20mg/kg組能減少進(jìn)入盲端的錯(cuò)誤次數(shù)，說(shuō)明在水逑宮實(shí)驗(yàn)中人參皂苷Rgl能改善由東t菪堿引起的小鼠記憶障礙。'3.2.3.避暗實(shí)驗(yàn)中，人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt對(duì)東萊菪堿引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用表6.避暗實(shí)驗(yàn)中，人參皂苦Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt對(duì)東萊菪堿引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用。n=16,Mean±SEM。組別劑量潛伏期錯(cuò)誤次數(shù)GroupDose(秒)汰)對(duì)照組229.0±118.53)0.6±0.93)東莨菪堿組lmg/kg68.0±82.92.1±0.91'多奈哌齊5mg/kg129.6±98.82)1.3±1.O:"Rhl組5mg/kg115.3±71.42)l.l土O.5alOmg/kg147.7±101.93>1.0±0.6MPpt組5mg/kg177.2±121.73>0.8±0.83)lOmg/kg178.6±117.I3'0.7±0.83)注與對(duì)照組比較"P<0.01;與東農(nóng)菪堿組比較"P復(fù)05,3'P<0.01由表6結(jié)果可見(jiàn)，人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt與東萊菪堿模型組相比，可以顯著延長(zhǎng)進(jìn)入暗室的潛伏期，減少進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)，RhllOmg/kg組和Ppt5、10mg/kg組與陽(yáng)性藥多奈哌齊相比作用稍強(qiáng)，說(shuō)明在避暗實(shí)驗(yàn)中人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt能改善由東莨菪堿引起的小鼠記憶障礙，并且代謝產(chǎn)物Ppt的作用強(qiáng)于Rhl。3.3結(jié)論人參皂苷Rgl在小鼠避暗實(shí)驗(yàn)及水迷宮實(shí)驗(yàn)中及其代謝產(chǎn)物Rhl和Ppt在小鼠避暗實(shí)驗(yàn)中均能改善由東K菪堿引起的小鼠記憶障礙，代謝終產(chǎn)物Ppt的作用要強(qiáng)于Rhl。本研究結(jié)果的科學(xué)意義1.LTP的形成和維持說(shuō)明突觸可塑性的提高，為Rgl及其代謝產(chǎn)物RM及Ppt改善認(rèn)知功能提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論依據(jù)，也是對(duì)中藥人參益智作用做出了科學(xué)解釋。2.人參皂苷Rgl是原型藥，Rhl及Ppt是人體內(nèi)Rgl的代謝產(chǎn)物，研究證明代謝產(chǎn)物有與原型藥相似的作用，并且強(qiáng)于原型藥Rgl,表明Rgl進(jìn)入體內(nèi)后可完全被利用，解釋了為什么Rgl劑量小(5-10mg/kg)、胃腸道吸收少卻有高效作用，因?yàn)樵退幒痛x產(chǎn)物均有藥理作用，不管哪種給藥途徑都能產(chǎn)生藥理作用，而且從體內(nèi)消除的時(shí)間也得到了延長(zhǎng)。3.對(duì)人參皂苷是原型藥發(fā)揮作用還是代謝產(chǎn)物發(fā)揮作用的爭(zhēng)論，我們有了新的結(jié)論，即原型藥及代謝產(chǎn)物都有生物學(xué)活性。最有力的證據(jù)是腦內(nèi)給藥可誘導(dǎo)LTP形成，但腦脊液不能將Rgl轉(zhuǎn)變?yōu)镻pt,僅有微量的Rhl發(fā)現(xiàn)，而顯然Rhl的這一濃度對(duì)LTP毫無(wú)影響。并且代謝產(chǎn)物人參皂苦RM和Ppt在動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中均具有更優(yōu)于Rgl的改善學(xué)習(xí)記憶功能的作用。權(quán)利要求1.人參皂苷Rg1在制備用于預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙疾病或癥狀的藥物或保健品中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述的能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙疾病或癥狀是阿爾茨海默氏病。3.人參皂普Rgl制備改善認(rèn)知功能和/或?qū)W習(xí)記憶功能的藥物或保健品中的應(yīng)用。4.人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl在制備用于預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙疾病或癥狀的藥物或保健品中的應(yīng)用。5.'根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于，所述的能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙疾病或癥狀是阿爾茨海默氏病。6.人參皂苷Rg1的代謝產(chǎn)物Rh1在制備改善認(rèn)知功能和/或?qū)W習(xí)記憶功能的藥物或保健品中的應(yīng)用。7.人參皂苷Rgl的Ppt在制備用于預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙疾病或癥狀的藥物或保健品中的應(yīng)用。8.,根據(jù)權(quán)利要求7的應(yīng)用，其特征在于，所述的能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙疾病或癥狀是阿爾茨海默氏病。9.人參皂苷Rg1的Ppt在制備改善認(rèn)知功能和/或?qū)W習(xí)記憶功能的藥物或保健品中的應(yīng)用。10.—種食品，其含有人參急苦Rgl的代謝產(chǎn)物Rhl。11.一種食品，其含有人參皂苷Rgl的代謝產(chǎn)物Ppt。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了人參皂苷Rg1、Rh1和Ppt抗認(rèn)知、學(xué)習(xí)記憶功能障礙的用途，具體涉及人參皂苷Rg1和/或其代謝產(chǎn)物Rh1和/或Ppt在制備預(yù)防、緩解和/或治療能引發(fā)認(rèn)知功能障礙和/或?qū)W習(xí)記憶功能障礙的疾病或癥狀的藥物和保健品中的應(yīng)用，尤其是阿爾茨海默氏病(Alzheimer’sdisease，AD)。已經(jīng)在制備改善認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶功能的藥物和保健品中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A23L1/30GK101548981SQ20081010306公開(kāi)日2009年10月7日申請(qǐng)日期2008年3月31日優(yōu)先權(quán)日2008年3月31日發(fā)明者張均田,楚世峰,王玉珠,霽陳申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所