專利名稱：包含含有三環(huán)二萜及其衍生物的混合物的鼠尾草提取物的膳食和藥物組合物及其用途的制作方法
專利說明包含含有三環(huán)二萜及其衍生物的混合物的鼠尾草提取物的膳食和藥物組合物及其用途 發(fā)明簡述 本發(fā)明涉及鼠尾草提取物用作為藥物，特別是用于治療與受損的(例如降低的)神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的用途，以及含有這類鼠尾草提取物的膳食和藥物組合物及其用途，所述鼠尾草提取物含有三環(huán)二萜及其衍生物的混合物。

背景技術(shù)：
眾所周知，受損的神經(jīng)傳遞例如低神經(jīng)遞質(zhì)水平與精神疾病相關(guān)，如抑郁和廣泛性焦慮障礙(GAD)和提高的壓力易感性。
能提高腦中的神經(jīng)遞質(zhì)水平并從而提高它們的傳遞的化合物可顯示抗抑郁特性以及對多種其它精神病癥的有益作用(Neurotransmitters，Drugs andBrain Function R.A.Webster(ed)，John Wiley & Sons，New York，2001，p.187-211，289-452，477-498)。主要的神經(jīng)遞質(zhì)是血清素、多巴胺、去甲腎上腺素(noradrenaline)(＝去甲腎上腺素(norepinephrine))、乙酰膽堿、谷氨酸、γ-氨基-丁酸以及神經(jīng)肽。與情緒相關(guān)病癥尤其相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)包括血清素、去甲腎上腺素和多巴胺。這樣達(dá)成增強(qiáng)或延長的神經(jīng)傳遞通過抑制進(jìn)入突觸前神經(jīng)末端的再攝取，來提高突觸間隙中的神經(jīng)遞質(zhì)濃度，或通過抑制降解酶(如單胺氧化酶(MAO)-A和-B)來預(yù)防神經(jīng)遞質(zhì)代謝。
抗抑郁藥和情緒相關(guān)病癥 三環(huán)抗抑郁化合物(TCA)如丙米嗪(imipramine)、阿米替林(amitriptyline)和氯米帕明(clomipramine)抑制血清素和去甲腎上腺素的再攝取。它們被廣泛認(rèn)為是屬于可獲得的最有效的抗抑郁藥，但是它們具有大量缺點，因為它們還與毒蕈堿乙酰膽堿-、組胺-和血清素-受體相互作用。這些活性導(dǎo)致的副作用除包括體位性低血壓以外還包括口干燥、視力模糊、便秘和尿潴留。最重要的是，過量服用TCA是不安全的，通常顯示急性心臟毒性。
另一類抗抑郁藥是阻斷血清素轉(zhuǎn)運蛋白(SERT)的所謂的SSRI(選擇性血清素再攝取抑制劑)，包括氟西汀(fluoxetine)、帕羅西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)、西酞普蘭(citalopram)和氟伏沙明(fluvoxamine)，它們能封閉血清素轉(zhuǎn)運蛋白(SERT)——高親和性的氯化鈉依賴性神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白，其通過攝取5-羥色胺來終止血清素激活的神經(jīng)傳遞。。它們已被證明在治療抑郁和焦慮癥時與TCA同樣有效，但是通常能被更好地耐受。這些藥物通常以低劑量開始，并提高至其達(dá)到治療水平。常見的副作用是惡心。其它可能的副作用包括降低的食欲、口干燥、出汗、感染、便秘、震顫、呵欠、嗜睡和性功能障礙。
另外，通過抑制MAOs -A和-B更廣泛地預(yù)防神經(jīng)遞質(zhì)代謝的化合物顯示抗抑郁的作用。MAOs催化含胺基的神經(jīng)遞質(zhì)如血清素、去甲腎上腺素和多巴胺的氧化。
另外，神經(jīng)傳遞的調(diào)節(jié)劑(modulator)對精神和認(rèn)知功能顯示多效作用。
存在對治療或預(yù)防精神疾病和/或病癥的化合物的需要，所述化合物不顯示已知抗抑郁藥的不利副作用。許多患者對下述備選療法感興趣，所述備選療法能夠最小化高劑量藥物相關(guān)的副作用，并產(chǎn)生累加的臨床益處。嚴(yán)重的抑郁是一種長期并復(fù)發(fā)的疾病，其通常很少被診斷出來。另外，許多患者患有溫和或中度嚴(yán)重的抑郁。因此，對下述化合物以及藥物和/或膳食組合物開發(fā)的興趣越來越大，所述化合物或組合物可被用于在風(fēng)險人群中治療精神疾病/病癥或預(yù)防精神疾病/病癥(如抑郁和抑郁癥)的發(fā)生，以穩(wěn)定情緒并達(dá)到感情平衡。
患者通常遭受由于GAD的復(fù)合病變(comorbidity)到抑郁或孤獨，所述GAD是初級護(hù)理(～10％患者)中一種高度盛行的焦慮病癥和慢性病(Wittchen，et al 2005 Eur.Neuropsycho.15357-376)?；颊邔λ麄兊某跫壸o(hù)理醫(yī)師表達(dá)多種生理癥狀。GAD的特征是慢性緊張和焦慮的擔(dān)憂和緊張(＞6個月)，這是無能為力并且不能控制的，并且伴隨著特征性的警覺過度綜合征(包括坐立不安、肌肉緊張和睡眠問題)。如果不治療的話，GAD進(jìn)行慢性的、波動的過程，并趨向于隨著年齡變得越來越嚴(yán)重。GAD患者遭受亞綜合征(subsyndromal)的抑郁，并作用于所有焦慮癥和抑郁病癥的最高的總體直接和間接健康經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管GAD發(fā)病率高，但是很少有患者被診斷、開出藥物處方或接受精神病治療；需要幫助患者識別和監(jiān)測的簡單診斷工具。即使有特異的診斷，醫(yī)師仍需要有效的GAD-癥狀療法。SSRI如帕羅西汀對GAD治療是有效的(Stocchi et al.2003，J.Clin.Psych.，63(3)250-258)。另外，全身性評估和有安慰劑作對照的RCT(隨機(jī)化的臨床試驗)表明一些SSRI(依他普侖(escitalopram)、帕羅西汀和舍曲林)、SNRI(選擇性去甲腎上腺素再攝取抑制劑)文拉法辛(venlafaxine)、一些苯并二氮雜卓類(阿普唑侖(alprazolam)和地西泮(diazepam))、TCA、丙米嗪和5-HT1A部分激動劑、丁螺環(huán)酮在急性治療中均是有效的。一般而言，治療的影響通常是中等的，當(dāng)治療周期停止時癥狀復(fù)發(fā)。因此，使用具有比SSRI更少的副作用并可長時間應(yīng)用的化合物進(jìn)行連續(xù)長期治療或預(yù)防可能比藥物治療更有利。
情緒病癥和職業(yè)壓力(occupational stress)可導(dǎo)致睡眠障礙、失眠、低睡眠質(zhì)量和晝夜節(jié)律(所謂的生物節(jié)律)的整體性失調(diào)；這些病癥的性質(zhì)通常是慢性和持久的。另外，由遠(yuǎn)距離航班(飛行時差(jet-lag))和輪班工作導(dǎo)致的晝夜節(jié)律失調(diào)可引起相似的癥狀和苦惱(distress)。因此，可能最期望的是用膳食補(bǔ)劑治療，以維持正常的晝夜節(jié)律(人或動物所習(xí)慣的晝夜節(jié)律)和/或減輕和預(yù)防與紊亂的晝夜節(jié)律相關(guān)的癥狀，如認(rèn)知功能和記憶損傷，和精神和生理疲勞。
發(fā)明詳述 鼠尾草提取物及其優(yōu)選的組分 已發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明，包含下式I到III的三環(huán)二萜(衍生物)的鼠尾草提取物可用于用于治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的藥物中，所述三環(huán)二萜(衍生物)即鼠尾草酚(式I的化合物)、鼠尾草酸(式II的化合物)和鼠尾草酸12-甲基醚(式III的化合物)。

也可任選地存在迷迭香酚(式IV的化合物)和/或20-脫氧鼠尾草酚(式V的化合物)。

特別優(yōu)選的是(除了鼠尾草酚、鼠尾草酸和鼠尾草酸12-甲基醚以外)額外地含有迷迭香酚的鼠尾草提取物。
鼠尾草提取物中這些三環(huán)二萜的量可在下述范圍內(nèi)變化以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)，對鼠尾草酸而言在從0.1到15重量-％的范圍內(nèi)(優(yōu)選地從1到12重量-％，更優(yōu)選地從9到11重量-％)，對鼠尾草酚而言在從0.01到10重量-％的范圍內(nèi)(優(yōu)選地從2到8重量-％，更優(yōu)選地從2到5重量-％)，和對鼠尾草酸12-甲基醚而言在從0.1到7重量-％的范圍內(nèi)(優(yōu)選地從0.2到6重量-％，更優(yōu)選地從3到5重量-％)，其中鼠尾草酸優(yōu)選地是主要組分。
如果存在迷迭香酚，則其含量可在從0.1到1.0重量-％的范圍內(nèi)變化，優(yōu)選地從0.1到0.7重量-％，更優(yōu)選地從0.1到0.5重量-％。
如果存在20-脫氧-鼠尾草酚，則其含量可低于1.0重量-％，優(yōu)選地，其可在從0.01到1.0重量-％的范圍內(nèi)變化，更優(yōu)選地從0.05到0.8重量-％，最優(yōu)選地從0.07到0.5重量-％。
術(shù)語“鼠尾草提取物”表示任何下述鼠尾草提取物，其含有三環(huán)二萜(衍生物)I、II和III，優(yōu)選地含有三環(huán)二萜(衍生物)I、II、III和IV，更優(yōu)選地含有三環(huán)二萜(衍生物)I、II、III、IV和V。合適的鼠尾草物種是Salvia officinalis、Salvia miltiorrhiza、Salvia lanigera、Salviacanariensis、Salvia fruticosa、Salvia mellifera、Salvia tomentosa、Salviadeserta、Salvia przewalskii和Salvia sclarea。優(yōu)選的是Salvia officinalis。
適用于本發(fā)明用途的鼠尾草提取物可商業(yè)得自例如FLAVEXNaturextrakte GmbH，Rehlingen，德國。實施例(見下文)中使用以下兩種提取物 (1)″Salbei Extrakt，Typ Nr.063.001″，以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)含0.06重量-％的鼠尾草酚，0.14重量-％的鼠尾草酸和0.36重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚(用純物質(zhì)作為參照，通過HPLC-UV在210nm處測量)。
(2)″Salbei Antioxidans Extrakt，Typ Nr.063.007″，以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)含3.50重量-％的鼠尾草酚，10.70重量-％的鼠尾草酸，4.30重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚，0.3重量-％的20-脫氧鼠尾草酚和0.3重量-％的迷迭香酚(用純物質(zhì)作為參照，通過HPLC-UV在210nm處測量)。
適合本發(fā)明目的的另一鼠尾草提取物含有以鼠尾草提取物總重為基礎(chǔ)7.44重量-％的鼠尾草酚，1.56重量-％的鼠尾草酸，0.23重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚，低于0.1重量-％的20-脫氧鼠尾草酚和0.41重量-％迷迭香酚(使用純物質(zhì)作為參考，通過HPLC-UV在210nm處測量)。
適用于本發(fā)明用途的鼠尾草提取物可根據(jù)以下兩種方案之一制造 方案1 將干Salvia officinalis葉(原料)以機(jī)械方式變成小片，然后置于壓強(qiáng)穩(wěn)定的提取管中。然后在從25℃到75℃范圍內(nèi)的溫度(優(yōu)選地在約50℃的溫度)和高壓(優(yōu)選地280bar)下，在存在小量乙醇時使超臨界的CO2通過提取管，從而使得親脂化合物溶解。在分離器中，在從15℃到45℃范圍內(nèi)的溫度下(優(yōu)選地在30℃的溫度下)，通過減壓至40到80bar范圍內(nèi)的壓強(qiáng)(優(yōu)選地通過減壓至60bar)分離溶解的化合物(提取物)。CO2可被再循環(huán)回該過程中?？蓮?4到20kg干Salvia officinalis葉中獲得含有以下的約1kg鼠尾草提取物 鼠尾草酚(優(yōu)選地含量以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)從2到5重量-％)， 鼠尾草酸(優(yōu)選地含量以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)從7到15重量-％)， 鼠尾草酸12-甲基醚(優(yōu)選地含量以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)從2到7重量-％)， 迷迭香酚(優(yōu)選地含量以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)從0.1到1重量-％)， 20-脫氧鼠尾草酚(優(yōu)選地含量以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ)從0.1到1重量-％)。
方案2 通過甲醇提取700g干Salvia officinalis葉，然后蒸發(fā)至干燥。隨后進(jìn)行溶劑-溶劑分離，所述分離使用己烷∶H2O，隨后使用甲基叔丁基醚(MTBE)∶H2O。將MTBE級分蒸發(fā)至干燥?？色@得40g該提取物，其產(chǎn)生富集量的松香烷和三萜(鼠尾草酚，含量優(yōu)選地含量從5到10重量-％；鼠尾草酸，含量優(yōu)選地從1到3重量-％；鼠尾草酸12-甲基醚，含量優(yōu)選地從0.05到0.5重量-％；迷迭香酚，含量優(yōu)選地從0.1到1重量-％；和20-脫氧鼠尾草酚，含量優(yōu)選地低于0.1重量-％；所有含量以鼠尾草提取物的總重為基礎(chǔ))。如果需要的話，可隨后進(jìn)行MPLC色譜從提取物中去除齊墩果酸、樺木酸(betulinic acid)或熊果酸(產(chǎn)量25g)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員已知產(chǎn)生下述鼠尾草提取物的其它提取方法，所述鼠尾草提取物富含鼠尾草酸、鼠尾草酚和鼠尾草酸12-甲基醚，并優(yōu)選地還富含迷迭香酚和/或20-脫氧鼠尾草酚。
“鼠尾草酚”表示外消旋混合物以及純(4aR，9S，10aS)-鼠尾草酚或純(4aS，9R，10aR)-鼠尾草酚或它們的任何混合物或非對映異構(gòu)體。優(yōu)選(4aR，9S，10aS)-鼠尾草酚。
“鼠尾草酸”表示外消旋混合物以及純(4aR，10aS)-鼠尾草酸或純(4aS，10aR)-鼠尾草酸或它們的任何混合物或非對映異構(gòu)體。優(yōu)選(4aR，10aS)-鼠尾草酸。
“鼠尾草酸12-甲基醚”表示外消旋混合物以及純(4aR，10aS)-鼠尾草酸12-甲基醚或純(4aS，10aR)-鼠尾草酸12-甲基醚或它們的任何混合物或非對映異構(gòu)體。優(yōu)選(4aR，10aS)-鼠尾草酸12-甲基醚。
“迷迭香酚”表示外消旋混合物以及純(4aR，9S，10aS)-迷迭香酚或純(4aS，9R，10aR)-迷迭香酚或它們的任何混合物或非對映異構(gòu)體。優(yōu)選(4aR，9S，10aS)迷迭香酚。
“20-脫氧-鼠尾草酚”表示外消旋混合物以及純(4aR，9S，10aS)-20-脫氧-鼠尾草酚或純(4aS，9R，10aR)-20-脫氧-鼠尾草酚或它們的任何混合物或非對映異構(gòu)體。(4aR，9S，1OaS)-20-脫氧-鼠尾草酚是優(yōu)選的。
鼠尾草提取物及其組分的用途 因此，本發(fā)明一方面涉及含有這些三環(huán)二萜(衍生物)I、II和III的鼠尾草提取物，優(yōu)選地涉及含有這類三環(huán)二萜(衍生物)I、II、III和IV的混合物的鼠尾草提取物，更優(yōu)選地涉及含有這類三環(huán)二萜(衍生物)I到V的混合物的鼠尾草提取物，所述提取物用作治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的藥物。
另一方面，本發(fā)明涉及含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物用于制造用于治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的組合物的用途，尤其是用于制造抗抑郁藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑、強(qiáng)迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑的用途。
還在另一方面，本發(fā)明涉及包含含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的鼠尾草提取物的膳食組合物，以及包含含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的鼠尾草提取物和常規(guī)藥物運載體的藥物組合物。
另外，本發(fā)明涉及在動物(包括人)中治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括對有需要的動物(包括人)施用有效劑量的下述鼠尾草提取物，所述鼠尾草提取物含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物。
在本發(fā)明的上下文中，動物包括人，并包括哺乳動物、水產(chǎn)養(yǎng)殖魚和鳥。優(yōu)選的“動物”是人、寵物和伴侶動物和農(nóng)業(yè)動物。寵物和伴侶動物的例子是犬、貓、鳥、水族箱魚(aquarium fish)、荷蘭豬、(jack)兔、野兔和雪貂。農(nóng)業(yè)動物的例子是魚、豬、馬、反芻類(牛、綿羊和山羊)和家禽。
在本發(fā)明的上下文中，“治療”也包括共同治療以及預(yù)防?！邦A(yù)防”可表示第一次發(fā)生(一級預(yù)防)或復(fù)發(fā)(二級預(yù)防)。
術(shù)語“降低的神經(jīng)傳遞”在本申請中根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的含義被使用，并涉及神經(jīng)傳遞的失調(diào)，所述失調(diào)可在神經(jīng)遞質(zhì)生物合成、加工、儲存、釋放、再攝取和受體結(jié)合的水平上發(fā)生。降低的神經(jīng)傳遞在動物(包括人)中可自身表現(xiàn)為行為、感情、情緒和思考過程紊亂，例如表現(xiàn)為多種類型的抑郁之一。
因此，本發(fā)明還涉及在動物(包括人)中預(yù)防與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括對有需要的動物(包括人)施用有效量的具有上述定義和偏好的鼠尾草提取物，所述鼠尾草提取物含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物。在這一點上，有效量的鼠尾草提取物可特別用于維持精神正常，用于維持平衡的認(rèn)知功能，用于幫助降低情緒波動的風(fēng)險，用于幫助保持積極的情緒和用于支持認(rèn)知健康，和用于幫助維持良好的睡眠質(zhì)量。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“病癥”還包括疾病。
用于治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的藥物/組合物包括抗抑郁藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑和強(qiáng)迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑。它們均改善、增強(qiáng)和支持神經(jīng)傳遞，特別是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，并因而減輕精神功能障礙。
抗抑郁藥是用于治療精神-、行為-和感情/情感-、神經(jīng)-、神經(jīng)變性-、進(jìn)食-和壓力-相關(guān)病癥的藥物/組合物，所述病癥如單相抑郁、雙相抑郁、急性抑郁、慢性抑郁、亞慢性抑郁、抑郁癥、產(chǎn)后抑郁、月經(jīng)前病理性心境惡劣(dysphoria)/綜合征(PMS)、更年期抑郁綜合征、攻擊、注意力缺陷病癥、社交焦慮癥、季節(jié)性情感障礙和焦慮(病癥)如GAD、纖維肌痛綜合征、創(chuàng)傷后應(yīng)激病癥、驚恐性障礙(panic disorders)和強(qiáng)制性障礙(obsessive-compulsive disorders)、下肢不寧綜合征(restless leg syndrome)、神經(jīng)質(zhì)、偏頭痛/原發(fā)性頭痛和一般性疼痛、嘔吐、食欲過盛、神經(jīng)性厭食、狂飲-進(jìn)食障礙、胃腸道病癥、身心衰竭綜合征(burn-out syndrome)和易激惹(irritability)。
抗抑郁藥也可用于(制造組合物，所述組合物用于)對神經(jīng)認(rèn)知損傷進(jìn)行一級和二級預(yù)防和/或治療。另外，它們也能有效治療抑郁癥狀或與受干擾的神經(jīng)傳遞相關(guān)的、為慢性疾病(如心血管疾病、中風(fēng)、癌癥、阿爾茨海默病、帕金森氏癥及其它)中的復(fù)合病變發(fā)生的其它癥狀，所述作。
因此，含有三環(huán)二萜衍生物的混合物的鼠尾草提取物以及含有它們的膳食/藥物組合物適用于治療動物(包括人)。
在本發(fā)明的又一實施方案中，含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物可用作一般情緒改善劑，以及用于制造用于這類用途的組合物(如膳食/藥物組合物、食物、飲料)?！扒榫w改善劑”、“感情健康加強(qiáng)劑”或“生活力改善劑”表示經(jīng)其治療的人情緒增強(qiáng)，自我尊重提高和/或負(fù)面想法和/或負(fù)面緊張被減少。其還表示感情平衡，和/或一般(特別是精神)健康和生活力被改善或維持，以及情緒波動的風(fēng)險(被幫助)降低，和正面情緒(被幫助)保留。
含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物一般也可用作用于動物(包括人)的焦慮減輕劑和/或強(qiáng)迫行為減輕劑；優(yōu)選地用于人、寵物動物和農(nóng)業(yè)動物。
“焦慮減輕劑”表示慢性緊張和焦慮的擔(dān)憂和緊張被減少或減輕。警覺過度綜合征(Hypervigilance syndrome)被減少或緩解，其包括不安(restlessness)、肌肉緊張(muscle tension)和睡眠問題。社交恐怖癥和其它恐怖癥被解決。一般而言，社交環(huán)境被體驗為較不具有威脅性。所述人感情放松，體驗舒適并享受陪伴和與其它人的接觸。
“弛緩劑”、“睡眠改善劑”或“失眠緩解劑”表示改善睡眠開始比國內(nèi)幫助人容易地進(jìn)入睡眠，以整晚維持不受干擾的睡眠。其還表示歸因于飛行時差(jet-lag)或輪班工作的晝夜節(jié)律相關(guān)的睡眠紊亂被糾正，與失眠相關(guān)的癥狀(即認(rèn)知功能和記憶受損，精神和生理疲勞，多夢)被除去或緩解，總體生活質(zhì)量和生機(jī)能量(vital energy)被提高。
另外，含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物以及包含有效劑量的它們的組合物可用于治療、預(yù)防和緩解壓力相關(guān)的癥狀，用于治療、預(yù)防和緩解與超負(fù)荷工作、衰竭和/或身心衰竭相關(guān)的癥狀，用于提高對壓力的抗性或耐性，和/或在正常健康個體中支持和促進(jìn)放松，即這些組合物具有“減壓劑”的作用。
另外，含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物適用于在人和動物中治療、預(yù)防和緩解焦慮和強(qiáng)迫行為。
本發(fā)明的又一實施方案涉及含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物和含有它們的組合物(如膳食/藥物組合物、食物、飲料)作為“狀況改善劑”的用途，即作為下述手段的用途，所述手段用于在患病或正常的健康個體中降低應(yīng)激性和疲勞，降低、預(yù)防或緩解生理和精神疲勞，和在更普遍的情況下提高能量，特別是提高腦能量生產(chǎn)。另外，用于一般認(rèn)知改進(jìn)，和特別用于維持或改善注意和集中，改善記憶和記憶能力，改善學(xué)習(xí)能力、語言加工、問題解決和智力功能；用于改善短期記憶；用于提高精神機(jī)警；用于增強(qiáng)精神警覺；用于減輕精神疲勞；用于支持認(rèn)知健康和用于維持平衡的認(rèn)知功能，用于調(diào)節(jié)饑餓和飽滿感，和用于調(diào)節(jié)運動活動。
獸醫(yī)用途 寵物和農(nóng)業(yè)動物可處于需要增強(qiáng)的或改善的神經(jīng)傳遞的狀態(tài)下，所述增強(qiáng)或改善的神經(jīng)傳遞可由本發(fā)明提供。動物可針對壓力情況顯示不利的行為和/或生理反映；在大量生產(chǎn)環(huán)境中飼養(yǎng)或在不利條件下運輸?shù)膭游锟娠@示肉或乳品質(zhì)或數(shù)量的降低；應(yīng)激的家禽可采取拔掉羽毛(feather-picking)、減少產(chǎn)卵和同種相殘。許多動物在不利的居住或運輸條件下會變得好斗或顯示刻板-(stereotypic-)、焦慮-和強(qiáng)迫的行為。
因此，本發(fā)明的另一方面是含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物作為膳食/藥物組合物的獸醫(yī)用途。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物被施用，用于在農(nóng)業(yè)動物中和大量生產(chǎn)的家畜飼養(yǎng)業(yè)、運輸至屠宰場期間預(yù)防壓力，和/或用于預(yù)防這類環(huán)境下所述農(nóng)業(yè)動物的肉品質(zhì)損失。農(nóng)業(yè)動物優(yōu)選地是家禽、牛、綿羊、山羊和豬。
在本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實施方案中，含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物被施用給家禽，用于預(yù)防拔掉羽毛和同種相殘，所述拔掉羽毛和同種相殘導(dǎo)致例如肉品質(zhì)和卵生產(chǎn)的損失。
本發(fā)明的另一方面是在水產(chǎn)養(yǎng)殖中預(yù)防和/或緩解壓力的方法，包括對有需要的動物施用含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物，其中所述動物是魚或蝦。
在本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實施方案中，含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物被施用給寵物或陪伴動物，用于減輕在壓力條件下顯示的壓力、緊張和進(jìn)攻性和強(qiáng)迫行為，所述壓力條件如主人的分離、改變或丟失，假日分離期間和所謂的“動物旅館”中的飼養(yǎng)，和動物保護(hù)地或保護(hù)區(qū)中的飼養(yǎng)。
本發(fā)明的再一方面是在用于皮毛工業(yè)的動物(優(yōu)選地為水貂、狐貍和野兔)中預(yù)防/減少與壓力條件相關(guān)癥狀的方法。
本發(fā)明優(yōu)選的劑量和組合物 對本發(fā)明的目的而言，用于人的具有上述定義和偏好的鼠尾草酚提取物的合適的每日劑量可以是使得三環(huán)二萜(衍生物)在每天每kg體重0.001mg到每kg體重約20mg的范圍內(nèi)的劑量。更優(yōu)選的是每kg體重從約0.01到約10mg三環(huán)二萜(衍生物)混合物的每日劑量，特別優(yōu)選的是每kg體重從約0.05到5.0mg三環(huán)二萜(衍生物)混合物的每日劑量。
術(shù)語“膳食組合物”包括任何類型的(強(qiáng)化)食物/飼料和飲料，還包含臨床營養(yǎng)品和膳食補(bǔ)充劑。根據(jù)本發(fā)明的膳食組合物可還含有保護(hù)性水膠體、粘合劑、成膜劑、包封劑/材料、壁/殼材料、基質(zhì)化合物、包衣、乳化劑、表面活性劑、增溶劑(油、脂肪、蠟、卵磷脂等等)、吸附劑、載體、填充劑、輔助化合物、分散劑、濕潤劑、加工助劑(溶劑)、流動劑、遮味劑、增重劑、啫喱化劑(jellyfying agents)、凝膠形成劑、抗氧化劑和抗微生物劑。
除了可藥用載體和含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物以外，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物還可含有常規(guī)的藥物添加劑和佐劑、賦形劑或稀釋劑、調(diào)味劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、緩沖劑、潤滑劑、著色劑、濕潤劑、填充劑等等。載體材料可以是適用于口/腸胃外/可注射施用的有機(jī)或無機(jī)惰性載體。
根據(jù)本發(fā)明的膳食和藥物組合物可以是適用于對動物體(包括人體)施用的任何蓋侖形式(galenic form)，特別是對經(jīng)口施用而言常規(guī)的任何形式，例如固體形式如食物或飼料(用于食物或飼料的添加劑/補(bǔ)充劑)、食物或飼料預(yù)混合物、強(qiáng)化的食物或飼料、片劑、丸劑、顆粒劑、錠劑、膠囊和泡騰配制物如粉末和片劑，或液體形式如溶液、乳液或懸浮液，如例如飲料、糊劑和油懸浮液。糊劑可以被填充進(jìn)硬殼或軟殼膠囊中。其他應(yīng)用形式的例子是用于經(jīng)皮、腸胃外或可注射施用的形式。膳食和藥物組合物可以是受控(延遲)釋放配制物的形式。
強(qiáng)化食物的例子是谷物棒和烘焙物如蛋糕和曲奇。
飲料包括無醇飲品和含酒精的飲品，以及要添加進(jìn)飲用水和液體食物中的液體制劑。無醇飲品為例如軟飲、運動飲品、果汁、檸檬水、接近水的飲品(例如具有低卡路里含量的基于水的飲品)、茶和基于乳的飲品。液體食物為例如湯和乳制品(例如什錦谷物飲品)。
在用于人的固體劑量單位制劑中，三環(huán)二萜(衍生物)的混合物以下述用量適當(dāng)?shù)卮嬖?，所述用量在每劑量單位從約0.1mg到約1000mg的范圍內(nèi)，優(yōu)選地在從約1mg到約500mg的范圍內(nèi)?？上鄳?yīng)地計算含有三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的、具有上述定義和優(yōu)選性的鼠尾草提取物的量。
在膳食組合物，特別是用于人的食物和飲料中，三環(huán)二萜(衍生物)的混合物以下述量適當(dāng)?shù)卮嬖冢隽恳允澄锘蝻嬃系目傊貫榛A(chǔ)從約0.0001(1mg/kg)到約5重量-％(50g/kg)，優(yōu)選地從約0.001％(10mg/kg)到約1重量-％，(10g/kg)，更優(yōu)選地從約0.01(100mg/kg)到約0.5重量-％(5g/kg)?？上鄳?yīng)地計算含有這類三環(huán)二萜(衍生物)混合物的鼠尾草提取物的量。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，在食物和飲品中，三環(huán)二萜(衍生物)混合物的量在每份從10到30mg的范圍內(nèi)，即每kg食物或飲品120mg?？上鄳?yīng)地計算含有這類三環(huán)二萜(衍生物)混合物的鼠尾草提取物的量。
對除人之外的動物而言，用于本發(fā)明目的的三環(huán)二萜(衍生物)混合物的量的合適的每日劑量可在每天每kg體重從0.001mg到每kg體重約1000mg。更優(yōu)選的是在每kg體重從約0.1mg到約500mg的范圍內(nèi)的每日劑量，特別優(yōu)選的是每kg體重從約1mg到100mg范圍內(nèi)的每日劑量?？上鄳?yīng)地計算含有這類三環(huán)二萜(衍生物)混合物的鼠尾草提取物的量。
本發(fā)明通過以下的實施例進(jìn)一步闡述。
實施例 在下述實驗中使用了三種不同的鼠尾草提取物。
鼠尾草提取物A得自FLAVEX Naturextrakte GmbH，Rehlingen，德國(“Salbei Extrakt，Typ Nr.063.001”)。其含有以鼠尾草提取物總重為基礎(chǔ)0.06重量-％的鼠尾草酚，0.14重量-％的鼠尾草酸和0.36重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚，使用純物質(zhì)作為參考通過HPLC-UV(高效液相色譜-紫外)在210nm處測量。
鼠尾草提取物B得自FLAVEX Naturextrakte GmbH，Rehlingen，德國(“Salbei Antioxidans Extrakt，Typ Nr.063.007”)。其含有以鼠尾草提取物總重為基礎(chǔ)3.50重量-％的鼠尾草酚，10.70重量-％的鼠尾草酸，4.30重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚，0.3重量-％的20-脫氧鼠尾草酚和0.3重量-％迷迭香酚，用純物質(zhì)作為參考通過HPLC-UV在210nm處測量。如下生產(chǎn)提取物將干Salvia officinalis葉(原料)以機(jī)械方式變成小片，然后置于壓強(qiáng)穩(wěn)定的提取管中。然后在50℃的溫度下、280bar的高壓下、在存在小量乙醇時使超臨界的CO2通過提取管，從而溶解親脂化合物。在分離器中，在30℃的溫度下，通過減壓至60bar分離溶解的化合物(提取物)。CO2可被再循環(huán)回該過程中?？蓮?4到20kg干Salvia officinalis葉中獲得約1kg鼠尾草提取物B。
鼠尾草提取物C含有以鼠尾草提取物總重為基礎(chǔ)7.44重量-％的鼠尾草酚，1.56重量-％的鼠尾草酸，0.23重量-％的鼠尾草酸12-甲基醚。低于0.1重量-％的20-脫氧鼠尾草酸和0.41重量-％的迷迭香酚，用純物質(zhì)作為參考通過HPLC-UV在210nm下測量。根據(jù)以下的步驟制造鼠尾草提取物C用甲醇提取700g干燥的生物材料(Salvia officinalis葉)，然后蒸發(fā)至干燥。隨后進(jìn)行溶劑-溶劑分離，所述分離使用己烷∶H2O，隨后使用甲基叔丁基醚(MTBE)∶H2O。將MTBE級分蒸發(fā)至干燥。獲得40g該提取物，其產(chǎn)生富集量的松香烷和三萜。
通過血漿膜轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)在突觸接頭處對它們的快速攝取和清除來調(diào)節(jié)單胺神經(jīng)遞質(zhì)、血清素、多巴胺和去甲腎上腺素的作用。中樞單胺能神經(jīng)元中的單胺轉(zhuǎn)運蛋白負(fù)責(zé)多達(dá)90％被釋放的神經(jīng)遞質(zhì)的回收，并且是大量神經(jīng)活性劑如可卡因、苯丙胺和抗抑郁藥的高親和力靶標(biāo)。這些藥劑通過阻斷轉(zhuǎn)運蛋白并因而防止神經(jīng)元攝取，提高中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)二者中的細(xì)胞外神經(jīng)遞質(zhì)濃度，有助于其行為效應(yīng)(behavioural effect)和自主效應(yīng)(autonomic effect)。因此，通過以下三個實施例闡述一種或多種鼠尾草提取物對血清素、多巴胺和去甲腎上腺素攝取的抑制。
實施例1 含三環(huán)二萜(衍生物)的鼠尾草提取物對血清素攝取的抑制 從R.Blakely，Vanderbilt University，USA獲得穩(wěn)定表達(dá)人血清素再攝取轉(zhuǎn)運蛋白(hSERT)的人胚腎(HEK-293)細(xì)胞。在含10％經(jīng)透析的胎牛血清(Invitrogen)、青霉素、鏈霉素、L-谷氨酰胺和抗生素G418的Dulbecco’s改良的Eagle’s培養(yǎng)基(Bioconcept)中常規(guī)地培養(yǎng)細(xì)胞，并通過胰蛋白酶消化來對細(xì)胞加以傳代。測定當(dāng)天，通過用溫?zé)岬牧姿猁}緩沖鹽水(PBS)柔和洗滌，從80％匯合燒瓶中收集細(xì)胞。然后通過離心將細(xì)胞洗滌一次，并以160μl緩沖液中10,000個細(xì)胞的濃度重懸于補(bǔ)充了35μM帕吉林(pargyline)、2.2mM CaCl2、1mM抗壞血酸和5mM N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-甲磺酸(HEPES緩沖液)的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液(Sigma)中，并以每孔10,000個細(xì)胞分裝于圓底聚丙烯96-孔微量滴定板(Corning)中。如下測定進(jìn)入細(xì)胞的血清素攝取以20nM的濃度添加放射性標(biāo)記的[3H]-血清素(GE Healthcare)，并在37℃下柔和搖動孵育40分鐘。這段時間結(jié)束時，使用Tomtec Mach III M細(xì)胞收獲儀，通過濾經(jīng)Unifilter 96 GF/B平板(Perkin Elmer)去除未摻入的標(biāo)簽。使用Microscint-40/Topcount(PerkinElmer)，通過液體閃爍計數(shù)法定量保留在平板上的被摻入的血清素。
如下文所述來測定鼠尾草提取物A、B和C對血清素攝取的影響在添加[3H]-血清素之前10分鐘或期間，將其以0.00316和100mg/ml之間的濃度范圍包含在測定中。使用SSRI、氟西汀、(0.03nM-1μM)作為參考化合物。鼠尾草提取物A、B和C以濃度依賴性的方式抑制血清素通過轉(zhuǎn)運蛋白的攝取。表1中顯示針對鼠尾草提取物A、B和C對血清素攝取的抑制所計算的IC50值。
表1鼠尾草提取物A、B和C和氟西汀對血清素攝取進(jìn)入經(jīng)轉(zhuǎn)染的HEK-293細(xì)胞的抑制。數(shù)據(jù)顯示為均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，其中進(jìn)行了多次測定。
實施例2 鼠尾草提取物B對多巴胺攝取的抑制 在測定前涂布表達(dá)人多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(hDAT)的中國倉鼠卵巢(CHO)-K1細(xì)胞。在改良的Tris-HEPES緩沖液(5mM Tris-HCl，7.5mM HEPES，pH7.1)中，將細(xì)胞(2×105/ml)與鼠尾草提取物B和/或載體于25℃下孵育20分鐘，然后添加50nM[3H]-多巴胺孵育10分鐘，所述改良的Tris-HEPES緩沖液還含有120mM NaCl、5.4mM KCl、1.2mM CaCl2、1.2mMMgSO4、5mM D-葡萄糖和1mM抗壞血酸。在存在10μM諾米芬辛(nomifensine)(多巴胺再攝取抑制劑)時測定特異信號。然后用1％SDS裂解緩沖液溶解細(xì)胞。相對于載體對照50％或更多(≥50％)的[3H]-多巴胺攝取減少表明顯著的抑制活性。在十個濃度(0.00316-100μg/ml)下篩選鼠尾草提取物B，這些相同的濃度被同時應(yīng)用于分離的細(xì)胞組，并且只有在觀察到顯著的攝取抑制時才評價可能的化合物誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。使用諾米芬辛(0.001-0.1μM)作為參考化合物。
表2針對鼠尾草提取物B和參考化合物諾米芬辛對多巴胺再攝取進(jìn)入經(jīng)轉(zhuǎn)染的CHO-K1細(xì)胞的抑制，測量的IC50值。
實施例3 鼠尾草提取物B對去甲腎上腺素攝取的抑制 在測定前一天涂布穩(wěn)定表達(dá)人去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運蛋白(hNAT)的MadinDarby犬腎(MDCK)細(xì)胞。在改良的Tris-HEPES緩沖液(5mM Tris-HCl，7.5mM HEPES，pH 7.1)中，將細(xì)胞(2×105/ml)與鼠尾草提取物B和/或載體于25℃下孵育20分鐘，然后添加25nM[3H]-去甲腎上腺素孵育10分鐘，所述改良的Tris-HEPES緩沖液還含有120mM NaCl、5.4mM KCl、1.2mMCaCl2、1.2mM MgSO4、5mM D-葡萄糖和1mM抗壞血酸。然后將各孔中的細(xì)胞沖洗兩次，用1％SDS裂解緩沖液溶解，并分析裂解物以測定[3H]-去甲腎上腺素攝取。在存在10μM地昔帕明(desipramine)(三環(huán)抗抑郁藥，其抑制去甲腎上腺素再攝取)時測定特異信號。相對于載體對照50％或更多(≥50％)的[3H]-去甲腎上腺素攝取減少表明顯著的抑制活性。在十個濃度(0.00316-100μg/ml)下篩選鼠尾草提取物B，這些相同的濃度被同時應(yīng)用于分離的細(xì)胞組，并且只有在觀察到顯著的攝取抑制時才評價可能的化合物誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。使用地昔帕明(0.5-50nM)作為參考化合物。
表3針對鼠尾草提取物B和參考化合物地昔帕明對去甲腎上腺素再攝取進(jìn)入經(jīng)轉(zhuǎn)染的MDCK細(xì)胞的抑制，所測量的IC50值。
因此，通過上述體外測定中對血清素、多巴胺和去甲腎上腺素的抑制，鼠尾草提取物B被證明具有三重再攝取抑制作用。
實施例4 含三環(huán)二萜(衍生物)的鼠尾草提取物對單胺氧化酶的抑制 有機(jī)胺對-酪胺或芐胺分別被用作單胺氧化酶A(MAO-A)和B(MAO-B)酶的底物。通過與香草酸的反應(yīng)定量該反應(yīng)產(chǎn)生的H2O2，所述與香草酸的反應(yīng)由辣根過氧化物酶(HRP)催化。
反應(yīng)于37℃下在聚苯乙烯微量滴定板中進(jìn)行。將MAO酶(終濃度2U/ml)與適宜的對-酪胺(Sigma，終濃度0.5mM)或芐胺(Sigma，終濃度0.5mM)任一和生色溶液(含香草酸(Fluka)、4-氨酰安替比林(Fluka)和辣根過氧化物酶(Sigma)，終濃度分別為0.25mM、0.125mM和1U/ml)在0.2M磷酸鉀緩沖液pH 7.6中混合。孵育40分鐘后，在微量滴定板吸光度讀數(shù)器例如Spectramax M5(Molecular Devices Corporation)中于495nm下分析平板。
在與底物孵育之前10分鐘和孵育期間，通過在測定中包含濃度范圍在0.03和100μM之間的鼠尾草提取物A、B和C，測定它們對單胺氧化酶的影響。為了測定提取物對HRP-催化的反應(yīng)部分的影響，用H2O2(Molecular Probes，終濃度50μM)代替MAO酶。含MAO-A和MAO-B的反應(yīng)均以劑量依賴的方式被鼠尾草提取物抑制，而對照反應(yīng)未受影響。表4中顯示針對鼠尾草提取物對單胺氧化酶活性的抑制所測量的IC50值。
表4鼠尾草提取物A、B和C對MAO-A和MAO-B的抑制。結(jié)果顯示為均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。
實施例5 小鼠中鼠尾草提取物B對大理石埋藏測試中行為的影響 通過埋藏有害物體的大鼠論證“防御性埋藏”行為，所述有害物體例如其中裝有味道令人不快的液體的飲水槽(Wilkie et al，1979J.Exp.Anal.Behav.31299-306.)或沖擊針(shock prod)(Pinel et al.J.Comp.Phys.Psych.92708-712)。大理石埋藏測試被設(shè)計為這類測試的修改(Poling et al 1981.J.Expl.Anal.Behav.3531-44)。將大鼠暴露于個體籠中，所述每個籠每天含有25塊大理石，連續(xù)持續(xù)10或21天。計數(shù)10天周期內(nèi)每天被埋藏的大理石數(shù)，或21天暴露后24小時被埋藏的大理石數(shù)。作者報道大理石的埋藏不是由新奇確定，或歸因于任何有害的刺激。
小鼠的大理石埋藏行為被報道為除了對SSRI(例如氟伏沙明、氟西汀、西酞普蘭)、三環(huán)抗抑郁藥(例如丙米嗪、地昔帕明)和選擇性去甲腎上腺素攝取抑制劑(例如瑞波西汀)敏感以外，在不誘導(dǎo)鎮(zhèn)靜作用的劑量下對一系列次要的(例如安定)和主要的(例如氟哌啶醇)安定藥敏感(Broekkamp et al.，1986Eur.J.Pharm.，126223-229)。模型可反映焦慮樣行為或強(qiáng)迫行為(見De Boer et al.，2003Eur.J.Pharm.463145-161)。
本文應(yīng)用的方法遵循Broekkamp et al.(1986)所述的方法。將小鼠(每個處理組n＝15)個別地置于透明塑料籠(33×21×18cm)中，所述籠的地板上有5cm鋸屑并且籠中央有一組25塊大理石(直徑1cm)。將第二個翻過來的籠子作為蓋子。在30分鐘測試周期結(jié)束時計數(shù)被鋸屑覆蓋(至少覆蓋三分之二)的大理石數(shù)。由不知曉藥物處理方案的研究人員進(jìn)行所述測試。
在測試前，通過在每個籠中將10只首次實驗的小鼠放置15分鐘，使所有的測試籠和大理石被“灌輸(impregnated)”。
因此在大理石埋藏測試中研究鼠尾草提取物B(30、100、300mg/kg，測試前24、5和1小時口服)，以評價其在小鼠中可能的抗焦慮作用。使用氯巴占、氟西汀和文拉法辛作為參考化合物。
表5小鼠中鼠尾草提取物B、文拉法辛、氟西汀和氯巴占在大理石埋藏測試中的影響(每組15只小鼠)。數(shù)據(jù)顯示為均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差并顯示為相對于對照的％改變，其中NS＝不顯著的，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001(學(xué)生t-檢驗)。

#第一次施用后(1/15)和第二次施用后死亡(1/15)。
測試的最高劑量的鼠尾草提取物B(300mg/kg)以與血清素和去甲腎上腺素再攝取抑制劑文拉法辛相似的方式，清楚和顯著地降低了大理石埋藏行為。
實施例6 小鼠中鼠尾草提取物B對光-暗盒測試中行為的影響 檢測抗焦慮活性的方法遵循Crawley(1981，Pharmacol.Biochem.Behav.，15695-699)所述的方法?？菇箲]劑提高在光室中花費的時間。
將動物置于兩室盒的光室中，所述兩室盒一般是光亮和開放的(25×27×27cm)，另一半是黑暗和關(guān)閉的(20×27×27cm)。在3-分鐘測試期間記錄在每個室中花費的時間以及動物從一側(cè)跨入另一側(cè)的次數(shù)。每組研究15只小鼠。測試不知情地進(jìn)行。
在三個劑量(30、100、300mg/kg，測試前24、5和1小時口服)下評價分散于玉米油中的鼠尾草提取物B，并與載體對照組(玉米油)比較。使用在測試前1小時施用的氯巴占(32mg/kg口服，分散于蒸餾水中0.2％w/v的羥丙基甲基纖維素中)作為參考物質(zhì)。該組中的小鼠在測試前24小時和5小時接受額外的載體施用，從而維持實驗為不知情的。
表6小鼠中鼠尾草提取物B(SAB)和氯巴占在光-暗盒測試中的影響(每組15只小鼠)。數(shù)據(jù)顯示為均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差和相對于對照的％改變，其中NS＝不顯著的，*p＜0.05，***p＜0.001(學(xué)生t-檢驗)。


#1在-1h口服施用后死亡(假施用)(1/15)。
#2鎮(zhèn)靜作用；300mg/kg的鼠尾草提取物B(1/14)和氯巴占(2/15)。
與載體對照相比，測試的最高劑量的鼠尾草提取物B(300mg/kg)清楚和顯著地提高了在光室中花費的時間。因此，鼠尾草提取物B在300mg/kg下顯示了抗焦慮藥樣活性。
實施例7 制備軟明膠膠囊 制備包含以下成分的軟明膠膠囊 可對成人每天施用兩粒膠囊持續(xù)3個月，用于治療溫和的慢性抑郁癥。
實施例8 制備軟明膠膠囊 制備包含以下成分的軟明膠膠囊 應(yīng)當(dāng)每天服用一粒膠囊持續(xù)14天，優(yōu)選地在月經(jīng)周期的下半部分服用，用于治療月經(jīng)前期綜合征和月經(jīng)前焦慮障礙。
實施例9 制備片劑 制備包含以下成分的片劑
對于一般健康、供能和減輕壓力而言，每天兩次服用一粒藥片，持續(xù)3個月。
實施例10 制備即食的調(diào)味軟飲 將所有成分混合并篩過500μm的篩網(wǎng)。將得到的粉末置于適宜的容器中，并在管狀攪拌機(jī)中至少混合20分鐘。為了制備飲品，向獲得的125g混合的粉末中添加足量水，制備一升飲料。
即飲型軟飲每份(250ml)含有約30mg三環(huán)二萜(衍生物)混合物。作為增強(qiáng)劑(strengthener)或?qū)σ话憬】刀?，每天?yīng)當(dāng)引用2份(240ml)。
實施例11 制備強(qiáng)化的非烘焙的谷物棒 將三環(huán)二萜(衍生物)混合物與脫脂乳粉預(yù)混合，并置于行星式碗狀攪拌機(jī)(planetary bowl mixer)中。添加玉米脆和脆麥酥，將整體柔和混合。然后添加干燥和切開的蘋果。在第一烹調(diào)罐中，以上文給定的量混合糖、水和鹽(溶液1)。在第二烹調(diào)罐中，以上文給定的量混合葡萄糖漿、轉(zhuǎn)化糖漿和山梨醇糖漿(溶液2)。烘焙油脂、棕櫚仁油脂、卵磷脂和乳化劑是油脂相。將溶液1加熱至110℃。將溶液2加熱至113℃，然后在冷水浴中冷卻。之后將溶液1和溶液2合并。在水浴中于75℃下熔化油脂相，然后添加至溶液1和2的合并混合物中。向液體的糖-油脂混合物中添加蘋果味香料和檸檬酸。將液體物料添加至干燥成分中，并在行星式碗狀攪拌機(jī)中充分混合。將物料置于大理石板上并滾至期望的厚度，然后冷卻至室溫，并切件。未烘焙的谷物棒每份(30g)含有約25mg三環(huán)二萜(衍生物)混合物。對于一般健康和提供能量而言，每天應(yīng)食用1-2只谷物棒。
權(quán)利要求
1.包含鼠尾草提取物的膳食或藥物組合物，所述鼠尾草提取物包含鼠尾草酚、鼠尾草酸和鼠尾草12-甲基醚。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的膳食或藥物組合物，其還包含迷迭香酚和/或20-脫氧鼠尾草酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合物，其選自由以下組成的組食物、飼料、乳制品、酸乳、強(qiáng)化食物、谷物棒、烘焙物、蛋糕、曲奇、膳食補(bǔ)劑、片劑、丸劑、顆粒劑、錠劑、膠囊、泡騰劑、無醇飲品、軟飲、運動飲品、果汁、檸檬水、接近水的飲品、茶、基于乳的飲品、液體食物、湯和液體乳制品(什錦谷物飲品)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項的組合物作為抗抑郁藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑、強(qiáng)迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑的用途。
4.用作藥物的權(quán)利要求1或2中定義的鼠尾草提取物。
5.用作藥物的權(quán)利要求1或2中定義的鼠尾草提取物，所述藥物用于治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥。
6.權(quán)利要求6中定義的鼠尾草提取物，其用作抗抑郁藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑、強(qiáng)迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑。
7.權(quán)利要求1或2中定義的鼠尾草提取物用于制造下述組合物的用途，所述組合物用于治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥。
8.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中所述組合物是抗抑郁藥、情緒/生活力改善劑、減壓劑、狀況改善劑、焦慮減輕劑、強(qiáng)迫行為減輕劑、弛緩劑、睡眠改善劑和/或失眠緩解劑。
9.在動物中治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括對需要其的動物施用有效劑量的權(quán)利要求1或2中定義的鼠尾草提取物，所述動物包括人。
10.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述動物是人、寵物動物或農(nóng)業(yè)動物。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有式I到III的三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的鼠尾草提取物，優(yōu)選地涉及含有式I到IV的三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的鼠尾草提取物，更優(yōu)選地涉及含有式I到V的三環(huán)二萜(衍生物)的混合物的鼠尾草提取物，所述提取物用作為治療與降低的神經(jīng)傳遞相關(guān)的病癥的藥物，本發(fā)明還涉及膳食和藥物組合物及其用途。
文檔編號A23L1/30GK101541193SQ200780043631
公開日2009年9月23日 申請日期2007年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月24日
發(fā)明者安·福勒, 克勞斯·吉爾泊特, 戈德·斯庫勒, 克利斯托弗·維瑞里, 艾德里安·維斯 申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司