專利名稱：：結(jié)合mcp-1的核酸的制作方法結(jié)合MCP-1的核酸本發(fā)明涉及結(jié)合MCP-1的核酸及其分別用于制備藥劑(medicament)和"^斷齊寸的用途。人MCP-1(單核細(xì)胞化學(xué)吸引蛋白-l(monocytech，attractantprotein-1);其他名稱為MCAF[單核細(xì)胞趨化和活化因子(monocytechemoattractingandactivatingfactor)]、CCL2、SMC-CF[平滑肌細(xì)胞集落刺激因子]、HC-ll、LDCF、GDCF、TSG-8、SCYA2、A2;SwissProt登錄號(hào)為P13500)由三個(gè)研究組獨(dú)立地表征(Matsushima1988;Rollins1989;Yoshimura1989)。它由76個(gè)氨基酸組成，并且像所有趨化因子一樣以肝素結(jié)合位點(diǎn)為特點(diǎn)。兩個(gè)分子內(nèi)二疏鍵賦予該分子以穩(wěn)定的剛性結(jié)構(gòu)。此外，MCP-1在其氨基末端攜帶有焦谷氨酸。位于Thr71處的是潛在的0-聯(lián)糖基化位點(diǎn)。另外的MCP家族成員既存在于人中(MCP-2、-3、-4)也存在于小鼠中(MCP-2、-3、-5)。人蛋白質(zhì)與人MCP-1具有大約70%的同源性。MCP-1的結(jié)構(gòu)已經(jīng)通過(guò)NMR(Handel1996)和X-射線(Lubkowski1"7)進(jìn)行了解析。MCP-1單體具有典型的趨化因子折疊，其中氨基末端的半胱氨酸后面接著是在希臘鑰匙模體(Greekkeymotif)中導(dǎo)致三個(gè)反平行P-折疊片的長(zhǎng)環(huán)。該蛋白質(zhì)終止于疊加在這三個(gè)p折疊片上的a螺旋(PDB數(shù)據(jù)登錄號(hào)1D0K)。盡管通常保持了來(lái)自不同哺乳動(dòng)物物種的MCP-1形式的三維結(jié)構(gòu)，但氨基酸序列在進(jìn)化過(guò)程中沒(méi)有特別好地保守。序列比對(duì)結(jié)果表明，在前76個(gè)氨基酸中人和鼠MCP-1(也稱為JE)之間的總體序列相似性為55%。除了氨基酸序列，鼠MCP-1與人MCP-1的區(qū)別在于分子大小(鼠MCP-1有125個(gè)氨基酸)和糖基化程度。鼠MCP-1含有49-氨基酸的羧基末端結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域在人MCP-1中不存在并且不是體外生物活性所必需的。人MCP-1與來(lái)自下面的MCP-1具有如下百分比的相同氨基酸:獼猴(船c歸咖7"")MCP-197%歐洲野豬縱ofa)MCP-179%家馬(^wwscs6a7/i/s)78%家犬(Ca/2"尸a邁27/ar/s)MCP-176%穴兔(。r/"o/agwsci//3_/cw/i/s)MCP-175%家牛(勿s17awriA)72%智人(#譜鄉(xiāng)/諸)MCP-371%智人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子64%智人MCP-262%小家鼠(M/s邁w腳/ws)MCP-155%褐家鼠(^〃i/s廢^7譜)MCP-155%考慮到這種高程度的趨異性，可能有必要產(chǎn)生嚙齒動(dòng)物MCP-1的拮抗劑以用于在嚙齒動(dòng)物模型中成功地實(shí)施藥理學(xué)研究。MCP-1是強(qiáng)效的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞的引誘劑。多種細(xì)胞類型，例如內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、腎小球膜細(xì)胞、成骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，以及眾多腫瘤細(xì)胞均表達(dá)MCP-1(Baggiolini1994)。它的表達(dá)受到幾種類型的促炎劑，例如IL-1P、TNF-oc、IFN-y、LPS(脂多糖)和GM-CSF刺激。在混雜的趨化因子網(wǎng)絡(luò)中相當(dāng)與眾不同的是，MCP-1在其受體使用上是高度特異的，只以高親和力與趨化因子受體CCR2結(jié)合。像所有趨化因子受體一樣，CCR2是GPCR(Dawson2003)。CCR2看來(lái)似乎由于編碼羧基末端區(qū)域的mRNA的選擇性剪接而表達(dá)成兩種稍微不同的形式(CCRh和CCIUb)(Charo1994)。這些受體在單核細(xì)胞、骨髓前體細(xì)胞和激活的T細(xì)胞中表達(dá)(Myers1995;Qin1996)。MCP-1與轉(zhuǎn)染入HEK-293細(xì)胞中的受體的解離常數(shù)是260pM，該值與在單核細(xì)胞上測(cè)得的值相一致(Myers1995;VanRiper1993)。用MCP-1激活在經(jīng)轉(zhuǎn)染的HEK-293細(xì)胞上的CCR2b，在濃度為90pM時(shí)抑制腺苷酸環(huán)化酶，并且在稍微更高的濃度時(shí)動(dòng)員細(xì)胞內(nèi)的鈣，這看似不依賴于磷脂酰肌醇的水解。對(duì)腺苷酸環(huán)化酶和細(xì)胞內(nèi)鈣釋放的影響受到百曰咳毒素的強(qiáng)烈抑制，這意味著Gi型異源三聚體G-蛋白參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(Myers1995)。MCP-1參與將單核細(xì)胞募集入發(fā)炎的組織中。在那里，定居巨噬細(xì)胞釋放趨化因子例如MCP-1等，和細(xì)胞因子例如TNF、IL-1卩等，它們激活內(nèi)皮細(xì)胞以表達(dá)一批粘著分子。所產(chǎn)生的"粘性"內(nèi)皮導(dǎo)致血管中的單核細(xì)胞沿著它的表面滾動(dòng)。在這里，單核細(xì)胞遇到內(nèi)皮表面上遞呈的MCP-1，其結(jié)合單核細(xì)胞上的CCR2并將它們激活。這最終導(dǎo)致被牢固地捕獲，單核細(xì)胞沿著內(nèi)皮擴(kuò)散，并移行入周圍組織中，在那里單核細(xì)胞分化成巨噬細(xì)胞并遷移至最大MCP-1濃度的位點(diǎn)。MCP-1是趨化因子家族的成員，該家族是一類小的(約8-14kDa)、結(jié)合肝素的、大多數(shù)為堿性的且在結(jié)構(gòu)上相關(guān)的分子的家族。它們主要在發(fā)炎的組織中形成并調(diào)節(jié)白血球(白細(xì)胞)的募集、激活和增殖(Baggiolini1994;Springer1995;Schall1994)。趨化因子選擇性地誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞的趨化性。除了它們的趨化效應(yīng)，它們還可以在應(yīng)答細(xì)胞中選擇性地發(fā)揮其他作用，如改變細(xì)胞形狀，瞬時(shí)升高游離的細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度，脫粒，上調(diào)整聯(lián)蛋白，形成生物活性脂質(zhì)例如白三烯、前列腺素、血栓烷，或呼吸爆發(fā)(釋放活性氧類別來(lái)破壞致病微生物或腫瘤細(xì)胞)。因此，通過(guò)引起另外的促炎介質(zhì)的釋放以及白細(xì)胞向感染或炎癥位點(diǎn)的趨化性和外滲，趨化因子引發(fā)炎性應(yīng)答逐步升級(jí)。基于四個(gè)保守的半胱氨酸殘基中的前兩個(gè)的排列，將趨化因子分成四類其中所述半胱氨酸串聯(lián)的CC或p-趨化因子，其中所述半胱氨酸由一個(gè)另外的氨基酸殘基隔開(kāi)的CXC或oc-趨化因子，只具有一個(gè)二疏橋的XC或y趨化因子(迄今為止，淋巴細(xì)胞趨化因子(lymphotacUn)是唯一的代表)，以及特征為在所述半胱氨酸之間有3個(gè)氨基酸殘基的CX3C-趨化因子(迄今為止已知唯一的該類型的成員是膜結(jié)合的fractalkin(Bazan1997))。CXC趨化因子主要作用于嗜中性粒細(xì)胞，特別是在它們的氨基末端處攜帶有氨基酸序列ELR的那些CXC趨化因子。對(duì)于嗜中性粒細(xì)胞具有活性的CXC趨化因子的實(shí)例是IL-8、GRO-a、GRO-P和GRO-y、NAP-2、ENA-78和GCP-2。CC趨化因子作用于更多類別的白細(xì)胞上，例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞以及T和B淋巴細(xì)胞(Oppenheim1991;Baggiolini1994;Miller1992;Jose1994;Ponath1996a)。這些趨化因子的實(shí)例是1-309、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MIP-lcx和MIP-(3、RANTES和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子。趨化因子通過(guò)屬于七跨膜G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs;Murphy2000)超家族的受體起作用。一般而言，趨化因子和趨化因子受體的相互作用是趨于混雜的，因?yàn)橐粋€(gè)趨化因子可以結(jié)合許多趨化因子受體，并且反而言之，單個(gè)趨化因子受體可以與幾種趨化因子相互作用。一些已知的CC趨化因子的受體包括結(jié)合MIP-la和RANTES的CCRl(Neote1993;Gao1993);結(jié)合包括MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4在內(nèi)的趨化因子的CCR2(Charo1994;Myers1995;Gong1997;Garcia—Zepeda1996);結(jié)合包括嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、RANTES和MCP-3在內(nèi)的趨化因子的CCR3(Ponath1996b);已經(jīng)發(fā)現(xiàn)響應(yīng)于MCP-1、MIP-la和RANTES而產(chǎn)生信號(hào)的CCR4(Power1995);以及已經(jīng)顯示響應(yīng)于MIP-1ct和MIP-|3及RANTES而產(chǎn)生信號(hào)的CCR5(Boring1996;Raport1996;Samson1996)。如上所述，MCP家族的所有四個(gè)成員(1-4)都結(jié)合CCR2，而MCP-2、MCP-3和MCP-4還可以與CCR1和CCR3相互作用(Gong1997;Heath1997;Uguccioni1997)，并且在MCP-2的情況下可以與CCR5相互作用(Ruffing1998)。顯示出與MCP家族具有高同源性的另一種CC趨化因子是嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子，其最初從獲自受變應(yīng)原攻擊的、致敏的豚鼠的支氣管肺泡灌洗液中分離出來(lái)(Jose1994)。已經(jīng)顯示出，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子也能夠激活CCR2(Martinelli2001)。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題是提供與MCP-1特異性地相互作用的工具(means)。更具體而言，作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題是提供與MCP-1特異性地相互作用的基于核酸的工具。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的另一個(gè)問(wèn)題是提供用于制備用于治療人或非人疾病的藥劑的工具，其中所述疾病的特征為MCP-1直接或間接地參與了這種疾病的致病才幾理。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的另外一個(gè)問(wèn)題是提供用于制備用于治療疾病的診斷劑的工具，其中所述疾病的特征為MCP-1直接或間接地參與了這種疾病的致病4幾理。的主題而得以解決。優(yōu)選的實(shí)施方案可以從從屬權(quán)利要求中獲得。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題也在第一個(gè)方面中通過(guò)一種核酸(優(yōu)選地結(jié)合MCP-1)得以解決，所述核酸選自1A型核酸、1B型核酸、2型核酸、3型核酸、4型核酸和具有根據(jù)SEQ.ID.No.87至115中^f壬一個(gè)的核酸序列的核酸。在第一個(gè)方面的第一個(gè)子方面，所述1A型核酸以5，-〉3，方向包含第一序列段(stretch)盒(Box)B1A、第二序列段盒B2、第三序列段盒B3、第四序列段盒B4、第五序列段盒B5、第六序列段盒B6和第七序列段盒B1B，其中第一序列段盒BU和第七序列段盒B1B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含核苷酸序列AGCRUG，第二序列段盒B2包含核苷酸序列CCCGGW，第三序列段盒B3包含核苷酸序列GUR,第四序列段盒B4包含核苷酸序列RYA，第五序列段盒B5包含核苷酸序列GGGGGRCGCGAYC,第六序列段盒B6包含核苷酸序列UGCAAUAAUG或URYAWUUG,并且第七序列段盒B1B包含核苷酸序列CRYGCU。在笫一個(gè)子方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，第一序列段盒B1A包含核苷酸序列AGCGUG。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第二序列段盒B2包含核苷酸序列CCCGGU。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第三序列段盒B3包含核苷酸序列GUG。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第四序列段盒B4包含核苷酸序列GUA。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第五序列段盒B5包含核苷酸序列GGGGGGCGCGACC。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第六序列段盒B6包含核苷酸序列UACAUUUG。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第七序列段盒B1B包含核苷酸序列CACGCU。在第一個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No21的核酸序列。在第一個(gè)方面的第二個(gè)子方面，所迷IB型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、第二序列段盒B2、第三序列段盒B3、第四序列段盒B4、第五序列段盒B5、第六序列段盒B6和第七序列段盒B1B，其中第一序列段盒B1A和第七序列段盒B1B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含核苦酸序列AGYRUG，第二序列段盒B2包含核苷酸序列CCAGCU或CCAGY,第三序列段盒B3包含核苷酸序列GUG，第四序列段盒B4包含核普酸序列AUG，第五序列段盒B5包含核苷酸序列GGGGGGCGCGACC第六序列段盒B6包含核苷酸序列CAUUUUA或CAUUUA,并且第七序列段盒B1B包含核苷酸序列CAYRCU。在第二個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第一序列段盒B1A包含核苷酸序列AGCGUG。在第二個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第二序列段盒B2包含核苷酸序列CCAGU。在第二個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第六序列段盒B6包含核苷酸序列CAUUUUA。在笫二個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第七序列段盒B1B包含核苷酸序列CACGCU。在第二個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No28和SEQ.ID.No27的核酸序列。在第一個(gè)方面的第三個(gè)子方面中，所述2型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、第二序列段盒B2和第三序列段盒B1B，其中第一序列段盒B1A和第三序列段盒B1B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含選自ACGCA、CGCA和GCA的核苷酸序列，第二序列段盒B2包含核苷酸序列CSUCCCUCACCGGUGCAAGUGAAGCCGYGGCUC,并且第三序列段盒B1B包含選自UGCGU、UGCG和UGC的核苷酸序列。在第三個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第二序列段盒B2包含核香酸序列CGUCCCUCACCGGUGCAAGUGAAGCCGUGGCUC。在第三個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列ACGCA,并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGCGU;或者b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CGCA，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGCG;或者c)笫一序列段盒B1A包含核苷酸序列GCA,并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGC或UGCG。在第三個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GCA。在第三個(gè)子方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGCG。在第三個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No37、SEQ.ID.No116、SEQ.ID.No117和SEQ.ID.No278的核酸序列。在第一個(gè)方面的第四個(gè)子方面，所述3型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、第二序列段盒B2A、第三序列段盒B3、第四序列段盒B2B、第五序列段盒B4、第六序列段盒B5A、第七序列段盒B6、第八序列段盒B5B和第九序列段盒B1B,其中第一序列段盒B1A和第九序列段盒B1B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第二序列段盒B2A和第四序列段盒B2B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第六序列段盒B5A和第八序列段盒B5B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含選自GURCUGC、GKSYGC、KBBSC和BNGC的核苷酸序列，第二序列段盒B2A包含核苷酸序列GKMGU，第三序列段盒B3包含核苷酸序列KRRAR，第四序列段盒B2B包含核苷酸序列ACKMC,第五序列段盒B4包含選自CURYGA、CUWAUGA、CWRMGACW和UGCCAGUG的核苷酸序列，第六序列段盒B5A包含選自GGY和CWGC的核苷酸序列，笫七序列段盒B6包含選自YAGA、CKAAU和CCUUUAU的核苷酸序列，第八序列段盒B5B包含選自GCYR和GCWG的核苷酸序列，并且第九序列段盒B1B包含選自GCAGCAC、GCRSMC、GSVVM和GCNV的核苷酸序列。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第三序列段盒B3包含核苷酸序列GAGAA或UAAAA。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第五序列段盒B4包含核苷酸序列CAGCGACU或CAACGACU。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第五序列段盒B4包含核苷酸序列CAGCGACU，并且第三序列段盒B3包含核苷酸序列UAAAA。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第五序列段盒B4包含核苷酸序列CAACGACU，并且第三序列段盒B3包含核苷酸序列GAGAA。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第七序列段盒B6包含核苷酸序列UAGA。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GURCUGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCAGCAC;或者b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GKSYGC,并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCRSMC;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列KBBSC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GSVVM;或者d)第一序列段盒BU包含核苷酸序列BNGC，并且笫九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCNV。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GUGCUGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCAGCAC;或者b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GUGCGC,并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCGCAC;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列KKSSC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GSSMM;或者d)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列SNGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCNS。在第四個(gè)子方面的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，笫一序列段盒B1A包含核苷酸序列GGGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCCC。在笫四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第二序列段盒B2A包含核苷酸序列GKMGU,并且第四序列段盒B2B包含核普酸序列ACKMC。在第四個(gè)子方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，第二序列段盒B2A包含核苷酸序列GUAGU，并且第四序列段盒B2B包含核苷酸序列ACUAC。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，a)第六序列段盒B5A包含核普酸序列GGY，并且第八序列段盒B5B包含核苷酸序列GCYR;或者b)第六序列段盒B5A包含核苷酸序列CWGC，并且第八序列段盒B5B包含核苷酸序列GCWG。在第四個(gè)子方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，第六序列段盒B5A包含核苷酸序列GGC，并且第八序列段盒B5B包含核苷酸序列GCCG。在第四個(gè)子方面的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，笫六序列段盒B5A與第八序列段盒B5B的核普酸GCY雜交。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No56的核酸序列。在第四個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含選自根據(jù)SEQ.ID.No57至61、SEQ.ID,No67至71和SEQ.ID.No73的核酸序列的核酸序列。在第一個(gè)方面的第五個(gè)子方面中，所述4型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、第二序列段盒B2、第三序列段盒B1B,其中第一序列段盒B1A和第三序列段盒B1B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含選自AGCGUGDU、GCGCGAG、CSKSUU、GUGUU和UGUU的核苷酸序列；第二序列段盒B2包含選自AGNDRDGBKGGURGYARGUAAAG、AGGUGGGUGGUAGUAAGUAAAG和CAGGUGGGUGGUAGAAUGUAAAGA的核苷酸序列，并且第三序列段盒B1B包含選自GNCASGCU、CUCGCGUC、GRSMSG、GRCAC和GGCA的核苷酸序列。在第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GUGUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GRCAC;b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GCGCGAG，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列CUCGCGUC;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CSKSUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GRSMSG，或者d)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列UGUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GGCA，或者e)第一序列段盒B1A包含核普酸序列AGCGUGDU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GNCASGCU。在第五個(gè)子方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CSKSUU,并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GRSMSG。在第五個(gè)子方面的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CCGCUU，并且第三序列段盒BIB包含核苷酸序列GGGCGG。在第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，第二序列段盒B2包含核苷酸序列AGGUGGGUGGUAGUAAGUAAAG。在第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No80的核酸序列。在第一個(gè)至第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸能夠結(jié)合MCP-1，優(yōu)選人MCP-1。在第一個(gè)至第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸能夠結(jié)合趨化因子，其中該趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。在第一個(gè)至第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸能夠結(jié)合趨化因子，其中該趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第一個(gè)至第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸能夠結(jié)合MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1、豬MCP-1和人MCP-1。在第一個(gè)至第五個(gè)子方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸能夠結(jié)合人MCP-1。在第一個(gè)至第五個(gè)子方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，MCP-1具有根據(jù)SEQIDNo.1的氨基酸序列。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第二個(gè)方面中通過(guò)一種核酸(優(yōu)選地結(jié)合鼠MCP-1)得以解決，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No.122、SEQ.ID.No.253和SEQ.ID.No.254的核酸序列。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第三個(gè)方面中通過(guò)一種核酸(優(yōu)選地結(jié)合鼠MCP-1)得以解決，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No.127的核酸序列。在第二個(gè)和第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，鼠MCP-1包含根據(jù)SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。在第一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸包含修飾物(modification),其中所述修飾物優(yōu)選為高分子量部分和/或其中所述修飾物優(yōu)選使得能夠改變根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸在動(dòng)物或人體(優(yōu)選人體)內(nèi)的停留時(shí)間方面的特征。在笫一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述修飾物選自HES部分和PEG部分。在笫一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述修飾物是由直鏈或支化的PEG組成的PEG部分，其中所述PEG部分的分子量?jī)?yōu)選為大約20至120kD，更優(yōu)選大約30至80kD，和最優(yōu)選大約40kD。在笫一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)備選的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述修飾物是HES部分，其中優(yōu)選地，所述HES部分的分子量為大約10至130kD,更優(yōu)選大約30至130kD，和最優(yōu)選大約100kD。在第一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述修飾物經(jīng)由連接體偶聯(lián)至所述核酸。在第一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述修飾物于所述核酸的5'-末端核苷酸和/或所述核酸的3'-末端核苷酸處偶聯(lián)至所述核酸，和/或于所述5，-末端核苷酸和所述3，-末端核苷酸之間偶聯(lián)至所述核酸的核苷酸。在第一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸的核苷酸或形成所述核酸的核苷酸是L-核普酸。在第一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸是L-核酸。在第一個(gè)至第三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，能夠結(jié)合MCP-1的所述核酸的所述部分由L-核苷酸組成。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第四個(gè)方面中通過(guò)藥物組合物得以解決，所述藥物組合物包含根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面的核酸和任選地另外的成分，其中所述另外的成分選自可藥用賦形劑、可藥用栽體和藥物學(xué)活性試劑。在第四個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含根據(jù)第一個(gè)至第三個(gè)方面中任一方面的核酸和可藥用載體。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第五個(gè)方面中通過(guò)根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面的核酸在制備藥劑中的用途得以解決。在第五個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥劑用于人醫(yī)學(xué)或用于獸醫(yī)學(xué)。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第六個(gè)方面中通過(guò)根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面的核酸在制備診斷工具中的用途得以解決。在第五個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案和在第六個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥劑和診斷工具分別用于分別治療和/或預(yù)防和診斷疾病或病癥，所述疾病或病癥選自炎性疾病，自身免疫疾病，自身免疫性腦脊髓炎，中風(fēng)，急性和慢性多發(fā)性硬化癥，慢性炎癥，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腎病，再狹窄，血管成形術(shù)后再狹窄，急性和慢性變態(tài)反應(yīng)，原發(fā)性和繼發(fā)性免疫反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)，哮喘，結(jié)膜炎，支氣管炎，癌癥，動(dòng)脈粥樣硬化，動(dòng)脈石更化性心血管心力衰竭(artherioscleroticcardiovasularheartfailure)或中風(fēng)，牛皮癬，牛皮痱性關(guān)節(jié)炎，神經(jīng)系統(tǒng)炎癥，特應(yīng)性皮炎，結(jié)腸炎，子宮內(nèi)膜異位，眼色素層炎，視網(wǎng)膜病癥，包括黃斑變性、視網(wǎng)膜脫離、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、色素性視網(wǎng)膜炎、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和漿液性中心性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變；特發(fā)性肺纖維化，結(jié)節(jié)病，多肌炎，皮肌炎，避免免疫抑制，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，膿毒癥，腎臟炎癥，腎小球腎炎，急驟進(jìn)展性腎小球腎炎，增生性腎小球腎炎，糖尿病性腎病，梗阻性腎病，急性腎小管壞死，和彌漫性腎小球硬化，全身性紅斑狼療，慢性支氣管炎，貝赫切特病，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)，川畸病之后的過(guò)早動(dòng)脈粥樣硬化，心肌梗死，肥胖癥，慢性肝病，佩羅尼病，急性脊髓損傷，肺或腎移植，心肌炎，阿爾茨海默病和神經(jīng)病，乳腺癌，胃癌，膀胱癌，卵巢癌，錯(cuò)構(gòu)瘤，結(jié)腸直腸癌，結(jié)腸腺瘤，胰腺炎，'隻性阻塞性肺部疾病(COPD),和炎性腸病例如克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎。不希望受任何理論的束縛，對(duì)于診斷目的，本發(fā)明核酸的適用性主要基于增加的或減少的趨化因子水平，其中此類趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3，更特別地為MCP-1。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)公認(rèn)，大多數(shù)上述疾病顯示出此類增加的或減少的趨化因子水平。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第七個(gè)方面中通過(guò)一種復(fù)合物得以解決，所述復(fù)合物包含趨化因子和根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和笫三個(gè)方面的核酸，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3，其中優(yōu)選地，所述復(fù)合物是晶體復(fù)合物。在第七個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第七個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第八個(gè)方面中通過(guò)根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面的核酸用于檢測(cè)趨化因子的用途得以解決，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。在第八個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第八個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所迷趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第九個(gè)方面中通過(guò)用于篩選趨化因子拮抗劑或趨化因子激動(dòng)劑的方法得以解決，該方法包括下列步驟-提供候選趨化因子拮抗劑和/或候選趨化因子激動(dòng)劑，-提供根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)或第三個(gè)方面的核酸，-提供測(cè)試系統(tǒng)，其在存在趨化因子拮抗劑和/或趨化因子激動(dòng)劑時(shí)提供信號(hào)，和-確定所述候選趨化因子拮抗劑是否為趨化因子拮抗劑和/或所述候選趨化因子激動(dòng)劑是否為趨化因子激動(dòng)劑，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。在第九個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第九個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所迷趨化因子是MCP-l,其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第十個(gè)方面中通過(guò)用于篩選趨化因子激動(dòng)劑和/或趨化因子拮抗劑的方法得以解決，該方法包括下列步驟-提供固定至相，優(yōu)選固相的趨化因子，-提供根據(jù)笫一個(gè)、第二個(gè)或第三個(gè)方面的核酸，優(yōu)選根據(jù)第一個(gè)方面的核酸，其是經(jīng)標(biāo)記的，-加入候選趨化因子激動(dòng)劑和/或候選趨化因子拮抗劑，和-確定所述候選趨化因子激動(dòng)劑是否為趨化因子激動(dòng)劑和/或所述候選趨化因子拮抗劑是否為趨化因子拮抗劑，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。在第十方面的一個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)行所述測(cè)定，從而能夠評(píng)估所述核酸是否被所述候選趨化因子激動(dòng)劑或候選趨化因子拮抗劑所替代。在第十個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第十個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-l,更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第十一個(gè)方面中通過(guò)用于檢測(cè)趨化因子的試劑盒得以解決，所述試劑盒包含根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面的核酸，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。在第十一個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第十一個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-l、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-l。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第十二個(gè)方面中通過(guò)能夠通過(guò)根據(jù)第十個(gè)方面或第九個(gè)方面的方法獲得的趨化因子拮抗劑得以解決，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-l、MCP-2和MCP-3。在第十二個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第十二個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第十三個(gè)方面中通過(guò)能夠通過(guò)根據(jù)第十個(gè)方面或第九個(gè)方面的方法獲得的趨化因子激動(dòng)劑得以解決，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。在第十三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)月包趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。在第十三個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述趨化因子是MCP-1,其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1,更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)公認(rèn)，趨化因子激動(dòng)劑和/或趨化因子拮抗劑優(yōu)選地分別為針對(duì)本文指定的各自的趨化因子的激動(dòng)劑和拮抗劑。因此，所述趨化因子激動(dòng)劑和趨化因子拮抗劑分別是例如MCP-1激動(dòng)劑和MCP-1拮抗劑。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題在第十四個(gè)方面中通過(guò)用于檢測(cè)樣品中的根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和笫三個(gè)方面中任一方面的核酸的方法得以解決，其中所述方法包括下列步驟-品:a)提供含有根據(jù)本發(fā)明的核酸的樣，b)提供捕獲探針和檢測(cè)探針，其中所述捕獲探針與根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸的第一部分至少部分地互補(bǔ)，和所述檢測(cè)探針與根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸的第二部分至少部分地互補(bǔ)，或者備選地，所述捕獲探針與根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸的第二部分至少部分地互補(bǔ)，和所述檢測(cè)探針與根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸的第一部分至少部分地互補(bǔ)；c)允許所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針同時(shí)地或者以任何順序依次地與根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸或其部分反應(yīng)；d)任選地，檢測(cè)所述捕獲探針是否與在步驟a)中提供的根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸雜交；和e)檢測(cè)在步驟c)中形成的復(fù)合物，其由根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面中任一方面的核酸以及所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針組成。在第十四個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述檢測(cè)探針包含檢測(cè)工具，和/或其中所述捕獲探針可以固定至支持物，優(yōu)選固體支持物。在第十四個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，將不作為所述復(fù)合物的一部分的任何檢測(cè)探針從所述反應(yīng)體系中去除，從而在步驟e)中僅檢測(cè)作為所述復(fù)合物的一部分的檢測(cè)探針。在第十四個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，步驟e)包括下列步驟比較當(dāng)所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針在根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和第三個(gè)方面的情況下進(jìn)行雜交時(shí)由所述檢測(cè)工具所產(chǎn)生的信號(hào)。在第十四個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述待檢測(cè)的核酸是具有根據(jù)SEQ.ID.NO.37、116、117或278的核酸序列的核酸，并且所述捕獲探針或檢測(cè)探針包含根據(jù)SEQ.ID.NO.255或SEQ.ID.NO.256的核酸序列。在第十四個(gè)方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述待檢測(cè)的核酸是具有根據(jù)SEQ.ID.NO.122、253或254的核酸序列的核酸，并且所述捕獲探針或檢測(cè)探針包含根據(jù)SEQ.ID.NO.281和SEQ.ID.NO.282的核酸序列。作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的問(wèn)題還通過(guò)所附的獨(dú)立權(quán)利要求的主題得以解決。優(yōu)選的實(shí)施方案可以從所附的從屬權(quán)利要求中獲得。如本文所述的根據(jù)本發(fā)明的核酸的特征可以在本發(fā)明的任一方面中實(shí)現(xiàn)，其中單獨(dú)地或者以任意的組合使用所述核酸。人以及鼠MCP-1分別是具有根據(jù)SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的氨基酸序列的堿性蛋白質(zhì)?？梢澡b定出對(duì)于MCP-1的短的且高親和力結(jié)合性的核酸這一發(fā)現(xiàn)是令人驚訝的，這是因?yàn)镋aton等人(1997)觀察到針對(duì)堿性蛋白質(zhì)的適體(aptamer)(即結(jié)合靶分子的D-核酸)的產(chǎn)生通常是非常困難的，因?yàn)檫@種類型的靶標(biāo)產(chǎn)生了高的但非特異性的信噪比。這種高的信噪比是由于由核酸所顯示的對(duì)堿性耙標(biāo)(例如MCP-1)的高的非特異性親和力而引起的。如在權(quán)利要求書(shū)和實(shí)施例1中更詳細(xì)概述的，本發(fā)明人能夠更令人驚訝地鑒定出許多不同的結(jié)合MCP-1的核酸分子，其中大多數(shù)核酸可以根據(jù)核苷酸序列段(stretch)(其在本文中也稱為盒)來(lái)表征?；谒龊泻湍承┙Y(jié)構(gòu)特征及元件，可以分別地對(duì)各種結(jié)合MCP-1的核酸分子進(jìn)行分類。如此確定的各種類別在本文中也稱為類型，并且更具體而言，稱為1A型、1B型、2型、3型和4型。的核酸。術(shù)語(yǔ)"基本同源"應(yīng)該理解為，同源性為至少75%，優(yōu)選85%，更優(yōu)選90%，和最優(yōu)選大于95%、96%、97%、98%或99°/。。存在于該核酸中的核苷酸的總數(shù)。修飾百分比可以基于存在于該核酸中的核苷酸的總數(shù)。同源性可以如本領(lǐng)域4支術(shù)人員已知的方式來(lái)測(cè)定。更具體而言，然后基于所指定的程序參數(shù)，用序列比較算法來(lái)計(jì)算出測(cè)試序列相對(duì)于參考序列的序列同一性百分比。測(cè)試序列優(yōu)選是這樣的序列或核酸分子，即所迷序列或核酸分子據(jù)稱被測(cè)試或待測(cè)試它是否與另一個(gè)核酸分子同源(如果同源的話，同源到什么程度)，其中這種另一個(gè)核酸分子也稱為參考序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，參考序列是如本文所描述的核酸分子，更優(yōu)選為具有根據(jù)SEQ.ID.NO.10-129、132-256和278-282中任一個(gè)的序列的核酸分子。用于比較的最佳序列比對(duì)可以例如通過(guò)下列方法來(lái)進(jìn)行Smith&Waterman的局部同源性算法(Smith&Waterman(1981))，Needleman&Wunsch的同源性比對(duì)算法(Needleman&W廳ch，1970)，Pearson&Upman的相似性搜索方法(Pearson&Lipman，1988)，這些算法的計(jì)算機(jī)化實(shí)施(WisconsinGeneticsSoftwarePackage,GeneticsComputerGroup575ScienceDr.，Madison，Wis.中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA),或目測(cè)檢查。適合于測(cè)定序列同一性百分比的算法的一個(gè)實(shí)例是在基本局部比對(duì)搜索工具(basiclocalalignmentsearchtool,在下文中稱為"BLAST")中使用的算法，參見(jiàn)，例如Altschul等人(Altschul等人，1990;和Altschul等人，1997)。用于進(jìn)行BLAST分析的軟件是通過(guò)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation,在下文中稱為"NCBI")可公開(kāi)獲得的。在使用從NCBI可獲得的軟件(例如BLASTN(用于核普酸序列)和BLASTP(用于氨基酸序列))進(jìn)行的序列同一性測(cè)定中所采用的默認(rèn)參數(shù)描述在McGinnis等人(McGinnis等人，2004)中。術(shù)語(yǔ)"本發(fā)明的核酸"或"根據(jù)本發(fā)明的核酸"還應(yīng)該包括包含本文所公開(kāi)的核酸序列或其部分的那些核酸，優(yōu)選地至這樣的程度，即所述核酸或所述部分參與結(jié)合MCP-1。本文優(yōu)選使用的術(shù)語(yǔ)"本發(fā)明的核酸"在一個(gè)實(shí)施方案中還應(yīng)該包括適合于結(jié)合選自MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的任何分子的核酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)公認(rèn)，獨(dú)個(gè)根據(jù)本發(fā)明的核酸將結(jié)合一個(gè)或幾個(gè)此類分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，此類核酸是本文所描述的核酸分子之一，或者其衍生物和/或代謝產(chǎn)物，其中此類衍生物和/或代謝產(chǎn)物優(yōu)選地為相比本文所描述的核酸分子而言截短的核酸。截短可以涉及本文所公開(kāi)的核酸的任一個(gè)末端或兩個(gè)末端。此外，截短可以涉及所述核酸的內(nèi)部核苷酸序列，即其可以分別涉及在5，和3，末端核苷酸之間的核苷酸。此外，截短應(yīng)該包括從本文所公開(kāi)的核酸序列中刪除少至單個(gè)核苷酸。截短還可以涉及本發(fā)明核酸的超過(guò)一個(gè)的序列段，其中該序列段可以僅為一個(gè)核苷酸長(zhǎng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過(guò)用常規(guī)試驗(yàn)或者通過(guò)使用或采用本文所描述的方法(優(yōu)選在本文中于實(shí)施例部分中所描述的方法)來(lái)測(cè)定根據(jù)本發(fā)明的核酸的結(jié)合，優(yōu)選與選自MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的分子的結(jié)合。除非明確地說(shuō)明與此相反，在本發(fā)明的實(shí)施方案范圍內(nèi)的是，無(wú)論何時(shí)當(dāng)本文提及根據(jù)本發(fā)明的核酸結(jié)合至MCP-1或與MCP-1結(jié)合時(shí)，這也適用于根據(jù)本發(fā)明的核酸結(jié)合至選自MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的任何分子或與之結(jié)合。#>據(jù)本發(fā)明的核酸可以是D-核酸或L-核酸。優(yōu)選地，本發(fā)明的核酸是L-核酸。另外，還可能的是，核酸的一個(gè)或幾個(gè)部分作為D-核酸存在或者核酸的至少一個(gè)或幾個(gè)部分是L-核酸。術(shù)語(yǔ)核酸的"部分"應(yīng)該表示少至一個(gè)核苷酸。此類核酸在本文中通常分別稱作D-核酸和L-核酸。因此，在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸由L-核苷酸組成并包含至少一個(gè)D-核苷酸。此類D-核苷酸優(yōu)選附著至與定義根據(jù)本發(fā)明的核酸的序列段不同的部分，優(yōu)選為其中涉及與該核酸的其他部分相互作用的該核酸的那些部分。優(yōu)選地，此類D-核苷酸分別附著在根據(jù)本發(fā)明的任意序列段的末端和任意核酸的末端處。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，此類D-核苷酸可以用作間隔物或連接物，其優(yōu)選地將修飾物例如PEG和HES附著至根據(jù)本發(fā)明的核酸。同樣也在本發(fā)明的實(shí)施方案的范圍內(nèi)的是，每個(gè)和任意的在本文中在它們的核酸序列方面以其整體描述的核酸分子局限于特定的核苷酸序列。換而言之，術(shù)語(yǔ)"包含"或"包括"在這樣的實(shí)施方案中應(yīng)該理解為"容納"或"由…組成"。也在本發(fā)明范圍內(nèi)的是，根據(jù)本發(fā)明的核酸是更長(zhǎng)的核酸的部分，其中該更長(zhǎng)的核酸包含幾個(gè)部分，其中至少一個(gè)此類部分是根據(jù)本發(fā)明的核酸或其部分。這些更長(zhǎng)的核酸的其他部分可以是一個(gè)或幾個(gè)D-核酸或一個(gè)或幾個(gè)L-核酸。任何組合都可以用于本發(fā)明。更長(zhǎng)的核酸的這些其他部分，單獨(dú)地或合在一起或者以其整體或以特定組合，可以表現(xiàn)出不同于結(jié)合(優(yōu)選結(jié)合MCP-1)的功能。一種可能的功能是允許與其他分子(其中此類其他分子優(yōu)選地與MCP-1不同)相互作用，例如，用于固定、交聯(lián)、檢測(cè)或擴(kuò)增。在本發(fā)明的另外的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸包含幾個(gè)本發(fā)明核酸，作為獨(dú)個(gè)或組合的部分。包含幾個(gè)本發(fā)明核酸的此類核酸也由術(shù)語(yǔ)"更長(zhǎng)的核酸"所涵蓋。如本文所使用的，L-核酸是由L-核苷酸組成的核酸，優(yōu)選完全由L-核苷酸組成的核酸。如本文所使用的，D-核酸是由D-核苷酸組成的核酸，優(yōu)選完全由D-核苷酸組成的核酸。如果沒(méi)有明確表明與此相反，則術(shù)語(yǔ)"核酸，，和"核酸分子"在本文中可以以可交換的方式^f吏用。此外，如果沒(méi)有表明與此相反，則任何核苷酸序列在本文中以5，—3'的方向示出。無(wú)論本發(fā)明的核酸由D-核苷酸組成、由L-核苷酸組成還是由兩者的組合(該組合是例如隨機(jī)的組合，或者是由至少一個(gè)L-核苷酸和至少一個(gè)D-核酸組成的序列段的限定序列)組成，所述核酸可以由脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或其組合組成。因?yàn)閹追N原因，將本發(fā)明的核酸設(shè)計(jì)成L-核酸是有利的。L-核酸是天然存在的核酸的對(duì)映體。然而，由于核酸酶的廣泛存在，D-核酸在含水溶液中并且特別是在生物系統(tǒng)或生物樣品中不是非常穩(wěn)定的。天然存在的核酸酶，特別是來(lái)自動(dòng)物細(xì)胞的核酸酶不能降解L-核酸。因此，L-核酸的生物學(xué)半衰期在此類系統(tǒng)(包括動(dòng)物和人體)中顯著增加。由于缺乏L-核酸的可降解性，因此沒(méi)有產(chǎn)生核酸酶降解產(chǎn)物并因而沒(méi)有觀察到從中產(chǎn)生的副作用。該方面界定了事實(shí)上所有其他化合物(其用于治療涉及MCP-1的存在的疾病和/或病癥)的L-核酸。通過(guò)不同于Watson-Crick堿基配對(duì)的機(jī)制特異性地結(jié)合靶分子的L-核酸，或者部分或完全由L-核酸組成的適體(尤其是該適體的那些部分參與該適體與靶分子的結(jié)合)也稱為鏡像異構(gòu)體(spiegelmer)。也在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，本發(fā)明的核酸(在本文中也稱為根據(jù)本發(fā)明的核酸)可以作為單鏈或雙鏈核酸存在，不論它們作為D-核酸、L-核酸或D,L-核酸存在或者它們是DM或RNA。通常，本發(fā)明的核酸是表現(xiàn)出由一級(jí)序列限定的二級(jí)結(jié)構(gòu)并因而也可以形成三級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈核酸。然而，本發(fā)明的核酸也可以是雙鏈的，這意味著彼此互補(bǔ)或部分互補(bǔ)的兩條鏈相互雜交。這賦予核酸以穩(wěn)定性，特別是，如果核酸是以天然存在的D-形式而不是以L-形式存在，則其將是有利的。可以修飾本發(fā)明的核酸。此類修飾物可以涉及核酸的單個(gè)核苷酸并且是本領(lǐng)域熟知的。此類修飾物的實(shí)例尤其描述于Venkatesan(2003);Kusser(2000);Aurup(1994);C畫(huà)ins(1995);Eaton(1995);Green(1995);Kawasaki(1993);Lesnik(1993);和Miller(1993)中。此類修飾物可以是在組成核酸的獨(dú)個(gè)核苷酸的2，位置處的H原子、F原子或者0-CH3基團(tuán)或冊(cè)2-基團(tuán)。此外，根據(jù)本發(fā)明的核酸可以包含至少一個(gè)LNA核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸由LNA核苷酸組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸可以是多分體(multipartite)核酸。如本文所4吏用的，多分體核酸是由至少兩個(gè)核酸鏈組成的核酸。這些至少兩個(gè)核酸鏈形成功能單元，其中該功能單元是靶分子的配體。所述至少兩個(gè)核酸鏈可以衍生自任何本發(fā)明的核酸，其中通過(guò)切割核酸以產(chǎn)生兩條鏈而衍生，或者通過(guò)合成與本發(fā)明的(即整體)核酸的第一個(gè)部分相對(duì)應(yīng)的一條核酸和與整體核酸的第二個(gè)部分相對(duì)應(yīng)的另一條核酸而衍生。公認(rèn)的是，切割和合成兩者均可用于產(chǎn)生其中存在超過(guò)兩條的如上所例示的鏈的多分體核酸。換而言之，所述至少兩個(gè)核酸鏈通常不同于互補(bǔ)且相互雜交的兩條鏈，盡管在各個(gè)核酸部分之間可能存在一定程度的互補(bǔ)性。最后，也在本發(fā)明范圍內(nèi)的是，實(shí)現(xiàn)了根據(jù)本發(fā)明的核酸的完全閉合(即環(huán)狀的)結(jié)構(gòu)，也就是說(shuō)，根據(jù)本發(fā)明的核酸是閉合的，優(yōu)選通過(guò)共價(jià)連接閉合，其中更優(yōu)選地，此類共價(jià)連接在如本文所公開(kāi)的核酸序列的5，末端和3，末端之間發(fā)生。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的核酸表現(xiàn)出非常有利的K。值范圍。測(cè)定結(jié)合常數(shù)的一種可能性是利用所謂的biacore裝置，其也是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。如本文所使用的，親和力也通過(guò)利用如實(shí)施例中所描述的"pull-down測(cè)定法"來(lái)測(cè)量。為了表示根據(jù)本發(fā)明的核酸與靶標(biāo)(在當(dāng)前情況下為MCP-1)之間的結(jié)合強(qiáng)度的合適量度是所謂的K。值，該值以及用于測(cè)定它的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。根據(jù)本發(fā)明的核酸通過(guò)某個(gè)L值來(lái)表征。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的核酸所顯示的K。值低于1juM。大約1mM的K。值被認(rèn)為是核酸與靶標(biāo)非特異性結(jié)合的特征。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將公認(rèn)的，一組化合物(例如根據(jù)本發(fā)明的核酸)的K。值在某個(gè)范圍內(nèi)。上述的大約l]aM的KD是優(yōu)選的K。值上限。結(jié)合靼標(biāo)的核酸的K。的優(yōu)選下限可以是約10pM或更高。在本發(fā)明范圍內(nèi)的是，獨(dú)個(gè)核酸與MCP-1結(jié)合的K。值優(yōu)選在這一范圍內(nèi)。優(yōu)選的范圍可以通過(guò)選擇該范圍內(nèi)的任意第一個(gè)數(shù)字和該范圍內(nèi)的任意第二個(gè)數(shù)字來(lái)限定。優(yōu)選的上限值是250nM和100nM，優(yōu)選的下限值是50nM、10nM、1nM、100pM和lOpM。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可以具有任意的長(zhǎng)度，只要它們?nèi)匀荒軌蚪Y(jié)合靶分子。本領(lǐng)域?qū)⒐J(rèn)，存在有根據(jù)本發(fā)明的核酸的優(yōu)選長(zhǎng)度。通常，長(zhǎng)度在15和120個(gè)核苷酸之間。本領(lǐng)域技術(shù)人員將公認(rèn)，在15和120之間的任何整數(shù)是根據(jù)本發(fā)明的核酸的可能長(zhǎng)度。根據(jù)本發(fā)明核酸的長(zhǎng)度的更優(yōu)選的范圍是約20至100個(gè)核苷酸、約20至80個(gè)核苷酸、約20至60個(gè)核苷酸、約20至50個(gè)核苷酸和約30至50個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，本文所公開(kāi)的核酸包含這樣的部分，所述部分優(yōu)選為高分子量部分和/或優(yōu)選使得能夠改變所述核酸尤其是在動(dòng)物體內(nèi)(優(yōu)選在人體內(nèi))的停留時(shí)間方面的特征。此類修飾物的特別優(yōu)選的實(shí)施方案是根據(jù)本發(fā)明的核酸的PEG化和HES化。如本文所使用的，PEG表示聚(乙二醇)，而HES表示羥乙基淀粉。如本文所優(yōu)選使用的，PEG化是根據(jù)本發(fā)明的核酸的修飾，其中該修飾由附著至根據(jù)本發(fā)明的核酸的PEG部分組成。如本文所優(yōu)選使用的，HES化是根據(jù)本發(fā)明的核酸的修飾，其中該修飾由附著至根據(jù)本發(fā)明的核酸的HES部分組成。這些4務(wù)飾物以及用此類修飾物來(lái)修飾核酸的方法在歐洲專利申請(qǐng)EP1306382中描述，該專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容在此通過(guò)提及而整體合并入本文中。優(yōu)選地，由高分子量部分組成或包含高分子量部分的修飾物的分子量，特別地在PEG作為此類高分子量部分的情況下為約2,000至200,000Da，優(yōu)選20,000至120，000Da，并且特別地在HES作為此類高分子量部分的情況下優(yōu)選為約3，OOO至180，000Da，更優(yōu)選5，000至130，000Da。HES修飾方法(例如)在德國(guó)專利申請(qǐng)DE12004006249.8中描述，該專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容在此通過(guò)提及而整體合并入本文中。在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，PEG和HES中的任一者可以以直鏈或支化的形式使用，如在專利申請(qǐng)WO20050749"和PCT/EP02/11950中進(jìn)一步描述的。原則上，此類修飾可以在本發(fā)明的核酸分子的任何位置處進(jìn)行。優(yōu)選地，此類修飾在5，-末端核苷酸上、在3，-末端核苷酸上和/或在該核酸分子的5，核苷酸和3'核苷酸之間的任意核苷酸上進(jìn)行。該修飾物并且優(yōu)選PEG和/或HES部分，可以或直接或通過(guò)連接體附著至本發(fā)明的核酸分子上。同樣也在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包含一個(gè)或多個(gè)修飾物，優(yōu)選一個(gè)或多個(gè)PEG和/或HES部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，獨(dú)個(gè)連接體分子將超過(guò)一個(gè)的PEG部分或HES部分附著至根據(jù)本發(fā)明的核酸分子。在本發(fā)明中使用的連接體可以本身是直鏈的或支化的。這種類型的連接體是本領(lǐng)域技術(shù)人員述。不希望受任何理論的束縛，看起來(lái)通過(guò)用高分子量部分例如聚合物并且更特別是本文所公開(kāi)的聚合物(其優(yōu)選為生理學(xué)上可接受的)來(lái)修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸，改變了分泌動(dòng)力學(xué)。更具體而言，看起來(lái)由于這種經(jīng)修飾的本發(fā)明核酸的分子量增加并且由于該核酸不經(jīng)歷代謝(特別是在L形式時(shí))，減少了從動(dòng)物體內(nèi)，優(yōu)選從哺乳動(dòng)物體內(nèi)，和更優(yōu)選從人體內(nèi)的分泌。由于分泌通常通過(guò)腎臟發(fā)生，因此本發(fā)明人推測(cè)經(jīng)如此修飾的核酸的腎小球?yàn)V過(guò)率相比于不具有這種類型的高分子量修飾的核酸顯著減小，這導(dǎo)致在體內(nèi)的停留時(shí)間增加。與之相關(guān)，特別值得注意的是，盡管具有這種高分子量修飾，但是根據(jù)本發(fā)明的核酸的特異性沒(méi)有受到有害的影響。在這種情況下，根據(jù)本發(fā)明的核酸具有令人驚訝的特征(該特征通常不能從藥物學(xué)活性化合物中預(yù)期)，從而使得不必需要具有持續(xù)釋放性質(zhì)的藥物制劑以提供持續(xù)釋放。而是，以它們包含高分子量部分的修飾形式，根據(jù)本發(fā)明的核酸本身就可用作持續(xù)釋放制劑。在這種情況下，如本文所公開(kāi)的核酸分子的<奮飾和經(jīng)如此修飾的核酸分子以及任何包含其的組合物可以提供不同的，優(yōu)選受控的藥物動(dòng)力學(xué)及其生物分布。這還包括在循環(huán)中的停留時(shí)間和分配到組織中。此類修飾在專利申請(qǐng)PCT/EP02/11950中有進(jìn)一步的描述。然而，同樣也在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，本文所公開(kāi)的核酸不包含任何修飾，并且特別是不包含高分子量修飾例如PEG化或HES化。當(dāng)核酸顯示出優(yōu)先分配到體內(nèi)的任何耙器官或組織時(shí)，這種實(shí)施方案是特別優(yōu)選的。具有這種分配特性的核酸試劑將使得能夠在靶組織中建立有效的局部濃度，同時(shí)保持低的全身濃度。這將使得能夠使用低劑量，這不但從經(jīng)濟(jì)學(xué)觀點(diǎn)來(lái)說(shuō)是有利的，而且還減少了其他組織對(duì)于該核酸試劑的非必需的暴露，從而降低了潛在的副作用風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明的拮抗劑可用于產(chǎn)生或制備藥劑。根據(jù)本發(fā)明的此類藥劑或藥物組合物包含任選地與其他藥物學(xué)活性化合物組合在一起的至少一種本發(fā)明的核酸，其中本發(fā)明的核酸優(yōu)選地本身用作藥物學(xué)活性化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，此類藥劑至少包含可藥用載體。此類栽體可以是例如水、緩沖液、PBS、葡萄糖溶液(優(yōu)選5。/。葡萄糖的鹽平衡溶液)、淀粉、糖、明膠或任何其他可接受的載體物質(zhì)。此類載體通常是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。本領(lǐng)域技術(shù)人員將公認(rèn)，本發(fā)明藥劑的任何實(shí)施方案、用途和方面或者與之相關(guān)的實(shí)施方案、用途和方面也可應(yīng)用于本發(fā)明的藥物組合物，反之亦然。用根據(jù)本發(fā)明的或根據(jù)本發(fā)明制備的核酸、藥物組合物和藥劑來(lái)進(jìn)行治療和/或預(yù)防的適應(yīng)癥、疾病和病癥是由于MCP-1直接或間接參與各自的致病機(jī)理所致。然而，還可以治療和預(yù)防MCP-2、MCP-3、MCP-4和/或嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子直接或間接參與了其致病機(jī)理的那些適應(yīng)癥、疾病和病癥。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的是，特別是根據(jù)本發(fā)明的那些核酸可以在這種范圍內(nèi)使用，即用于更廣義地涉及MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的疾病，所述核酸分別結(jié)合至MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)月包趨化因子或與之相互作用。更具體而言，此類用途尤其起因于MCP-1的表達(dá)模式，這暗示了其在特征為單核細(xì)胞浸潤(rùn)的人疾病中起重要作用。這種細(xì)胞浸潤(rùn)存在于許多炎性疾病和自身免疫疾病中。在動(dòng)物模型中，已經(jīng)顯示，MCP-1在局灶性缺血后(Kim1995;Wang1995)和在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎期間(Hulkower1993;Ransohoff1993;Banisor2005)于腦中表達(dá)。MCP-1可能是在由這些動(dòng)物模型所說(shuō)明的疾病過(guò)程(例如中風(fēng)和多發(fā)性硬化癥)中耙向單核細(xì)胞的重要趨化因子。大量的證據(jù)支持這樣的觀點(diǎn)，即MCP-1/CCR2軸在單核細(xì)胞的趨化過(guò)程中并因而在慢性炎癥中具有獨(dú)特的作用(i)MCP-1或CCR2缺陷型小鼠顯示出顯著減少的巨噬細(xì)胞趨化應(yīng)答而在其他方面表現(xiàn)正常(Kuziel1997;Kurihara1997;Boring1997;Lu1998)。(ii)盡管在體外與其他趨化因子呈現(xiàn)出功能冗余，但在幾種炎癥模型中僅MCP-1效應(yīng)子功能的喪失才足以損害單核細(xì)胞的運(yùn)輸(Lloyd1997;Furuichi2003;Egashira2002;Galasso2000;Ogata1997;Kennedy1998;Gonzalo1998;Kitamoto2003)。(iii)在許多炎性疾病中MCP-1的水平升高。事實(shí)上，MCP-1被認(rèn)為在許多具有或沒(méi)有明顯炎性成分的疾病中起作用，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Koch1992;Hosaka1994;Akahoshi1993;Harigai1993;Rollins1996)、腎病(Wada1996;Viedt2002)、血管成形術(shù)后再狹窄(Economou2001)、變態(tài)反應(yīng)和哮喘(Alaml996;Holgate1997;Gonzalo1998)、癌癥(Salcedo2000;Gordillo2004)、動(dòng)#粥樣硬化(Nelken1991;Yla-Herttuala1991;Schwartz1993;Takeya1993;Boring1998)、牛皮癉(Vestergaard2004)、神經(jīng)系統(tǒng)炎癥(Huang2001)、特應(yīng)性皮炎(Kaburagi2001)、結(jié)腸炎(Okuno2002)、子宮內(nèi)膜異位(Jolicoeur2001)、眼色素層炎(Tuaillon2002)、視網(wǎng)膜病癥(Nakazawa2007)、特發(fā)性肺纖維化和結(jié)節(jié)病(Iyonaga1994)以及多肌炎/皮肌炎(DeBleecker2002)。使用抗-MCP-1試劑或CCR2拮抗劑的治療性干預(yù)將會(huì)影響過(guò)量的炎性單核細(xì)胞運(yùn)輸，但可以保留基本的巨噬細(xì)胞運(yùn)輸，從而避免全面的免疫抑制和增加的感染風(fēng)險(xiǎn)(Dawson2003)。的相互作用的不斷增加的認(rèn)識(shí)，已經(jīng)鑒定了用于治療腎病的新乾標(biāo)(Holdsworth2000;Segerer2000)。那些革巴才示之一是MCP-1，對(duì)于所述的那些靶標(biāo)，存在大量的有關(guān)在合適的動(dòng)物模型中用特異性拮抗劑進(jìn)行的表達(dá)和干預(yù)研究方面的數(shù)據(jù)。這種蛋白質(zhì)對(duì)于將免疫細(xì)胞募集到腎臟炎癥的位點(diǎn)來(lái)說(shuō)具有廣泛地非冗余的作用。免疫細(xì)胞對(duì)腎臟的浸潤(rùn)被認(rèn)為在各種類型的腎病的發(fā)展中是結(jié)構(gòu)性腎損傷和腎功能衰退的主要機(jī)制。所有類型的腎細(xì)胞在體外受到刺激時(shí)可以表達(dá)趨化因子，包括MCP-1(Segerer2000);存在大量在體外引發(fā)MCP-1表達(dá)的刺激，包括細(xì)胞因子、氧自由基、免疫復(fù)合物和脂質(zhì)介質(zhì)。在大鼠和小鼠的健康腎臟中，MCP-1不表達(dá)，但是其在急性和慢性的腎臟炎癥嚙齒動(dòng)物模型的過(guò)程中容易被上調(diào)，所述模型包括免疫復(fù)合物性腎小球腎炎、急驟進(jìn)展性腎小球腎炎、增生性腎小球腎炎、糖尿病性腎病、梗阻性腎病或急性腎小管壞死(Segerer2000;Anders2003)。MCP-1在嚙齒動(dòng)物中的表達(dá)數(shù)據(jù)與在人腎臟活組織檢查中所發(fā)現(xiàn)的相應(yīng)的表達(dá)非常相關(guān)(Rovin1994;Cockwel11998;Wadal999)。此外，人腎臟中的腎表達(dá)與疾病活動(dòng)度(diseaseactivity)相關(guān)，并且在合適的治療導(dǎo)致疾病緩解時(shí)降低(A歸nn2003)。腎小球的單核細(xì)胞浸潤(rùn)與患有糖尿病性腎病的患者中的彌漫性腎小球硬化的發(fā)展有關(guān)。MCP-1在腎小球內(nèi)單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的募集和聚集中起重要作用(Banba2000;Morii2003)。局部產(chǎn)生的MCP-1看來(lái)似乎特別是參與了腎小管間質(zhì)損害的起始和進(jìn)展，如在使用患有腎毒性血清誘導(dǎo)的腎炎(NSN)的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中所證明的。主要是在血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和浸潤(rùn)的單核細(xì)胞(在間質(zhì)損害中)中檢測(cè)到了MCP-1。MCP-1介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的激活與下列觀念相一致MCP-1促進(jìn)了腎小管間質(zhì)性炎癥(其為進(jìn)行性腎病的標(biāo)志)(Wada2001;Viedt2002)。由于在一方面的MCP-1和另一方面的MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子之間的同源性，根據(jù)本發(fā)明的核酸，至少它們中分別與MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子結(jié)合或與之相互作用的那些核酸通常可以用于治療、預(yù)防和/或診斷任何這樣的疾病，在所述疾病中分別有MCP-2、MCP-3、MCP"和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的直接或間接的參與。如本文優(yōu)選使用的，"參與"表示，如果各個(gè)參與該疾病的分子被阻止發(fā)揮其與該疾病的根本致病機(jī)理相關(guān)的功能中的一種、幾種或全部，則該疾病將會(huì)被治愈或其程度將會(huì)減輕或其發(fā)作將會(huì)被阻止；至少此類疾病的癥狀或任何指示物(indicator)將分別得到減輕和改善，從而使得所述癥狀和指示物分別與在未患該疾病或不具有形成此類疾病的風(fēng)險(xiǎn)的受試者中所觀察到的相同或相近。當(dāng)然，由于根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合MCP-1的核酸與人或鼠MCP-1相互作用或與之結(jié)合，因此技術(shù)人員通常將會(huì)理解，根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合MCP-1的核酸可以容易地用于治療、預(yù)防和/或診斷人和動(dòng)物的如本文所描述的任何疾病。因此，單核細(xì)胞化學(xué)吸引蛋白(MCP)家族的這些成員，即MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子，與MCP-1具有高度的序列相似性。盡管不是排它性的，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-2、MCP-3和MCP-4經(jīng)由CCR3(人嗜酸性粒細(xì)胞上的特征性的趨化因子受體)相互作用(Heath1997)。CCR3受體在贅生性病狀，例如皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(Kleinhans2003)、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Kouno2004)或腎細(xì)胞癌(Johrer2005)中被上調(diào)。更特別地，增加的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平與哮喘診斷和受損的肺功能直接相關(guān)(Nakamura1999)。已經(jīng)在特應(yīng)性和非特應(yīng)性孝喘中均觀察到嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子在過(guò)敏性炎癥位點(diǎn)處的表達(dá)增加(Ying1997;Ying1999)。此外，編碼MCP-2和MCP-4的mRNA在各種組織中組成性地表達(dá)；但是它們?cè)谶@些背景下的生理功能是未知的。血漿MCP-2水平在膿毒癥中與MCP-1—起增加(Bossink1995);MCP-3的表達(dá)在哮喘中發(fā)生(Humbert1997)。最后，在動(dòng)脈粥樣硬化的脈管的腔表面上可以發(fā)現(xiàn)MCP-4(Berkhout1997)。因此，可以用根據(jù)本發(fā)明的藥劑進(jìn)行治療和/或預(yù)防的疾病和/或病癥和/或患病狀況包括但不限于炎性疾病，自身免疫疾病，自身免疫性腦脊髓炎，中風(fēng)，急性和慢性多發(fā)性硬化癥，慢性炎癥，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腎病，再狹窄，血管成形術(shù)后再狹窄，急性和慢性變態(tài)反應(yīng)，原發(fā)性和繼發(fā)性免疫反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)，哮喘，結(jié)膜炎，支氣管炎，癌癥，動(dòng)脈粥樣石更化，動(dòng)脈硬化性心血管心力衰竭或中風(fēng)，牛皮瓣，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，神經(jīng)系統(tǒng)炎癥，特應(yīng)性皮炎，結(jié)腸炎，子宮內(nèi)膜異位，眼色素層炎，視網(wǎng)膜病癥，包括黃斑變性、視網(wǎng)膜脫離、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、色素性視網(wǎng)膜炎、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和漿液性中心性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變；特發(fā)性肺纖維化，結(jié)節(jié)病，多肌炎，皮肌炎，避免免疫抑制，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，膿毒癥，腎臟炎癥，腎小球腎炎，急驟進(jìn)展性腎小球腎炎，增生性腎小球腎炎，糖尿病性腎病，梗阻性腎病，急性腎小管壞死，和彌漫性腎小球硬化，全身性紅斑狼瘡，慢性支氣管炎，貝赫切特病，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)，川畸病之后的過(guò)早動(dòng)脈粥樣硬化，心肌梗死，肥胖癥，慢性肝病，佩羅尼病，急性脊髓損傷，肺或腎移植，心肌炎，阿爾茨海默病和神經(jīng)病，乳腺癌，胃癌，膀胱癌，卵巢癌，錯(cuò)構(gòu)瘤，結(jié)腸直腸癌，結(jié)腸腺瘤，胰腺炎，慢性阻塞性肺部疾病(COPD)，和炎性腸病例如克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎。在其他實(shí)施方案中，所述藥劑包含另外的藥物學(xué)活性試劑。此類另外的藥物學(xué)活性化合物尤其是(但不限于此)已知能控制血壓和糖尿病的那些，例如血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑和血管緊張素受體阻斷劑。在另外的實(shí)施方案中，所述另外的藥物學(xué)活性化合物也可以是減少免疫細(xì)胞浸潤(rùn)至慢性炎癥位點(diǎn)中或一般地抑制過(guò)度的免疫應(yīng)答(所述過(guò)度的免疫應(yīng)答存在于慢性炎癥位置中并導(dǎo)致組織損傷)的那些化合物中的一種。此類化合物可以是但不限于類固醇或免疫抑制劑，并且優(yōu)選選自皮質(zhì)類固醇(例如潑尼;N^、曱潑尼龍、氫化可的^K地塞米松)和通用免疫抑制劑(例如環(huán)磷酰胺、環(huán)孢素、苯丁酸氮芥、硫唑噤呤、他克莫司或嗎替麥考酚酸酯)。另外，T-細(xì)胞共刺激的更特異的阻斷劑，如CD154或CD40或CD28或CD86或CD80的阻斷劑；或者T-細(xì)胞和/或B-細(xì)胞耗竭劑，如抗-CD20試劑，可用于其他實(shí)施方案。最后，另外的藥物學(xué)活性試劑可以是任何其他趨化因子的活性的調(diào)節(jié)劑，其可以是趨化因子激動(dòng)劑或拮抗劑或者趨化因子受體激動(dòng)劑或拮抗劑。備選地，或另外地，此類另外的藥物學(xué)活性試劑是其他的根據(jù)本發(fā)明的核酸。備選地，所述藥劑包含至少多于一種這樣的核酸，所述核酸結(jié)合不同于MCP-1的靶分子或者顯示出與根據(jù)本發(fā)明的核酸的功能不同的功能。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，原則上將所述藥劑備選地或另外地用于預(yù)防任何在所述藥劑用于治療所述疾病的用途方面所公開(kāi)的疾病。因此，各自的標(biāo)記物，即各自疾病的各自標(biāo)記物，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。優(yōu)選地，各自的標(biāo)記是MCP-1。備選地和/或另外地，各自的標(biāo)記選自MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子。另外一組標(biāo)記物選自血漿中的自身反應(yīng)性抗體(例如抗-dsDNA抗體)或類風(fēng)濕因子。在本發(fā)明的藥劑的一個(gè)實(shí)施方案中，將這種藥劑與用于任何本文所公開(kāi)的疾病(特別是，將使用本發(fā)明的藥劑進(jìn)行治療的那些疾病)的其他治療聯(lián)合使用。"聯(lián)合療法(combinationtherapy)，，(或"綜合療法(co-therapy)，，)包括施用本發(fā)明的藥劑和至少另一種試劑作為具體治療方案的一部分，以期望從這些治療劑即本發(fā)明的藥劑和所述另一種試劑的共同作用中提供有益效應(yīng)。這種聯(lián)合的有益效應(yīng)包括但不限于由治療劑的聯(lián)合而產(chǎn)生的藥物動(dòng)力學(xué)或藥效動(dòng)力學(xué)共同作用。這些治療劑的聯(lián)合施用通常在限定的時(shí)間內(nèi)完成(通常為數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)、數(shù)天或數(shù)周，這取決于所選擇的組合)。"聯(lián)合療法，，意在包括(但通常不包括)施用兩種或更多種這些治療劑作為分開(kāi)的單一療法方案的一部分，所述單一療法方案偶然地地和不定地導(dǎo)致本發(fā)明的聯(lián)合。"聯(lián)合療法，，旨在包括以連續(xù)的方式施用這些治療劑，也就是說(shuō)，其中每種治療劑在不同的時(shí)間施用，以及以基本上同時(shí)的方式施用這些治療劑或所述治療劑中的至少兩種。基本上同時(shí)施用可以例如通過(guò)下列方式來(lái)完成將具有固定比例的每種治療劑的單個(gè)膠囊或者將多個(gè)關(guān)于每種治療劑的單膠嚢施用給受試者。每種治療劑的順次施用或基本上同時(shí)施用可以通過(guò)任何合適的途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)，包括但不限于局部途徑、口服途徑、靜脈內(nèi)途徑、肌內(nèi)途徑和經(jīng)過(guò)粘膜組織的直接吸收。治療劑可以通過(guò)相同的途徑或通過(guò)不同的途徑施用。例如，所選擇的聯(lián)合的第一種治療劑可以通過(guò)注射施用而該聯(lián)合中的其他治療劑可以局部施用。備選地，例如，所有治療劑可以局部施用或者所有治療劑可以通過(guò)注射施用。治療劑的施用順序不是嚴(yán)格重要的，除非另外說(shuō)明。"聯(lián)合療法"還可以包括將如上所述的治療劑以與其他生物活性成分的進(jìn)一步聯(lián)合形式進(jìn)行施用。如果聯(lián)合療法還包括非藥物治療，則該非藥物治療可以在任何合適的時(shí)間進(jìn)行，只要能實(shí)現(xiàn)從治療劑和非藥物治療的聯(lián)合的共同作用中獲得有益效應(yīng)。例如，在適當(dāng)?shù)那闆r下，當(dāng)非藥物治療在時(shí)間上距離治療劑的施用可能有幾天或甚至幾周時(shí)，仍然能夠達(dá)到有益效應(yīng)。如在上述通用術(shù)語(yǔ)中所論述的，根據(jù)本發(fā)明的藥劑原則上可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何形式施用。優(yōu)選的施用途徑是全身性施用，更優(yōu)選地，其通過(guò)腸胃外施用，優(yōu)選通過(guò)注射施用來(lái)進(jìn)行。備選地，藥劑可以局部施用。其他施用途徑包括肌內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下、經(jīng)口、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或肺部施用，優(yōu)先選擇侵入性最低并同時(shí)確保效力的施用途徑。腸胃外施用通常用于皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射和輸注。另外，一種用于腸胃外施用的方法采用了本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的緩釋或持續(xù)釋放系統(tǒng)的植入，其確保維持恒定的劑量水平。此外，本發(fā)明的優(yōu)選藥劑可以通過(guò)局部使用合適的鼻內(nèi)媒介物(vehicle)、吸入劑來(lái)以鼻內(nèi)形式進(jìn)行施用，或者可以采用那些本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的透皮貼劑的形式通過(guò)經(jīng)皮途徑進(jìn)行施用。為了以透皮遞送系統(tǒng)的形式施用，在整個(gè)給藥方案過(guò)程中，劑量的施用將(當(dāng)然)是連續(xù)的而不是間歇性的。其他優(yōu)選的局部制劑包括乳膏劑、軟膏劑、洗劑、氣霧噴霧劑和凝膠劑，其中活性成分的濃度的范圍通常將是0.01%至15%(w/w或w/v)。本發(fā)明的藥劑將通常包含溶解或分散于可藥用介質(zhì)中的有效量的治療活性成分，包括但不限于本發(fā)明的核酸分子。可藥用介質(zhì)或載體包括任何和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。對(duì)于藥物學(xué)活性物質(zhì)使用此類介質(zhì)和試劑是本領(lǐng)域熟知的。補(bǔ)充的活性成分也可以摻入本發(fā)明的藥劑中。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明涉及藥物組合物。此類藥物組合物包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的核酸并且優(yōu)選包含可藥用媒介物。此類媒介物可以是本領(lǐng)域使用的和/或已知的任何媒介物或任何粘合劑。更特別地，此類粘合劑或媒介物是任何在關(guān)于本文所公開(kāi)的藥劑的制備時(shí)所論述的粘合劑或媒介物。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，藥物組合物包含另外的藥物學(xué)活性試劑。根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道藥劑和藥物組合物的制備。通常，此類組合物可以制備成注射劑(作為液體溶液或懸浮液)；制備成適合于在注射前溶解或懸浮于液體中的固體形式；制備成用于口服施用的片劑或其他固體劑；制備成定時(shí)釋放膠嚢；或制備成當(dāng)前使用的任何其他形式，包括滴眼劑、乳膏劑、洗劑、油骨劑、吸入劑等。由外科醫(yī)生、內(nèi)科醫(yī)生或衛(wèi)生保健工作者使用無(wú)菌制劑(例如基于鹽水的洗液)來(lái)處理手術(shù)區(qū)中的特殊區(qū)域也是特別有用的。組合物也可以通過(guò)微型裝置、微顆粒或海綿遞送。在配制后，藥劑將以與劑量制劑相容的方式并以藥理學(xué)有效的量施用。制劑容易地以各種劑型，例如上述的可注射溶液的類型進(jìn)行施用，但是也可以采用藥物釋放膠嚢等。在該情形中，待施用的活性成分的量和組合物的體積取決于待治療的個(gè)體或受試者。對(duì)于施用而言所必需的活性化合物的具體量取決于從業(yè)者的判斷，并且對(duì)于每個(gè)個(gè)體是特殊的。通常利用對(duì)于分散活性化合物而言所必需的最小體積的藥劑。合適的施用方案也是可變的，但是典型的是最初施用所述化合物并監(jiān)測(cè)結(jié)果，然后以進(jìn)一步的時(shí)間間隔提供進(jìn)一步的受控劑量。例如，對(duì)于以片劑或膠嚢(例如明膠膠嚢)形式的口服施用，活性藥物成分即本發(fā)明的核酸分子和/或任何另外的藥物學(xué)活性試劑(在本文中也稱為治療劑或活性化合物)可以與口服的、無(wú)毒的、可藥用的惰性載體例如乙醇、甘油、水等相組合。而且，當(dāng)期望或需要時(shí)，也可以將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑摻入混合物中。合適的粘合劑包括淀粉，硅酸鎂鋁，淀粉漿，明膠，曱基纖維素，羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，天然糖類例如葡萄糖或p-乳糖，玉米增甜劑，天然和合成的樹(shù)膠例如阿拉伯膠、黃蓍膠或藻酸鈉，聚乙二醇，蠟等。在這些劑型中使用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、二氧化硅、滑石、硬脂酸、它的鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇等。崩解劑包括但不限于，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽、或泡騰混合物等。稀釋劑包括例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘氨酸。本發(fā)明的藥劑還可以以諸如定時(shí)釋放和持續(xù)釋放片劑或膠嚢、丸劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、混懸劑、糖漿劑和乳劑的口服劑型來(lái)進(jìn)行施用。有利地由脂肪乳濁液或懸浮液制備栓劑。藥物組合物或藥劑可以是經(jīng)滅菌的和/或含有佐劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑、溶液促進(jìn)劑(solutionpromoter)、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以包含其他在治療上有價(jià)值的物質(zhì)。組合物根據(jù)傳統(tǒng)的混合、?；虬卜椒▉?lái)制備，并且通常含有約0.1%至75%，優(yōu)選約1%至50%的活性成分。液體的(特別是可注射的)組合物可以例如通過(guò)溶解、分散等來(lái)制備。將活性化合物溶解于在藥物學(xué)上純的溶劑(例如水、鹽水、含水右旋糖、甘油、乙醇等)中或與之混合從而形成可注射的溶液或懸浮液。另外，可以配制適合于在注射前溶解于液體中的固體形式。對(duì)于固體組合物，賦形劑包括藥物級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。還可以用例如聚亞烷基二醇如丙二醇作為載體將上文限定的活性化合物配制成栓劑。在一些實(shí)施方案中，栓劑有利地由脂肪乳濁液或懸浮液制備。各自地，本發(fā)明的藥劑和核酸分子也可以以脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)例如小單層嚢泡、大單層嚢泡和多層嚢泡的形式施用。脂質(zhì)體可以由各種磷脂(包含膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿)組成。在一些實(shí)施方案中，將脂質(zhì)成分的薄膜與藥物水溶液水合以形成包嚢該藥物的脂質(zhì)層，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。例如，可以作為用本領(lǐng)域已知方法構(gòu)建的與親脂化合物或非免疫原性高分子量化合物的復(fù)合物來(lái)提供本文所描述的核酸分子。另外，脂質(zhì)體可以在它們的表面上攜帶有此類核酸分子，以便用于靶向和在內(nèi)部攜帶細(xì)胞毒性試劑來(lái)介導(dǎo)細(xì)胞殺死。核酸相關(guān)的復(fù)合物的實(shí)例在美國(guó)專利號(hào)6，011，020中提供。各自地，本發(fā)明的藥劑和核酸分子也可以與作為可靶向的藥物載體的可溶聚合物相偶聯(lián)。此類聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥乙基天冬酰胺苯酚(polyhydroxyethylaspanamidephenol)或聚環(huán)氧乙烷聚賴氨酸,其用棕櫚酰殘基取代。此外，各自地，本發(fā)明的藥劑和核酸分子可以偶聯(lián)至一類可用于實(shí)現(xiàn)藥物的受控釋放的可生物降解的聚合物，例如聚乳酸、聚e-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛類、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯類以及水凝膠的交聯(lián)或兩親性的嵌段共聚物。如果需要，各自待施用的藥物組合物和藥劑還可以含有較少量的非毒性輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖劑以及其他物質(zhì)例如乙酸鈉和三乙醇胺油酸酯。各自使用本發(fā)明的核酸分子和藥劑的給藥方案可以根據(jù)多種因素進(jìn)行選擇，包括患者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀況；待治療的病狀的嚴(yán)重度；施用途徑；患者的腎和肝的功能；以及所采用的具體適體或其鹽。普通醫(yī)師或獸醫(yī)能夠容易地確定和規(guī)定對(duì)于預(yù)防、對(duì)抗或阻止病狀進(jìn)展而言所需的藥物的有效量。在治療本文所公開(kāi)的任何疾病中，根據(jù)本發(fā)明的核酸的有效血漿水平的范圍優(yōu)選為500fM至500jiiM。各自地，本發(fā)明的核酸分子和藥劑可優(yōu)選地以單次日劑量、每?jī)商旎蛎咳?、每周、每?jī)芍?、以單次月劑量或者每三個(gè)月進(jìn)行施用。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本文所描述的藥劑組成了本文所公開(kāi)的藥物組合物。在另外的方面，本發(fā)明涉及用于治療需要這種治療的受試者的方法，其中該方法包括施用藥物學(xué)活性量的至少一種根據(jù)本發(fā)明的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者患有疾病或處于發(fā)展出該疾病的風(fēng)險(xiǎn)中，其中該疾病是任何本文所公開(kāi)的那些，特別是在關(guān)于任何根據(jù)本發(fā)明的核酸用于制備藥劑的用途時(shí)所公開(kāi)的那些疾病中的任何一種。應(yīng)當(dāng)理解，根椐本發(fā)明的核酸以及拮抗劑不僅可用作藥劑或用于制備藥劑，而且還可用于美容目的，特別是與MCP-1參與發(fā)炎的區(qū)域性皮膚損害有關(guān)的美容目的。因此，根據(jù)本發(fā)明的核酸、藥劑和/或藥物組合物可用于治療或預(yù)防的其他病狀或疾病是發(fā)炎的區(qū)域性皮膚損害。如本文優(yōu)選使用的，診斷或診斷劑或診斷工具適合于直接或間接地檢測(cè)MCP-1，優(yōu)選如本文所描述的MCP-1，和更優(yōu)選如本文在關(guān)于本文所描述的各種病癥和疾病時(shí)所描述的MCP-1。然而，就根據(jù)本發(fā)明的核酸分子也結(jié)合MCP-2、MCP-3、MCP-4和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子中的任何、一些或所有來(lái)說(shuō)，此類核酸分子還可以分別用于診斷致病機(jī)理直接或間接地與MCP-2、MCP-3、MCP-4和/或嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的過(guò)表達(dá)或過(guò)度活性相關(guān)或相關(guān)聯(lián)的疾病和病癥。該診斷適合于檢測(cè)和/或隨訪任何各自在本文中所描述的病癥和疾病。此類檢測(cè)通過(guò)根據(jù)本發(fā)明的核酸與MCP-1的結(jié)合而成為可能?？梢灾苯踊蜷g接地檢測(cè)這種結(jié)合。相應(yīng)的方法和工具是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。尤其是，根據(jù)本發(fā)明的核酸可以包含標(biāo)記，所述標(biāo)記使得能夠檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的核酸，優(yōu)選結(jié)合至MCP-1的核酸。此類標(biāo)記優(yōu)選選自力文射性標(biāo)記、酶標(biāo)記和熒光標(biāo)記。原則上，所有已知的對(duì)于抗體而開(kāi)發(fā)的測(cè)定法都可用于根據(jù)本發(fā)明的核酸，但是將靶結(jié)合性抗體替換成了靶結(jié)合性核酸。在使用未標(biāo)記的靶結(jié)合性抗體的抗體-測(cè)定法中，檢測(cè)優(yōu)選通過(guò)二抗來(lái)進(jìn)4亍，所述二抗用i文射性標(biāo)記、酶標(biāo)記和熒光標(biāo)記進(jìn)行修飾并且在其Fc-片段處結(jié)合該耙結(jié)合性抗體。在核酸，優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的核酸的情形中，核酸用這樣的標(biāo)記進(jìn)行修飾，其中優(yōu)選地，這種標(biāo)記選自生物素、Cy-3和Cy-5，并且這種標(biāo)記通過(guò)針對(duì)此類標(biāo)記的抗體例如抗生物素抗體、抗Cy3抗體或抗Cy5抗體進(jìn)行檢測(cè)，或者在標(biāo)記是生物素的情況下，該標(biāo)記通過(guò)天然結(jié)合生物素的鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白進(jìn)行檢測(cè)。繼而，將此類抗體、鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白優(yōu)選地用相應(yīng)的標(biāo)記例如放射性標(biāo)記、酶標(biāo)記或熒光標(biāo)記進(jìn)行修飾(如同二抗一樣)。在另外的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子通過(guò)第二種檢測(cè)工具進(jìn)行檢測(cè)或分析，其中所述檢測(cè)工具是分子信標(biāo)。分子信標(biāo)的方法學(xué)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。簡(jiǎn)而言之，核酸探針(其也稱為分子信標(biāo))是待檢測(cè)的核酸樣品的反向互補(bǔ)序列并因而能夠與待檢測(cè)的核酸樣品的部分雜交。在結(jié)合至核酸樣品后，分子信標(biāo)的熒光基團(tuán)分開(kāi)，這導(dǎo)致熒光信號(hào)的變化，優(yōu)選為強(qiáng)度的變化。這種變化與存在的核酸樣品的量相關(guān)。應(yīng)該承認(rèn)，用根據(jù)本發(fā)明的核酸來(lái)檢測(cè)MCP-1將特別使得能夠檢測(cè)如本文所定義的MCP-1。關(guān)于MCP-1的檢測(cè)，優(yōu)選的方法包括下列步驟(a)提供樣品，其待就MCP-1的存在進(jìn)行檢測(cè)，(b)提供根據(jù)本發(fā)明的核酸，(c)讓所述樣品與所述核酸反應(yīng)，優(yōu)選在反應(yīng)容器中進(jìn)行反應(yīng)，其中步驟(a)可以在步驟(b)之前進(jìn)行，或者步驟(b)可以在步驟(a)之前進(jìn)行。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了另外的步驟d),其在于檢測(cè)樣品與核酸的反應(yīng)。優(yōu)選地，將步驟b)的核酸固定至表面。該表面可以是反應(yīng)容器例如反應(yīng)管、平板上的孔的表面，或者可以是包含于該反應(yīng)容器中的裝置(例如珠)的表面。將核酸固定至該表面可以通過(guò)任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的手段來(lái)完成，包括但不限于非共價(jià)或共價(jià)連接。優(yōu)選地，通過(guò)在表面和核酸之間的共價(jià)化學(xué)鍵來(lái)建立連接。然而，同樣也在本發(fā)明范圍內(nèi)的是，將核酸間接地固定至表面，其中這種間接固定涉及使用另外的組分或一對(duì)相互作用伙伴(interactionpartner)。這種另外的組分優(yōu)選為與待固定的核酸特異性地相互作用的化合物(其也稱為相互作用伙伴)，并因而介導(dǎo)核酸附著至該表面。相互作用伙伴優(yōu)選選自核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體。優(yōu)選地，相互作用伙伴為抗體，更優(yōu)選為單克隆抗體。備選地，相互作用伙伴為核酸，優(yōu)選為功能性核酸。更優(yōu)選地，此類功能性核酸選自適體、鏡像異構(gòu)體和至少與該核酸部分互補(bǔ)的核酸。在另外的備選的實(shí)施方案中，核酸與表面的結(jié)合由多分體相互作用伙伴(multi-partiteinteractionpartner)介導(dǎo)。這種多分體相互作用伙伴優(yōu)選為由第一個(gè)成員和第二個(gè)成員組成的一對(duì)相互作用伙伴或一個(gè)相互作用伙伴，其中第一個(gè)成員包含在該核酸中或與其連接，而第二個(gè)成員連接至該表面或包含在該表面內(nèi)。多分體相互作用伙伴優(yōu)選選自包括生物素和抗生物素蛋白、生物素和鏈霉抗生物素蛋白、以及生物素和中性鏈霉抗生物素蛋白(neutravidin)的相互作用伙伴對(duì)。優(yōu)選地，該相互作用伙伴對(duì)的第一個(gè)成員是生物素。該方法的優(yōu)選的結(jié)果是形成了MCP-1和所述核酸的經(jīng)固定的復(fù)合物，其中更優(yōu)選地，檢測(cè)到所述復(fù)合物。在實(shí)施方案范圍內(nèi)的是，從該復(fù)合物中檢測(cè)出MCP-1。符合這一需要的相應(yīng)的檢測(cè)工具是例如任何對(duì)于MCP-1的那個(gè)/那些部分特異的檢測(cè)工具。特別優(yōu)選的檢測(cè)工具是選自核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體的檢測(cè)工具，所述檢測(cè)工具的產(chǎn)生是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。所述用于檢測(cè)MCP-1的方法還包括將樣品從已經(jīng)優(yōu)選地用于實(shí)施步驟c)的反應(yīng)容器中移除。在另外的實(shí)施方案中，所述方法還包括將MCP-1的相互作用伙伴固定在表面(優(yōu)選如上定義的表面)上的步驟，其中該相互作用伙伴是如本文中定義的，和優(yōu)選如上面在關(guān)于相應(yīng)的方法時(shí)所定義的，并且更優(yōu)選在它們的各種實(shí)施方案中包括核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體。在這個(gè)實(shí)施方案中，特別優(yōu)選的檢測(cè)工具是根據(jù)本發(fā)明的核酸，其中此類核酸可優(yōu)選為經(jīng)標(biāo)記的或未標(biāo)記的。在此類核酸為經(jīng)標(biāo)記的情況下，它可以直接或間接地被檢測(cè)。這種檢測(cè)也可以涉及第二種檢測(cè)工具的使用，所述第二種檢測(cè)工具也優(yōu)選選自核酸、多肽、蛋白質(zhì)和在本文所描述的各種實(shí)施方案中的具體形式。此類檢測(cè)工具優(yōu)選為對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的核酸是特異性的。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二種檢測(cè)工具是分子信標(biāo)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述核酸或所述第二種檢測(cè)工具或兩者可以包含檢測(cè)標(biāo)記。所述檢測(cè)標(biāo)記優(yōu)選選自生物素、溴脫氧尿苷標(biāo)記、洋地黃毒苷標(biāo)記、熒光標(biāo)記、UV-標(biāo)記、放射性標(biāo)記和螯合劑分子。備選地，所述第二種檢測(cè)工具與優(yōu)選由該核酸所含有、由該核酸所包含或附著至該核酸的檢測(cè)標(biāo)記相互作用。特別優(yōu)選的組合如下檢測(cè)標(biāo)記是生物素而第二種檢測(cè)工具是針對(duì)生物素的抗體，或其中檢測(cè)標(biāo)記是生物素而第二種檢測(cè)工具是抗生物素蛋白或攜帶抗生物素蛋白的分子，或其中檢測(cè)標(biāo)記是生物素而第二種檢測(cè)工具是鏈霉抗生物素蛋白或攜帶鏈霉抗生物素蛋白的分子，或其中檢測(cè)標(biāo)記是生物素而第二種檢測(cè)工具是中性鏈霉抗生物素蛋白或攜帶中性鏈霉抗生物素蛋白的分子，或者其中檢測(cè)標(biāo)記是溴脫氧尿苷而第二種檢測(cè)工具是針對(duì)溴脫氧尿苷的抗體，或其中檢測(cè)標(biāo)記是洋地黃毒苷而第二種檢測(cè)工具是針對(duì)洋地黃毒苷的抗體，或其中檢測(cè)標(biāo)記是螯合劑而第二種檢測(cè)工具是放射性核素，其中所述檢測(cè)標(biāo)記優(yōu)選附著至所述核酸。將公認(rèn)的是，這種類型的組合也可以應(yīng)用于其中核酸附著至表面的實(shí)施方案。在這種實(shí)施方案中，檢測(cè)標(biāo)記優(yōu)選附著至相互作用伙伴。最后，同樣也在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是，用第三種檢測(cè)工具檢測(cè)第二種檢測(cè)工具，優(yōu)選地，第三種檢測(cè)工具是酶，更優(yōu)選地為在檢測(cè)第二種檢測(cè)工具時(shí)顯示出酶促反應(yīng)的酶，或者第三種檢測(cè)工具是用于檢測(cè)輻射(更優(yōu)選地，由放射性核素發(fā)射的輻射)的工具。優(yōu)選地，第三種檢測(cè)工具特異性地檢測(cè)第二種檢測(cè)工具和/或與第二種檢測(cè)工具相互作用。此外，在將MCP-1的相互作用伙伴固定在表面上并將根據(jù)本發(fā)明的核酸優(yōu)選加入至在相互作用伙伴和MCP-1之間形成的復(fù)合物中的實(shí)施方案之中，可以將樣品從反應(yīng)體系中移除，更優(yōu)選地從在其中進(jìn)行步驟c)和/或d)的反應(yīng)容器中移除。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸包含熒光部分，并且其中該熒光部分的熒光在所述核酸與MCP-1之間形成復(fù)合物和在所述核酸與游離的MCP-1之間形成復(fù)合物時(shí)是不同的。在另外的實(shí)施方案中，所述核酸是根據(jù)本發(fā)明的核酸的衍生物，其中所述核酸的衍生物包含至少一種腺苷的熒光衍生物以替換腺苷。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述腺苷的熒光衍生物是亞乙烯基腺苷。在另外的實(shí)施方案中，利用熒光來(lái)檢測(cè)由根據(jù)本發(fā)明的核酸的衍生物和MCP-1組成的復(fù)合物。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，信號(hào)在步驟(c)或步驟(d)中產(chǎn)生，并且優(yōu)選地，所述信號(hào)與樣品中MCP-1的濃度相關(guān)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述測(cè)定法可以在96孔板中進(jìn)行，其中將成分固定在如上描述的反應(yīng)容器中并且將孔用作反應(yīng)容器。本領(lǐng)域技術(shù)人員將公認(rèn)，至少就根據(jù)本發(fā)明的核酸也結(jié)合至MCP-2、MCP-3、MCP-4和/或嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子或與之結(jié)合來(lái)說(shuō)，上文中所描述的內(nèi)容也適用于MCP-2、MCP-3、MCP-4和/或嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子。本發(fā)明的核酸可以進(jìn)一步用作用于藥物設(shè)計(jì)的起始材料。主要存在兩種可能的方法。一種方法是篩選化合物文庫(kù)，而此類化合物文庫(kù)優(yōu)選為低分子量化合物文庫(kù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述篩選是高通量篩選。優(yōu)選地，高通量篩選是在基于靶標(biāo)的測(cè)定法中對(duì)化合物進(jìn)行快速且有效的試錯(cuò)法(tria卜and-error)評(píng)估。該分析最好是通過(guò)比色測(cè)量法來(lái)進(jìn)行。與之相關(guān)使用的文庫(kù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。備選地，根據(jù)本發(fā)明的核酸可用于藥物的合理設(shè)計(jì)。優(yōu)選地，合理藥物設(shè)計(jì)是設(shè)計(jì)藥物學(xué)先導(dǎo)結(jié)構(gòu)。從靶標(biāo)的三維結(jié)構(gòu)開(kāi)始，用計(jì)算機(jī)程序把包含許多不同化合物的結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)庫(kù)搜索一遍，所述三維結(jié)構(gòu)通常通過(guò)諸如X射線晶體學(xué)或核磁共振光譜學(xué)之類的方法來(lái)確定。該選擇通過(guò)計(jì)算機(jī)來(lái)完成，隨后可在實(shí)驗(yàn)室中測(cè)試所確定的化合物。合理藥物設(shè)計(jì)可以從任何根據(jù)本發(fā)明的核酸開(kāi)始，并涉及與本發(fā)明核酸的結(jié)構(gòu)相似的或與本發(fā)明核酸的結(jié)構(gòu)中的介導(dǎo)結(jié)合的部分相同的結(jié)構(gòu)，優(yōu)選三維結(jié)構(gòu)。在任何情況下，此類結(jié)構(gòu)仍然顯示出與本發(fā)明的核酸相同或相似的結(jié)合特征。在合理藥物設(shè)計(jì)中的進(jìn)一步的步驟中或作為備選的步驟，優(yōu)選地用不同于核苷酸和核酸的化學(xué)基團(tuán)來(lái)模擬結(jié)合至神經(jīng)遞質(zhì)的所述核酸的那些部分的三維結(jié)構(gòu)。通過(guò)這種模擬，可以設(shè)計(jì)出不同于所述核酸的化合物。此類化合物優(yōu)選為小分子或肽。在例如通過(guò)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的竟?fàn)幮詼y(cè)定法來(lái)篩選化合物文庫(kù)的情況下，可以發(fā)現(xiàn)合適的MCP-1類似物、MCP-1激動(dòng)劑或MCP-1拮抗劑。這種竟?fàn)幮詼y(cè)定法可以如下建立。將本發(fā)明的核酸，優(yōu)選作為結(jié)合耙標(biāo)的L-核酸的鏡像異構(gòu)體偶聯(lián)至固相。為了鑒定MCP-1類似物，可以將經(jīng)標(biāo)記的MCP-1加入至該測(cè)定法。潛在的類似物將與MCP-1分子竟?fàn)幗Y(jié)合該鏡像異構(gòu)體，這將伴隨有通過(guò)相應(yīng)標(biāo)記獲得的信號(hào)的減少。篩選激動(dòng)劑或拮抗劑可以涉及使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定法。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒可以包含至少一種或幾種本發(fā)明的核酸。另外，試劑盒可以包含至少一種或幾種陽(yáng)性或陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照可以例如是MCP-1，特別是針對(duì)其來(lái)選擇本發(fā)明核酸或本發(fā)明核酸與其結(jié)合的MCP-1，優(yōu)選以液體形式。陰性對(duì)照可以例如是根據(jù)類似于MCP-1的生物物理學(xué)性質(zhì)而限定的肽，但是其不會(huì)被本發(fā)明的核酸所識(shí)別。此外，所述試劑盒可以包含一種或幾種緩沖液。各種成分可以以干燥或凍干的形式，或者以溶解于液體中的形式包含在試劑盒中。試劑盒可以包括一個(gè)或幾個(gè)容器，所述容器繼而可以包含一種或幾種該試劑盒的成分。在另外的實(shí)施方案中，試劑盒包括說(shuō)明書(shū)或說(shuō)明書(shū)散頁(yè)，其將有關(guān)如何使用試劑盒及其各種成分的信息提供給使用者。根據(jù)本發(fā)明的核酸的藥物學(xué)和生物分析測(cè)定主要用于評(píng)估它在幾種人體和非人體的體液、組織和器官中的藥物動(dòng)力學(xué)和生物動(dòng)力學(xué)特性。為這個(gè)目的，可以使用任何本文所公開(kāi)的和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的檢測(cè)方法。在本發(fā)明的另外的方面，提供了用于檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的核酸的夾心雜交測(cè)定法。在該檢測(cè)測(cè)定法中，使用了捕獲探針和檢測(cè)探針。捕獲探針與根據(jù)本發(fā)明的核酸的第一個(gè)部分互補(bǔ)，而檢測(cè)探針與根據(jù)本發(fā)明的核酸的第二個(gè)部分互補(bǔ)。捕獲探針和檢測(cè)探針都可以由DNA核苷酸、經(jīng)^f務(wù)飾的DNA核苷酸、經(jīng)修飾的RNA核苷酸、RNA核苷酸、LNA核苷酸和/或PM核苷酸形成。因此，捕獲探針包含與根據(jù)本發(fā)明的核酸的5，-末端互補(bǔ)的序列段，而檢測(cè)探針包含與根據(jù)本發(fā)明的核酸的3，-末端互補(bǔ)的序列段。在該情況下，將捕獲探針經(jīng)由其5，-末端固定至表面或基質(zhì)，其中該捕獲探針可以在其5，-末端處直接固定，或者經(jīng)由在其5，-末端和表面或基質(zhì)之間的連接體進(jìn)行固定。然而，原則上，連接體可以連接至捕獲探針的每個(gè)核苷酸。連接體可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的親水性連接體形成，或者由D-DM核苷酸、經(jīng)修飾的D-DNA核苷酸、D-RNA核苷酸、經(jīng)修飾的D-RNA核苷酸、D-LNA核苷酸、PNA核苷酸、L-RNA核香酸、L-DNA核苷酸、經(jīng)修飾的L-RNA核苷酸、經(jīng)修飾的L-DNA核苷酸和/或L-LNA核苷酸形成。備選地，捕獲探針包含與根據(jù)本發(fā)明的核酸的3，-末端互補(bǔ)的序列段，而檢測(cè)探針包含與根據(jù)本發(fā)明的核酸的5，-末端互補(bǔ)的序列段。在該情況下，捕獲探針經(jīng)由其3，-末端固定至表面或基質(zhì)，其中該捕獲探針可以在其3，-末端處直接固定，或者經(jīng)由在其3，-末端和表面或基質(zhì)之間的連接體進(jìn)行固定。然而，原則上，連接體可以連接至與根據(jù)本發(fā)明的核酸互補(bǔ)的序列段的每個(gè)核苷酸。連接體可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的親水性連接體形成，或者由D-DNA核苷酸、經(jīng)修飾的D-DNA核苷酸、D-RNA核苷酸、經(jīng)修飾的D-RNA核苷酸、D-LNA核苷酸、PNA核苷酸、L-RNA核苷酸、L-DM核苷酸、經(jīng)修飾的L-RM核苷酸、經(jīng)修飾的L-DNA核苷酸和/或L-LNA核苷酸形成。自身的核苷酸數(shù)目?？膳c根據(jù)本發(fā)明的核酸雜交的捕獲探針和檢測(cè)探針的核苷酸總數(shù)目的最大值應(yīng)該是根據(jù)本發(fā)明的核酸所包含的核苷酸數(shù)目。檢測(cè)探針和捕獲探針的核苷酸的最小數(shù)目(2至10個(gè)核苷酸)應(yīng)該使得能夠分別與根據(jù)本發(fā)明的核酸的5，-末端或3，-末端雜交。為了實(shí)現(xiàn)在根據(jù)本發(fā)明的核酸和存在于所分析的樣品中的其他核酸之間的高的特異性和選擇性，捕獲探針和檢測(cè)探針的核苷酸總數(shù)目應(yīng)該是或者最多為根據(jù)本發(fā)明的核酸所包含的核苷酸數(shù)目。此外，檢測(cè)探針優(yōu)選攜帶有如本文先前所描述的可檢測(cè)的標(biāo)記物分子或標(biāo)記。原則上，標(biāo)記或標(biāo)記物分子可以連接至檢測(cè)探針的每個(gè)核苷酸。優(yōu)選地，標(biāo)記或標(biāo)記物位于檢測(cè)探針的5，-末端或3，-末端，間可以插入連接體。連接體可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的親水性連接體形成，或者由D-DNA核苷酸、經(jīng)修飾的D-DNA核苷酸、D-RNA核苷酸、經(jīng)修飾的D-RNA核苷酸、D-LNA核苷酸、PNA核苷酸、L-RNA核苷酸、L-DNA核苷酸、經(jīng)修飾的L-RNA核苷酸、經(jīng)修飾的L-DNA核苷酸和/或L-LNA核苷酸形成。根據(jù)本發(fā)明的核酸的檢測(cè)可以如下進(jìn)行將根據(jù)本發(fā)明的核酸以其一端與捕獲探針雜交，并且以其另一端與檢測(cè)探針雜交。然后，通過(guò)例如一個(gè)或多個(gè)洗滌步驟來(lái)移除未結(jié)合的檢測(cè)探針。隨后可以測(cè)量結(jié)合的檢測(cè)探針的量，所述檢測(cè)探針優(yōu)選攜帶有標(biāo)記或標(biāo)記物分子。如本文優(yōu)選使用的，術(shù)語(yǔ)"治療"在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中額外地或備選地包括預(yù)防和/或隨訪。如本文優(yōu)選使用的，如果沒(méi)有指出與此相反，術(shù)語(yǔ)"疾病"和"病癥"應(yīng)該以可交換的方式使用。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"包含"優(yōu)選地?zé)o意于限制該術(shù)語(yǔ)前面的主題或由該術(shù)語(yǔ)所描述的主題。然而，在一個(gè)備選的實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"包含，，應(yīng)該以容納的含義理解，并因而理解為限制了該術(shù)語(yǔ)前面的主題或由該術(shù)語(yǔ)所描述的主題。本文所使用的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子和靶分子MCP-1的各個(gè)序列標(biāo)識(shí)號(hào)、化學(xué)性質(zhì)，其實(shí)際序列以及內(nèi)部參考號(hào)概括在下表中。<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula>本發(fā)明通過(guò)附圖、實(shí)施例和序列表來(lái)進(jìn)一步舉例說(shuō)明，從這些附圖、實(shí)施例和序列表中可獲得另外的特征、實(shí)施方案和優(yōu)點(diǎn)，其中圖1顯示了結(jié)合人MCP-1的相關(guān)RNA配體的序列比對(duì)，其中指明了在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中以其整體對(duì)于結(jié)合人MCP-1來(lái)說(shuō)不可缺少的序列基序("1A型")；圖2顯示了結(jié)合人MCP-1的相關(guān)RNA配體以及RNA配體180-Dl-002的衍生物的序列比對(duì)，其中指明了在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中以其整體對(duì)于結(jié)合人MCP-1來(lái)說(shuō)不可缺少的序列基序("IB型")；圖3顯示了結(jié)合人MCP-1的相關(guān)RNA配體的序列比對(duì)，其中指明了在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中以其整體對(duì)于結(jié)合人MCP-1來(lái)說(shuō)不可缺少的序列基序("2型")；圖4顯示了結(jié)合人MCP-1的相關(guān)RNA配體的序列比對(duì)，其中指明了在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中以其整體對(duì)于結(jié)合人MCP-1來(lái)說(shuō)不可缺少的序列基序("3型，，);圖5顯示了RNA配體178-D5和181-A2(序列基序"3型，，的人MCP-1RNA配體)的衍生物;圖6顯示了結(jié)合人MCP-1的相關(guān)RNA配體的序列比對(duì)，其中指明了在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中以其整體對(duì)于結(jié)合人MCP-1來(lái)說(shuō)不可缺少的序列基序("4型")(其他序列)；圖7顯示了幾種不同的結(jié)合人MCP-1的RNA配體的序列的表格，其不能與MCP-1結(jié)合性序列基序"1A型"、"1B型"、"2型"、"3型"或"4型"相關(guān)；圖8顯示了結(jié)合至鼠MCP-1的RNA配體188-A3-001和189-G7-001的4汙生物的比對(duì)；圖9顯示了適體D-NOX-E36與生物素化的人D-MCP-l在室溫和37。C下的結(jié)合分析的結(jié)果，表示為隨生物素化的人D-MCP-1濃度而變化的適體結(jié)合；圖10顯示了適體D-mNOX-E36與生物素化的鼠D-MCP-1在37'C下的結(jié)合分析的結(jié)果，表示為隨生物素化的鼠D-MCP-1濃度而變化的適體結(jié)合；圖11顯示了在THP-1細(xì)胞中MCP-1誘導(dǎo)的Ca++-釋放，其中獲得了關(guān)于人MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，其中表明半數(shù)有效濃度(halfeffectiveconcentration,EC5。)為大約3nM,表示為隨人MCP-1濃度而變化的相對(duì)于空白的熒光差異；圖12顯示了鏡像異構(gòu)體N0X-E36在鈣釋放測(cè)定法中的效力；細(xì)胞用與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36在37。C下預(yù)孵育的3nM人MCP-1進(jìn)行刺激，表示為隨NOX-E36濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖13顯示了鏡像異構(gòu)體mNOX-E36在鈣釋放測(cè)定法中的效力；細(xì)胞用與各種量的鏡像異構(gòu)體mNOX-E36在37。C下預(yù)孵育的5nM鼠MCP-l進(jìn)行刺激，表示為隨mNOX-E36濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖14顯示了人MCP-1誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞的趨化性，其中在THP-1細(xì)胞朝向各種MCP-1濃度遷移3小時(shí)后，獲得了關(guān)于MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，表示為隨人MCP-1濃度而變化的相比于對(duì)照而言的X倍增加；圖15顯示了鏡像異構(gòu)體NOX-E36在趨化性測(cè)定法中的效力；讓細(xì)胞朝向與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36在37。C下預(yù)孵育的0.5nM人MCP-1遷移，表示為隨鏡像異構(gòu)體NOX-E36濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖16顯示了鏡像異構(gòu)體mNOX-E36在趨化性測(cè)定法中的效力；讓細(xì)胞朝向與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36在37。C下預(yù)孵育的0.5nM鼠MCP-1遷移，表示為隨鏡像異構(gòu)體mNOX-E36濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖17顯示了Biacore2000傳感圖(sensorgram)，其指明了鏡像異構(gòu)體NOX-E-36與人MCP-1(其通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程固定在PioneerFl傳感器芯片上)結(jié)合的K。值，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖18顯示了Biacore2000傳感圖，其指明了鏡像異構(gòu)體NOX-E36與人MCP-家族蛋白質(zhì)(huMCP-l、huMCP-2、huMCP-3)和人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(其通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程分別固定在PioneerFl和CM4傳感器芯片上)的結(jié)合，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖19顯示了Biacore2000傳感圖，其指明了鏡像異構(gòu)體NOX-E36與來(lái)自不同物種的MCP-1(犬MCP-1、猴MCP-1、人MCP-1、豬MCP-1、兔MCP-1、小鼠MCP-1、大鼠MCP-1)(其中不同形式的MCP-1通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程分別固定在PioneerFl和CM4傳感器芯片上)的結(jié)合，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖20顯示了Biacore2000傳感圖，其指明了鏡像異構(gòu)體181-A2-018與人MCP-1(其通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程固定在CM4傳感器芯片上)結(jié)合的K。值，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖21顯示了Biacore2000傳感圖，其指明了鏡像異構(gòu)體181-A2-018與人MCP-家族蛋白質(zhì)(huMCP-l、huMCP-2、huMCP-3)和人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(其通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程分別固定在PioneerFl和CM4傳感器芯片上)的結(jié)合，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖22顯示了Biacore2000傳感圖，其指明了鏡像異構(gòu)體181-A2-018與來(lái)自不同物種的MCP-l(犬MCP-1、猴MCP-1、人MCP-1、豬MCP-1、兔MCP-1、小鼠MCP-1、大鼠MCP-1)(其中不同形式的MCP-1通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程分別固定在PioneerFl和CM4傳感器芯片上)的結(jié)合，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖23顯示了來(lái)自不同哺乳動(dòng)物物種的MCP-1以及人MCP-2、MCP-3和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(僅位置1-76)的ClustalW比對(duì)；圖24A顯示了概括了N0X-E36和181-A2-018對(duì)于來(lái)自不同哺乳動(dòng)物物種的MCP-1以及人MCP-2、MCP-3和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子的結(jié)合特異性的表格；圖24B顯示了概括了通過(guò)Biacore分析測(cè)定的NOX-E36的選擇性的表格，其中生物素化的NOX-E36固定在傳感器芯片表面上，并且分析了一組各種CC和CXC趨化因子與NOX-E36的結(jié)合；圖24C顯示了通過(guò)Biacore分析測(cè)定的NOX-E36與趨化因子相互作用的動(dòng)力學(xué)分析，其中所述趨化因子共價(jià)固定在CM5傳感器芯片表面上并注射入各種濃度的NOX-E36,并且用BiaEvaluation軟件來(lái)分析NOX-E36的結(jié)合4亍為；圖24D顯示了用MIP-lot刺激的THP-1細(xì)胞的趨化性劑量-反應(yīng)曲線，半數(shù)有效濃度為約O.2nM;圖24E顯示了NOX-E36對(duì)于由MIP-1oci秀導(dǎo)的趨化性的抑制。N0X-E36對(duì)于由MIP-lct誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞的趨化性沒(méi)有影響；圖25顯示了鏡像異構(gòu)體NOX-E36-3，-PEG在釣釋放測(cè)定法中的效力；將細(xì)胞用與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36-3'-PEG在37'C下預(yù)孵育的3nM人MCP-l進(jìn)行刺激，表示為隨鏡像異構(gòu)體NOX-E36-3，-PEG濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖26顯示了鏡像異構(gòu)體NOX-E36-3，-PEG在趨化性測(cè)定法中的效力；讓細(xì)胞朝向與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36-3，-PEG在37。C下預(yù)孵育的0.5nM人MCP-1遷移，表示為隨NOX-E36-3，-PEG濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖27A顯示了鏡像異構(gòu)體NOX-E36-5，-PEG在鈣釋放測(cè)定法中的效力；將細(xì)胞用與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36-5，-PEG在37。C下預(yù)孵育的3nM人MCP-l進(jìn)行刺激，表示為隨鏡像異構(gòu)體NOX-E36-5，-PEG濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖27B顯示了鏡像異構(gòu)體NOX-E36-5，-PEG在趨化性測(cè)定法中的效力；讓細(xì)胞朝向與各種量的鏡像異構(gòu)體NOX-E36-5，-PEG在37'C下預(yù)孵育的0.5nM人MCP-1遷移，表示為隨鏡像異構(gòu)體NOX-E36-5，-PEG濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖28顯示了在THP-1細(xì)胞中由鼠MCP-1誘導(dǎo)的0&++-釋放，其中獲得了關(guān)于鼠MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，其中表明半數(shù)有效濃度(ECs。)為大約5nM，表示為隨鼠MCP-l濃度而變化的相對(duì)于空白的熒光差異；圖29顯示了抗-鼠MCP-1的鏡像異構(gòu)體mNOX-E36-3，-PEG在鈣釋放測(cè)定法中的效力；細(xì)胞用與各種量的鏡像異構(gòu)體raNOX-E36-3，-PEG在37。C下預(yù)孵育的3nM鼠MCP-1進(jìn)行刺激，表示為隨鏡像異構(gòu)體mNOX-E36-3，-PEG濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖30顯示了鼠MCP-1誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞的趨化性，其中在THP-1細(xì)胞朝向各種mMCP-l濃度遷移3小時(shí)后，獲得了關(guān)于mMCP-l的劑量-反應(yīng)曲線，表示為隨鼠MCP-1濃度而變化的相比于對(duì)照而言的X倍增加；圖31顯示了抗-鼠MCP-1的鏡像異構(gòu)體mNOX-E36-3，-PEG在趨化性測(cè)定法中的效力；讓細(xì)胞朝向與各種量的鏡4象異構(gòu)體mNOX-E36-3，-PEG在37。C下預(yù)孵育的0.5nM鼠MCP-1遷移，表示為隨抗-鼠的鏡像異構(gòu)體mNOX-E36-3，-PEG濃度而變化的對(duì)照的百分比；圖32顯示了Biacore2000傳感圖(sensorgram),其指明了適體D-mNOX-E36與鼠D-MCP-1(其通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程固定在PioneerFl傳感器芯片上)結(jié)合的L值，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖33顯示了Biacore2000傳感圖，其指明了適體D-mNOX-E36與人D-MCP-1和鼠D-MCP-1(其中所述兩種不同形式的D-MCP-1通過(guò)胺偶聯(lián)過(guò)程分別固定在PioneerFl和CM4傳感器芯片上)的結(jié)合，表示為隨時(shí)間而變化的響應(yīng)(RU);圖34顯示了24周齡的MRL'"'"小鼠的腎臟切片，其如所示的用過(guò)碘酸-希夫(PAS)、Mac-2(巨噬細(xì)胞)的抗體和CD3(T細(xì)胞)的抗體進(jìn)行染色；所述圖像是每個(gè)組中7-12只小鼠的代表(原始放大倍數(shù)PAS:xlOO,PAS插圖x400,Mac2:x400,CD3:xlOO);圖35顯示了表格，其圖解說(shuō)明了在不同組的24周齡的MRLlp"1IU小鼠中腎功能參數(shù)和組織學(xué)檢查結(jié)果；圖36顯示了組織學(xué)變化的定量，其通過(guò)在來(lái)自所有組的小鼠的銀染色切片上實(shí)施的形態(tài)計(jì)量法來(lái)進(jìn)行；A，間隙體積指數(shù)(interstitialvolumeindex);B，腎小管擴(kuò)張指數(shù)(tubulardilationindex);和C,腎小管細(xì)胞損傷指數(shù)(tubularcelldamageindex),被計(jì)算為高倍視野的百分比并表示成平均值±SEM;圖37顯示了通過(guò)Kaplan-Meier分析計(jì)算出的各個(gè)治療組的MRLW1"小鼠的存活；圖38顯示了CC-趨化因子CCL2和CCL5的腎mRNA表達(dá)，其通過(guò)使用從每個(gè)組的5只小鼠中匯集的總腎RNA經(jīng)實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)測(cè)定，其中每組小鼠的RNA水平按照各自的18SrRNA表達(dá)來(lái)表示；圖39顯示了通過(guò)用mNOX-E36-3，PEG進(jìn)行治療引起肺病理學(xué)減少；從24周齡的所有組中制備肺組織，并半定量地進(jìn)行評(píng)分；用mNOX-E36和m羅-E36-3，PEG進(jìn)行治療減少了MRL1^1"小鼠中的細(xì)支氣管周炎癥；所述圖像是每個(gè)組中7-11只小鼠的代表；原始放大倍數(shù)xlOO;圖40顯示了24周齡的MRi;pr"pr小鼠的皮膚狼瘡表現(xiàn)，其通常出現(xiàn)在面部或頸部區(qū)域(左邊的小鼠)，其在用抗-mCCL2鏡像異構(gòu)體治療的小鼠(右邊的小鼠)中較少發(fā)生；圖41顯示了在24周齡的MRL—一小鼠中血清和組織學(xué)檢查結(jié)果；圖42顯示了在該研究過(guò)程中在血漿中PEG化的和未PEG化的抗-mCCL2鏡像異構(gòu)體的藥物動(dòng)力學(xué)，表示為作為時(shí)間的函數(shù)的鏡像異構(gòu)體mNOX-E36的血漿濃度；圖43顯示了在24周齡的用媒介物治療的或用mNOX-E36-3，PEG-治療的MRL一一小鼠中在骨髓和外周血中的CCR2的流式細(xì)胞術(shù)；數(shù)據(jù)顯示為在每個(gè)組的5只小鼠中，在骨髓或外周血中CCR2陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分比±SEM;圖44顯示了在用PoC-PEG治療的(白色柱)和用mNOX-E36-3，PEG(mNOX-E36-P)治療的(黑色柱)IKdb/db小鼠中的血清CCL2水平，其在所示的不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)ELISA來(lái)測(cè)定；數(shù)據(jù)是平均值土SEM;*,p<0.05，m賺-E36-3，PEG(m廳-E36-P)對(duì)PoC-PEG;圖45顯示了在未治療的或者用POC-PEG或確切地說(shuō)mNOX-E36-3，PEG治療的db/db小鼠的腎小球和間質(zhì)中，Mac-2和Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞的浸潤(rùn)的數(shù)目；圖46顯示了在6個(gè)月大的db/db小鼠中的糖尿病性腎小球硬化；將來(lái)自不同組的小鼠的腎切片用過(guò)碘酸-希夫進(jìn)行染色，并對(duì)來(lái)自每個(gè)腎切片的15個(gè)腎小球就糖尿病性腎小球硬化的程度進(jìn)行評(píng)分；所述圖像顯示了分級(jí)至所示的各自得分的代表性腎小球，原始放大倍數(shù)為400x;所述解說(shuō)明了每個(gè)組(n=7-10)中所有小鼠的每個(gè)得分的平均百分比士SEM;*，p<0.05,用mNOX-E36-3，PEG(mNOX-E36-P)治療的1Kdb/db小鼠對(duì)用PoC-PEG(PoC-P)治療的IKdb/db小鼠；圖47顯示了在6個(gè)月大的用mNOX-E36-3，PEG(mNOX-E36-P)治療的和用PoC-PEG(PoC-P)治療的IKdb/db小鼠中的腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR);在所述研究的末期，在用PoC-PEG治療的和用mNOX-E36-3，PEG治療的IKdb/db小鼠中，通過(guò)FITC-菊粉清除動(dòng)力學(xué)來(lái)測(cè)定GFR;圖48顯示了6個(gè)月大的db/db小鼠的腎小管萎縮和間隙體積；銀染色的腎切片的圖像圖解說(shuō)明了來(lái)自各個(gè)組的代表性腎臟(原始放大倍數(shù)為100x);值表示每個(gè)組中的7-1Q只小鼠的各自形態(tài)計(jì)量分析指數(shù)的平均值士SEM;*，p<0.05，2Kdb/db對(duì)BKS野生型小鼠；#，p<0.05，IK對(duì)2Kdb/db小鼠；十，p<0.05，用mNOX—E36—3，PEG(mNOX-E36-PEG)治療的IKdb/db小鼠對(duì)用PoC-PEG治療的IKdb/db小鼠J圖49顯示了db/db小鼠的腎CCL2mRNA表達(dá)，其通過(guò)使用從每個(gè)組的6-10只小鼠中匯集的總腎RNA經(jīng)實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)測(cè)定；每組小鼠的mRM水平按照各自的18SrRNA表達(dá)來(lái)表示；和圖50顯示了如通過(guò)免疫染色所測(cè)定的在db/db小鼠腎臟中的空間CCL2表達(dá)；所述圖像圖解說(shuō)明了來(lái)自所示各個(gè)組的6個(gè)月大的小鼠的腎臟的代表性切片(原始放大倍數(shù)，200x)。實(shí)施例1:結(jié)合人MCP-1的核酸使用生物素化的人D-MCP-1作為靶標(biāo)，可以產(chǎn)生幾種結(jié)合人MCP-l的核酸，該核酸的核苷酸序列在圖1至7中描繪。這些核酸如下進(jìn)行表征采用使用生物素化的人D-MCP-l的竟?fàn)幮曰蛑苯觩ull-down測(cè)定法在適體(即D-核酸)水平上進(jìn)行表征(實(shí)施例4)，或者通過(guò)使用Biacore2000裝置進(jìn)行的表面等離子體共振測(cè)量法(實(shí)施例7)、體外細(xì)胞培養(yǎng)物0&++-釋放測(cè)定法(實(shí)施例5)或體外趨化性測(cè)定法(實(shí)施例6)在鏡像異構(gòu)體水平(即具有天然構(gòu)型的MCP-1(L-MCP)的L-核酸)上進(jìn)行<formula>formulaseeoriginaldocumentpage80</formula>表征。如此產(chǎn)生的核酸分子顯示出不同的序列基序，四種主要的類型在圖1和圖2(1A/1B型)、圖3(2型)、圖4和圖5(3型)以及圖6(4型)中定義。另外的不能相互相關(guān)并且不能與本文所描述的不同序列基序相關(guān)的結(jié)合MCP-1的核酸在圖7中列出。對(duì)于核苷酸序列基序的定義，使用了IUPAC縮寫以用于不確定的核苷酸S強(qiáng)G或C;A或U;G或A;C或U;G或U;A或C;C或U或G;A或G或U;A或C或U;A或C或G;A或G或C或U。如果未指明與此相反，則任何核酸序列或者序列段和盒的序列都分別以5，->3，的方向顯示。DHVN基非C非G非U全部7嫂潛，戶，雄f惑"如在圖1中所描繪的，所有1A型的結(jié)合MCP-1的核酸的序列都包含幾個(gè)序列段或盒，其中盒^]和^1是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段。然而，在該分子中并非一定給出這種雜交，如在生理?xiàng)l件下實(shí)際存在的。盒^、^j、B4、@和盒B6的側(cè)翼為盒^!]和盒采用使用生物素化的人D-MCP-1的直接和竟?fàn)幮詐ull-down測(cè)定法，在適體水平上表征這些核酸，以便根據(jù)它們的結(jié)合行為對(duì)它們進(jìn)行分級(jí)(實(shí)施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構(gòu)體(實(shí)施例3),呤咬基氨A嘌嘧酮亞非RYKMB并使用天然構(gòu)型的MCP-l(L-MCP)在體外細(xì)胞培養(yǎng)物Ca"-釋放測(cè)定法中進(jìn)行測(cè)試(實(shí)施例5)。所定義的盒的序列在1A型的結(jié)合MCP-1的核酸之間可能不同，這影響了對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力?；趯?duì)被概括為藝潛合M-7的裙^的不同的結(jié)合MCP-1的核酸所進(jìn)行的結(jié)合分析，如下描述的盒,B2、A義B4、B5、B6和B1B以及它們的核苷酸序列獨(dú)個(gè)地和更優(yōu)選地以其整體對(duì)于結(jié)合MCP-1來(lái)說(shuō)是必需的盒B1A和B1B是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段；其中B1A是AGCRUG，優(yōu)選AGCGUG;并且其中B1B是CRYGCU,優(yōu)選CACGCU盒M，其是CCCGGW，優(yōu)選CCCGGU;盒W,其是6W，優(yōu)選6W;盒B4，其是RYA，優(yōu)選GUA;盒幽，其是|GGGGGRCGCGAYC|，優(yōu)選|GGGGGGCGCGACC盒B6，其是UGCAAUAAUG或URYAWUUG，優(yōu)選UACAUUUG;如在圖1中所描繪的，稱為176-E10trc的核酸分子具有最好的對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力(在pull-down測(cè)定法中作為適體，L為5nM;以及在體外細(xì)胞培養(yǎng)物Ca++-釋放測(cè)定法中作為鏡像異構(gòu)體，IC5。為4-5nM)，并因此可以構(gòu)成最佳序列以及序列元件f^AB6和^]的最佳組合。B2、W、B4、B5M型潛合的核^廣窗W如在圖2中所描繪的，所有IB型的序列都包含幾個(gè)序列段或盒，其中盒B1A和BIB是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段，并且盒B2、"J、B4、B5和盒B6的側(cè)翼為盒B1A和盒B1B。然而，在該分子中并非一定給出這種雜交，如在生理?xiàng)l件下實(shí)際存在的采用使用生物素化的人D-MCP-1的直接和竟?fàn)幮詐ull-down測(cè)定法，在適體水平上表征這些核酸，以便根據(jù)它們的結(jié)合行為對(duì)它們進(jìn)行分級(jí)(實(shí)施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構(gòu)體(實(shí)施例3)，并使用天然構(gòu)型的MCP-1(L-MCP)在體外細(xì)胞培養(yǎng)物〔&++-釋放測(cè)定法中進(jìn)行測(cè)試(實(shí)施例5)。所定義的盒的序列在1B型的結(jié)合MCP-1的核酸之間可能不同，這影響了對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力?；趯?duì)被概括為#裙凝的不同的結(jié)合MCP-1的核酸所進(jìn)行的結(jié)合分析，如下描述的盒B1AB2、W、B4、B5B6和^J以及它們的核苷酸序列獨(dú)個(gè)地和更優(yōu)選地以其整體對(duì)于結(jié)合MCP-1來(lái)說(shuō)是必需的盒pTX]和fi，，其可以相互雜交；其中^H是|agyrug|，優(yōu)選AGCGUG;并且B1B是CAYRCU，優(yōu)選CACGCU盒M，其是CCAGCU或CCAGY，優(yōu)選CCAGU;盒^，其是f"〖；盒B4，其是AUG;盒B5，其是iggggggcgcgacc，盒B6，其是CAUUUUA或CAUUUA，優(yōu)選CAUUUUA。如在圖2中所描繪的，稱為176-C9trc的核酸具有最好的對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力(在pull-down測(cè)定法中作為適體，K。為5nM;以及在體外細(xì)胞培養(yǎng)物03++-釋放測(cè)定法中作為鏡像異構(gòu)體，ICs。為4-5nM)，并因此可以構(gòu)成最佳序列以及序列元件^、B2、萬(wàn)J、B4、網(wǎng)、B6和B1B的最佳組合,2型潛合f677-/^核凝"如在圖3中所描繪的，所有2型的序列都包含幾個(gè)序列段或盒，其中盒l(wèi)BU!和IB1BJ是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段，并且盒l(wèi)l是中心的序列元件。然而，在該分子中并非一定給出這種雜交，如在生理?xiàng)l件下實(shí)際存在的。采用使用生物素化的人D-MCP-1的直接和竟?fàn)幮詐ull-down測(cè)定法，在適體水平上表征這些核酸，以便根據(jù)它們的結(jié)合行為對(duì)它們進(jìn)行分級(jí)(實(shí)施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構(gòu)體(實(shí)施例3)，并使用天然構(gòu)型的MCP-1(L-MCP)在體外細(xì)胞培養(yǎng)物Ca++-釋放測(cè)定法(實(shí)施例5)或體外趨化性測(cè)定法(實(shí)施例6)中進(jìn)行測(cè)試。所定義的盒的序列在3型的結(jié)合MCP-1的核酸之間可能不同，這影響了對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力。基于對(duì)被概括為2^潛合,戶-7^^"教的不同的結(jié)合MCP-1的核酸所進(jìn)行的結(jié)合分析，如下描述的盒B1A^_和阿司以及它們的核苷酸序列獨(dú)個(gè)地和更優(yōu)選地以其整體對(duì)于結(jié)合MCP-1來(lái)說(shuō)是必需的,盒目和CT，其是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段；其中Ibia!是|acgca|而Ibib!是|ugcgu|，或者!biaI是|cgca|而IbibI是,cg或者^(guò)H]是^T1而Iugcg|或網(wǎng);優(yōu)選地，^T^是^^而B(niǎo)1B是UGCG盒M，其是CSUCCCUCACCGGUGCAAGUGAAGCCGYGGCUC，優(yōu)選CGUCCCUCACCGGUGCAAGUGAAGCCGUGGCUC。如在圖3中所描繪的，稱為180-D1-002的核酸以及180-D1-002的衍生物例如180-Dl-Oll、180-D1-012、180-D1-035和180-D1-036(=N0X-E36)具有最好的對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力(在pull-down測(cè)定法或竟?fàn)幮詐ull-down測(cè)定法中作為適體，KD<1nM)，并因此可以構(gòu)成最佳序列以及序列元件^、^_和^]的最佳組合。對(duì)于核酸分子D-NOX-E36(D-180-Dl-036;SEQ.IDNO.159)，測(cè)得解離常數(shù)(KD)在室溫(RT)下為890±65pM而在W。C下為l"士13pM(實(shí)施例4;圖9)。相應(yīng)的鏡像異構(gòu)體NOX-E36(180-D1-036;SEQ.IDNO.37)在體外Ca"-釋放測(cè)定法中顯示出3-4nM的抑制濃度(ICs。)(實(shí)施例5;圖12)，和在體外趨化性測(cè)定法中顯示出約0.5nM的抑制濃度(IC5。)(實(shí)施例6;圖15)。對(duì)于NOX-E36的PEG化的衍生物麗-E36-3，PEG和NOX-E36-5，PEG,在0&++-釋放測(cè)定法中測(cè)定出約3nM的IC5。(實(shí)施例5;圖25和圖27A)，和在趨化性測(cè)定法中測(cè)定出<1nM的IC5Q(實(shí)施例6;圖26和圖27B)。J型趁合M:戶-J的核^f^如在圖4和圖5中所描繪的，所有3型的序列包含幾個(gè)序列段或盒，其中三對(duì)盒是J型潛合MY-7的核凝所特征性的。盒B1A和B1B以及盒B2A和B2B以及盒B5A和B5B具有相互雜交的能力。然而，在該分子中并非一定給出這種雜交，如在生理?xiàng)l件下實(shí)際存在的。非雜交性核苷酸位于這些可能雜交的序列元件之間，其被定義為盒萬(wàn)J、盒B4和盒Ib因。采用使用生物素化的人D-MCP-1的直接和竟?fàn)幮詐ull-down測(cè)定法，在適體水平上表征這些核酸，以便根據(jù)它們的結(jié)合行為對(duì)它們進(jìn)行分級(jí)(實(shí)施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構(gòu)體(實(shí)施例3)，并使用天然構(gòu)型的MCP-1(L-MCP)在體外趨化性測(cè)定法(實(shí)施例6)中或通過(guò)Biacore測(cè)量法(實(shí)施例7)進(jìn)行測(cè)試。所定義的盒的序列在3型的結(jié)合MCP-1的核酸之間可能不同，這影響了對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力?；趯?duì)被概括為J型潛合M/W^裙^的不同的結(jié)合MCP-1的核酸所進(jìn)行的結(jié)合分析，如下描述的盒B1AB2A、W、B2B、B4、B5A、B6B5B、B1B以及它們的核苷酸序列獨(dú)個(gè)地和更優(yōu)選地以其整體對(duì)于結(jié)合MCP-1來(lái)說(shuō)是必需的其是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段；盒B1A和B1B其中B1A是GURCUGC而B(niǎo)1B是GCAGCAC;優(yōu)選地，B1A是GUGCUGC而B(niǎo)1B是GCAGCAC或者B1A是GKSYGC而B(niǎo)1B是GCRSMC;優(yōu)選地，B1A是GUGCGC而B(niǎo)1B是GCGCAC或者B1A是KBBSC而B(niǎo)1B是GSVVM;優(yōu)選地，B1A是KKSSC而B(niǎo)1B是GSS固或者BU是BNGC而B(niǎo)1B是GCNV;優(yōu)選地，B1A是SNGC而B(niǎo)1B是G^l;最優(yōu)選地，^TX^^^]而^TJ]是盒B2A和B2B，其是可以相互雜交的序列段；其中B2A是GKMGU而B(niǎo)2B是ACKMC;優(yōu)選地，B2A是GUAGU而B(niǎo)2B是ACUAC;盒"J，其是ifi^M,優(yōu)選或W6^;盒B4,其是CURYGA或CUWAUGA或CWRMGACW或UGCCAGUG，優(yōu)選CAGCGACU或CAACGACU;B5A和B5B，其是可以相互雜交的序列段；其中B5A是GGY而B(niǎo)5B是GCYR,其中GCY可以與B5A的核苷酸雜交；或者B5A是CWGC而B(niǎo)5B是GCWG;優(yōu)選地，B5A是GGC而B(niǎo)5B是GCCG;盒B6，其是|YAGA|或ICKAAU威|CCUUUAU|，優(yōu)選歸入|。如在圖4和圖5中所描繪的，稱為178-D5的核酸及其衍生物178-D5-030以及稱為181-A2的核酸及其衍生物181-A2-002、181-A2-004、181-A2-005、181-A2-006、181-A2-007、181-A2-017、181-A2-018、181-A2-019、181-A2-020、181-A2-021和181-A2-023具有最好的對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力。178-D5和178-D5-030在直接或竟?fàn)幮詐ul卜down測(cè)定法中作為適體進(jìn)行評(píng)估(實(shí)施例4)，其K。為約500pM。在相同的實(shí)驗(yàn)設(shè)置下，測(cè)定出181-A2的K。約100pM。通過(guò)Biacore分析(實(shí)施例7)，181-A2及其衍生物對(duì)于MCP-1的K。經(jīng)測(cè)定為200-300pM。在使用培養(yǎng)細(xì)胞的0&++釋放測(cè)定法和趨化性測(cè)定法(分別為實(shí)施例5和6)中，測(cè)得178-D5和181-A2兩者的I"為約500pM。因此，178-D5和181-A2以及它們的衍生物可以構(gòu)成最佳序列以及序列元件B1A、墜、AJ、，、B4、B5A、B6、B5B和B1B的最佳組合4型潛合#67^-7^M,凝f溶^如在圖6中所描繪的，所有4型的序列都包含幾個(gè)序列段或盒:其中盒^]和^是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段，并且盒^_是中心的序列元件。采用使用生物素化的人D-MCP-1的直接pul卜down測(cè)定法，在適體水平上表征這些核酸，以便根據(jù)它們的結(jié)合行為對(duì)它們進(jìn)行分級(jí)(實(shí)施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構(gòu)體(實(shí)施例3)，并使用天然構(gòu)型的MCP-l(L-MCP)在體外細(xì)胞培養(yǎng)物Ca"-釋放測(cè)定法(實(shí)施例5)和/或趨化性測(cè)定法(實(shí)施例6)中進(jìn)行測(cè)試。所定義的盒的序列在4型的結(jié)合MCP-1的核酸中可能不同，這影響了對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力。基于對(duì)被概括為4型潛合州，-2的核凝的不同的結(jié)合mcp-i的核酸所進(jìn)行的結(jié)合分析，如下描述的盒^n^i和,以及它們的核苷酸序列獨(dú)個(gè)地和更優(yōu)選地以其整體對(duì)于結(jié)合MCP-1來(lái)說(shuō)是必需的其是可以相互雜交的5，-和3，-末端序列段；盒B1A和B1B其中BlA是AGCGUGDU而B(niǎo)IB是GNCASGCU;或者B1A是GCGCGAG而B(niǎo)IB是CUCGCGUC;或者BIA是CSKSUU而B(niǎo)IB是GRSMSG;或者BIA是GUGUU而^Ti]是lGRCACl;或者^(guò)TI1是|UGUU|而^是GGCA|;優(yōu)選地，BIA是CSKSUU而B(niǎo)IB是GRSMSG;最優(yōu)選的BIA是CCGCUU而B(niǎo)IB是GGGCGG以及盒B2，其是AGNDRDGBKGGURGYARGUAAAG或AGGUGGGUGGUAGUAAGUAAAG或CAGGUGGGUGGUAGAAUGUAAAGA,優(yōu)選AGGUGGGUGGUAGUAAGUAAAG。如在圖6中所描述的，稱為174-D4-004和166-A4-002的核酸具有最好的對(duì)MCP-1的結(jié)合親和力(在體外細(xì)胞培養(yǎng)物Ca—釋放測(cè)定法中作為鏡像異構(gòu)體，ICs。為2-5nM),并因此可以構(gòu)成最佳序列以及序列元件^、^_和pll司的最佳組合。另夕卜，鑒定了29個(gè)其他的結(jié)合MCP-1的核酸，它們不能通過(guò)已對(duì)于1-4型結(jié)合MCP-1的核酸而顯示的核苷酸序列元件的組合來(lái)描述。這些序列在圖7中列出。應(yīng)當(dāng)理解，任何在圖1至圖7中顯示的序列都是根據(jù)本發(fā)明的核酸，包括它們的那些截短形式，而且還包括它們的那些延伸形式，但是條件是各自如此截短和延伸的核酸分子仍然能夠結(jié)合靶標(biāo)。實(shí)施例2:結(jié)合鼠MCP-1的核酸使用生物素化的鼠D-MCP-1作為靶標(biāo)，可以產(chǎn)生幾種與之結(jié)合的核酸分子。這些核酸分子的序列分析的結(jié)果可從圖8中獲得。采用使用生物素化的鼠D-MCP-1的pull-down測(cè)定法，在適體水平上表征這些核酸，以便根據(jù)它們的結(jié)合行為對(duì)它們進(jìn)行分級(jí)(實(shí)施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構(gòu)體(實(shí)施例3),并使用天然構(gòu)型的MCP-1(L-MCP)在體外細(xì)胞培養(yǎng)物Ca++-釋放測(cè)定法(實(shí)施例5)或趨化性測(cè)定法(實(shí)施例6)中進(jìn)行測(cè)試。如在圖8中所描繪的，D-188-A3-001和D-189-G7-001以及它們的衍生物在pu11-down測(cè)定法中以亞納摩爾濃度的KD結(jié)合D-MCP-1(圖8)。對(duì)于D-mNOX-E36(=D-188-A3-007;SEQ.IDNO.244)，測(cè)得在37。C下解離常數(shù)(Kd)為0.1-0.2nM(實(shí)施例4;圖10)。相應(yīng)的鏡像異構(gòu)體mNOX-E36(188-A3-007;SEQ.IDNO.122)在體外Ca++-釋放測(cè)定法中顯示出約12nM的抑制濃度(ICs。)(實(shí)施例5;圖13),和在體外趨化性測(cè)定法中顯示出約7nM的抑制濃度(IC5。)(實(shí)施例6;圖16)。對(duì)于mNOX-E36的PEG化的衍生物m醒-E36-3，PEG(SEQ.IDNO.254),在Ca"-釋放測(cè)定法中測(cè)定出約8nM的IC;。(實(shí)施例5;圖29)，和在趨化性測(cè)定法中測(cè)定出約3nM的IC5。(實(shí)施例6;圖31)。應(yīng)當(dāng)理解，任何在圖1至圖7中顯示的序列都是根據(jù)本發(fā)明的核酸，包括它們的那些截短形式，而且還包括它們的那些延伸形式，但是條件是各自如此截短和延伸的核酸分子仍然能夠結(jié)合靶標(biāo)。實(shí)施例3:適體和鏡像異構(gòu)體的合成和衍生化小規(guī)模合成利用2，TBDMSRNA亞磷酰胺化學(xué)(M.J.Damha，K丄Ogilvie，MethodsinMolecularBiology,Vol.20Protocolsforoligonucleotidesandanalogs,ed.S.Agrawal，p.81—114，HumanaPressInc.1993)，使用ABI394合成儀(AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity,CA，USA),通過(guò)固相合成來(lái)制備適體和鏡像異構(gòu)體。D-和L-構(gòu)型的rA(N-Bz)-、rC(Ac)-、rG(N-ibu)-和rll-亞碌酰胺購(gòu)自ChemGenes，Wilmington,MA。適體和鏡像異構(gòu)體通過(guò)凝膠電泳進(jìn)行純化。大規(guī)模合成加修飾利用2，TBDMSRNA亞磷酰胺化學(xué)(M.J.Damha，K.K.Ogilvie，MethodsinMolecularBiology,Vol.20Protocolsforoligonucleotidesandanalogs,ed.S.Agrawal，p.81-114,HumanaPressInc.1993)，使用AktaPilotlOO合成儀(AmershamBiosciences;GeneralElectricHealthcare,Freiburg),通過(guò)固相合成來(lái)制備鏡像異構(gòu)體NOX-E36。L-rA(N-Bz)-、L-rC(Ac)-、L-rG(N-ibu)-和L-rU-亞磷酰胺購(gòu)自ChemGenes，Wilmington,MA。5，-氨基-修飾劑購(gòu)自AmericanInternationalChemicalsInc.(Framingham，MA，USA)。未修飾的鏡像異構(gòu)體的合成開(kāi)始于L-riboG修飾的CPG,孔徑為1000A(LinkTechnology,Glasgow,UK);對(duì)于3，-NH2-修飾的鏡像異構(gòu)體，使用3，-氨基修飾劑-CPG，1000A(ChemGenes，Wilmington,MA)。對(duì)于偶聯(lián)(每次循環(huán)15分鐘)，使用0.3M在乙腈中的芐硫基四唑(CMS-Chemicals,Abingdon,UK)和3.5當(dāng)量的各自Q.1M在乙腈中的亞磷酰胺溶液。使用氧化封端循環(huán)。其他用于寡核苷酸合成的標(biāo)準(zhǔn)'溶劑和試劑購(gòu)自Biosolve(Valkenswaard，NL)。合成鏡i象異構(gòu)體，DMT-ON;在去保護(hù)后，使用Sourcel5RPC介質(zhì)(Amersham)，通過(guò)制備型RP-HPLC(WincottF等人,(1995)#"c/e/cJc油b23:2677)進(jìn)行純化。用80%乙酸除去5，DMT-基團(tuán)(在室溫下30分鐘)。隨后，加入2MNaOAc水溶液，并使用5K再生纖維素膜(Mi11ipore，Bedford,MA)通過(guò)切向流過(guò)濾來(lái)對(duì)鏡像異構(gòu)體進(jìn)行脫鹽。NOX-E36的PEG化為了延長(zhǎng)鏡像異構(gòu)體在體內(nèi)的血漿停留時(shí)間，將鏡像異構(gòu)體N0X-E36在3，-末端或5，-末端處共價(jià)偶聯(lián)至40kDa聚乙二醇(PEG)部分。NOX-E36的3，-PEG化為了PEG化(關(guān)于PEG化方法的技術(shù)細(xì)節(jié)，可參見(jiàn)歐洲專利申請(qǐng)EP1306382)，將純化的3，-氨基修飾的鏡像異構(gòu)體溶解于H20(2.5ml)、DMF(5ml)和緩沖液A(5ml;通過(guò)混合檸檬酸"20[7g]、硼酸[3.54g]、磷酸[2.26ml]和1MNaOH[343加1]并加入1120以達(dá)到1L的終體積來(lái)制備；用1MHCl調(diào)節(jié)pH-8.4)的混合物中。用1MNaOH使鏡像異構(gòu)體溶液的pH達(dá)到8.4。然后，在37'C下以4份(每份0.6當(dāng)量)每30分鐘添加40kDaPEG-NHS酯(NektarTherapeutics,Huntsville，AL),直至達(dá)到75至85%的最大收率。在添加PEG-NHS酯的過(guò)程中，用1MNaOH將反應(yīng)混合物的pH保持在8-8.5。將該反應(yīng)混合物與4ml尿素溶液(8M)、4ml緩沖液A和4ml緩沖液B(0.1M的在H20中的乙酸三乙基銨)混合，并加熱至95。C15分鐘。然后，釆用乙腈梯度(緩沖液B;緩沖液C:0.IM的在乙腈中的乙酸三乙基銨)，使用Source15RPC介質(zhì)(Amersham)，通過(guò)RP-HPLC來(lái)純化PEG化的鏡像異構(gòu)體。在5%緩沖液C處洗脫過(guò)量的PEG,在10-15%緩沖液C處洗脫P(yáng)EG化的鏡像異構(gòu)體。將純度>95%(這通過(guò)HPLC來(lái)評(píng)估)的產(chǎn)物級(jí)分合并，并與40ml3MNaOAC相混合。通過(guò)切向流過(guò)濾(5K再生纖維素膜，MUlipore，BedfordMA)對(duì)PEG化的鏡像異構(gòu)體進(jìn)行脫鹽。NOX-E36的5，-PEG化為了PEG化(關(guān)于PEG化方法的技術(shù)細(xì)節(jié)，可參見(jiàn)歐洲專利申請(qǐng)EP1306382)，將純化的5，-氨基修飾的鏡像異構(gòu)體溶解于H20(2.5ml)、DMF(5ml)和緩沖液A(5ml;通過(guò)混合檸檬酸*1120[7g]、硼酸[3.54g]、磷酸[2.26ml]和1MNaOH[343ml]并加入水以達(dá)到1L的終體積來(lái)制備；用1MHCl調(diào)節(jié)pH=8.4)的混合物中。用1MNaOH使鏡像異構(gòu)體溶液的pH達(dá)到8.4。然后，在37C下以6份(每份0.25當(dāng)量)每30分鐘添加40kDaPEG-NHS酯(NektarTherapeutics,Huntsville,AL),直至達(dá)到75至85%的最大收率。在添加PEG-NHS酯的過(guò)程中，用1MNaOH將反應(yīng)混合物的pH保持在8-8.5。將該反應(yīng)混合物與4ml尿素溶液(8M)和4ml緩沖液B(0.1M的在H20中的乙酸三乙基銨)混合，并加熱至95C15分鐘。然后，采用乙腈梯度(緩沖液B;緩沖液C:0.1M的在乙腈中的乙酸三乙基銨)，使用Source15RPC介質(zhì)(Amershara)，通過(guò)RP-HPLC來(lái)純化PEG化的鏡像異構(gòu)體。在5。/。緩沖液C處洗脫過(guò)量的PEG,在10-15%緩沖液C處洗脫P(yáng)EG化的鏡像異構(gòu)體。將純度>95%(這通過(guò)HPLC來(lái)評(píng)估)的產(chǎn)物級(jí)分合并，并與40ml3MNaOAC相混合。通過(guò)切向流過(guò)濾(5K再生纖維素膜，MiUipore，BedfordMA)對(duì)PEG化的鏡像異構(gòu)體進(jìn)行脫鹽。實(shí)施例4:結(jié)合常數(shù)的測(cè)定(Pull-Down測(cè)定法)直接pul卜down觀'J定法分別在20或37。C下，在pull-down測(cè)定法中測(cè)量適體對(duì)D-MCP-1的親和力。使用[y-32p]-標(biāo)記的ATP(HartmannAnalytic,Braunschweig,Germany),通過(guò)T4多核苷酸激酶(Invitrogen，Karlsruhe,Germany)對(duì)適體進(jìn)行5，-磷酸標(biāo)記。經(jīng)標(biāo)記的適體的比;改射性為200，000-800，000cpm/pmol。在變性和復(fù)性后將適體在37。C下以20pM的濃度與不同量的生物素化的D-MCP-1—起于選擇緩沖液(20mMTris-HClpH7.4;137mMNaCl;5mMKC1;1mMMgCl2;1mMCaCl2;0.1%[w/vol]Tween-20)中孵育4-12小時(shí)以便在低濃度下達(dá)到平衡。用10ng/ml人血清白蛋白(Sigma-Aldrich，Steinheim，Germany)和10jng/ml酵母RNA(Ambion，Austin,USA)補(bǔ)充選擇緩沖液，以便防止結(jié)合伴侶吸附至所使用的塑料器具或固定基質(zhì)的表面。生物素化的D-MCP-1的濃度范圍被設(shè)定為8pM至lOOnM;總反應(yīng)體積為1ml。將肽和肽-適體復(fù)合物固定在1.5jalStreptavidinUltralinkPlus顆粒(PierceBiotechnology,Rockford，USA)上，所述顆粒已用選擇緩沖液預(yù)平衡并重懸于6pl的總體積中。顆粒在相應(yīng)的溫度下于熱混勻器中保持懸浮30分鐘。在分離上清液并適當(dāng)洗滌后，在閃爍計(jì)數(shù)器中對(duì)固定的放射性進(jìn)行定量。將結(jié)合百分比對(duì)生物素化的D-MCP-1的濃度進(jìn)行繪圖，并且通過(guò)使用軟件算法(GRAFIT;ErithacusSoftware;SurreyU丄)并假定1:1的化學(xué)計(jì)量來(lái)獲得解離常數(shù)。竟?fàn)幮詐ull-down測(cè)定法為了比較不同的結(jié)合D-MCP-1的適體，實(shí)施竟?fàn)幮苑旨?jí)測(cè)定法。為達(dá)到此目的，將可獲得的最具親和力的適體進(jìn)行放射性標(biāo)記(參見(jiàn)上文)并用作參考。在變性和復(fù)性后，將它在一定的條件下于37。C與生物素化的D-MCP-1在1ml選擇緩沖液中進(jìn)行孵育，所述條件導(dǎo)致在NeutrAvidin瓊月旨糖或StreptavidinUltralinkPlus(兩者都來(lái)自Pierce)上固定和洗滌之后大約5-10%的與所述肽的結(jié)合(無(wú)竟?fàn)?。將過(guò)量的變性和復(fù)性的未標(biāo)記的D-RNA適體變體以不同的濃度(如2、10和50nM)與經(jīng)標(biāo)記的參考適體一起加入，以便進(jìn)行平行的結(jié)合反應(yīng)。待檢測(cè)的適體與參考適體竟?fàn)幗Y(jié)合靶標(biāo)，從而減少了結(jié)合信號(hào)，信號(hào)減少的情況取決于它們的結(jié)合特征。在該測(cè)定法中發(fā)現(xiàn)的最具活實(shí)施例5:Ca++-釋放測(cè)定法中抑制濃度的測(cè)定將THP-1細(xì)胞(DSMZ，Braunschweig)以0.3x106/ml的細(xì)胞密度，在37。C和5%C。2下，在具有GlutaMAX(Invitrogen)的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)過(guò)夜，該培養(yǎng)基另外還含有10%胎牛血清、50單位/ml青霉素、50Mg/ml鏈霉素和50uM巰基乙醇。于37。C在0.2ml薄型(lowprofile)96-管板中，在Hanks平衡鹽溶液(HBSS)中將鏡像異構(gòu)體與重組人MCP-1(Bachem)—起孵育15至60分鐘，所述Hanks平衡鹽溶液含有1mg/ml牛血清白蛋白、5mM丙磺舒和20mMHEPES(HBSS+)("刺激溶液")。為了用鈣指示劑染料進(jìn)行加載，將細(xì)胞以300xg離心5分鐘，重懸于4ml指示劑染料溶液(10|aMfluo-4[分子探針]、0.08%pluronic127[分子探針],于HBSS+中)中，并在37TC下孵育60分鐘。隨后，加入llmlHBSS+，并如上所述離心細(xì)胞，用15mlHBSS+洗滌一次，然后再重懸于HBSS+中以使細(xì)胞密度為1.1x107ml。向黑色96-孔板的每個(gè)孔中加入90ju1該細(xì)胞懸浮液。在FluostarOptima多檢測(cè)平板讀取器(BMG)中以485nm的激發(fā)波長(zhǎng)和520rnn的發(fā)射波長(zhǎng)測(cè)量熒光信號(hào)。對(duì)于多個(gè)樣品的平行測(cè)量，同時(shí)記錄96-孔平板的(垂直的)一排孔。進(jìn)行時(shí)間延遲為4秒的最初3次讀取以用于確定基線。然后，中斷記錄，并將平板從該裝置中取出。用多道移液器將lOn1刺激溶液加入孔中，然后將平板再次移進(jìn)裝置中并繼續(xù)測(cè)量?？偣?，進(jìn)行時(shí)間間隔為4秒的20次記錄。對(duì)于每個(gè)孔，測(cè)定最大熒光值和基線值之間的差異，并對(duì)MCP-1濃度進(jìn)行繪圖，或者在關(guān)于由鏡像異構(gòu)體抑制鈣釋放的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)鏡像異構(gòu)體的濃度進(jìn)行繪圖。人MCP-1的半數(shù)最大有效濃度(EC5。)的測(cè)定在用各種濃度的hMCP-1刺激THP-1細(xì)胞并將最大信號(hào)和基線信號(hào)之間的差異進(jìn)行繪圖后，獲得了人MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，其表明半數(shù)有效濃度(EC5Q)為約2-4nM(圖11)。該濃度被用于進(jìn)一步的關(guān)于由鏡像異構(gòu)體抑制Ca"-釋放的實(shí)驗(yàn)。鼠MCP-1的半數(shù)最大有效濃度(EC5。)的測(cè)定在用各種濃度的mMCP-1刺激THP-1細(xì)胞并將最大信號(hào)和基線信號(hào)之間的差異進(jìn)行繪圖后，獲得了鼠MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，其表明半數(shù)有效濃度(EC5。)為約5riM(圖28)。該濃度被用于進(jìn)一步的關(guān)于由鏡像異構(gòu)體抑制Ca++-釋放的實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例6:在趨向性測(cè)定法中抑制濃度的測(cè)定將如上所述進(jìn)行生長(zhǎng)的THP-1細(xì)胞離心，在HBH(HBSS,含有1mg/ml牛血清白蛋白和20mMHEPES)中洗滌一次，并以3x106個(gè)細(xì)胞/ml進(jìn)行重懸浮。將100ja1該懸浮液加入具有5iam孑L的Transwell插入物(inserts)(Corning,#3421)中。在較低的區(qū)室中，在加入細(xì)胞之前，將MCP-1與各種濃度的鏡像異構(gòu)體一起于37。C在600jli1HBH中預(yù)孵育20至30分鐘。允許細(xì)胞在37。C下遷移3小時(shí)。隨后，移去插入物，并將60jul在磷酸鹽緩沖鹽水中的440juM刃天青(Sigma)加入至較低的區(qū)室中。在37。C下賻育2.5小時(shí)后，在FluostarOptima多檢測(cè)平板讀取器(BMG)中以544mn的激發(fā)波長(zhǎng)和590nm的發(fā)射波長(zhǎng)測(cè)量焚光。人MCP-1的半數(shù)最大有效濃度(EC5Q)的測(cè)定在THP-1細(xì)胞向各種濃度的人MCP-1遷移3小時(shí)后，獲得了人MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，其表明最大有效濃度為約1nM，并且在更高的濃度時(shí)活性減少(圖14)。對(duì)于進(jìn)一步的關(guān)于由鏡像異構(gòu)體抑制趨化性的實(shí)驗(yàn)，使用的MCP-1濃度為0.5nM。鼠MCP-1的半數(shù)最大有效濃度(EC5。)的測(cè)定在THP-1細(xì)胞向各種濃度的鼠MCP-1遷移3小時(shí)后，獲得了鼠MCP-1的劑量-反應(yīng)曲線，其表明最大有效濃度為約l-3nM，并且在更高的濃度時(shí)活性減少(圖30)。對(duì)于進(jìn)一步的關(guān)于由鏡像異構(gòu)體抑制趨化性的實(shí)驗(yàn)，使用的鼠MCP-l濃度為0.5nM。實(shí)施例7:通過(guò)表面等離子體共振測(cè)量進(jìn)行的結(jié)合分析7.1評(píng)估NOX-E36、181-A2-018和mNOX-E36的特異性使用Biacore2000裝置(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)來(lái)分析核酸與人MCP-1和相關(guān)蛋白質(zhì)的結(jié)合。當(dāng)偶聯(lián)通過(guò)胺基團(tuán)來(lái)實(shí)現(xiàn)時(shí)，將蛋白質(zhì)逆水透析1-2小時(shí)(MilliporeVSWP混合的纖維素酯；孔尺寸為0.025jaM)以去除干擾性的胺。在蛋白質(zhì)偶聯(lián)之前，通過(guò)以5ja1/分鐘的流速注射35m10.4MNHS和0.1MEDC的1:1稀釋物來(lái)活化PioneerFl或CM4傳感器芯片(BiacoreAB)。然后以2jj1/分鐘的流速注射入濃度為Q.1-1.5pg/ml的趨化因子，直到裝置的響應(yīng)在1000-2000RU(相對(duì)單位)的范圍內(nèi)。通過(guò)以5ja1/分鐘的流速注射35jn1鹽酸乙醇胺溶液(pH8.5)來(lái)使未反應(yīng)的NHS酯去活化。將傳感器芯片用結(jié)合緩沖液預(yù)處理兩次，并以lOn1/分鐘平衡1-2小時(shí)直到基線看起來(lái)穩(wěn)定。對(duì)于所有蛋白質(zhì)，通過(guò)一系列在選擇緩沖液(Tris-HCl，20mM;NaCl，137mM;KC1，5raM;CaCl2，1mM;MgCl2,1mM;Tween20,0.1%[w/v];pH7.4)中濃度為1000、500、250、125、62.5、31.25和0nM的鏡4象異構(gòu)體注射液來(lái)評(píng)估動(dòng)力學(xué)參數(shù)和解離常數(shù)。在所有實(shí)驗(yàn)中，在37。C下用Kinject命令來(lái)進(jìn)行分析，所述命令定義了在10ju1/分鐘的流速下締合時(shí)間為180秒而解離時(shí)間為360秒。數(shù)據(jù)分析和解離常數(shù)(Kd)的計(jì)算采用BIAevaluation3.0軟件(BIACOREAB,Uppsala,Sweden)來(lái)進(jìn)行，其使用了Langmuir1:1化學(xué)計(jì)量擬合算法。7.1.1NOX-E36和181-A2-018(人-MCP-1特異性核酸)僅對(duì)于人MCP-1,描述了所有的傳感圖(分別為圖17和20);對(duì)于其他蛋白質(zhì)，為了清晰的目的，只顯示了使用125nM鏡像異構(gòu)體濃度獲得的傳感圖(圖18/19和21/22)。NOX-E36hMCP-l相互作用的分析將重組人MCP-1按照生產(chǎn)商的建議(胺偶聯(lián)方法)固定在PioneerFl傳感器芯片上，直到建立1381RU(相對(duì)單位)的儀器響應(yīng)。測(cè)得的NOX-E36與人MCP-1結(jié)合的解離常數(shù)(Kd)為約890pM(圖17)。181-A2-018hMCP-1相互作用的分析將重組人MCP-1按照生產(chǎn)商的建議(胺偶聯(lián)方法)固定在CM4傳感器芯片上，直到建立3111RU(相對(duì)單位)的儀器響應(yīng)。測(cè)得的181-A2-018與人MCP-1結(jié)合的解離常數(shù)(Kd)為約370pM(圖20)。為了測(cè)定NOX-E36和181-A2-018的特異性，將各種人MCP-1家族蛋白質(zhì)以及人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子固定在PioneerFl和CM4傳感器芯片上(跳P-1,1754RU;hMCP-2，1558RU;hMCP-3，1290RU;嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子，1523RU)。動(dòng)力學(xué)分析顯示，NOX-E36以5-10nM的解離常數(shù)(K。)結(jié)合至嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子和hMCP-2;hMCP-3不被識(shí)別(圖18和24A)。與之相反，181-A2-018結(jié)合嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、hMCP-2和hMCP-3，但是親和力略有降低(10-20nM;圖21和24A)。使用在PioneerFl和CM4傳感器芯片上的經(jīng)胺偶聯(lián)固定的來(lái)自人(1460RU)、猴(1218RU)、豬(1428RU)、狗(1224RU)、兔(1244RU)、大鼠(1267RU)和小鼠(1361RU)的MCP-1來(lái)評(píng)估NOX-E36和181-A2-018的物種間交叉反應(yīng)性。動(dòng)力學(xué)分析顯示，N0X-E36以相當(dāng)?shù)?.89-1.2nM的解離常數(shù)(K。)結(jié)合至人、猴、豬和犬MCP-1，但是不識(shí)別來(lái)自小鼠、大鼠和兔的MCP-1(圖19和24A)。181-A2-018以相當(dāng)?shù)?.5-0.6nM的解離常數(shù)(KD)結(jié)合至人和猴MCP-1，但是以低得多的親和力結(jié)合豬、兔和犬MCP-l。NOX-A2-018不識(shí)別大鼠和小鼠MCP-l(圖22和24A)。序列以及在來(lái)自不同物種的MCP-1蛋白質(zhì)和密切相關(guān)的人蛋白質(zhì)之間的以相同氨基酸百分比表示的同源性程度在圖23中描述；計(jì)算出的NOX-E36和181-A2-018的KD值在圖24A中以表格形式顯示。7.1.2mNOX-E36(鼠MCP-1特異性核酸)為了分析mNOX-E36的結(jié)合行為，將3759RU的合成的、生物素化的鼠D-MCP-1(流動(dòng)池(flowcell)3)和3326RU的生物素化的人D-MCP-1(流動(dòng)池4)分別固定在綴合有鏈霉抗生物素蛋白的傳感器芯片(BiacoreAB，F(xiàn)reiburg,Germany)上。使用Kinject命令來(lái)注射500、250、125、62.5、31.25和0nM的mNOX-E36適體(D-RNA)溶液，所述命令定義了締合時(shí)間為180秒而解離時(shí)間為360秒。將流動(dòng)池1用作緩沖液和葡聚糖基質(zhì)對(duì)照(BiacoreSA-芯片表面)，而在流動(dòng)池2上，固定非特異性的D-肽以測(cè)定適體的非特異性結(jié)合。圖32顯示了D-NOX-E36結(jié)合至鼠D-MCP-1的動(dòng)力學(xué)的傳感圖，計(jì)算出的解離常數(shù)(Kd)為200-300pM。m廳-E36不結(jié)合人D-MCP-1(圖33);為了清晰的目的，只顯示了使用125nM鏡像異構(gòu)體獲得的傳感圖。7.2評(píng)估NOX-E36的選擇性通過(guò)將5，生物素化的N0X-E36固定在Streptavidin(SA-芯片)上，利用表面等離子體共振分析來(lái)評(píng)估NOX-E36的選擇性。在流動(dòng)池(FC)1上的352RU的NOX-E36和相同量的在FC2上的5，-末端生物素化的非功能性對(duì)照鏡像異構(gòu)體(P0C)通過(guò)鏈霉抗生物素蛋白/生物素的結(jié)合來(lái)進(jìn)行固定。將FC3用作表面對(duì)照以測(cè)定與葡聚糖-SA傳感器表面的非特異性結(jié)合。注射100nM的一組來(lái)自所有四個(gè)亞群(CC、CXC、CX3C和XC)的人趨化因子360秒，并允許復(fù)合物在10|a1/分鐘的流速和37。C下解離360秒。將在締合(響應(yīng)l;相互作用的程度)后和在解離(響應(yīng)2，相互作用的親和力)后的響應(yīng)單位進(jìn)行繪圖。在每次注射后，用240s的含0.1%Tween的1M氯化鈉使芯片表面再生；隨后允許固定的鏡像異構(gòu)體在生理?xiàng)l件(走樣緩沖液)下重折疊2分鐘。將每種趨化因子的注射重復(fù)3次。CXCL1、CXCL2、CXCL6和CXCL9顯示出與核糖核酸和芯片葡聚糖表面的非特異性結(jié)合。只有關(guān)于CCL2/MCP-1、CCL8/MCP-2、CCLll/嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、CCL3/MIP1ot和CXCL7/NAP-2才能夠檢測(cè)到與固定的NOX-E36的特異性高親和力結(jié)合(圖24B)。MCP-2和嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子被NOX-E36結(jié)合這一發(fā)現(xiàn)由于這些趨化因子和MCP-l之間具有62y。和70%的相對(duì)較高的同源性而并不令人驚訝，對(duì)于未預(yù)料到的陽(yáng)性CCL3/MIP-1cc和CXCL7/NAP-2，已經(jīng)分別實(shí)施或目前正在建立有關(guān)功能性抑制的體外測(cè)試。最后，NOX-E36和CCL2/MCP-1、CCL8/MCP-2、CCLll/嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、CCL3/MIP1a、CXCL7/NAP-2、CCL7/MCP-3及CCL13/MCP-4之間的相互作用的動(dòng)力學(xué)參數(shù)在"反向的(inverted)"體系中進(jìn)行了測(cè)定。這里，固定趨化因子，并注射游離的N0X-E36(關(guān)于詳細(xì)的方案，參見(jiàn)7.1)。動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)概括于圖24C中。7.3體外評(píng)估抗-MIP-la功能性Biacore測(cè)量已經(jīng)顯示出NOX-E36與MIP-1cx的交叉反應(yīng)性。應(yīng)該通過(guò)采用功能性的、基于細(xì)胞培養(yǎng)的體外測(cè)定法來(lái)檢驗(yàn)NOX-E36與MIP-la的純粹的Biacore結(jié)合是否也轉(zhuǎn)化為功能性，如拮抗作用。為了達(dá)到該目的，實(shí)施使用THP-1細(xì)胞的趨化性實(shí)驗(yàn)，所述THP-1細(xì)胞可通過(guò)MIP-loc來(lái)進(jìn)行刺激。將如上所述進(jìn)行生長(zhǎng)的THP-1細(xì)胞離心，在HBH(HBSS，含有1mg/ml牛血清白蛋白和20mMHEPES)中洗滌一次，并以3x1(^個(gè)細(xì)胞/ml進(jìn)行重懸浮。將100ul該懸浮液力口入具有5jam孑L的Transwell插入凈勿(Corning,#3421)中。在較{氐的區(qū)室中，在加入細(xì)胞之前，將MIP-lot與各種濃度的鏡像異構(gòu)體一起于37。C在600)i1HBH中預(yù)孵育20至30分鐘。允許細(xì)胞在37。C下遷移3小時(shí)。隨后，移去插入物，并將60)a1在磷酸鹽緩沖鹽水中的440jaM刃天青(Sigma)加入至較低的區(qū)室中。在37。C下孵育2.5小時(shí)后，在FluostarOptima多檢測(cè)平板讀取器(BMG)中以544nm的激發(fā)波長(zhǎng)和590nm的發(fā)射波長(zhǎng)測(cè)量焚光。在THP-1細(xì)胞向各種濃度的人MIP-loc遷移3小時(shí)后，獲得了人MIP-la的劑量-反應(yīng)曲線，其表明半數(shù)最大有效濃度為約1nM,并且在更高的濃度時(shí)活性減少(圖24D)。對(duì)于進(jìn)一步的關(guān)于由鏡像異構(gòu)體抑制趨化性的實(shí)驗(yàn)，使用的MIP-la濃度為0.5nM。使用0.5nMMIP-1a的刺激，實(shí)施用于測(cè)定NOX-E36對(duì)趨化性的抑制的實(shí)驗(yàn)?？梢郧宄仫@示，NOX-E36不抑制由MIP-lot誘導(dǎo)的趨化性，直至1MMMIP-la的最高測(cè)試濃度。作為陽(yáng)性對(duì)照，平行實(shí)施了使用MCP-1作為刺激物的各自實(shí)驗(yàn)(圖24E)。實(shí)施例8:用抗-mMCP-l鏡像異構(gòu)體治療MRLlp〃lpi小鼠中的狼療樣疾病阻斷促炎介質(zhì)已變成為一種成功的用于治療慢性炎癥的方法(Steinman2004)。除了TNF和白細(xì)胞介素外，CC-趨化因子也是對(duì)于特異性拮抗作用的重要候選物，因?yàn)镃C-趨化因子介導(dǎo)白細(xì)胞從血管內(nèi)腔募集至炎癥位點(diǎn)(Baggiolini1998，Luster2005)。存在非常強(qiáng)的證據(jù)表明，MCP-1(=CCL2)及其各自的趨化因子受體CCR2在自身免疫性組織損傷(例如全身性紅斑狼瘡的臨床表現(xiàn))中起至關(guān)重要的作用(Gerard&Rollins2001)。例如，CcW或Ccr2基因缺陷的MRL'P〃一小鼠受到保護(hù)而免于狼瘡樣自身免疫(PerezdeLema2005，Teschl999)。因此，CCL2/CCR2軸可代表具有前景的治療靶標(biāo)，例如對(duì)于狼瘡腎炎。實(shí)際上，延遲的基因療法或轉(zhuǎn)移經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(兩者都導(dǎo)致原位產(chǎn)生NH廣截短的MCP-1)顯著減少了MRLIW1PI小鼠中的自身免疫性組織損傷。可是，此類實(shí)驗(yàn)方法由于控制不住的拮抗劑產(chǎn)生和腫瘤形成而不能用于人(Hasegawa2003，Shimizu2004)。因此，仍然需要開(kāi)發(fā)在體內(nèi)具有有利的藥物動(dòng)力學(xué)特性曲線的新型CCL2拮抗劑。在該實(shí)施例中顯示了，用抗-mCCL2鏡像異構(gòu)體mNOX-E36或mNOX-E36-3，PEG阻斷鼠CCL2將適合用于治療狼瘡腎炎和全身性紅斑狼瘡的其他疾病表現(xiàn)。最近開(kāi)始的raCCL2鏡像異構(gòu)體療法有效改善了MRLlpr/lpr小鼠中的狼瘡腎炎、自身免疫性支氣管周炎和狼瘡樣皮膚疾病，而不受與治療性CCL2/CCR2阻斷相關(guān)的任何先前問(wèn)題的支配。絲和,發(fā)才黃從HarlanWinkelmann(Borchen，Germany)獲得10周齡的雌性MRL一小鼠，并將其以12小時(shí)的光照和黑暗循環(huán)保持在正常居住條件下?？梢噪S意獲得水和標(biāo)準(zhǔn)食物(Ssniff，Soest，Germany)。在14周齡時(shí)，將12只小鼠的組如下每周三次接受皮下注射在5%葡萄糖中的鏡像異構(gòu)體(注射體積為4ml/kg):mNOX-E36，1.5jamol/kg;mNOX-E36-3，PEG,0.9jamol/kg;無(wú)功能的對(duì)照鏡像異構(gòu)體PoC(5，-UAAGGAAACUCGGUCUGAUGCGGUAGCGCUGUGCAGAGCU-3，)，1.9|amol/kg;PoC-PEG,0.9nmol/kg;媒介物(5%葡萄糖)。從分別在注射后3或24小時(shí)每周取自眶后竇的血樣中測(cè)定mNOX-E36和mNOX-E36-3，PEG的血漿水平。血漿樣品中的鏡像異構(gòu)體水平通過(guò)如實(shí)施例8中描述的夾心雜交方法的改進(jìn)形式來(lái)進(jìn)行測(cè)定。在年齡的第24周結(jié)束時(shí)，通過(guò)頸脫位法處死小鼠。全j^孩4付伊估通過(guò)半定量評(píng)分來(lái)記錄皮膚損害(Schwarting2005)。計(jì)算出脾和腸系膜淋巴結(jié)團(tuán)塊(bulk)與總體重的重量比作為與狼瘡相關(guān)的淋巴組織增生綜合征的標(biāo)志。在實(shí)驗(yàn)期結(jié)束時(shí)，通過(guò)在吸入醚進(jìn)行全身麻醉下從眶后靜脈叢抽血來(lái)收集每只動(dòng)物的血樣和尿樣。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)收集每只動(dòng)物的血樣和尿樣，并如以前所描述的(Pawar2006)測(cè)定尿白蛋白/肌酸酐比率和血清dsDNA自身抗體IgG同種型滴度。在24周時(shí)，通過(guò)在單次推注后5、10、15、20、35、60和90分鐘時(shí)的血漿FITC-菊粉(Sigma-Aldrich，Steinheim，Germany)的清除動(dòng)力學(xué)來(lái)測(cè)定腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)(Qi2004)。熒光以485nm的激發(fā)進(jìn)行測(cè)定，并以535nm的發(fā)射進(jìn)行讀取。<吏用非線性回歸曲線擬合軟件(GraphPadPrism,GraphPadSoftwareInc.,SanDiego,CA),基于二室模型來(lái)計(jì)算GFR。使用對(duì)于IL-6、IL-Up40(OptEiA，BDPharmingen)和IFN-oc(PBLBiomedicalLabs，USA)的商業(yè)ELISA試劑盒來(lái)測(cè)定血清細(xì)胞因子水平。將來(lái)自所有小鼠的腎臟和肺在10%緩沖的福爾馬林中固定，處理，并包埋于石蠟中。按照常規(guī)方案制備用于銀染色和過(guò)碘酸-希夫染色的5-jum切片(Anders2002)。使用如關(guān)于狼瘡腎炎所描述的活性指數(shù)和慢性指數(shù)(Austin1984)對(duì)腎臟損害的嚴(yán)重度進(jìn)行分級(jí)，并且如以前描述的(Anders2002)進(jìn)行腎間質(zhì)損傷的形態(tài)計(jì)量法。將支氣管周圍炎癥的嚴(yán)重度半定量地分級(jí)為0-4。對(duì)于免疫染色，將經(jīng)福爾馬林固定的且用石蠟包埋的組織切片脫蠟并再水化。通過(guò)3%過(guò)氧化氫來(lái)阻斷內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶，并且在高壓滅菌烘箱中于抗原提取溶液(Vector,Burlingame，CA)中進(jìn)行抗原提取(retrieval)。^吏用抗生物素蛋白/生物素阻斷試劑盒(Vector)來(lái)阻斷生物素。將載玻片與一抗一起孵育1小時(shí)，之后與生物素化的二抗(抗大鼠IgG，Vector)和ABC試劑(Vector)—起孵育。在孵育步驟之間，在磷酸鹽緩沖鹽水中洗滌載玻片。將具有金屬增強(qiáng)作用的3，3，二氨基聯(lián)苯胺(畫(huà)，Sigma,Taufkirchen，Germany)用作檢測(cè)體系，產(chǎn)生了黑色產(chǎn)物。將曱基綠用作復(fù)染劑，將載玻片脫水并放置在Histomount(ZymedLaboratories,SanFrancisco,CA)中。1吏用下歹'J一抗大鼠抗一Mac2(巨謹(jǐn)細(xì)月包，Cederlane，Ontario,Canada1:50)、抗-小鼠CD3(1:100，克隆500A2,BD)、抗-小鼠IgG丄(1:100，M32015,CaltagLaboratories,Burlingame，CA，USA)、抗-小鼠IgG2a(1:100，M32215,Caltag)、抗-小鼠C3(1:200，GAM/C3c/FITC，NordicImmunologicalLaboratories,Tilburg,Netherlands)。陰性對(duì)照包括用相應(yīng)的同種型抗體進(jìn)行孵育。對(duì)于定量分析，以每個(gè)切片在15個(gè)皮質(zhì)腎小5^中計(jì)數(shù)腎小球細(xì)胞。15個(gè)皮質(zhì)腎小球切片上，對(duì)腎小球Ig和C3c沉積物在0-3范圍內(nèi)進(jìn)行評(píng)分。WW的浙務(wù)和I^;C量fra^/a/^^r-尸CT將來(lái)自每只小鼠的腎組織在液氮中速凍并在-8(TC下貯存。從每只動(dòng)物中，如所描述的(Anders2002)進(jìn)4亍總腎RNA的制備和逆轉(zhuǎn)錄。引物和探針來(lái)自PEBiosystems，Weiterstadt,Ger訓(xùn)y。所使用的用于檢測(cè)Cc/么Cc/J"和7《5VyA^的引物(300nM)，預(yù)先開(kāi)發(fā)的TaqMan測(cè)定法試劑，來(lái)自PEBiosystems。在該研究結(jié)束時(shí)，從所有組的小鼠中獲得總血樣和骨髓樣品。使用FACScalibur儀器和先前經(jīng)表征的MC21抗-mCCR2抗體(Mack2001)進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。將生物素化的抗-大鼠IgG抗體(BDBiosciences)用于檢測(cè)。將大鼠IgG2b(BDBiosciences)用作同種型對(duì)照。鍵^夢(mèng)為、奸數(shù)椐表示為平均值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)。組之間的比較用單變量ANOVA來(lái)完成。將PosthocBonferroni校正用于多重比較。p<0.05的值被認(rèn)為是表明了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。^心染爻游;C法基于如Drolet等人，2000(17:1503)所描述的測(cè)定法，通過(guò)夾心雜交測(cè)定法來(lái)定量樣品中的鏡像異構(gòu)體量。平行收集血樣以跟蹤NOX-E36的血漿清除。制備所選擇的組織用以測(cè)定鏡像異構(gòu)體濃度。雜交平板的制備將鏡像異構(gòu)體mNOX-E36通過(guò)使用未驗(yàn)證的夾心雜交測(cè)定法來(lái)進(jìn)行定量。簡(jiǎn)而言之，將在0.5M磷酸鈉、1mMEDTA(pH8.5)中的0.75mMmNOX-E36捕獲探針(Seq.ID.No:281)在4。C下固定至白色的DNA—BIND96孑L板(CorningCostar，Wiesbaden,Germany)過(guò)夜。將孔洗滌兩次并在37。C下用在0.25M磷酸鈉、1mMEDTA(pH8.5)中的0.5%w/vBSA封閉3小時(shí)，再次洗滌并在4'C下貯存直到使用。在雜交前，將孔預(yù)先升溫至37°C，并用預(yù)先升溫的洗滌緩沖液(3xSSC，0.5%[w/v]十二烷基肌氨酸鈉，pH7.0;預(yù)先制備無(wú)月桂酰基肌氨酸鈉的20x儲(chǔ)液[3MNaCl，0.3M檸檬酸鈉]，并相應(yīng)地進(jìn)行稀釋)洗滌兩次。樣品的制備將所有樣品一式兩份地進(jìn)行測(cè)定。將血漿樣品在水上解凍，渦旋振蕩，并在冷卻的臺(tái)式離心機(jī)中簡(jiǎn)短地進(jìn)行離心。將組織勻漿物在室溫下解凍，并在最大速度和室溫下離心5分鐘。只移出5pi的每種樣品用于測(cè)定法，并隨后將其放回冷凍室進(jìn)行貯存。按照下列方案，在室溫下將樣品用雜交緩沖液(8nMmNOX-E36檢測(cè)探針[Seq.ID:282]，在洗滌緩沖液中)進(jìn)行稀釋1:305pl樣品+145^11雜交緩沖液1:30020ja11:30+180^11雜交緩沖液1:300020p11:300+180"1雜交緩沖液1:3000020m11:3000+180"1雜交緩沖液。檢測(cè)所有的樣品稀釋液。將mNOX-E36標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋成跨越0-4nM范圍的8-點(diǎn)校準(zhǔn)曲線。不制備和檢測(cè)QC樣品。校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品與所研究樣品的那個(gè)相同。雜交和檢測(cè)將樣品在95。C下加熱10分鐘，并冷卻至37°C。將鏡像異構(gòu)體/檢測(cè)探針復(fù)合物在37X:下與經(jīng)固定的捕獲探針退火30分鐘。通過(guò)分別用洗滌緩沖液和lxTBST(20mMTris-Cl，137mMNaCl，0.1%Tween20，pH7.5)洗滌兩次來(lái)除去未結(jié)合的鏡像異構(gòu)體。在室溫下，通過(guò)在lxTBST中以1:5000稀釋的鏈霉抗生物素蛋白堿性磷酸酶來(lái)檢測(cè)雜交的復(fù)合物1小時(shí)。為了除去未結(jié)合的綴合物，將孔用lxTBST和20mMTris-Cl，1mMMgCl2，pH9.8再次洗滌(每孔洗涂?jī)纱?。最后，用100mlCSDP底物(AppliedBiosystems,Darmstadt,Germany)充滿孔，并在室溫下孵育45分鐘。在FLUOstarOptima微量培養(yǎng)板讀取器(BMGLabtechnologies，Offenburg，Germany)上測(cè)量化學(xué)發(fā)光。數(shù)據(jù)分析將下面經(jīng)測(cè)定的樣品稀釋物用于定量數(shù)據(jù)分析大鼠EDTA血漿1:2000。作為背景信號(hào)，減去從媒介物組(沒(méi)有施用鏡像異構(gòu)體)獲得的數(shù)據(jù)。對(duì)于鏡像異構(gòu)體NOX-36、NOX-E36-5，-PEG和NOX-E36-3，-PEG,也以類似的方式進(jìn)行如本文所描述的夾心雜交測(cè)定法，其中必須使用相應(yīng)的NOX-E36捕獲探針(Seq.ID:255)和相應(yīng)的NOX-E36檢測(cè)探針(Seq.ID:256)(數(shù)據(jù)未顯示)。結(jié)果邁^WJ-^^-J'/^Y7炎<#V、^f"病雌性MRL1P〃1P1小鼠發(fā)展出并隨后死于增生性免疫復(fù)合物性腎小球腎炎，這與人類中的彌散性增生性狼瘡腎炎驚人地相似。在該治療性研究設(shè)計(jì)中，在年齡的第14至24周時(shí)，將待治療的MRL^小鼠用PEG化的和未PEG化的抗-mCCL2鏡^f象異構(gòu)體、PEG化的和未PEG化的對(duì)照("PoC")-鏡像異構(gòu)體或媒介物進(jìn)行治療。這時(shí)，媒介物、PoC或PoC-PEG治療的MRL'—"小鼠顯示出彌散性增生性腎小球腎炎，其特征在于腎小球巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)以及混合的腎小球周和間質(zhì)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)物(其由腎小球和間質(zhì)的Mac2-陽(yáng)性巨噬細(xì)胞和間質(zhì)的CD3-陽(yáng)性淋巴細(xì)胞組成)(圖34和35)。mNOX-E36-3，PEG改善了狼瘡腎炎的活性指數(shù)和慢性指數(shù)以及前面提及的腎臟炎癥的標(biāo)志(圖35)。未PEG化的分子raNOX-E36對(duì)于慢性指數(shù)以及間質(zhì)巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞計(jì)數(shù)的效果較小(圖35)。通過(guò)在經(jīng)媒介物、PoC和PoC-PEG治療的小鼠中的腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化的匯合面積來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明了晚期慢性腎病(圖34)。通過(guò)將形態(tài)計(jì)量法應(yīng)用于定量這些變化，發(fā)現(xiàn)PEG化的和未PEG化的mN0X-E36減少了間隙體積、腎小管細(xì)胞損傷和腎小管擴(kuò)張，這些都是慢性腎病的嚴(yán)重度和預(yù)后的標(biāo)志(圖36)。mNOX-E36-3，PEG,而不是未PEG化的mNOX-E36，改善了50%死亡率(圖37)。因此，mNOX-E36-3，PEG可以減少腎巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞浸潤(rùn)物的數(shù)目，并改善MRIT""小鼠的狼瘡腎炎和(腎)存活。為了研究用mN0X-E36和mNOX-E36-3，PEG治療是否會(huì)影響MRLwlpi小鼠中的腎內(nèi)炎癥，實(shí)施實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)評(píng)估促炎趨化因子CCL2和CCL5的表達(dá)水平，先前表明在腎病的發(fā)展過(guò)程中，CCL2和CCL5的表達(dá)水平在MRL1PI/1PI小鼠的腎臟中被逐漸上調(diào)(PerezdeLema2001)。與經(jīng)J某介物治療的對(duì)照相比較，在年齡的第14至24周用mNOX-E36和mNOX-E36-3，PEG進(jìn)行治療減少了CCL2和CCL5mRNA的腎表達(dá)(圖38)。我HXW裙錄岸樹(shù)沐^#Mw//、^^/4>、^,/^《_#^^#^歡嫂諒在MRLlp〃lpr小鼠中，皮膚和肺通常也受自身免疫性組織損傷的影響。在經(jīng)媒介物治療的小鼠中，自身免疫性肺病的特征在于中等的細(xì)支氣管周的和血管周的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)物，并且在60%的小鼠中觀察到皮膚損害(圖39、40和35)。分別與經(jīng)媒介物、PoC和PoC-PEG治療的MRL一小鼠相比較，mNOX-E36和mNOX-E36-3，PEG兩者都減少了支氣管周的炎癥和皮膚疾病(圖39、40和35)。因此，CCL2-特異性鏡像異構(gòu)體的效果不局限于狼瘡腎炎，而是延伸到MRL一小鼠中的自身免疫性組織損傷的其他表現(xiàn)。mNOX-E36和在MRL小鼠中的淋巴組織增生綜合征,dsDNA自身抗體及血清細(xì)胞因子水平雌性MRL'pr^小鼠發(fā)展出了淋巴組織增生綜合征，其特征在于嚴(yán)重的脾腫大以及頸部、腋窩、腹股溝和腸系膜淋巴結(jié)團(tuán)塊。mNOX-E36和mNOX-E36-3，PEG兩者都對(duì)MRLwlpf小鼠中的脾重量和淋巴結(jié)重量沒(méi)有影響(圖41)。MRL一小鼠中的自身免疫的特征在于針對(duì)多種核抗原(包括dsDNA)的自身抗體的產(chǎn)生。在24周齡的MRL^"pr小鼠中，血清dsDNAIgG，IgG"IgG2a、IgG2b自身抗體以高水平存在。m應(yīng)-E36和mNOX-E36-3，PEG兩者都對(duì)任一種這些DNA自身抗體沒(méi)有影響(圖41)。在經(jīng)媒介物治療的MRi;p^r小鼠中的狼瘡樣疾病的特征在于升高的IFN-a、IL-12p40和IL-6的血清水平。mNOX-E36和mNOX-E36-3，PEG兩者都對(duì)任一種這些炎癥介質(zhì)沒(méi)有影響(圖41)。因此，這兩種m廳-E36變體都不影響MRL一小鼠中的淋巴組織增生、抗-dsDNAIgG產(chǎn)生和血清細(xì)胞因子水平。MRL小鼠中mNOX-E36和mNOX-E36-3'PEG的血漿水平以一周的間隔測(cè)定mN0X-E36和mNOX-E36-3，PEG血漿水平，以俊_在MRLwlpr小鼠的進(jìn)行性腎病過(guò)程中監(jiān)控藥物暴露。在該研究的整個(gè)過(guò)程中，在注射后3小時(shí)的平均mNOX-E36血漿水平和在注射后24小時(shí)的平均mNOX-E36-3，PEG血漿水平分別為約300nM和1)iM(圖42)。因此，PGE化增加了mNOX-E36的血漿水平，并且MRL"""小鼠的進(jìn)行性腎病沒(méi)有調(diào)節(jié)這兩種鏡像異構(gòu)體的藥物動(dòng)力學(xué)。mNOX-E36-3'PEG阻斷單核細(xì)胞從骨髓中滲出據(jù)顯示，細(xì)菌感染過(guò)程中單核細(xì)胞從骨髓中的滲出涉及趨化因子受體CCR2(Serbina2006)，但是CCL2在自身免疫情形中的作用仍然是假定的。因此，在24周齡MRL一一小鼠的經(jīng)mNOX-E36-3，PEG和媒介物治療的組的小鼠中，檢查了外周血和骨髓中的CCR2-陽(yáng)性單核細(xì)胞群體。用mNOX-E36-3，PEG進(jìn)行治療使骨髓中的CCR2陽(yáng)性細(xì)胞百分比從13%增加至26%,而它使外周血中的該群體從26%減少至11%(圖43)。這些數(shù)據(jù)支持了CCL2對(duì)于在MRL一小鼠的自身免疫性疾病過(guò)程中CCR2陽(yáng)性細(xì)胞從骨髓中逃逸出的作用?？偨Y(jié)通過(guò)應(yīng)用鏡像異構(gòu)體技術(shù)，產(chǎn)生了新的且特異性的mCCL2拮抗劑，其在體外和體內(nèi)有效地阻斷mCCL2。事實(shí)上，最近出現(xiàn)的使用CCL2鏡像異構(gòu)體進(jìn)行治療在MRLlp〃lpr小鼠中顯著改善了晚期狼瘡樣自身免疫性組織損傷。這些數(shù)據(jù)支持了CCL2在慢性炎性組織損傷中的中心作用，并將CCL2鏡像異構(gòu)體鑒定為新的用于自身免疫組織損傷的治療劑。實(shí)施例9:使用抗-mMCP-l鏡像異構(gòu)體治療在經(jīng)單側(cè)腎切除的糖尿病小鼠中的糖尿病性腎病糖尿病性腎病依然是終末期腎病的最主要原因，因?yàn)榘邢蜓芫o張素依賴性的病理機(jī)制常常不能防止疾病的進(jìn)展(Zimmet2001;Ritz1999;UnitedStatesRenalDataSystem2004;S濯sson2003)。因此，對(duì)于糖尿病性腎病的治療方法需要加入其他治療策略。來(lái)自最近的實(shí)驗(yàn)研究的數(shù)據(jù)將糖尿病性腎病的發(fā)展與腎內(nèi)炎癥相關(guān)聯(lián)(Galkina2006;Mora2005;Meyer2003;Tuttle2005)。例如，嗎替麥考酚酸酯、甲氨蝶呤或輻射減少了患有經(jīng)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病性腎病的大鼠中的尿白蛋白排泄和腎小球硬化(Yozai2005;Utimura2003)。然而，糖尿病性腎病中的腎內(nèi)炎癥的分子和細(xì)胞機(jī)制依然很難表征?；加刑悄虿⌒阅I病的患者具有增加的炎癥的急性期標(biāo)記物的血清水平，但這可能并不可代表腎內(nèi)炎癥(DallaVestra2005;Navarro2003)。患有糖尿病性腎病的患者將高水平的CC-趨化因子單核細(xì)胞化學(xué)吸引蛋白1(MCP-1/CCL2)排泄于尿中，這可能對(duì)于腎內(nèi)炎癥來(lái)說(shuō)是更特異的(Morii2003;Tashiro2002;Takebayashi2006)。事實(shí)上，MCP-1/CCL2是由暴露于高的葡萄糖濃度或高級(jí)糖基化終產(chǎn)物的人腎小球膜細(xì)胞所表達(dá)的(Ihml998;Yamagishi2002)。CCL2參與白細(xì)胞從血管內(nèi)募集至血管外區(qū)室(即腎小球和腎間質(zhì))中這一復(fù)雜的多步驟過(guò)程(Baggiolini1998)。實(shí)際上，巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)物是人和實(shí)驗(yàn)性的糖尿病性腎'J、球硬化及腎小管間質(zhì)損傷中的普遍發(fā)現(xiàn)(Bohlel991;Furuta1993;Chow2007)。Cc"i陷型1型或2型糖尿病小鼠具有更低的腎小球巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)，這與較少的腎小球損傷相關(guān)(Chow2004;Chow2006)。在這些研究中，還證實(shí)了CCL2對(duì)于1型和2型糖尿病性腎病的腎小球病理學(xué)的功能性作用。因此，CCL2可能代表了對(duì)于糖尿病性腎病的潛在的治療靶標(biāo)，并且具有有利的藥物動(dòng)力學(xué)特性曲線的合適CCL2拮抗劑在該疾病情形中應(yīng)當(dāng)被證實(shí)是有效的。在該實(shí)施例中，我們報(bào)導(dǎo)了PEG化的抗-CCL2鏡像異構(gòu)體mNOX-E36-3，PEG在患有晚期糖尿病性腎病的2型糖尿病db/db小鼠中的效果。我們顯示，抗CCL2-鏡像異構(gòu)體應(yīng)該適合用于治療糖尿病性腎病。動(dòng)參和^發(fā)才襲5周齡的雄性C57BLKSdb/db或C57BLKS野生型小鼠從Taconic(Ry，Denmark)獲得，并將其在研究期間圏養(yǎng)于具有過(guò)濾蓋的籠中，采用12小時(shí)黑暗/光照循環(huán)并且可不受限制地?cái)z取食物和水。將籠、草墊、小巢(nestlets)、食物和水在使用前通過(guò)高壓滅菌法進(jìn)行滅菌。在6周齡時(shí)，如以前所描述的(Bower1980)，在db/db和野生型小鼠中通過(guò)lcm的脅腹切口實(shí)施單側(cè)腎切除術(shù)("1K"小鼠)或假手術(shù)("2K"小鼠)。在假手術(shù)組的小鼠中，腎臟保留在原位。10周后，在4個(gè)月大時(shí)，將1Kdb/db小鼠分成兩組，其每周3次接受使用在5%葡萄糖中的mNOX-E36-3，PEG或PoC-PEG(劑量，0.9Mmol/kg;注射體積，1ml/kg)的皮下注射。讓該治療持續(xù)8周(直到6個(gè)月大)，到那時(shí)，將動(dòng)物處死并獲得組織以用于組織病理學(xué)評(píng)估。所有的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程都已經(jīng)得到當(dāng)?shù)卣畽C(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。潛尿病^fV^的謬估如所描述的(Anders2002)，在石蠟包埋的切片上實(shí)施所有免疫組織學(xué)研究。將下列抗體用作一抗大鼠抗-Mac2(腎小球巨噬細(xì)胞，Cederlane，Ontario,Canada,1:50)、抗-Ki-67(細(xì)胞增殖，Dianova，Hamburg,Germany,1:25)。對(duì)于組織病理學(xué)評(píng)估，從每只小鼠中，將腎臟的一部分在磷酸鹽緩沖鹽水中的10%福爾馬林中進(jìn)行固定，并包埋于石蠟中。按照供應(yīng)商(Bio-Optica,MiUno，Italy)的說(shuō)明書(shū)，將3pm-切片用高碘酸-希夫試劑或銀進(jìn)行染色。腎小球硬化損害通過(guò)如下釆用由不知情的觀察者進(jìn)行半定量評(píng)分來(lái)評(píng)估分別地，0-無(wú)損害，1=<25°/"更化，2-25-49%石更化，3=50-74。/U更化，4=75-100%硬化。每個(gè)切片分析15個(gè)腎小球。如以前描述的(Anders2002),通過(guò)將100個(gè)點(diǎn)的網(wǎng)格疊合在10個(gè)非重疊的皮質(zhì)區(qū)域上來(lái)測(cè)定間隙體積指數(shù)和腎小管擴(kuò)張指數(shù)。由不知情的觀察者在15個(gè)高倍視野(hpf，400x)中測(cè)定間質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。從脫石蠟的腎小球中進(jìn)行RNA制備和實(shí)時(shí)定量(TaqMan)RT-PCR。在60。C下于裂解緩沖液(10raMTris-HC1、0.lmMEDTA、2%SDS和20jjg/ml蛋白酶K)中賻育16小時(shí)后，實(shí)施基于苯酚-氯仿的RNA提取。將腎小球RNA溶解于10n1無(wú)RM酶的水中。如所描述的(Anders2002，Cohen2002)，從總器官和腎小球RNA中實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)RT-PCR。關(guān)于靶和管家基因由ddH20組成的對(duì)照是陰性的。用于mCcl2、Gapdh和18SrRM的寡核苷酸引物(300nM)和探針(100nM)是來(lái)自PE的預(yù)先開(kāi)發(fā)的TaqMan測(cè)定法試劑。引物和探針來(lái)自ABIBiosystems，Weiterstadt，Ge簡(jiǎn)ny。通過(guò)在單次推注后5、10、15、20、35、60和90分鐘時(shí)的血漿FITC-菊粉(Sigma-Aldrich,Steinheim，Germany)的清除動(dòng)力學(xué)來(lái)測(cè)定腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)(Qi2004)。熒光以485nm的激發(fā)進(jìn)行測(cè)定，并以535rnn的發(fā)射進(jìn)4亍讀取。4吏用非線性回歸曲線擬合軟件(GraphPadPrism,GraphPadSoftwareInc.,SanDiego，CA)，基于二室模型來(lái)計(jì)算GFR。將所有數(shù)據(jù)都表示為平均值土SEM。使用ANOVA來(lái)進(jìn)行組的比4交，并且此后將Bonferroni才交正用于多重比較。p<0.05的值被認(rèn)為是表明了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果歷7WJ-^^-J'減>'了經(jīng),#^勿餘的小虞哞的fv、球^^勿應(yīng)^"炎和^謬V、承硬/A當(dāng)功能性CCL2的缺乏與db/db小鼠中腎小球巨噬細(xì)胞募集的減少有關(guān)(Chow2007)并且m匿-E36-3，PEG能夠在體外和體內(nèi)阻斷CCL2-介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞募集，則mNOX-E36-3，PEG應(yīng)當(dāng)削弱患有晚期2型糖尿病性腎病的db/db小鼠中的腎巨噬細(xì)胞募集。為了檢驗(yàn)這一假設(shè)，我們?cè)?個(gè)月大的經(jīng)單側(cè)腎切除的("IK")db/db小鼠中開(kāi)始皮下注射mNOX-E36-3，PEG或PoC-PEG。該治療持續(xù)8周，到那時(shí)，收集組織以用于評(píng)估糖尿病性腎病。在這一過(guò)程中，mNOX-E36-3，PEG治療沒(méi)有顯著影響白細(xì)胞或血小板計(jì)數(shù)、血糖水平或體重，而白細(xì)胞或血小板計(jì)數(shù)、血糖水平或體重在所有db/db小鼠組中都相比非糖尿病BLKS小鼠而言顯著升高(數(shù)據(jù)未顯示)。有趣的是，mNOX-E36-3，PEG增加了IKdb/db小鼠中的CCL2血清水平，這表明CCL2拮抗劑使CCL2保留在循環(huán)中(圖44)。與我們的假設(shè)相一致，與經(jīng)PoC-PEG或媒介物治療的db/db小鼠相比較，m應(yīng)-E36-3，PEG使腎小球巨噬細(xì)胞的數(shù)目顯著減少了40%，這與在經(jīng)mNOX-E36-3，PEG治療的db/db小鼠的腎小球內(nèi)Ki-67陽(yáng)性增殖性細(xì)胞數(shù)目較低相關(guān)(圖45)。這些發(fā)現(xiàn)與IKdb/db小鼠中總體糖尿病性腎小球硬化的顯著改善有關(guān)(圖46)。實(shí)際上，mNOX-E36-3，PEG治療使IKdb/db小鼠中的糖尿病性腎小球硬化減輕至在年齡相當(dāng)?shù)奈唇?jīng)腎切除的("2K")db/db小鼠中所存在的腎小球硬化的程度(圖46)。這些發(fā)現(xiàn)顯示，由mNOX-E36-3'PEG引起的CCL2-依賴性腎小球巨噬細(xì)胞募集的延遲阻斷可在2型糖尿病db/db小鼠中預(yù)防總體糖尿病性腎小球硬化。mNOX-E36-3，PEG治療對(duì)于1Kdb/db小鼠中的糖尿病性腎小球硬化的有益效果應(yīng)當(dāng)與更好的GFR相關(guān)。我們?cè)赿b/db小鼠中分析了作為GFR的標(biāo)志的FITC-菊粉清除動(dòng)力學(xué)(Qi2004)。與db/db小鼠中正常的大約250ml/分鐘的GFR(Qi2004)相比較，我們發(fā)現(xiàn)在注射了PoC-PEG的6個(gè)月大的1Kdb/db小鼠中GFR降低為112±23m1/分鐘(圖47)。mNOX-E36-3，PEG治療在1Kdb/db小鼠中將GFR顯著改善至231±30ml/分鐘(p<0.001),這暗示阻斷CCL2-依賴性腎小球巨噬細(xì)胞募集也可以改善2型糖尿病小鼠中的腎功能。/zMur-fm-j，戶w減,r^v、處哞的/《1^^細(xì)應(yīng)#炎和^7、#辨#源務(wù)人的晚期糖尿病性腎病與顯著數(shù)量的間質(zhì)巨噬細(xì)胞和腎小管間質(zhì)損傷相關(guān)(Bohlel991)。在2Kdb/db小鼠中，間質(zhì)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)物和顯著的腎小管間質(zhì)損傷不在8月齡之前出現(xiàn)(Chow2007)。在db/db小鼠中，早期單側(cè)腎切除術(shù)加速了腎小管間質(zhì)病理學(xué)的發(fā)展(Ninichuk2005),因而我們對(duì)間質(zhì)巨噬細(xì)胞、腎小管擴(kuò)張和間隙體積進(jìn)行定量以作為6月齡的所有組的小鼠中腎小管間質(zhì)損傷的標(biāo)志。在這時(shí)，與2Kdb/db小鼠相比較，1Kdb/db小鼠顯示出間質(zhì)巨噬細(xì)胞的數(shù)目增加以及腎小管擴(kuò)張和間隙體積顯著升高(圖45，圖48)。mNOX-E36-3，PEG治療使1Kdb/db小鼠中的間質(zhì)巨噬細(xì)胞數(shù)目減少了53°/。，而且還減少了腎小管擴(kuò)張和間隙體積(圖45,圖48)。因此，阻斷CCL2-依賴性腎巨噬細(xì)胞募集還可預(yù)防2型糖尿病db/db小鼠中的腎小管間質(zhì)損傷。/zM^J-AJ6-J，Z^7減,rLTV、處*Cc〃的薩4這巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)物增強(qiáng)了組織損傷中的炎癥應(yīng)答，例如局部的CCL2表達(dá)。因此，我們假定，腎巨噬細(xì)胞的與mNOX-E36-3，PEG相關(guān)的減少應(yīng)該與較低的腎CCL2表達(dá)有關(guān)。我們利用實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)定量db/db小鼠中CCL2的mRNA表達(dá)。與年齡相當(dāng)?shù)慕?jīng)PoC-PEG治療的小鼠相比較，mNOX-E36-3，PEG減少了6個(gè)月大的1Kdb/db小鼠腎臟中的CCL2的mRNA水平(圖49)。為了進(jìn)一步評(píng)估CCL2的空間表達(dá)，我們?cè)谀I切片上進(jìn)行了對(duì)于CCL2蛋白質(zhì)的免疫染色。與2Kdb/db小鼠或2K野生型小鼠相比較，在1Kdb/db小鼠中，CCL2的表達(dá)在腎小球、腎小管和間質(zhì)細(xì)胞中明顯提高(圖50)。與經(jīng)媒介物或PoC-PEG治療的1Kdb/db小鼠相比較，mNOX-E36-3，PEG明顯減少了在所有這些區(qū)室中的CCL2染色。這些數(shù)據(jù)表明，用mNOX-E36-3，PEG阻斷CCL2-依賴性腎巨噬細(xì)胞募集減少了1Kdb/db小鼠中CCL2的局部表達(dá)?？偨Y(jié)炎癥促進(jìn)人糖尿病性腎病的發(fā)展這一概念逐漸變得為人所接受(TutUe2005)，這使得MCP-1/CCL2作為潛在的靶標(biāo)來(lái)治療該疾病成為焦點(diǎn)。在該實(shí)施例中，我們已經(jīng)顯示，用mNOX-E36-3，PEG治療經(jīng)單側(cè)腎切除的糖尿病小鼠在6月齡時(shí)減少了腎小球(和間質(zhì))的巨噬細(xì)胞數(shù)目，這與較少的增殖性腎小球細(xì)胞相關(guān)。另外，用mNOX-E36-3，PEG治療使CCL2mRNA的腎/腎小球表達(dá)明顯減少。此外，治療組中較少數(shù)目的腎小球巨噬細(xì)胞和腎小球增殖性細(xì)胞與保護(hù)免于總體腎小球硬化以及與顯著改善的腎小球?yàn)V過(guò)率有關(guān)。mNOX-E36-3，PEG對(duì)于糖尿病小鼠中的腎小球病理學(xué)和腎功能的有益效果與在其他腎小球損傷模型中使用其他CCL2拮抗劑的那些研究(Lloyd1997,Hasegawa2003，Tang1996,Wenzel1997，F(xiàn)ujinaka1997，Schneider1999)相一致。引人注意的是，CCL2阻斷的延遲發(fā)生也減少了IKdb/db小鼠中的間質(zhì)巨噬細(xì)胞數(shù)目，這與較少的腎小管間質(zhì)病理學(xué)相關(guān)?？傊?，這些數(shù)據(jù)證實(shí)了CCL2為具有前景的用于糖尿病性腎病的治療靶標(biāo)，并暗示了用鏡像異構(gòu)體起始CCL2阻斷(即使在疾病的晚期)仍然具有保護(hù)作用。參考文獻(xiàn)如果未表明與此相反，本文所引用的文獻(xiàn)的完整參考文獻(xiàn)資料(將其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)提及而合并入本文)如下AkahoshiT,WadaC，EndoH,HirotaK，HosakaS,TakagishiK,KondoH，KashiwazakiS,MatsushimaK(1993).Expressionofmonocytechemotacticandactivatingfactorinrheumatoidarthritis.Regulationofitsproductioninsynovialcellsbyinterleukin-1andtumornecrosisfactor.勿A〃'to7/ze謂.36:762AlamR,YorkJ,MoyarsM,StaffordS，GrantJA,LeeJ,ForsytheP,SimT，IdaN(1996).IncreasedMCP-1,RANTES，andMIP-lainbronchoalveolarlavagefluidofallergicasthmaticpatients,v4附./7邵/>.CWf.C"re她J.153:1398AltschulSF，GishW,MillerW,MyersEW，LipmanDJ(1990),Basiclocalalignmentsearchtool.JA/o/215(3):403-10.AltschulSF，MaddenTL，SchafferAA，ZhangJ，ZhangZ,MillerW，LipmanDJ(1997).GappedBLASTandPSI-BLAST:anewgenerationofproteindatabasesearchprograms.NucleicAcidsRes.Sepl;25(17):3389-402.AmannB,TinzmannR,AngelkortB(2003).ACEinhibitorsimprovediabeticnephropathythroughsuppressionofrenalMCP-1.26:2421AndersHJ，VielhauerV，F(xiàn)rinkM,LindeY,CohenCD，BlattnerSM，KretzlerM,StrutzF,MackM,GroneHJ,OnufferJ，HorukR,NelsonPJ,Schl加dorffD(2002).AchemokinereceptorCCR-1antagonistreducesrenalfibrosisafterunilateralureterligation.J.C7/w./"veW.109:251AndersHJ，VielhauerV，Schl6ndorffD(2003)，Chemokinesandchemo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GUG，第四序列段盒B4包含核苷酸序列AUG，第五序列段盒B5包含核苷酸序列GGGGGGCGCGACC第六序列段盒B6包含核苷酸序列CAUUUUA或CAUUUA，并且第七序列段盒B1B包含核苷酸序列CAYRCU。12.權(quán)利要求11的核酸，其中第一序列段盒B1A包含核苷酸序列AGCGUG。13.權(quán)利要求11或12的核酸，其中第二序列段盒B2包含核苷酸序列CCAGU。14.權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)的核酸，其中第六序列段盒B6包含核苷酸序列CAUUUUA。15.權(quán)利要求11至14中任一項(xiàng)的核酸，其中第七序列段盒B1B包含核苷酸序列CACGCU。16.權(quán)利要求11至15中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No28和SEQ.ID.No27的核酸序列。17.權(quán)利要求1的核酸，其中所述2型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、笫二序列段盒B2和第三序列段盒B1B，其中第一序列段盒B1A和第三序列段盒BIB任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含選自ACGCA、CGCA和GCA的核苷酸序列，第二序列段盒B2包含核苷酸序列CSUCCCUCACCGGUGCAAGUGAAGCCGYGGCUC，并且第三序列段盒B1B包含選自UGCGU、UGCG和UGC的核苷酸序列。18.權(quán)利要求17的核酸，其中第二序列段盒B2包含核苷酸序列CGUCCCUCACCGGUGCAAGUGAAGCCGUGGCUC。19.權(quán)利要求17至18中任一項(xiàng)的核酸，其中a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列ACGCA,并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGCGU;或者b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CGCA,并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGCG;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GCA，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGC或UGCG。20.權(quán)利要求17至19中任一項(xiàng)的核酸，其中第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GCA。21.權(quán)利要求17至20中任一項(xiàng)的并且優(yōu)選權(quán)利要求20的核酸，其中第三序列段盒B1B包含核苷酸序列UGCG。22.權(quán)利要求17至21中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No37、SEQ.ID.No116、SEQ.ID.No117和SEQ.ID.No278的核酸序列。23.權(quán)利要求1的核酸，其中所述3型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、第二序列段盒B2A、第三序列段盒B3、第四序列段盒BZB、第五序列段盒B4、第六序列段盒B5A、笫七序列段盒B6、第八序列段盒B5B和第九序列段盒B1B，其中第一序列段盒B1A和第九序列段盒B1B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第二序列段盒B2A和第四序列段盒B2B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第六序列段盒B5A和第八序列段盒B5B任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，笫一序列段盒B1A包含選自GimCUGC、GKSYGC、KBBSC和BNGC的核苷酸序列，第二序列段盒B2A包含核苷酸序列GKMGU,第三序列段盒B3包含核苷酸序列KRRAR，第四序列段盒B2B包含核苷酸序列ACKMC，第五序列段盒B4包含選自CURYGA、CUWAUGA、CWRMGACW和UGCCAGUG的核普酸序列，第六序列段盒B5A包含選自GGY和CWGC的核苷酸序列，第七序列段盒B6包含選自YAGA、CKAAU和CCUUUAU的核苷酸序列，第八序列段盒B5B包含選自GCYR和GCWG的核苷酸序列，并且第九序列段盒B1B包含選自GCAGCAC、GCRSMC、GSVVM和GCNV的核苷酸序列。24.權(quán)利要求23的核酸，其中第三序列段盒B3包含核苷酸序列GAGAA或UAAAA。25，權(quán)利要求23或24的核酸，其中第五序列段盒B4包含核苷酸序列CAGCGACU或CAACGACU。26.權(quán)利要求23至25中任一項(xiàng)的核酸，其中第五序列段盒B4包含核苷酸序列CAGCGACU，并且第三序列段盒B3包含核苷酸序列UAAAA。27.權(quán)利要求23至25中任一項(xiàng)的核酸，其中第五序列段盒B4包含核苷酸序列CAACGACU，并且第三序列段盒B3包含核苷酸序列GAGAA。28.權(quán)利要求23至27中任一項(xiàng)的核酸，其中第七序列段盒B6包含核苷酸序列UAGA。29.權(quán)利要求23至28中任一項(xiàng)的核酸，其中a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GURCUGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCAGCAC;或者b)第一序列段盒B1A包含核普酸序列GKSYGC,并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCRSMC;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列KBBSC,并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GSVVM;或者d)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列BNGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCNV。30.權(quán)利要求29的核酸，其中a)第一序列段盒BU包含核苷酸序列GUGCUGC，并且笫九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCAGCAC;或者b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GUGCGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCGCAC;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列KKSSC,并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GSSMM;或者d)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列SNGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCNS。31.權(quán)利要求30的核酸，其中第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GGGC，并且第九序列段盒B1B包含核苷酸序列GCCC。32.權(quán)利要求23至31中任一項(xiàng)的核酸，其中第二序列段盒B2A包含核苷酸序列GKMGU，并且第四序列段盒B2B包含核苷酸序列ACKMC。33.權(quán)利要求32的核酸，其中第二序列段盒B2A包含核苷酸序列GUAGU，并且第四序列段盒B2B包含核苷酸序列ACUAC。34.權(quán)利要求23至33中任一項(xiàng)的核酸，其中a)第六序列段盒B5A包含核苷酸序列GGY，并且第八序列段盒B5B包含核苷酸序列GCYR;或者b)第六序列段盒B5A包含核苷酸序列CWGC，并且第八序列段盒B5B包含核苷酸序列GCWG。35.權(quán)利要求34的核酸，其中第六序列段盒B5A包含核苷酸序列GGC，并且第八序列段盒B5B包含核苷酸序列GCCG。36.權(quán)利要求23至35中任一項(xiàng)的，優(yōu)選權(quán)利要求34'至35中任一項(xiàng)的核酸，其中第六序列段盒B5A與第八序列段盒B5B的核苷酸GCY雜交。37.權(quán)利要求23至26和28至36中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No56的核酸序列。38.權(quán)利要求23至25和27至36中任一項(xiàng)的核酸，其中所迷核酸包含選自根據(jù)SEQ.ID.No57至61、SEQ.ID.No67至71和SEQ.ID.No73的核酸序列的核酸序列。39.權(quán)利要求1的核酸，其中所述4型核酸以5，->3，方向包含第一序列段盒B1A、第二序列段盒B2、第三序列段盒B1B,其中第一序列段盒B1A和第三序列段盒BIB任選地相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)，第一序列段盒B1A包含選自AGCGUGDU、GCGCGAG、CSKSUU、GUGUU和UGUU的核苷酸序列；第二序列段盒B2包含選自AGNDRDGBKGGURGYARGUAAAG、AGGUGGGUGGUAGUAAGUAAAG和CAGGUGGGUGGUAGAAUGUAAAGA的核苷酸序列，并且第三序列段盒B1B包含選自GNCASGCU、CUCGCGUC、GRSMSG、GRCAC和GGCA的核苷酸序列。40.權(quán)利要求39的核酸，其中a)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GUGUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GRCAC;b)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列GCGCGAG,并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列CUCGCGUC;或者c)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CSKSUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GRSMSG，或者d)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列UGUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GGCA，或者e)第一序列段盒B1A包含核苷酸序列AGCGUGDU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GNCASGCU。41.權(quán)利要求40的核酸，其中第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CSKSUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GRSMSG。42.權(quán)利要求41的核酸，其中第一序列段盒B1A包含核苷酸序列CCGCUU，并且第三序列段盒B1B包含核苷酸序列GGGCGG。43.權(quán)利要求39至42中任一項(xiàng)的核酸，其中第二序列段盒B2包含核苷酸序列AGGUGGGUGGUAGUAAGUAAAG。44.核酸權(quán)利要求39至43中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No80的核酸序列。45.權(quán)利要求1至44中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸能夠結(jié)合趨化因子，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。46.權(quán)利要求1至45中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸能夠結(jié)合趨化因子，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。47.權(quán)利要求1至46中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸能夠結(jié)合MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1、豬MCP-1和人MCP-1。48.權(quán)利要求1至47中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸能夠結(jié)合人MCP-1。49.權(quán)利要求1至48中任一項(xiàng)的，優(yōu)選權(quán)利要求48的核酸，其中所述MCP-1具有根據(jù)SEQ.ID.No.1的氨基酸序列。50.—種核酸，其優(yōu)選地結(jié)合鼠MCP-1，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No.122、SEQ.ID.No.253和SEQ.ID.No.254的核酸序列。51.—種核酸，其優(yōu)選地結(jié)合鼠MCP-1，其中所述核酸包含根據(jù)SEQ.ID.No.127的核酸序列。52.權(quán)利要求50或51的核酸，其中所述鼠MCP-1包含根據(jù)SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。53.權(quán)利要求1至52中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸包含修飾物，其中所述修飾物優(yōu)選為高分子量部分和/或其中所述修飾物優(yōu)選使得能夠改變權(quán)利要求1至52中任一項(xiàng)的核酸在動(dòng)物或人體，優(yōu)選人體內(nèi)的停留時(shí)間方面的特征。54.權(quán)利要求53的核酸，其中所述修飾物選自HES部分和PEG部分。55.權(quán)利要求54的核酸，其中所述修飾物是由直鏈或支化的PEG組成的PEG部分，其中所述PEG部分的分子量?jī)?yōu)選為大約20至120kD，更優(yōu)選大約30至80kD,和最優(yōu)選大約40kD。56.權(quán)利要求54的核酸，其中所述修飾物是HES部分，其中優(yōu)選地，所述HES部分的分子量為大約10至130kD，更優(yōu)選大約30至130kD，和最優(yōu)選大約100kD。57.權(quán)利要求53至56中任一項(xiàng)的核酸，其中所述修飾物經(jīng)由連接體偶聯(lián)至所述核酸。58.權(quán)利要求53至57中任一項(xiàng)的核酸，其中所述修飾物于所述核酸的5，-末端核苷酸和/或所述核酸的3，-末端核苷酸處偶聯(lián)至所述核酸，和/或于所述5，-末端核苷酸和所述3，-末端核苷酸之間偶聯(lián)至所述核酸的核苷酸。59.權(quán)利要求1至58中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸的核苷酸或形成所述核酸的核苷酸是L-核苷酸。60.權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸是L-核酸。61.權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)的核酸，其中能夠結(jié)合MCP-1的所述核酸的所述部分由L-核苷酸組成。62.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸和任選地另外的成分，其中所述另外的成分選自可藥用賦形劑、可藥用載體和藥物學(xué)活性試劑。63.權(quán)利要求62的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸和可藥用載體。64.權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸在制備藥劑中的用途。65.權(quán)利要求64的用途，其中所述藥劑用于人醫(yī)學(xué)或用于獸醫(yī)學(xué)。66.權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸在制備診斷工具中的用途。67.權(quán)利要求64或65的用途，其中所述藥劑用于治療和/或預(yù)防疾病或病癥，所述疾病或病癥選自炎性疾病，自身免疫疾病，自身免疫性腦脊髓炎，中風(fēng)，急性和慢性多發(fā)性硬化癥，慢性炎癥，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腎病，再狹窄，血管成形術(shù)后再狹窄，急性和慢性變態(tài)反應(yīng)，原發(fā)性和繼發(fā)性免疫反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)，哮喘，結(jié)膜炎，支氣管炎，癌癥，動(dòng)脈粥樣石更化，動(dòng)脈硬化性心血管心力衰竭或中風(fēng)，牛皮痺，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，神經(jīng)系統(tǒng)炎癥，特應(yīng)性皮炎，結(jié)腸炎，子宮內(nèi)膜異位，眼色素層炎，視網(wǎng)膜病癥，包括黃斑變性、視網(wǎng)膜脫離、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、色素性視網(wǎng)膜炎、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和漿液性中心性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變；特發(fā)性肺纖維化，結(jié)節(jié)病，多肌炎，皮肌炎，避免免疫抑制，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，膿毒癥，腎臟炎癥，腎小球腎炎，急驟進(jìn)展性腎小球腎炎，增生性腎小球腎炎，糖尿病性腎病，梗阻性腎病，急性腎小管壞死，和彌漫性腎小球硬化，全身性紅斑狼瘡，慢性支氣管炎，貝赫切特病，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)，川畸病之后的過(guò)早動(dòng)脈粥樣硬化，心肌梗死，肥胖癥，慢性肝病，佩羅尼病，急性脊髓損傷，肺或腎移植，心肌炎，阿爾茨海默病和神經(jīng)病，乳腺癌，胃癌，膀胱癌，卵巢癌，錯(cuò)構(gòu)瘤，結(jié)腸直腸癌，結(jié)腸腺瘤，胰腺炎，慢性阻塞性肺部疾病(COPD)，和炎性腸病例如克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎。68.—種復(fù)合物，其包含趨化因子和權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3，其中優(yōu)選地，所述復(fù)合物是晶體復(fù)合物。69.權(quán)利要求68的復(fù)合物，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。70.權(quán)利要求68或69的復(fù)合物，其中所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。71.權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸用于檢測(cè)趨化因子的用途，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。72.權(quán)利要求71的用途，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。73.權(quán)利要求71或72的用途，其中所述趨化因子是MCP-l,其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1,更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。74.用于篩選趨化因子拮抗劑或趨化因子激動(dòng)劑的方法，其包括下列步驟-提供候選趨化因子拮抗劑和/或候選趨化因子激動(dòng)劑，-提供權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸，-提供測(cè)試系統(tǒng)，其在存在趨化因子拮抗劑和/或趨化因子激動(dòng)劑時(shí)提供信號(hào)，和-確定所述候選趨化因子拮抗劑是否為趨化因子拮抗劑和/或所述候選趨化因子激動(dòng)劑是否為趨化因子激動(dòng)劑，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和'MCP-3。75.權(quán)利要求74的方法，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。76.權(quán)利要求74或75的方法，其中所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。77.用于篩選趨化因子激動(dòng)劑和/或趨化因子拮抗劑的方法，其包括下列步驟-提供固定至相，優(yōu)選固相的趨化因子，-提供權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸，優(yōu)選權(quán)利要求1至52中任一項(xiàng)的核酸，其是經(jīng)標(biāo)記的，-加入候選趨化因子激動(dòng)劑和/或候選趨化因子拮抗劑，和-確定所述候選趨化因子激動(dòng)劑是否為趨化因子激動(dòng)劑和/或所述候選趨化因子拮抗劑是否為趨化因子拮抗劑，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。78.權(quán)利要求77的方法，其特征在于，進(jìn)行所述測(cè)定，從而能夠評(píng)估所述核酸是否被所述候選趨化因子激動(dòng)劑或候選趨化因子拮抗劑所替代。79.權(quán)利要求77或78的方法，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)月包趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。80.權(quán)利要求77至79中任一項(xiàng)的方法，其中所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。81.用于檢測(cè)趨化因子的試劑盒，其包含權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。82.權(quán)利要求81的試劑盒，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。83.權(quán)利要求81或82的試劑盒，其中所述趨化因子是MCP-l,其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。84.通過(guò)權(quán)利要求74至80中任一項(xiàng)的方法能夠獲得的趨化因子拮抗劑，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。85.權(quán)利要求84的趨化因子拮抗劑，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。86.權(quán)利要求84或85的趨化因子拮抗劑，其中所述趨化因子是MCP-1，其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。87.通過(guò)權(quán)利要求74至80中任一項(xiàng)的方法能夠獲得的趨化因子激動(dòng)劑，其中所述趨化因子選自嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、MCP-1、MCP-2和MCP-3。88.權(quán)利要求87的趨化因子激動(dòng)劑，其中所述趨化因子選自人嗜酸性粒細(xì)月包趨化因子、人MCP-1、人MCP-2和人MCP-3。89.權(quán)利要求87或88的趨化因子激動(dòng)劑，其中所述趨化因子是MCP-1,其中MCP-1優(yōu)選地選自人MCP-1、猴MCP-1、馬MCP-1、兔MCP-1、牛MCP-1、犬MCP-1和豬MCP-1，更優(yōu)選地MCP-1是人MCP-1。90.用于檢測(cè)樣品中的權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸的方法，其中所述方法包括下列步驟f)提供含有根據(jù)本發(fā)明的核酸的樣品；g)提供捕獲探針和檢測(cè)探針，其中所述捕獲探針與權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸的第一部分至少部分地互補(bǔ)，和所述檢測(cè)探針與權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸的第二部分至少部分地互補(bǔ)，或者備選地，所述捕獲探針與權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸的第二部分至少部分地互補(bǔ)，和所述檢測(cè)探針與權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸的第一部分至少部分地互補(bǔ)；h)允許所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針同時(shí)地或者以任何順序依次地與^=又利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸或其部分反應(yīng)；i)任選地，檢測(cè)所述捕獲探針是否與在步驟a)中提供的權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸雜交；和j)檢測(cè)在步驟c)中形成的復(fù)合物，其由權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)的核酸以及所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針組成。91.權(quán)利要求90的方法，其中所述檢測(cè)探針包含檢測(cè)工具，和/或其中所迷捕獲探針可以固定至支持物，優(yōu)選固體支持物。92.權(quán)利要求90或91的方法，其中將不作為所述復(fù)合物的一部分的任何檢測(cè)探針從所述反應(yīng)體系中去除，從而在步驟e)中僅檢測(cè)作為所述復(fù)合物的一部分的檢測(cè)探針。93.權(quán)利要求90至92中任一項(xiàng)的方法，其中步驟e)包括下列步驟比較當(dāng)所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針在權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)行雜交-由;述檢測(cè)工具;斤產(chǎn)生的信號(hào)。V、"、'；'94.權(quán)利要求90至93中任一項(xiàng)的方法，其中所述待檢測(cè)的核酸是具有根據(jù)SEQ.ID.NO.37、116、117或278的核酸序列的核酸，并且所述捕獲探針或檢測(cè)探針包含根據(jù)SEQ.ID.NO.255或SEQ.ID.NO.256的核酸序列。95.權(quán)利要求90至93中任一項(xiàng)的方法，其中所述待檢測(cè)的核酸是具有根據(jù)SEQ.ID.NO.122、253或254的核酸序列的核酸，并且所述捕獲探針或檢測(cè)探針包含根據(jù)SEQ.ID.NO.281和SEQ.ID.NO.282的核酸序列。全文摘要本發(fā)明涉及核酸，其優(yōu)選地結(jié)合MCP-1，所述核酸選自1A型核酸、1B型核酸、2型核酸、3型核酸、4型核酸和具有根據(jù)SEQ.ID.No.87至115中任一個(gè)的核酸序列的核酸。文檔編號(hào)C12N15/115GK101415825SQ200780011305公開(kāi)日2009年4月22日申請(qǐng)日期2007年2月14日優(yōu)先權(quán)日2006年2月14日發(fā)明者C·馬阿施,D·尤爾貝格,F·雅羅施,K·布赫納,S·克呂斯曼,W·普爾施克申請(qǐng)人:諾松制藥股份公司