專利名稱：一種檢測成年男性綜合疾病遺傳易感性的試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及分子生物學和醫(yī)學領域，更具體地說，本發(fā)明涉及一種檢測成年男性疾病遺傳易感性的試 劑盒，通過對疾病遺傳風險相關的基因進行檢測分析來評估個體疾病遺傳易感性。
背景技術：
基因檢測分析技術已迅速成為預測人類疾病健康的重要工具?；蚣夹g能將人類的健康狀態(tài)和生理病 癥、遺傳突變的因素、疾病的傾向和狀態(tài)等關聯(lián)起來。DNA序列由于堿基插入、缺失、錯配引發(fā)的遺傳因 子突變，以及個體DNA表達式的上下調節(jié)等都是和健康狀態(tài)及疾病的機理有關的生物信息。例如，"老年性癡呆"是一種出現于老年期的持續(xù)性智能損害。遺傳基因是老年性癡呆的重要風險因 素,其中AP0E基因e4亞型與老年性癡呆患病風險密切相關。如果攜帶2個拷貝AP0E e4等位基因(e4/ e4)， 便屬于高風險人群。在沒有采取預防措施的情況下，65歲以下患老年性癡呆的可能性是60%到75%。而相 比之下，在AP0E基因e4等位基因檢測結果呈陰性的人群中，老年性癡呆的發(fā)病危險不足10%。被測試者 可以根據基因檢測結果，采取積極預防措施，使發(fā)病年齡至少可以推遲10年。又如，研究顯示P0N1基因的Glnl92Arg多態(tài)性與冠心病嚴重性、冠狀動脈粥樣硬化進展程度、血脂 水平和降血脂藥物治療效果都有相關。通過檢測中國北方地區(qū)49例老年冠心病患者和38例健康老年對照 者的P0N1的Gln/ Argl92基因多態(tài)性，研究發(fā)現冠心病組與健康組比較各基因型分布差異具有顯著性意 義。B等位基因在冠心病組比例為0.56,在健康組為0.37，冠心病組的B等位基因比例明顯高于健康組。 B等位基因是中國北方地區(qū)冠心病發(fā)病的危險因素。說明P0Nl基因Gln/Argl92遺傳多態(tài)性與中國北方地 區(qū)冠心病發(fā)病明顯相關。通過檢測P0N1基因的Gln/ Argl92遺傳多態(tài)性能夠得到被檢測者的冠心病易感 性，可以根據檢測結果盡早采取預防措施，減小發(fā)病的可能性。再如，p53突變和DNA甲基化在一定程度上預示了直腸癌的病理存在，進行基因檢測可以在被測者身 體尚未顯現任何癥狀的情況下發(fā)現早期直腸癌，及早采取措施進行治療，延長生命。ALDH2基因的rs671 多態(tài)性改變(G/A)缺陷導致機體對乙醛的代謝能力下降，引起飲酒的不適感，臉紅綜合癥等，容易導致 酒精中毒。通過基因檢測分析可以預知個人是否會發(fā)生酒精中毒情況，可以進行提前預防。相對于己經發(fā) 生酒精中毒再進行補救，基因檢測可以更好地保障生命健康。同樣對于一些藥物的使用，基因檢測可以得 知個體對藥物藥效與毒副作用的敏感性，基因檢測的結果可以作為醫(yī)師用藥的參考。發(fā)明內容基于基因檢測分析技術可用來評估個體疾病遺傳易感性的基礎上，本發(fā)明提供一種檢測成年男性綜合 疾病遺傳易感性的試劑盒。本發(fā)明所述的試劑盒主要用于檢測與動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病、腦梗塞、腦出血、糖尿病、肥 胖癥、高血脂癥、支氣管哮喘、潰瘍性結腸炎、甲狀腺功能亢進、老年性癡呆、骨質疏松、膽石癥、痛風、 肺癌、肝癌、食管癌、胃癌、大腸癌、鼻咽癌、甲狀腺癌、腎癌、膀胱癌、白血病、前列腺癌等疾病相關 的基因位點，以及與改善維生素利用能力、葉酸代謝能力、抗氧化能力、抗衰老、解毒、炎癥反應等相關 的基因位點。通過檢測這些基因位點，可得到被檢人疾病遺傳易感性的情況，并向被檢人提供個體化健康 指導報告。該試劑盒包括檢測LPL、 TNF-a、 LEP、 ADIPOQ、 S0D3、 IL3、 CTLA4、 EN0S、 ESR2、 ERCC1、 MTHFR、 MS4A2、 XRCC1、 ALDH2、 TNFA、 MTR、 CCL5、 C0MT、 GSTP1、 PPARG、 PARP1、 0PG、 VDR、 P0N1、 ABCA1、 MTRR、 ERCC2、 AT1R、 AGT、 CCND1、 UCP2、 ADH2、 ADBR2、 AP0B、 CYP11B2、 CYP1A1、 CYP2E1、 CETP、 NQOl、 IL6、 CYP2A13基因上 48個SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對；熒光定量PCR反應組件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCL溶液、反應緩沖液、去離子水等)。 本試劑盒中所述的特異性引物對是指針對LPL、 TNF-a 、 LEP、 ADIPOQ、 S0D3、 IL3、 CTLA4、 EN0S、 ESR2、 ERCC1、 MTHFR、 MS4A2、 XRCC1、 ALDH2、 TNFA、 MTR、 CCL5、 C0MT、 GSTP1、 PPARG、 PARP1、 0PG、 VDR、 P0N1、ABCA1、 MTRR、 ERCC2、 AT1R、 AGT、 CCND1、 UCP2、 ADH2、 ADBR2、 AP0B、 CYP11B2、 CYP1A1、 CYP2E1、 CETP、 NQOl、 IL6、 CYP2A13基因上48個SNP位點而設計，能特異性擴增出包含這些SNPs位點的DNA片段的引物 對。設計這類引物對是本領域技術人員能夠輕易完成的。特異性引物對可用常規(guī)的合成技術進行合成。本試劑盒中所述的特異性熒光探針對是指針對LPL、 TNF-a 、 LEP、 ADIPOQ、 SOD3、 IL3、 CTLA4、 ENOS、 ESR2、 ERCC1、 MTHFR、 MS4A2、 XRCC1、 ALDH2、 TNFA、 MTR、 CCL5、 COMT、 GSTP1、 PPARG、 PARP1、 0PG、 VDR、 P0N1、 ABCA1、 MTRR、 ERCC2、 AT1R、 AGT、 CCND1、 UCP2、 ADH2、 ADBR2、 APOB、 CYP11B2、 CYP1A1、 CYP2E1、 CETP、 NQOl、 IL6、 CYP2A13基因上48個SNP位點而設計，能通過熒光定量PCR技術特異性檢測出這些SNPs 位點基因型的Tacpan探針對。設計這類探針是本領域技術人員能夠輕易完成的。特異性熒光探針對可用 常規(guī)的探針合成技術進行合成。所有可用于熒光定量PCR法檢測本發(fā)明中所述的48個SNPs位點的探針均 在本發(fā)明范圍內。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī) 條件，或按照廠商所建議的條件。實施例l.檢測試劑盒的使用 步驟l: DNA模板的抽取 用硅膠吸附法抽提口腔上皮細胞的基因組DNA。 步驟2:熒光定量PCR反應使用檢測試劑盒，每個SNP位點分別進行一次獨立的熒光定量PCR反應，每個反應的體系為總體積 lOnl,包含濃度為20ng/pl的DNA模板2jxl、 lpl 10 X熒光定量PCR反應緩沖液、0.1^1 25mM dNTP混合 液、0.6nl 25mM MgCl2溶液、0. 025fil (5units/nl) Taq DNA聚合酶、20pM的引物每一條各0.225pl、 lOpM的熒光探針每一條各0. 25pl，去離子水5. 325nl。在ABI9700型PCR擴增儀上進行反應，反應條件為50'C、 2分鐘，95°C、 IO分鐘，進行60個循環(huán)的 95°C、 30秒，60°C、 l分鐘。反應結束后在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟3: SNP基因型分析熟悉熒光定量PCR技術的本領域技術人員能夠通過辨識熒光定量PCR儀上顯示的最終樣品熒光量，根 據不同序列探針的不同熒光信號的強弱即可確定所檢測的SNP位點的基因型。實施例2.對成年男性進行綜合疾病遺傳易感性檢測的服務 步驟l: DNA提取由醫(yī)院檢驗科醫(yī)師指導被檢者使用口腔采樣拭進行口腔上皮細胞取樣，采用硅膠吸附法進行口腔上皮 細胞的DNA抽提。步驟2:基因分型檢測使用本發(fā)明提供的試劑盒，對被檢測者基因組DNA的LPL、 TNF-a 、 LEP、 ADIPOQ、 S0D3、 IL3、 CTLA4、 EN0S、 ESR2、 ERCC1、 MTHFR、 MS4A2、 XRCC1、 ALDH2、 TNFA、 MTR、 CCL5、 COMT、 GSTP1、 PPARG、 PARP1、 OPG、 VDR、 P0N1、 ABCA1、 MTRR、 ERCC2、 AT1R、 AGT、 CCND1、 UCP2、 ADH2、 ADBR2、 APOB、 CYP11B2、 CYP1A1、 CYP2E1、 CETP、 NQOl、 IL6、 CYP2A13基因上48個SNP位點分別進行熒光定量PCR檢測，確定這些SNP位 點的基因型。步驟3:綜合疾病遺傳易感性的分析通過對被檢測者SNPs基因型的分析，出具綜合疾病遺傳易感性的分析報告單，并由醫(yī)師向被檢者詳 細說明和解讀綜合疾病遺傳易感性分析報告單。
權利要求
1. 一種檢測成年男性綜合疾病遺傳易感性的試劑盒，其特征在于包括同時檢測LPL、TNF-α、LEP、ADIPOQ、SOD3、IL3、CTLA4、ENOS、ESR2、ERCC1、MTHFR、MS4A2、XRCC1、ALDH2、TNFA、MTR、CCL5、COMT、GSTP1、PPARG、PARP1、OPG、VDR、PON1、ABCA1、MTRR、ERCC2、AT1R、AGT、CCND1、UCP2、ADH2、ADBR2、APOB、CYP11B2、CYP1A1、CYP2E1、CETP、NQO1、IL6、CYP2A13基因上48個SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應緩沖液、去離子水。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性引物對是指針對LPL、 TNF-(i、 LEP、 ADIP0Q、 S0D3、 IL3、 CTLA4、 EN0S、 ESR2、 ERCC1、 MTHFR、 MS4A2、 XRCC1、 ALDH2、 TNFA、 MTR、 CCL5、 COMT、 GSTP1、 PPARG、 PARP1、 0PG、 VDR、 P0N1、 ABCA1、 MTRR、 ERCC2、 AT1R、 AGT、 CCND1、 "UCP2、 ADH2、 ADBR2、 APOB、 CYP11B2、 CYP1A1、 CYP2E1、 CETP、 NQOl、 IL6、 CYP2A13基因上的48個SNP位點而設計，能特異性 擴增出包含這48個SNPs位點的DNA片段的引物對。
3. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性熒光探針對是指針對LPL、 TNF- a 、 LEP、 ADIP0Q、 S0D3、 IL3、 CTLA4、 EN0S、 ESR2、 ERCC1、 MTHFR、 MS4A2、 XRCC1、 ALDH2、 TNFA、 MTR、 CCL5、 COMT、 GSTP1、 PPARG、 PARP1、 OPG、 VDR、 P0N1、 ABCA1、 MTRR、 ERCC2、 AT1R、 AGT、 CCND1、 UCP2、 ADH2、 ADBR2、 APOB、 CYP11B2、 CYP1A1、 CYP2E1、 CETP、 NQOl、 IL6、 CYP2A13基因上的48個SNP位點而設計，能通過熒 光定量PCR技術特異性檢測出這48個SNPs位點基因型的Taqman探針對。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測成年男性綜合疾病遺傳易感性的試劑盒。該試劑盒包括同時檢測過LPL、TNF-α、LEP、ADIPOQ、SOD3、IL3、CTLA4、ENOS、ESR2、ERCC1、MTHFR、MS4A2、XRCC1、ALDH2、TNFA、MTR、CCL5、COMT、GSTP1、PPARG、PARP1、OPG、VDR、PON1、ABCA1、MTRR、ERCC2、AT1R、AGT、CCND1、UCP2、ADH2、ADBR2、APOB、CYP11B2、CYP1A1、CYP2E1、CETP、NQO1、IL6、CYP2A13基因上48個SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對、用于熒光定量PCR檢測的常規(guī)組件等。本發(fā)明的試劑盒通過同時檢測與成年男性綜合疾病遺傳易感性密切相關的48個單核苷酸多態(tài)性位點基因型來評估成年男性綜合疾病遺傳易感性。
文檔編號C12Q1/68GK101275160SQ20071003859
公開日2008年10月1日 申請日期2007年3月29日 優(yōu)先權日2007年3月29日
發(fā)明者馮哲民, 鄒祖燁 申請人:上海主健生物工程有限公司