專利名稱：：用于檢測流感a型病毒的強(qiáng)毒株的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及使用與除流感病毒A的強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒株的方法，且更具體而言涉及夾心免疫測定法，和特別地免疫層析測定法和免疫層析測定法裝置。本發(fā)明涉及用于快速和簡單的診斷流感病毒的強(qiáng)毒林，例如高致病性禽流感病毒感染的檢測方法。
背景技術(shù)：
：高致病性禽流感是由對雞等顯示致命致病性的流感病毒引起的傳染病。這種疾病也稱為雞瘟。在日本，這種疾病是根據(jù)家畜傳染病預(yù)防法法律上指定的傳染病。同樣，高致病性禽流感由OfficeInternationaldesEpizooties(OIE)指定為ListA疾病。已引起此類高致病性禽流感的流感病毒歸入流感病毒A亞型僅H5和H7。這些亞型不一定是強(qiáng)毒的。然而，當(dāng)家畜感染這些亞型時(shí)，無論它們是強(qiáng)毒的還是減毒的，在日本所有動(dòng)物都必須被殺死。就感染禽流感病毒的人類而言，禽流感病毒亞型H5、H7和H9感染已得到報(bào)道。在這些中，H5N1亞型是已報(bào)道引起患者死亡的唯一流感病毒。已報(bào)道流感病毒亞型H5N1感染引起嚴(yán)重的肺炎隨后為死亡。在1997年，由亞型H5N1引起的高致病性禽流感已在香港變得流行。此外，在2003年后至今這已在幾個(gè)亞洲國家中變得如此流行，并且甚至人類感染和死亡也已得到報(bào)道。目前，亞型H5N1關(guān)于人類感染在全世界具有極大關(guān)注，并且被關(guān)注在亞型H1N1和H3N2后在世界上引起新流感。根據(jù)2005年11月17日的WHO報(bào)道，存在其中人類感染流感病毒亞型H5N1得到證實(shí)的130個(gè)病例，并且在他們中，存在其中患者死亡的67個(gè)病例。在2004年12月后，其中人類感染得到證實(shí)的病例數(shù)目已快速增加，并且死亡人數(shù)也已增加。感染H5N1病毒后患者的死亡率為51.3%(67/130)。如由上文描述顯而易見的，人類感染亞型H5N1現(xiàn)在已變成現(xiàn)實(shí)。為了預(yù)防流感的大規(guī)模感染，亞型H5N1感染的快速檢測是主要問題。此外，快速診斷對于其治療也是重要的。在當(dāng)前環(huán)境下，關(guān)于鳥類的高致病性禽流感的診斷通過下述方法來進(jìn)行，所述方法包括收集來自懷疑病毒感染的患病鳥的氣管拭子或泄殖腔拭子(泄殖腔的拭子)，將其接種在含胚雞蛋中用于培養(yǎng)，且隨后分離病毒。然而，這種方法是不利的，因?yàn)樗枰獛滋煲垣@得結(jié)果且因此結(jié)果無法快速獲得。使用最近開發(fā)的遺傳測試(PCR法、LAMP法)，獲得結(jié)果所需的時(shí)間顯著減少。然而，因?yàn)檫@些遺傳測試需要專用設(shè)備和技術(shù)，所以無法在家禽飼養(yǎng)所等進(jìn)行這些測試。流感病毒通過人類上呼吸道、下呼吸道等進(jìn)行感染，并且在1-2天的潛伏期后，病毒引起頭痛、腰痛、肌痛、全身不適、消化器官紊亂等、以及發(fā)燒(38°C-39°C)。此類流感最成問題的并發(fā)癥包括在老年人中的肺炎和在兒童中的腦炎/腦病。特別地，在兒童中的腦炎/腦病的特征在于它伴隨高燒、意識(shí)紊亂和驚厥。在兒童中的此類腦炎/腦病的預(yù)后極差，并且從最初癥狀到中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的表現(xiàn)或死亡的時(shí)期極短。因此，快速診斷和治療是必要的。先前，人僅基于前述臨床癥狀診斷為類似流感的疾病。然而，近年來由于用于快速檢測流感病毒抗原的測試試劑盒的開發(fā)和廣泛傳播，已可以在早期階段時(shí)診斷流感病毒傳染病。此類快速診斷試劑盒包括利用酶聯(lián)免疫測定法(EIA)或免疫層析測定法作為原理的那些。某些試劑盒僅檢測流感病毒A,和其他試劑盒共同檢測流感病毒A和B。此外，某些其他試劑盒單獨(dú)檢測流感病毒A和B。然而，目前的流感抗原測試使用所有A病毒共有的核蛋白反應(yīng)的抗體。因此，無法進(jìn)行亞型H5與亞型H1N1或H3N2感染之間的鑒別診斷，所有這些都是流感病毒A。亞型H5N1感染引起嚴(yán)重的肺炎，并且死亡率極高。因此，在初次診斷時(shí)進(jìn)行亞型H5感染的鑒別診斷是重要的，這還將用于確定關(guān)于患者的治療策略。這還使得能夠采取措施例如在早期階段時(shí)患者的隔離以防止進(jìn)一步的感染，這對于防止亞型H5N1感染的進(jìn)一步擴(kuò)大將是重要的。使用最近開發(fā)的遺傳測試(PCR法、LAMP法)，可以區(qū)別且檢測亞型H5N1。然而，這些遺傳測試需要專用設(shè)備和技術(shù)，且因此不能說它們是簡單的方法。專利文件1:日本專利提前公開(Laid-open)(Kohyo)號2004-509648專利文件2:日本專利提前公開(Kokai)號11-108932專利文件3:日本專利提前公開(Kokai)號2001-215228非專利文件1:HinshawV.S.等人,"Specificantibodyresponsesandgenerationofantigenicvariantsinchickensimmunizedagainstavirulentavianinfluenzavirus,"AvianDis.1990，34(1):80-6非專利文件2:KaverinN.V.等人，"StructureofantigenicsitesonthehaemagglutininmoleculeofH5avianinfluenzavirusandphenotypicvariationescapemutants,，，J.Gen.Virol.2002,83(ptl0):2497-505本發(fā)明的公開內(nèi)容由本發(fā)明解決的問題如上所述，流感病毒快速感染，且如果檢測被延遲，那么在大范圍中迅速傳播。因此，必須盡早且盡快地檢測流感病毒感染。特別是，流感病毒A亞型H5N1引起嚴(yán)重的肺炎，并且死亡率極高。然而，迄今為止，通過使用用于檢測流感病毒抗原的常規(guī)試劑無法與其他類型的流感病毒A感染分開檢測流感病毒A亞型H5。本發(fā)明的目的是提供使得能夠快速和簡單的鑒別診斷流感病毒A的強(qiáng)毒林包括流感病毒A亞型H5N1的檢測試劑，以及使用其的檢測方法，包括夾心免疫測定法、和特別地免疫層析測定法，和免疫層析測定法裝置。用于解決該問題的方法本發(fā)明人通過用流感病毒A作為免疫原使小鼠免疫已獲得各種類型的抗體。隨后，這些抗體已在免疫層析測定法裝置中進(jìn)行測試。在這個(gè)過程期間，本發(fā)明人已成功地獲得與除流感病毒的強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的單克隆抗體。隨后，本發(fā)明已通過發(fā)現(xiàn)流感病毒A的強(qiáng)毒林可以使用上述抗體在免疫測定法進(jìn)行檢測來完成，所述免疫測定法特別是夾心免疫測定法、和具體地免疫層析測定法中。換言之，依照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的方法，其包括提供與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、和不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體，且進(jìn)行免疫測定法以檢測在與第一種抗體的反應(yīng)中顯示陽性應(yīng)答、和在與第二種抗體的反應(yīng)中顯示陰性應(yīng)答的抗原。在這種檢測方法中使用的免疫測定法未具體限制。夾心免疫測定法、特別是ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法)法、免疫層析測定法等是優(yōu)選的。因此，在本發(fā)明的上述檢測方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，上述免疫測定法包括使用第一種抗體和與第三種抗體的夾心免疫測定法，所述第三種抗體與笫一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)，和/或使用第二種抗體和第四種抗體的夾心免疫測定法，所述第四種抗體與第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)。此類夾心免疫測定法可以有利地通過使第一種抗體和第二種或笫四種抗體固定在栽體中來進(jìn)行。在這種情況下，如果使用膜載體作為載體，那么可以進(jìn)行免疫層析測定法。因此，依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了免疫層析測定法，其包括提供具有第一個(gè)捕獲區(qū)帶和第二個(gè)捕獲區(qū)帶的膜栽體，所述捕獲區(qū)帶通過分別使第一種抗體和第二種抗體固定在其預(yù)定位置中形成，第一種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，和第二種抗體不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)；和在膜栽體中分別針對第一個(gè)捕獲區(qū)帶和笫二個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)第一種混合溶液和第二種混合溶液，第一種混合溶液包含測試樣品和第三種抗體，所述第三種抗體與第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)，和第二種混合溶液包含測試樣品和第四種抗體，所述第四種抗體與第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)，或在膜載體中針對2個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)第一種混合溶液，由此流感病毒A的強(qiáng)毒林可以基于下述結(jié)果進(jìn)行檢測在與第一種抗體的反應(yīng)中的陽性應(yīng)答顯示于第一個(gè)捕獲區(qū)帶中，同時(shí)在與第二種抗體的反應(yīng)中的陰性應(yīng)答顯示于第二個(gè)捕獲區(qū)帶中。此外，依照本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供了用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、與第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第三種抗體、與第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第四種抗體、和膜栽體，其中第一種和第二種抗體先前固定在膜栽體的預(yù)定位置中，以便分別形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶和第二個(gè)捕獲區(qū)帶，以及第三種和第四種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中第三種和第四種抗體在遠(yuǎn)離捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在膜載體中分別針對第一個(gè)和笫二個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。上述膜載體可以是具有彼此遠(yuǎn)離的第一個(gè)捕獲區(qū)帶和第二個(gè)捕獲區(qū)帶的單個(gè)膜載體。另外，膜載體可以包含在其中固定第一種抗體的第一個(gè)膜載體，和在其中固定第二種抗體的笫二個(gè)膜栽體。后面一個(gè)膜載體就特異性而言是極佳的，且因此是優(yōu)選的。在后面一個(gè)膜載體的情況下，第三種抗體在第一個(gè)膜載體上進(jìn)行制備，和第四種抗體在第二個(gè)膜載體上進(jìn)行制備是方便的，因?yàn)闇y量可以僅通過將測試樣品注入每個(gè)膜載體內(nèi)來進(jìn)行。第三種和第四種抗體進(jìn)行制備同時(shí)灌注到部件內(nèi)是方便的，所迷部件分別排列在第一個(gè)和第二個(gè)膜載體上。當(dāng)本發(fā)明的膜栽體包含所述第一個(gè)和笫二個(gè)膜載體時(shí)，它們可以被制成所謂的免疫層析測試條，其中第一個(gè)和第二個(gè)膜載體都具有延伸形式，即條形式，和排列在分別的膜載體上的灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)第一個(gè)和第二個(gè)膜載體彼此平行放置。備選地，可以形成所謂的免疫層析測試條或免疫層析測試試劑盒，其中笫一個(gè)和第二個(gè)膜載體都具有延伸形式，即條形式，和排列在分別的膜栽體上的灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)第一個(gè)和第二個(gè)膜栽體放射狀或相對地》文置。上述方法和裝置全都涉及其中上述笫二種抗體固定在栽體中的技術(shù)。然而，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，其中上述第二種抗體未固定在載體中的技術(shù)也可以采用。換言之，依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了免疫層析測定法，其包括提供與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、和與第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第三種抗體；制備各自具有通過使第一種抗體固定在其預(yù)定位置中形成的第一個(gè)捕獲區(qū)帶的膜載體；和在分別的膜載體中針對第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)第一種混合溶液和第二種混合溶液，笫一種混合溶液包含測試樣品和第二種抗體，和第二種混合溶液包含測試樣品和笫三種抗體，由此流感病毒A的強(qiáng)毒林可以基于下述結(jié)果進(jìn)行檢測在與第三種抗體的反應(yīng)中的陽性應(yīng)答顯示于第一個(gè)捕獲區(qū)帶中，同時(shí)在與第二種抗體的反應(yīng)中的陰性應(yīng)答顯示于笫一個(gè)捕獲區(qū)帶中。這種測定法僅需要在其中固定第一種抗體的單一類型的膜栽體，但需要層析顯色2次，即，第一種混合溶液的層析顯色和第二種混合溶液的層析顯色。因此，這種測定法需要總共2個(gè)膜載體用于上述2次層析顯色。此外，依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、與第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第三種抗體、和膜載體，其中第一種抗體先前固定在膜載體的預(yù)定位置中，以便形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶，以及第二種和第三種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中第二種和第三種抗體各自在遠(yuǎn)離第一個(gè)捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在膜栽體中針對第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。在上述測定法裝置中，膜載體優(yōu)選地至少包含在其中固定第一種抗體的第一個(gè)膜載體，和在其中固定第一種抗體的第二個(gè)膜栽體。第二種抗體在第一個(gè)膜載體上進(jìn)行制備，和第三種抗體在第二個(gè)膜載體上進(jìn)行制備是方便的，因?yàn)闇y量可以僅通過將測試樣品注入2個(gè)膜載體內(nèi)來進(jìn)行。第二種和第三種抗體進(jìn)行制備同時(shí)灌注到部件內(nèi)是方便的，所述部件分別排列在第一個(gè)和第二個(gè)膜栽體上。A和B的商購可得的免疫層析測試條或試劑盒來進(jìn)行，例如CAPILIA(注冊商標(biāo))FluA+B(由TaunsLaboratories,Inc.制造)，4吏用所述第一種抗體和第二種抗體的夾心免疫測定法裝置。因此，對于此類實(shí)施方案，依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的笫一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、和膜栽體，其中第二種抗體先前固定在膜載體的預(yù)定位置中，以便形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶，和第一種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中第一種抗體在遠(yuǎn)離第一個(gè)捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在膜載體中針對第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。此外，對于相同實(shí)施方案，依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、和膜載體，其中第一種抗體先前固定在膜載體的預(yù)定位置中，以便形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶，和第二種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中第二種抗體在遠(yuǎn)離第一個(gè)捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在膜載體中針對第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。本發(fā)明中使用的上述第一種抗體和第二種抗體各自是針對流感病毒的抗體，并且一般作為針對流感病毒的核蛋白的抗體獲得。上述第一種抗體和第二種抗體各自可以是多克隆抗體或單克隆抗體，且從特異性的觀點(diǎn)來看優(yōu)選是單克隆抗體。作為上述第一種抗體，一般可以使用針對流感病毒A的核蛋白的已知單克隆抗體。上述第二種抗體已獲得，同時(shí)就與各自流感病毒A亞型的反應(yīng)性檢查針對流感病毒A的核蛋白的各種單克隆抗體。在第一種抗體的情況下，上述多克隆抗體可以通過下述來獲得，例如，克隆對應(yīng)包含構(gòu)成表位的氨基酸殘基的區(qū)帶的DNA片段，所述DNA片段來自編碼SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的DNA序列，允許克隆基因在宿主例如大腸桿菌(fsc力eWc力/aco//)中以遺傳改造的方式表達(dá)，提取并純化表達(dá)的蛋白質(zhì)，用純化的蛋白質(zhì)用作抗原根據(jù)常規(guī)方法免疫動(dòng)物，并且隨后從免疫動(dòng)物的抗血清中獲得多克隆抗體。在第二種抗體的情況下，上述多克隆抗體可以通過下述來獲得，例如，克隆對應(yīng)包含構(gòu)成表位的氨基酸殘基的區(qū)帶的DNA片段，所述表位不同于流感病毒亞型H5N1，所述DM片段來自編碼SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列的DNA序列，允許克隆基因在宿主例如大腸桿菌中以遺傳改造的方式表達(dá)，提取并純化表達(dá)的蛋白質(zhì)，用純化的蛋白質(zhì)用作抗原根據(jù)常規(guī)方法免疫動(dòng)物，并且隨后從免疫動(dòng)物的抗血清中獲得多克隆抗體。在第一種和第二種抗體的2種情況下，單克隆抗體可以通過下述來獲得，例如，用上述純化的蛋白質(zhì)用作抗原免疫動(dòng)物例如小鼠，使免疫動(dòng)物的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合用于細(xì)胞融合，在含HAT的培養(yǎng)基中選擇因而融合的細(xì)胞并允許它們生長，并且隨后通過酶標(biāo)記免疫測定法等使用上述純化的蛋白質(zhì)選擇生長菌林。用作上述第二種抗體的單克隆抗體不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。此類單克隆抗體特別地識(shí)別在除流感病毒的強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型中是保守的，并且在流感病毒的強(qiáng)毒林中進(jìn)行突變且喪失，并且特別地識(shí)別流感病毒A的核蛋白的表位。認(rèn)為流感病毒A的此類表位通過流感病毒亞型H5N1中的氨基酸序列的置換或不同糖鏈修飾的發(fā)生進(jìn)行突變，且因此不能被上述第二種抗體特異性識(shí)別。此類單克隆抗體仍是未知的，且它是新型的。因此，依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的單克隆抗體。特別地，單克隆抗體不與流感病毒A亞型H5N1的核蛋白反應(yīng)但與除亞型H5N1外的所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)。在本發(fā)明中，在夾心免疫測定法例如免疫層析測定法中使用的笫三種抗體可以是任何抗體，只要它與第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)。第三種抗體可以與第一種抗體相同，或可以是除第一種抗體外的抗體。例如，當(dāng)抗原具有與第一種抗體反應(yīng)的多個(gè)表位時(shí)，與第一種抗體相同的抗體可以用作第三種抗體。因此，第三種抗體可以是與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體。此外，第三種抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體，并優(yōu)選是單克隆抗體，并且從特異性的觀點(diǎn)來看特別是與流感病毒的核蛋白反應(yīng)的單克隆抗體。在本發(fā)明中，在夾心免疫測定法例如免疫層析測定法中使用的第四種抗體可以是任何抗體，只要它與第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)。第四種抗體可以與第二種抗體相同，或可以是除第二種抗體外的抗體。例如，當(dāng)抗原具有與笫二種抗體反應(yīng)的多個(gè)表位時(shí)，與第二種抗體相同的抗體可以用作第四種抗體。因此，第四種抗體可以是與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體。另外，第四種抗體還可以是不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體。此外，第四種抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體，并優(yōu)選是單克隆抗體，并且從特異性的觀點(diǎn)來看特別是與流感病毒的核蛋白反應(yīng)的單克隆抗體。當(dāng)?shù)谒姆N抗體是與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體時(shí)，它可以與第三種抗體相同。提及流感病毒A亞型，目前就H(血凝素)蛋白而言已知16種亞型，和就N(神經(jīng)氨酸酶)蛋白而言已知9種亞型。因此，在理論上，將存在144(16x9)種亞型。然而，一般而言，與亞型H1-H15的代表性例子反應(yīng)的抗體應(yīng)當(dāng)理解為"與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體"。因此，在本說明書中，"所有流感病毒A亞型"意指目前已知的亞型HI-H15的代表性例子，并且具體意指本說明書中隨后的表2中所示的毒林。同樣，"除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型，，意指亞型HI-H15的代表性例子，并且具體意指本說明書中隨后的表2中所示的毒抹，從其中排除強(qiáng)毒林。術(shù)語"強(qiáng)毒林，，意指亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒抹。與流感病毒A的核蛋白反應(yīng)的抗體不與流感病毒B或流感病毒C的核蛋白交叉反應(yīng)。類似地，本發(fā)明的第一種抗體和第二種抗體都不與流感病毒B或流感病毒C的核蛋白交叉反應(yīng)。此外，在本說明書中，表達(dá)"在與抗體的反應(yīng)中的陽性應(yīng)答"意指抗原-抗體反應(yīng)在抗原和抗體之間進(jìn)行，而表達(dá)"在與抗體的反應(yīng)中的陰性應(yīng)答"意指抗原-抗體反應(yīng)未在抗原和抗體之間進(jìn)行。此外，在本說明書中，關(guān)于抗體的表達(dá)"不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)，，包括其中抗體不與選自下述的至少一種的任何區(qū)帶進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的情況流感病毒A亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒林，和其中抗體僅輕微地進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，同時(shí)它在使用的某一狀態(tài)中不進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的情況，例如，當(dāng)抗體固定在膜栽體中時(shí)。發(fā)明效應(yīng)根據(jù)本發(fā)明，通過使用與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體作為第一種抗體、連同不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體作為第二種抗體，根據(jù)免疫測定法已可以檢測在與第一種抗體的反應(yīng)中顯示陽性應(yīng)答、和在與第二種抗體的反應(yīng)中顯示陰性應(yīng)答的抗原。這種檢測方法可以用于選擇性或特異性檢測流感病毒的強(qiáng)毒林，并且可以應(yīng)用于廣泛范圍診斷由針對人類、鳥類等的流感病毒的強(qiáng)毒抹引起的傳染病。此外，通過使用本發(fā)明的免疫層析測定法和免疫層析測定法裝置，可以在醫(yī)院、家禽飼養(yǎng)所等中簡單和快速地檢測流感病毒的強(qiáng)毒林和診斷病毒感染，無需專用設(shè)備或熟練技術(shù)。用于執(zhí)行本發(fā)明的最佳方式可以用于執(zhí)行本發(fā)明的免疫層析測定法的測定法裝置可以基于已知免疫層析測試條的結(jié)構(gòu)容易地實(shí)現(xiàn)。在下文中，其具體例子將就附圖而言進(jìn)行描述。(1)使用單個(gè)免疫層析測試條的實(shí)施方案作為免疫層析測試條的具體例子，可以提及例如如圖1中所示的測試條IO。在圖1中，數(shù)字l指示粘著層，2指示灌注部件，3指示膜栽體，4指示捕獲區(qū)帶，5指示吸附部件，和6指示樣品接受部件。在如該圖中所示的例子中，膜載體3由具有5mm寬度和36mm長度的延伸的條形硝化纖維素膜濾器組成。膜載體3與具有與上文相同的寬度的粘著層1的中部附著。膜載體3具有第一種抗體，其固定在距離層析顯色的初始點(diǎn)一側(cè)下游7.5mm位置上，即，距離圖l中的左側(cè)上的膜栽體的末端(這在下文中稱為"上游側(cè)"，和對側(cè)即層析顯色方向的一側(cè)，換言之，圖1中的右側(cè)在下文中稱為"下游側(cè)")。因此形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a用于捕獲第三種抗體和病毒抗原的復(fù)合物，所述病毒抗原例如流感病毒A的核蛋白。此外，第二種抗體固定在距離膜載體3的上游側(cè)上的末端下游10.5mm位置上，且因此形成第二個(gè)41b用于捕獲第四種抗體(如下所述，它可以與圖1的裝置中的第三種抗體相同)和病毒抗原的復(fù)合物，所述病毒抗原例如除強(qiáng)毒林外的流感病毒A的核蛋白。此外，在距離膜載體3的上游側(cè)上的末端下游15.0mm位置上提供了所謂的對照線42。提供對照線42以證實(shí)反應(yīng)已進(jìn)行，不管分析物的存在或不存在。一般而言，此類對照線42可以通過使物質(zhì)固定來形成，所述物質(zhì)能夠與膜載體3中的第三種和/或第四種抗體(除分析物外)免疫特異性結(jié)合。例如，當(dāng)小鼠抗體用作第三種和/或第四種抗體時(shí)，針對小鼠抗體的抗體可以用作該物質(zhì)。在圖1中的裝置中，硝化纖維素膜濾器用作膜載體3。然而，任何類型的膜載體都可以在本文中使用，只要它能夠?qū)游龇ǖ仫@現(xiàn)測試樣品中包含的分析物，并且使形成捕獲區(qū)帶4的抗體固定。因此，其他類型的纖維素膜、尼龍膜、玻璃纖維膜等也可以使用。在圖1中的裝置中，作為第一種抗體，優(yōu)選使用與所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)的單克隆抗體。作為第二種抗體，優(yōu)選使用與除強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)的單克隆抗體。在本發(fā)明中，第三種抗體是與第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的抗體，且優(yōu)選是與所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)的抗體。在許多情況下，與第一種抗體相同的抗體可以用作第三種抗體。此外，第四種抗體是與第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的抗體。本文使用的第四種抗體的例子包括與所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)的單克隆抗體，和與除強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)的單克隆抗體。換言之，第四種抗體是可以與第一種、第二種或第三種抗體相同的抗體。在圖l的裝置中，作為可以彼此相同或不同的第三種和第四種抗體，使用與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體。在許多情況下，作為第三種和第四種抗體，可以使用與第一種抗體相同的單克隆抗體。第三種和第四種抗體可以與測試樣品和顯影溶劑混合，以在與免疫層析測試條IO分開的合適器皿中制備混合溶液。其后，混合溶液可以被注入該圖中所示的免疫層析測試條10的樣品接受部件6內(nèi)，從而使得它在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)。然而，第三種和第四種抗體優(yōu)選與免疫層析測試條10整合，從而使得當(dāng)通過使測試樣品與顯影溶劑混合而制備的混合溶液被注入樣品接受部件6內(nèi)時(shí)，這些抗體可以與混合溶液相混合且在膜栽體3中層析法地顯現(xiàn)。因此，在圖1的裝置中，第三種和第四種抗體先前已用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，且隨后注入部件2，所述部件2與膜載體3的上游側(cè)的末端聯(lián)系，由此這些抗體構(gòu)成免疫層析測試條10的部分。應(yīng)當(dāng)指出以標(biāo)記狀態(tài)的第三種和/或第四種抗體在本發(fā)明中通常稱為標(biāo)記抗體。在如該圖中所示的例子中，具有5mmx15mm的大小的條形玻璃纖維非紡織物用作灌注部件2。然而，灌注部件2不限于其，而包括例如纖維素織物(濾紙、硝化纖維素膜等)、多孔塑料織物例如聚乙烯和聚丙烯、及其他。作為標(biāo)記第三種和第四種抗體的標(biāo)記試劑，可以使用任何物質(zhì)，只要它可在本文中使用。此類標(biāo)記試劑的例子包括有色標(biāo)記試劑、酶才示i己試劑和i丈射才示"i己試劑。在這些中，優(yōu)選使用有色標(biāo)記試劑，因?yàn)橛萌庋塾^察捕獲區(qū)帶4中的顏色變化使得能夠快速和簡單的測定。此類有色標(biāo)記試劑的例子包括金屬膠體顆粒例如膠體金顆粒和鉑膠體顆粒，合成乳膠顆粒例如用紅或藍(lán)色素染色的聚苯乙烯乳膠，和乳膠顆粒例如天然橡膠乳膠。在這些中，金屬膠體顆粒例如膠體金顆粒是特別優(yōu)選的。灌注部件2可以通過下述產(chǎn)生，將標(biāo)記抗體的懸浮液吸收到部件例如上述玻璃纖維非紡織物內(nèi)，并且隨后使其干燥。如圖1中所示，免疫層析測試條IO可以通過下述產(chǎn)生，使膜載體3與粘著層1的中部固定，將灌注部件2的下游側(cè)末端放置在膜載體3的上游側(cè)末端上，以便使其聯(lián)系，和使灌注部件2的上游側(cè)區(qū)帶與粘著層1固定。此外，在圖l的裝置中，樣品接受部件6的下游側(cè)區(qū)帶放置在灌注部件2的上部表面上，并且同時(shí)使樣品接受部件6的上游側(cè)區(qū)帶與粘著層1固定。此外，吸收部件5的上游側(cè)區(qū)帶放置在膜載體3的下游側(cè)區(qū)帶的上部表面上，并且同時(shí)使吸收部件5的下游側(cè)區(qū)帶與粘著層1固定。從而構(gòu)建了免疫層析測試條10。作為樣品接受部件6，可以使用例如多孔合成樹脂的層或薄膜例如多孔聚乙烯和多孔聚丙烯，以及纖維素紙或機(jī)織物或非紡織物例如濾紙和棉織物。吸收部件5可以由任何材料制成，只要它能夠快速吸收且保留液體。此類材料的例子包括棉織物、濾紙、和由聚乙烯、聚丙烯等制成的多孔塑料非紡織物。特別地，濾紙是最佳的。如圖1中所示的免疫層析測試條10可以直接用作浸漬片測量裝置。備選地，免疫層析測試條10可以作為浸漬片測量裝置供應(yīng)，所述浸漬片測量裝置用一個(gè)或多個(gè)合適的塑料層作為背面或夾心。優(yōu)選地，如圖1中所示的免疫層析測試條IO作為測量裝置提供，所述測量裝置將測試條容納在合適的塑料外殼中，所述塑料外殼具有分別在樣品接受部件6和捕獲區(qū)帶4上方開放的測試樣品注入?yún)^(qū)帶和測定區(qū)帶。如上所述，在本發(fā)明中，第三種和第四種抗體可以與測試樣品和顯影溶劑在與免疫層析測試條10分開的合適器皿中混合，以便產(chǎn)生混合溶液，并且隨后可以將混合溶液注入免疫層析測試條10的樣品接受區(qū)帶6內(nèi)，從而使得它可以在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)。因此，當(dāng)免疫層析測試條10容納在外殼中時(shí)，第三種和第四種抗體可以吸收到灌注部件2內(nèi)，且因此可以貯藏在上述外殼內(nèi)。以其他方式，第三種和第四種抗體可以包含在與上述外殼分開的合適器皿中，且因此它們可以貯藏在上述外殼外。因此，必要時(shí)，使由懷疑感染強(qiáng)毒抹的患者的生物樣品等組成的測試樣品與合適的顯影溶劑混合，所述強(qiáng)毒林例如流感病毒A亞型H5N1,以便獲得可以層析法地顯現(xiàn)的混合溶液。其后，將混合溶液注入如圖1中所示的免疫層析測試條10的樣品接受區(qū)帶6內(nèi)，從而使得它經(jīng)過樣品接受部件6且與在灌注部件2處的標(biāo)記抗體混合。在這種情況下，如果流感病毒A的強(qiáng)毒林存在于上述混合溶液中，那么由于抗原-抗體反應(yīng)形成強(qiáng)毒病毒林的病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物。這種復(fù)合物在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)，且隨后到達(dá)捕獲區(qū)帶4。因此，由于抗原-抗體反應(yīng)，復(fù)合物被固定在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的第一種抗體捕獲，以產(chǎn)生陽性結(jié)果。然而，該復(fù)合物不被固定在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41b中的第二種抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。相比之下，如果除強(qiáng)毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41b中都獲得陽性結(jié)果。因此，通過將第一個(gè)和第二個(gè)捕獲區(qū)帶的結(jié)果拼湊，可以區(qū)別測定強(qiáng)毒抹感染和除強(qiáng)毒林外的流感病毒A感染。當(dāng)有色標(biāo)記試劑例如膠體金顆粒用作標(biāo)記試劑時(shí)，基于由有色標(biāo)記試劑在第一個(gè)和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41a和41b處積聚，無論結(jié)果是陽性還是陰性的都可以立即確定。在圖l的裝置中，因?yàn)榈诙€(gè)捕獲區(qū)帶41b位于第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a下游，所以第二個(gè)捕荻區(qū)帶41b的檢測敏感性趨向減少。因此，優(yōu)選敏感性例如通過使用固定在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41b中的抗體得到控制，其量大于固定在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的抗體的那種。測試樣品包括，但不限于，例如泄殖腔拭子、氣管拭子、糞便、鼻抽吸流體、鼻拭子、咽喉拭子、血液(這可以是全血、血清或血漿)、唾液、尿和器官乳狀液。在測試樣品注入膜載體內(nèi)前，它可以用合適的稀釋劑例如顯影溶劑進(jìn)行稀釋。當(dāng)全血用作測試樣品時(shí)，如果有色標(biāo)記試劑例如膠體金顆粒特別用作標(biāo)記試劑用于標(biāo)記抗體，那么優(yōu)選將血細(xì)胞捕獲膜部件排列在上述樣品接受部件中。此類血細(xì)胞捕獲膜部件優(yōu)選在上述灌注部件和上述樣品接受部件之間分層。這抑制膜載體中的紅細(xì)胞顯色，且因此促進(jìn)膜載體的捕獲區(qū)帶中的有色標(biāo)記試劑積聚的證實(shí)。作為此類血細(xì)胞捕獲膜部件，使用羧甲基纖維素膜。特別地，可以使用可從AdvantecToyoK.K.獲得的離子交換濾器CM(商標(biāo)名)，和可從WhatmanJapanK.K.等獲得的離子交換纖維素紙。(2)使用2種免疫層析測試條的實(shí)施方案圖2的裝置是包含2種免疫層析測試條10和20的免疫層析測定法裝置。免疫層析測試條10和20各自具有與圖1中所示的免疫層析測試條10的那種相同的結(jié)構(gòu)，除了捕獲區(qū)帶4的結(jié)構(gòu)和標(biāo)記抗體。圖2中所示的免疫層析測試條10與圖l相同，其中第一種抗體固定在距離膜載體3的上游側(cè)上的末端7.5mra位置上，從而使得形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a以捕獲第三種抗體和分析物的復(fù)合物。然而，圖2中所示的免疫層析測試條10不同于圖1，其中針對流感病毒B的抗體固定在距離膜載體3的上游側(cè)上的末端10.5mm位置上，從而使得形成用于檢測流感病毒B的捕獲區(qū)帶41b。此外，由標(biāo)記的第三種抗體和標(biāo)記的抗流感病毒B抗體組成的標(biāo)記抗體吸附在免疫層析測試條10的灌注部件2內(nèi)。此處，作為第三種抗體，在許多情況下可以使用與第一種抗體相同的抗體。作為抗流感病毒B抗體，可以使用已用于免疫層析測定法裝置的已知抗體。圖2中所示的免疫層析測試條20不同于圖1中所示的免疫層析測試條10,其中第二種抗體固定在距離膜載體3的上游側(cè)上的末端9.0mm位置上，從而使得形成第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c以捕獲第四種抗體和分析物的復(fù)合物。此外，由標(biāo)記的第四種抗體組成的標(biāo)記抗體吸附在免疫層析測試條20的灌注部件2內(nèi)。此處，作為第四種抗體，使用與第二種抗體相同的抗體。然而，與第一種抗體相同的抗體也可以用作第四種抗體。因此，通過與上文參考圖1所述相同的方法獲得包含測試樣品的混合溶液后，將混合溶液注入圖2中所示的免疫層析測試條10和20各自的樣品接受部件6內(nèi)，從而使得它經(jīng)過樣品接受部件6，且與灌注部件2上的標(biāo)記抗體混合。在這種情況下，如果流感病毒A的強(qiáng)毒林存在于上述混合溶液中，那么由于抗原-抗體反應(yīng)，在免疫層析測試條10中形成強(qiáng)毒抹的病毒抗原和第三種抗體的復(fù)合物。這種復(fù)合物在膜栽體3中層析法地顯現(xiàn)，且隨后到達(dá)捕獲區(qū)帶4。因此，由于抗原-抗體反應(yīng)，復(fù)合物被固定在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的第一種抗體捕獲，以產(chǎn)生陽性結(jié)果。然而，該復(fù)合物不被固定在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41b中的抗流感病毒B抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，未形成強(qiáng)毒林的病毒抗原和第四種抗體的復(fù)合物，并且因此抗原和抗體各自在膜載體3中層析法地獨(dú)立顯現(xiàn)，且隨后到達(dá)第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c。然而，它們不被固定在其中的第二種抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。相比之下，如果除強(qiáng)毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么由于抗原-抗體反應(yīng)，在免疫層析測試條10中形成病毒抗原和第三種抗體的復(fù)合物。這種復(fù)合物在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)，且隨后到達(dá)捕荻區(qū)帶4。隨后，由于抗原-抗體反應(yīng)，復(fù)合物被固定在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的第一種抗體捕獲，以產(chǎn)生陽性結(jié)果。然而，該復(fù)合物不被固定在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41b中的抗流感病毒B抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，形成強(qiáng)毒林的病毒抗原和第四種抗體的復(fù)合物。該復(fù)合物在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)，且到達(dá)第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c。隨后，由于抗原-抗體反應(yīng)，復(fù)合物被固定在其中的第二種抗體捕獲，以產(chǎn)生陽性結(jié)果。此外，如果流感病毒B存在于混合溶液中，那么由于抗原-抗體反應(yīng)，在免疫層析測試條10中形成病毒抗原和抗流感病毒B抗體的復(fù)合物。這種復(fù)合物在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)，且到達(dá)捕獲區(qū)帶4。隨后由于抗原-抗體反應(yīng)，該復(fù)合物被固定在捕獲區(qū)帶41b中的抗流感病毒B抗體捕獲，以產(chǎn)生陽性結(jié)果。然而，該復(fù)合物不被固定在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的第一種抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，未形成病毒抗原和第四種抗體的復(fù)合物，并且因此抗原和抗體各自在膜栽體3中層析法地獨(dú)立顯現(xiàn)，且隨后到達(dá)第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c。然而，它們不被固定在其中的第二種抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。因此，基于第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a、笫二個(gè)捕獲區(qū)帶41c、和捕獲區(qū)帶41b中獲得的結(jié)果，可以區(qū)別測定強(qiáng)毒林感染、除強(qiáng)毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。圖2的裝置僅必須包含至少2種免疫層析測試條10和20。2種測試條可以容納在單個(gè)外殼中。以其他方式，數(shù)片分別的條可以包含在分別的單個(gè)外殼中，從而使得使用時(shí)一片測試條可以從分別的外殼中取出。在前面一種情況下，可以形成整合產(chǎn)物，其包含其中免疫層析測試條10和20以其膜栽體彼此平行，同時(shí)其灌注部件彼此以一定距離彼此隔開的方式排列的外殼。作為如圖2中所示的免疫層析測試條10,可以使用用于區(qū)別測量流感A型和B型的商購可得的免疫層析測試條或試劑盒來進(jìn)行，例如CAPILIA(注冊商標(biāo))FluA+B(由TaunsLaboratories,Inc.制造)。因此，僅如圖2中所示的免疫層析測試條20可以作為單項(xiàng)供應(yīng)，從而使得本發(fā)明的檢測方法或測定法可以使用與此類商購可得的測試條或試劑盒組合的測試條來進(jìn)行。圖3的裝置具有與圖2的裝置的那種相同的結(jié)構(gòu)，除了免疫層析測試條10和20共享單個(gè)灌注部件2和單個(gè)樣品接受部件6。即，免疫層析測試條10和20的2個(gè)膜載體3彼此靠近且基本上平行排列。在上游側(cè)上的末端上，單側(cè)寬(寬度約12ram)灌注部件2在2個(gè)膜載體3上延伸且與之聯(lián)系。在這個(gè)灌注部件2中，第三種和第四種抗體以及抗流感病毒B抗體這樣排列，以便以與上文所述相同的方式層析法地顯現(xiàn)。在這個(gè)實(shí)施方案中，與圖1的裝置相似，優(yōu)選第三種和第四種抗體都是與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的抗體，并且第三種和第四種抗體都與第一種抗體相同是方便的。因此，通過與上文參考圖2所述相同的方法獲得包含測試樣品的混合溶液后，將混合溶液注入圖3中所示的由免疫層析測試條10和20共享的樣品接受部件6內(nèi)，從而使得它經(jīng)過樣品接受部件6，且與灌注部件2上的標(biāo)記抗體混合。在這種情況下，如果流感病毒A的強(qiáng)毒林存在于上述混合溶液中，那么與圖2類似地，免疫層析測試條10給出在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的陽性結(jié)果和在捕獲區(qū)帶41b中的陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，盡管形成強(qiáng)毒林的病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物，但它不被固定在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中的第二種抗體捕獲，以給出陰性結(jié)果。如果除強(qiáng)毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么與圖2類似地，免疫層析測試條IO給出在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41中的陽性結(jié)果和在捕獲區(qū)帶41b中的陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，在膜載體3中形成病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物且層析法地顯現(xiàn)，并且到達(dá)第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c。隨后，該復(fù)合物被固定在其中的第二種抗體捕獲，以給出陽性結(jié)果。此外，如果流感病毒B存在于混合溶液中，那么與圖2類似地，免疫層析測試條10給出在捕獲區(qū)帶41b中的陽性結(jié)果和在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的陰性結(jié)果。與圖2類似地，免疫層析測試條20給出在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中的陰性結(jié)果。因此，基于第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a、第二個(gè)捕荻區(qū)帶41c、和捕獲區(qū)帶"b中獲得的結(jié)果，可以區(qū)別測定強(qiáng)毒抹感染、除強(qiáng)毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。圖3的裝置也可以容納在合適的外殼中。圖4的裝置具有與圖2的那種相同的結(jié)構(gòu)，除了免疫層析測試條IO和20共享單個(gè)膠帶1和單個(gè)樣品接受部件6。即，免疫層析測試條IO和20的2個(gè)膜載體3以彼此相反的方向基本上線性排列。特別地，免疫層析測試條10和20以合適的距離彼此面對排列在2種測試條的灌注部件2的上游側(cè)的末端，即2種條在直線上彼此相對地放置。單個(gè)樣品接受部件6在2個(gè)灌注部件2上延伸且與之聯(lián)系。備選地，2種免疫層析測試條10和20可以放射狀排列，從而使得2種測試條的膜栽體彼此延伸成一個(gè)角度。因此，通過與上文參考圖2所述相同的方法獲得包含測試樣品的混合溶液后，將混合溶液注入圖4中所示的由免疫層析測試條10和20共享的樣品接受部件6內(nèi)，從而使得它經(jīng)過樣品接受部件6，且與免疫層析測試條10和20的灌注部件2上的標(biāo)記抗體混合。隨后，與圖2類似地，基于第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a、第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c、和捕獲區(qū)帶41b中獲得的結(jié)果，可以區(qū)別測定強(qiáng)毒林感染、除強(qiáng)毒抹外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。圖4的裝置也可以容納在合適的外殼中。提及圖4的裝置的修改，不僅粘著層1和樣品接受部件6而且單個(gè)灌注部件都可以由免疫層析測試條10和20共享。在這種情況下，第三種和笫四種抗體可以依照圖3的實(shí)施方案進(jìn)行構(gòu)建以實(shí)踐本發(fā)明。在圖4的裝置中，將包含測試樣品的上述混合溶液均勻地浸入測試條10和20內(nèi)。因此，與圖l的裝置不同，圖4的裝置是方便的，因?yàn)闊o需控制第一個(gè)和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41a和41b的敏感性。(3)使用第二種抗體作為標(biāo)記抗體的實(shí)施方案圖2的裝置可以修改為使用第二種抗體作為標(biāo)記抗體用于執(zhí)行本發(fā)明的實(shí)施方案的裝置。此類裝置可以通過下述產(chǎn)生，使第一種抗體而不是第二種抗體固定在圖2的裝置的免疫層析測試條20的第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中，且使用第二種抗體而不是第四種抗體作為標(biāo)記抗體以吸收到上述條20的灌注部件2內(nèi)。在這個(gè)裝置中，免疫層析測試條10的結(jié)構(gòu)與圖2的那種完全相同。因此，通過與上文參考圖2所述相同的方法獲得包含測試樣品的混合溶液后，將混合溶液注入圖2的修改裝置的免疫層析測試條10和20各自的樣品接受部件6內(nèi)，從而使得它經(jīng)過樣品接受部件6，且與灌注部件2上的標(biāo)記抗體混合。在這種情況下，如果流感病毒A的強(qiáng)毒抹存在于上述混合溶液中，那么與圖2類似地，免疫層析測試條10給出在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的陽性結(jié)果和在捕獲區(qū)帶41b中的陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，未形成強(qiáng)毒林的病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物，并且因此抗原和抗體在膜載體3中層析法地獨(dú)立顯現(xiàn)，且到達(dá)第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c。強(qiáng)毒林的病毒抗原通過固定在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中的第一種抗體捕獲。然而，因?yàn)闃?biāo)記抗體不與之結(jié)合，所以它給出陰性結(jié)果。如果除強(qiáng)毒林外的流感病毒A存在于混合溶液中，那么與圖2類似地，免疫層析測試條10給出在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41中的陽性結(jié)果和在捕獲區(qū)帶41b中的陰性結(jié)果。在免疫層析測試條20中，形成病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物，并且在膜載體3中層析法地顯現(xiàn)，且到達(dá)第二個(gè)捕獲區(qū)帶41。隨后，該復(fù)合物被固定在第二種捕獲區(qū)帶41c中的第一種抗體捕獲，以給出陽性結(jié)果。此外，如果流感病毒B存在于混合溶液中，那么與圖2類似地，免疫層析測試條10給出在捕獲區(qū)帶41b中的陽性結(jié)果和在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中的陰性結(jié)果。免疫層析測試條20在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中給出陰性結(jié)果。因此，基于第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a、第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c、和捕獲區(qū)帶41b中獲得的結(jié)果，可以區(qū)別測定強(qiáng)毒林感染、除強(qiáng)毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。依照與上文所述相同的修改，圖4的裝置還可以修改為使用第二種抗體作為標(biāo)記抗體用于執(zhí)行本發(fā)明的實(shí)施方案的裝置。即，此類修改可以通過下述對圖4的裝置來進(jìn)行，使第一種抗體而不是第二種抗體固定在免疫層析測試條20的第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中，且使用第二種抗體而不是笫四種抗體作為標(biāo)記抗體以吸收到上迷條20的灌注部件2內(nèi)。同時(shí)，免疫層析測試條10的結(jié)構(gòu)與圖4的那種完全相同。因此，通過與上文參考圖2所述相同的方法獲得包含測試樣品的混合溶液后，將混合溶液注入圖4的修改裝置的由免疫層析測試條10和20共享的樣品接受部件6內(nèi)，從而使得它經(jīng)過樣品接受部件6,且與測試條10和20的灌注部件2上的標(biāo)記抗體混合。類似于圖2的上述修改裝置，基于第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a、第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c、和捕獲區(qū)帶41b中獲得的結(jié)果，可以區(qū)別測定強(qiáng)毒抹感染、除強(qiáng)毒林外的流感病毒A感染、和流感病毒B感染。實(shí)施例本發(fā)明將在下述實(shí)施例中更具體地進(jìn)行描述。然而，這些實(shí)施例不意欲限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1(流感病毒A和B的重組核蛋白(NP)基因的克隆)將流感病毒A，A/PuertoRico/8/34(H1N1)和流感病毒B，B/Lee/40接種到含胚雞蛋中，且隨后進(jìn)行培養(yǎng)。數(shù)天后，收集絨毛尿囊流體以獲4尋病毒。將RNA提取試劑(TRIzolReagent,Invitrogen)加入此類病毒中，且提取每種病毒RNA。對提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以便生產(chǎn)NP基因cDNA。Uni12Primer:5，—AGCAAAAGCAGG-3，(SEQIDNO:1)在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中用作引物。對獲得的A/PuertoRico/8/34和B/Lee/40的NP基因cDNAs實(shí)施聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法，以便擴(kuò)增NP基因。在A/PuertoRico/8/34的情況下，使用下述引物有義引物5，-GGAATTCCATATGGCGTCCCAAGGCACC-3，(SEQIDNO:2);和反義引物5，-CCGCTCGAGTTAATTGTCGTACTCCTCTGC-3，(SEQIDNO:3)。在B/Lee/40的情況下，使用下述引物有義引物5，-CGGGATCCATATGTCCAACATGGATATTG-3，(SEQIDNO:4);和反義引物5，-CCGCTCGAGTTAATAATCGAGGTCATCATA-3'(SEQIDNO:5)。為了摻入載體pET15b內(nèi)，向引物中加入NdeI和XhoI位點(diǎn)內(nèi)分別作為上游引物和下游引物。對獲得的PCR產(chǎn)物的部分實(shí)施DNA電泳以證實(shí)其擴(kuò)增，并且每種擴(kuò)增產(chǎn)物隨后用限制酶NdeI和XbaI進(jìn)行切割。隨后將切割產(chǎn)物插入用相同限制酶切割的栽體pET15b內(nèi)。實(shí)施例2(重組核蛋白(NP蛋白質(zhì))的表達(dá)及其純化)大腸桿菌BL21CodonPlus用載體pET15b進(jìn)行轉(zhuǎn)化，所述pET15b載體在實(shí)施例1中已插入目的基因。它隨后在氨節(jié)青霉素選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以便獲得集落。它在包含氨千青霉素(100ng/ml)和氯霉素(25ng/ml)的L-Broth中進(jìn)行過夜培養(yǎng)，并且隨后將培養(yǎng)物加入包含氨千青霉素(100ng/ml)的L-肉湯中。使混合物于37。C培養(yǎng)3小時(shí)，隨后向其中加入lMIPTG至1mM的終濃度，以便誘導(dǎo)重組NP蛋白質(zhì)的表達(dá)。蛋白質(zhì)經(jīng)由IPTG的表達(dá)通過SDS-PAGE加以證實(shí)。將通過離心回收的細(xì)胞群懸浮于增溶緩沖液中。對懸浮液進(jìn)一步實(shí)施PMSF和溶菌酶處理，以便完全溶解細(xì)胞群。從獲得溶液的離心上清液中獲得重組NP蛋白質(zhì)，并且使其經(jīng)過包含Ni-NTA樹脂的柱，以便使其純化。純化的蛋白質(zhì)針對PBS進(jìn)行透析，以便獲得目的重組NP蛋白質(zhì)。實(shí)施例3(單克隆抗體的生產(chǎn))使用實(shí)施例2中獲得的流感病毒A重組NP蛋白質(zhì)(FluANP)和流感病毒B重組NP蛋白質(zhì)(FluBNP)作為抗原，生產(chǎn)針對FluANP和FluBNP的單克隆抗體(抗FluANP抗體和抗FluBNP抗體)。此類單克隆抗體根據(jù)常規(guī)方法進(jìn)行生產(chǎn)。使100jLlg每種重組NP蛋白質(zhì)與相同量的弗氏完全佐劑混合(Difco)。其后，小鼠(BALB/c,5周大，JapanSLC，Inc.)用混合物免疫3次，并且其脾細(xì)胞隨后在細(xì)胞融合中使用。對于此類細(xì)胞融合，使用其為小鼠骨髓瘤細(xì)胞的Sp2/0-Agl4細(xì)胞(Shulman等人，1978)。對于細(xì)胞的培養(yǎng)，使用這樣的培養(yǎng)基，其為包含O.3mg/mlL-谷氨酰胺、100單位/mi青霉素G鉀、100pg/ml硫酸鏈霉素和40pg/mlGentacin的Dulbecco'sModifiedEagleMedium(Gibco)(DMEM),向其中進(jìn)一步加入胎牛血清(JRH)至10%的濃度。細(xì)胞融合通過下述來進(jìn)行，使免疫小鼠的脾細(xì)胞與Sp2/0-Agl4細(xì)胞混合，且隨后向其中加入聚乙二醇溶液(Sigma)。融合的細(xì)月包在HAT-DMEM(包含0.1mM次黃嘌呤鈉、0.4pM氨基蝶呤和0.016mM胸苷(Gibco)的添加血清的DMEM)中進(jìn)行培養(yǎng)?？笷luANP抗體通行篩選，使用在其上已固定滅活的流感病毒，A型(H1N1)的平板。此外，抗FluBNP抗體通過依照相同方法證實(shí)抗體在培養(yǎng)上清液中生產(chǎn)進(jìn)行篩選，使用在其上已固定滅活的流感病毒B的平板。顯示抗體生產(chǎn)陽性的細(xì)胞在HT-DMEM(包含0.1mM次黃嘌呤鈉和0.016mM胸苷(Gibco)的添加血清的DMEM)中進(jìn)行培養(yǎng)，并且在添加血清的DMEM中進(jìn)一步連續(xù)培養(yǎng)。具有生產(chǎn)抗體的高能力的細(xì)胞通過ELISA法進(jìn)行選擇，且隨后進(jìn)行克隆。將克隆細(xì)胞接種到小鼠(BALB/c,Retire,JapanSLC，Inc.)的腹腔內(nèi)，在所述小鼠中已接種2，6，10，14-四甲基十五烷(Sigma),且隨后收集其腹水。其后，IgG純化通過常規(guī)方法使用蛋白G吸附劑來進(jìn)行，以便獲得單克隆抗體。生產(chǎn)的單克隆抗體的同種型通過ELISA使用MouseMonoclonalAntibodyIsotypingReagents(Sigma)進(jìn)行鑒定。最后，獲得針對FluANP的單克隆抗體產(chǎn)生細(xì)胞的3個(gè)克隆，即F/169、B/347和F/211。在它們中，最終發(fā)現(xiàn)抗體產(chǎn)生細(xì)胞F/211是生產(chǎn)這樣的抗體的克隆，所述抗體不與流感病毒A亞型H5N1反應(yīng)但與除亞型H5N1外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)(本發(fā)明的第二種抗體)，如在下述實(shí)施例中證明的。獲得針對FluBNP的生產(chǎn)單克隆抗體的細(xì)胞的4個(gè)克隆。在這些中，只有F/171在下述實(shí)施例中使用。實(shí)施例4(免疫層析測定法裝置的生產(chǎn))(1)抗FluANP抗體、抗FluBNP抗體、和不與亞型H5N1反應(yīng)的抗FluANP抗體的制備將實(shí)施例1中獲得的抗FluANP抗體產(chǎn)生細(xì)胞F/169和B/347各自接種到小鼠的腹腔內(nèi)，以便獲得包含抗FluANP抗體的腹水。此外，將抗FluBNP抗體產(chǎn)生細(xì)胞F/171接種到小鼠的腹腔內(nèi)，以便獲得包含抗FluBNP抗體的腹水。此外，將FluANP抗體產(chǎn)生細(xì)胞F/211接種到小鼠的腹腔內(nèi)，以便獲得包含抗FluANP抗體的腹水。此外，IgG純化根據(jù)常規(guī)方法使用蛋白G吸附劑來進(jìn)行，以便獲得每種抗體。(2)膠體金顆粒溶液的制備將1ml1%(v/w)氯金酸(原文為chloroauricacid,疑為chlorauricacid)水溶液加入通過加熱煮沸的99ml特純水中。1分鐘后，向其中進(jìn)一步加入1.5ml1%(v/w)檸檬酸鈉水溶液，并且隨后使混合物加熱且煮沸5分鐘。其后，使溶液放置于室溫，從而使得其冷卻。隨后，向溶液中加入200mM碳酸鉀水溶液，從而使得溶液調(diào)整至pH9.0。其后，向其中加入特純水至100ml的總量，從而獲得膠體金顆粒溶液。(3)膠體金顆粒標(biāo)記的抗體溶液的制備通過下述操作用膠體金顆粒標(biāo)記抗體產(chǎn)生細(xì)胞B/347衍生的抗FluANP抗體(在下文中稱為抗FluANP抗體B/347)、抗體產(chǎn)生細(xì)胞F/171衍生的抗FluBNP抗體(在下文中稱為抗FluBNP抗體F/171)、和抗體產(chǎn)生細(xì)胞F/211衍生的抗FluANP抗體(在下文中稱為抗FluANP抗體F/211)，所述抗體在上文(1)中獲得。使3jug(與蛋白質(zhì)的重量相等)抗FluANP抗體B/347與上文(2)中描述的1ml膠體金顆粒溶液混合，并且隨后使混合物靜置于室溫2分鐘，從而使得允許所有抗體與膠體金顆粒的表面結(jié)合。其后，將10%BSA水溶液加入膠體金溶液中至1%的終濃度，并且膠體金顆粒的其余表面全部用BSA進(jìn)行封閉，以便制備膠體金顆粒標(biāo)記的抗FluANP抗體B/347溶液。這種溶液(5600xG，30分鐘)進(jìn)行離心，以使膠體金顆粒標(biāo)記的抗體沉淀。去除上清液，以便獲得膠體金顆粒標(biāo)記的抗體。使這種膠體金顆粒標(biāo)記的抗體懸浮于包含10%蔗糖、1%BSA和0.5%Triton—X100的50mMTris-HCl緩沖液(pH7.4)中，以便制備膠體金標(biāo)記的抗FluANP抗體B/347溶液。此外，通過上述方法允許lMg(與蛋白質(zhì)的重量相等)抗FluBNP抗體F/171與膠體金顆粒的表面結(jié)合，以便制備膠體金顆粒標(biāo)記的抗FluBNP抗體F/171溶液。此外，允許1Mg(與蛋白質(zhì)的重量相等)抗FluANP抗體F/211與膠體金顆粒的表面結(jié)合，以便制備膠體金顆粒標(biāo)記的抗FluANP抗體F/211溶液。(4)免疫層析測定法裝置的產(chǎn)生如圖4中所示的免疫層析測定法裝置通過下述操作進(jìn)行生產(chǎn)。(4-1)膜載體的第一個(gè)捕獲區(qū)帶的形成具有5醒寬度和36mm長度的大小的延伸的條形硝化纖維素膜制備為膜栽體3。將包含1.0mg/ml抗FluANP抗體F/169的0.5m1溶液以線性形式應(yīng)用于距離膜載體3的上游側(cè)上的末端5.0腿位置。隨后使其在室溫下干燥，以便形成捕荻區(qū)帶41a(第一個(gè)捕獲區(qū)帶)用于捕獲流感病毒A的病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物。此外，將包含1.0mg/ml抗FluBNP抗體F/171的0.5|a1溶液以線性形式應(yīng)用于距離膜載體3的上游側(cè)上的末端8.Omm位置。隨后使其在室溫下干燥，以便形成捕獲區(qū)帶41b用于捕獲流感病毒B的病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物。(4-2)膜載體的第二個(gè)捕獲區(qū)帶的形成制備與上文(4-1)中使用的膜栽體相同的另一個(gè)膜載體3。將包含1.0mg/ml抗FluANP抗體F/169的0.5pi溶液以線性形式應(yīng)用于距離膜載體3的上游側(cè)上的末端5.Omm位置。隨后使其在室溫下干燥，以便形成捕荻區(qū)帶41c(第二個(gè)捕獲區(qū)帶)用于捕荻流感病毒抗原和標(biāo)記抗體的復(fù)合物。(4-3)灌注有膠體金顆粒標(biāo)記的抗體的灌注部件的產(chǎn)生具有5mmx15mm的大小的條形玻璃纖維非紡織物注入37.5ja1混合溶液，所述混合溶液具有上文(3)中獲得的膠體金顆粒標(biāo)記的抗FluANP抗體B/347溶液和膠體金顆粒標(biāo)記的抗FluBNP抗體F/171溶液，且隨后在室溫下進(jìn)行干燥，以便制備標(biāo)記抗體灌注的部件。此外，具有5mmx15mm的大小的另一個(gè)條形玻璃纖維非紡織物注入37.5ju1膠體金顆粒標(biāo)記的抗FluANP抗體F/211溶液，且隨后在室溫下進(jìn)行干燥，以便制備標(biāo)記抗體灌注的部件。前面一種標(biāo)記抗體灌注的部件用作測試條10的灌注部件3,和后面一種標(biāo)記抗體灌注的部件用作測試條20的灌注部件3。在上文(4-1)中獲得的膜載體用作測試條10的膜栽體3,和在上文(4-2)中獲得的膜栽體用作測試條20的膜栽體3。此外，對于每種測試條棉織物用作樣品接受部件6，和濾紙用作吸收部件5，從而產(chǎn)生具有與圖4中相同的構(gòu)造的免疫層析測定法裝置。實(shí)施例5(關(guān)于與流感病毒H5N1毒林(Yamaguchi毒林)的反應(yīng)性的測試)實(shí)施例4中產(chǎn)生的免疫層析測定法裝置用于執(zhí)行關(guān)于與流感病毒H5N1毒才朱(A/chichen/Yamaguchi/7/04，Yamaguchi毒株)的反應(yīng)性的測試。流感病毒H3N2(A/Aichi/2/68，Aichi毒林)用作對照。使用已通過下述制備的測試樣品，允許上述流感病毒毒林各自在含胚雞蛋中生長以獲得絨毛尿嚢流體，且隨后用分析物稀釋液來稀釋絨毛尿嚢流體。使用微量吸管，將150|il測試樣品逐滴加入實(shí)施例4中獲得的測試條的樣品接受部件6中，從而使得它在其中層析法地顯現(xiàn)。使其在室溫下放置15分鐘。其后，通過肉眼觀察由第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c各自捕獲的病毒抗原和膠體金顆粒標(biāo)記的抗體的復(fù)合物量。通過用肉眼將紅-紫色水平分成下述5個(gè)階段來測定捕獲的復(fù)合物量，所述紅-紫色水平取決于捕獲的量而增加或減少-(無著色)；±(輕微著色)；+(清楚著色)；++(更清楚的著色)；和+++(顯著著色)。應(yīng)當(dāng)指出上述Yamaguchi毒^^的絨毛尿嚢流體的HA值為1024,和Aichi毒林的絨毛尿嚢流體的HA值為2048。結(jié)果顯示于表1中。表l:就與流感病毒A亞型H5N1的反應(yīng)性的測試<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>根據(jù)表1中所示的結(jié)果，當(dāng)與用作陽性對照的Aichi毒林(H3N2)的反應(yīng)性比較時(shí)，發(fā)現(xiàn)在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中幾乎沒有證實(shí)與Yamaguchi毒一朱(H5N1)的反應(yīng)性。這些結(jié)果暗示用作關(guān)于測試條20的標(biāo)記抗體的抗FluANP抗體F/211不與Yamaguchi毒林(H5N1)反應(yīng)，并且因此它不與流感病毒A亞型H5N1特異性反應(yīng)。相比之下，在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a中，抗FluANP抗體F/211具有相同水平的與Aichi毒抹(H3N2)和Yamaguchi毒林(H5N1)的反應(yīng)性。實(shí)施例6(關(guān)于與流感病毒A的各種亞型的反應(yīng)性的測試)實(shí)施例4中產(chǎn)生的免疫層析測定法裝置用于執(zhí)行關(guān)于與流感病毒A的15種亞型的反應(yīng)性的測試。使用已通過下述制備的測試樣品，允許流感病毒A的每種亞型在含胚雞蛋中生長以獲得絨毛尿嚢流體，且隨后用分析物稀釋液來稀釋絨毛尿嚢流體。使用微量吸管，將150jal測試樣品逐滴加入實(shí)施例4中獲得的測試條的樣品接受部件6中，從而使得它在其中層析法地顯現(xiàn)。使其在室溫下放置15分鐘。其后，通過肉眼觀察由笫一個(gè)捕獲區(qū)帶41a和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c各自捕獲的病毒抗原和膠體金顆粒標(biāo)記的抗體的復(fù)合物量。通過用肉眼將紅-紫色水平分成下述5個(gè)階段來測定捕獲的復(fù)合物量，所述紅-紫色水平取決于捕獲的量而增加或減少-(無著色)；±(輕微著色)；+(清楚著色)；++(更清楚的著色)；和+++(顯著著色)。對下述流感病毒A亞型實(shí)施測試A/PuertoRico/8/34(H1N1)、A/Hokkaido/ll/02(H1N1)、A/Singapore/l/57(H2N2)、A/Aichi/2/68(謂2)、A/Hokkaido/1/03(謂2)、A/duck/Czech/56(H4N6)、A/duck/Pennsylvania/1028/83(H5N2)、A/HongKong/156/97(H5N1)、A/HongKong/483/97(H5N1)、A/turkey/Massachusetts/3740/65(細(xì)2)、A/seal/Massachusetts/1/80(H7N7)、A/turkey/Ontario/67(訓(xùn)4)、A/turkey/Wisconsin/66(H9N2)、A/chicken/Ge纖ny/N/49(H10N7)、A/duck/England/56(H11N6)、A/duck/Alberta/60/76(H12N5)、A/gull/Maryland/704/77(H13N6)、A/mallard/Astrakhan/263/82(H14N5)、A/duck/Australia/341/83(H15N8)。結(jié)果顯示于表2中。如由表2顯而易見的，關(guān)于實(shí)施測試的所有病毒毒抹，在測試條10的第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a上觀察到顯著著色，但關(guān)于所有病毒毒林，在其捕獲區(qū)帶41b上未觀察到著色。另一方面，在測試條20的第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中，在實(shí)施測試的所有流感病毒A中，關(guān)于僅有的H5N1菌才木即A/Hongkong/156/97(H5N1)和A/HongKong/483/97(H5N1)未觀察到著色，但關(guān)于實(shí)施測試的其他病毒毒林包括亞型H纟N2，A/duck/Pennsylvania/1028/83(H5N2)觀察到顯著著色。因此，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例4中描述的免疫層析測定法裝置在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a上顯示與所有流感病毒A的反應(yīng)性，但在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c上未能顯示與僅有的流感病毒亞型H5N1的反應(yīng)性。這些結(jié)果證實(shí)用作測試條20的標(biāo)記抗體的抗FluANP抗體F/211不與流感病毒A亞型H5N1反應(yīng)，但與除亞型H5N1外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。因此，當(dāng)對從懷疑流感感染的患者收集的樣品實(shí)施實(shí)施例4中描述的免疫層析測定法裝置時(shí)，如果在第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c上觀察到著色，那么將證實(shí)患者感染流感病毒H1N1或H3N2,且因此將懷疑患者感染通常的流感病毒。此外，如果在笫一個(gè)捕獲區(qū)帶41a上觀察到著色，但在第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c上未觀察到，那么將懷疑患者感染流感病毒H5N1。因此，使用這種裝置，取決于感染病毒的類型和預(yù)防感染擴(kuò)大的努力，可以給出關(guān)于患者的合適治療。如果在捕獲區(qū)帶41b的B型測定區(qū)帶上觀察到著色，那么將確定患者懷疑感染流感病毒B。如果在所有測定區(qū)帶中未觀察到著色，那么將確定患者就流感感染而言是陰性的。因此，根據(jù)本發(fā)明，流感病毒H5N1感染可以通過第一種抗體和第二種抗體的組合使用進(jìn)行檢測，所述第一種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，所述第二種抗體不與流感病毒A亞型H5N1反應(yīng)但與除亞型H5N1外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。表2:就與流感病毒A的各種亞型的反應(yīng)性的測試<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>實(shí)施例7(在各種稀釋倍數(shù)中就與流感病毒A的各種類型的反應(yīng)性的測試)實(shí)施例4中產(chǎn)生的免疫層析測定法裝置用于執(zhí)行關(guān)于與8種流感病毒A的反應(yīng)性的測試。使用已通過下述制備的測試樣品，允許每種流感病毒A在含胚雞蛋中生長以荻得絨毛尿嚢流體，且隨后用分析物稀釋液使絨毛尿嚢流體稀釋10、100、1000和10000倍。使用微量吸管，將150pi測試樣品逐滴加入實(shí)施例4中獲得的測試條的樣品接受部件6中，從而使得它在其中層析法地顯現(xiàn)。使其在室溫下放置15分鐘。其后，通過肉眼觀察由第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a和第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c各自捕獲的病毒抗原和膠體金顆粒標(biāo)記的抗體的復(fù)合物量。通過用肉眼將紅-紫色水平分成下述6個(gè)階段來測定捕獲的復(fù)合物量，所述紅-紫色水平取決于捕獲的量而增加或減少-(無著色)；±(輕微著色)；+(清楚著色)；++(更清楚的著色)；+++(顯著著色)；和++++(更顯著的著色)。對下述流感病毒A實(shí)施測試A/Vietnam/1194/04(H5N1)、A/HongKong/483/97(謂l)、A/Chicken/Suphanburi/1/04(H5N1)、A/Whooperswan/Mongolia/3/05(固l)、A/Chicken/Ibaraki/1/05(H5N2)、A/Swan/Hokkaido/51/96(H5N3)、A/Chicken/Italy/99(H7N1)和A/Chicken/Netherlands/03(H7N7)。這些流感病毒A除了A/Swan/Hokkaido/51/96(H5N3)和A/Chicken/Netherlands/03(H7N7)已知為強(qiáng)毒林。結(jié)果連同每種亞型的絨毛尿嚢流體的HA值一起顯示于表3-1至3-4中。表3-l:就與流感病毒A的反應(yīng)性的測試<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表3-2:就與流感病毒A的反應(yīng)性的測試<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表3-3:就與流感病毒A的反應(yīng)性的測試<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表3-4:就與流感病毒A的反應(yīng)性的測試<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>如由表3-1至3-4顯而易見的，在IOOO倍或更小的稀釋倍數(shù)時(shí)關(guān)于實(shí)施測試的所有病毒毒抹，在測試條10的第一個(gè)捕獲區(qū)帶41a上觀察到著色。另一方面，在測試條20的第二個(gè)捕獲區(qū)帶41c中，在超過1000倍的稀釋倍數(shù)時(shí)，關(guān)于所有H5N1亞型和其為亞型H5N2的強(qiáng)毒林的A/Chicken/Ibaraki/1/05(H5N2)未觀察到著色，同時(shí)在1000倍或更小的稀釋倍數(shù)時(shí)關(guān)于實(shí)施測試的所有其他流感病毒A毒林觀察到顯著著色。因此，這些結(jié)果證實(shí)在實(shí)施例4中描述的免疫層析測定法裝置對于流感病毒A的強(qiáng)毒林的檢測是有效的，優(yōu)選用于亞型H5N1和亞型H5N2的強(qiáng)毒林的檢測，和特別優(yōu)選用于亞型H5N1的檢測。工業(yè)適用性本發(fā)明提供了用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的方法，其使用與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、和不與流感病毒A的強(qiáng)毒株反應(yīng)但與除強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體，以便根據(jù)免疫測定法檢測在與第一種抗體的反應(yīng)中顯示陽性應(yīng)答、和在與第二種抗體的反應(yīng)中顯示陰性應(yīng)答的抗原。特別地，本發(fā)明提供了夾心免疫測定法、以及免疫層析測定法和免疫層析測定法裝置。根據(jù)本發(fā)明，屬于流感病毒的強(qiáng)毒抹的病毒可以通過簡單方法特異性檢測。因此，本發(fā)明對于快速和筒單診斷由此類病毒引起的人類、鳥類等的疾病是有用的。附圖簡述圖la是顯示具有單個(gè)免疫層析測試條的本發(fā)明免疫層析測定法裝置的具體例子的平面圖，和圖lb是圖la中所示裝置的橫斷面的縱向圖；圖2是顯示具有2個(gè)免疫層析測試條的本發(fā)明免疫層析測定法裝置的具體例子的平面圖；圖3是顯示具有2個(gè)免疫層析測試條的本發(fā)明免疫層析測定法裝置的另一個(gè)具體例子的平面圖；和圖4a是顯示具有2個(gè)免疫層析測試條的本發(fā)明免疫層析測定法裝置的進(jìn)一步具體例子的平面圖，和圖4b是圖4a中所示裝置的橫斷面的縱向圖。符號描述1粘著層2灌注部件3膜栽體4捕獲區(qū)帶5吸收部件6樣品接受部件10免疫層析測試條20免疫層析測試條權(quán)利要求1.用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒株的方法，其包括提供與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、和不與流感病毒A的強(qiáng)毒株反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒株外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體，且進(jìn)行免疫測定法以檢測在與所述第一種抗體的反應(yīng)中顯示陽性應(yīng)答、和在與所述第二種抗體的反應(yīng)中顯示陰性應(yīng)答的抗原。2.根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，其中所述免疫測定法包括使用所述第一種抗體和與第三種抗體的夾心免疫測定法，所述第三種抗體與所述第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)，和/或使用所迷第二種抗體和第四種抗體的夾心免疫測定法，所述第四種抗體與所述笫二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)。3.根據(jù)權(quán)利要求2的檢測方法，其中所述第一種抗體和所述第二種或第四種抗體固定在載體中。4.根據(jù)權(quán)利要求3的檢測方法，其中所述第三種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，和所述第四種抗體不與流感病毒A的強(qiáng)毒4朱反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。5.根據(jù)權(quán)利要求3的檢測方法，其中可以彼此相同或不同的所述第三種和第四種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的檢測方法，其中所述第一種、第二種、第三種和第四種抗體是針對流感病毒的核蛋白的單克隆抗體。7.根據(jù)權(quán)利要求6的檢測方法，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒抹是選自亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒林中的至少一種。8.根據(jù)權(quán)利要求7的檢測方法，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒林是亞型H5N1。9.一種免疫層析測定法，其包括提供具有第一個(gè)捕獲區(qū)帶和第二個(gè)捕獲區(qū)帶的膜載體，所述捕獲區(qū)帶通過分別使第一種抗體和第二種抗體固定在其預(yù)定位置中形成，所述第一種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，和所述笫二種抗體不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)；和在所述膜栽體中分別針對所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶和所述第二個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)第一種混合溶液和第二種混合溶液，所述第一種混合溶液包含測試樣品和第三種抗體，所述第三種抗體與所述第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)，和所述第二種混合溶液包含所述測試樣品和第四種抗體，所述第四種抗體與所述第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)，或在所述膜載體中針對2個(gè)所述捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)所述第一種混合溶液，由此流感病毒A的強(qiáng)毒林可以基于下述結(jié)果進(jìn)行檢測在與所述第一種抗體的反應(yīng)中的陽性應(yīng)答顯示于所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶中，同時(shí)在與所述第二種抗體的反應(yīng)中的陰性應(yīng)答顯示于所述第二個(gè)捕獲區(qū)帶中。10.根據(jù)權(quán)利要求9的測定法，其中所述第三種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，和所述第四種抗體不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。11.根據(jù)權(quán)利要求9的測定法，其中可以彼此相同或不同的所述第三種和第四種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)。12.根據(jù)權(quán)利要求9-11中任一項(xiàng)的測定法，其中所述第一種、第二種、第三種和第四種抗體是針對流感病毒的核蛋白的單克隆抗體。13.根據(jù)權(quán)利要求12的測定法，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒林是選自亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒株中的至少一種。14.根據(jù)權(quán)利要求13的測定法，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒林是亞型H5N1。15.根據(jù)權(quán)利要求9的測定法，其中所述第三種和笫四種抗體用金屬膠體顆粒或乳膠顆粒進(jìn)行標(biāo)記。16.根據(jù)權(quán)利要求15的測定法，其中所述膜栽體是硝化纖維素。17.用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒株的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、與所述第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第三種抗體、與所述第二種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第四種抗體、和膜栽體，其中所述第一種和第二種抗體先前固定在所述膜載體的預(yù)定位置中，以便分別形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶和第二個(gè)捕獲區(qū)帶，以及所述第三種和第四種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中所述第三種和第四種抗體在遠(yuǎn)離所述捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在所述膜載體中分別針對所述第一個(gè)和第二個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。18.根據(jù)權(quán)利要求17的測定法裝置，其中所述第三種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，和所述第四種抗體不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。19.根據(jù)權(quán)利要求17的測定法裝置，其中可以彼此相同或不同的所述第三種和第四種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)。20.根據(jù)權(quán)利要求17-19中任一項(xiàng)的測定法裝置，其中所述第一種、第二種、第三種和第四種抗體是針對流感病毒的核蛋白的單克隆抗體。21.根據(jù)權(quán)利要求20的測定法裝置，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒才朱是選自亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒^^中的至少一種。22.根據(jù)權(quán)利要求21的測定法裝置，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒才朱是亞型H5N1。23.根據(jù)權(quán)利要求17的測定法裝置，其中所述膜栽體是具有彼此遠(yuǎn)離的所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶和所述第二個(gè)捕獲區(qū)帶的單個(gè)膜栽體。24.根據(jù)權(quán)利要求17的測定法裝置，其中所述膜載體包含在其中固定所述第一種抗體的第一個(gè)膜載體，和在其中固定所述第二種抗體的第二個(gè)膜載體。25.根據(jù)權(quán)利要求24的測定法裝置，其中所述第三種抗體在所述第一個(gè)膜載體上進(jìn)行制備，和所述第四種抗體在所述第二個(gè)膜載體上進(jìn)行制備。26.根據(jù)權(quán)利要求25的測定法裝置，其中所述第三種和笫四種抗體進(jìn)行制備同時(shí)灌注到部件內(nèi)，所述部件分別排列在所述第一個(gè)和第二個(gè)膜栽體上。27.根據(jù)權(quán)利要求26的測定法裝置，其中所述第一個(gè)膜載體和所述第二個(gè)膜載體都具有延伸形式，和排列在所述分別的膜栽體上的所述灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)所述2個(gè)膜載體彼此平行放置。28.根據(jù)權(quán)利要求26的測定法裝置，其中所述第一個(gè)膜栽體和所述第二個(gè)膜載體都具有延伸形式，和排列在所述分別的膜栽體上的所述灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)所述2個(gè)膜載體放射狀或相對地放置。29.根據(jù)權(quán)利要求24的測定法裝置，其中可以彼此相同或不同的所述第三種和第四種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)，且制備用于在所述膜載體中針對所述第一個(gè)和第二個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。30.根據(jù)權(quán)利要求29的測定法裝置，其中所述第三種和第四種抗體在所述膜載體上進(jìn)行制備。31.根據(jù)權(quán)利要求30的測定法裝置，其中所述第三種和第四種抗體進(jìn)行制備同時(shí)灌注到排列在所述膜栽體上的部件內(nèi)。32.根據(jù)權(quán)利要求31的測定法裝置，其中所述第三種和第四種抗體是相同的，和所述灌注部件與所述第一個(gè)和第二個(gè)膜載體聯(lián)系。33.根據(jù)權(quán)利要求32的測定法裝置，其中所述第一個(gè)膜栽體和所述第二個(gè)膜載體都具有延伸形式，和排列在所述分別的膜栽體上的所述灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)所述2個(gè)膜載體彼此平行放置。34.根據(jù)權(quán)利要求32的測定法裝置，其中所述第一個(gè)膜載體和所述第二個(gè)膜載體都具有延伸形式，和排列在所述分別的膜栽體上的所述灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)所述2個(gè)膜載體放射狀或相對地放置。35.根據(jù)權(quán)利要求17的測定法裝置，其中所述第三種和第四種抗體用金屬膠體顆?；蛉槟z顆粒進(jìn)行標(biāo)記。36.根據(jù)權(quán)利要求35的測定法，其中所述膜栽體是硝化纖維素。37.根據(jù)權(quán)利要求17的測定法裝置，其中所述膜載體容納在外殼中。38.根據(jù)權(quán)利要求37的測定法裝置，其中所述第三種抗體和/或所述第四種抗體貯藏在所述外殼內(nèi)或外。39.免疫層析測定法，其包括提供與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒株反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒抹外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、和與所述第一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第三種抗體；制備各自具有通過使所述第一種抗體固定在其預(yù)定位置中形成的第一個(gè)捕獲區(qū)帶的膜載體；和在所述分別的膜載體中針對所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)第一種混合溶液和第二種混合溶液，所述第一種混合溶液包含測試樣品和所述第二種抗體，和所述第二種混合溶液包含所述測試樣品和所述第三種抗體；由此流感病毒A的強(qiáng)毒抹可以基于下述結(jié)果進(jìn)行檢測在與所述第三種抗體的反應(yīng)中的陽性應(yīng)答顯示于所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶中，同時(shí)在與所述笫二種抗體的反應(yīng)中的陰性應(yīng)答顯示于所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶中。40.根據(jù)權(quán)利要求39的測定法，其中所述第三種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)。41.根據(jù)權(quán)利要求39或40的測定法，其中所述第一種、第二種和第三種抗體是針對流感病毒的核蛋白的單克隆抗體。42.根據(jù)權(quán)利要求41的測定法，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒抹是選自亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒林中的至少一種。43.根椐權(quán)利要求42的測定法，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒林是亞型H5N1。44.根據(jù)權(quán)利要求39的測定法，其中所述第二種和第三種抗體用金屬膠體顆粒或乳膠顆粒進(jìn)行標(biāo)記。45.根據(jù)權(quán)利要求44的測定法，其中所述膜栽體是硝化纖維素。46.用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒株的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒抹反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、與所述笫一種抗體與之反應(yīng)的抗原反應(yīng)的第三種抗體、和膜栽體，其中所述第一種抗體先前固定在所述膜載體的預(yù)定位置中，以便形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶，以及所述第二種和第三種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)4亍標(biāo)記，并且其中所述第二種和第三種抗體各自在遠(yuǎn)離所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在所述膜栽體中針對所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。47.根據(jù)權(quán)利要求46的測定法裝置，其中所述第三種抗體與所有流感病毒A亞型反應(yīng)。48.根據(jù)權(quán)利要求46或47的測定法裝置，其中所述第一種、第二種和第三種抗體是針對流感病毒的核蛋白的單克隆抗體。49.根據(jù)權(quán)利要求48的測定法裝置，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒林是選自亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒林中的至少一種。50.根據(jù)權(quán)利要求49的測定法裝置，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒抹是亞型H5N1。51.根據(jù)權(quán)利要求46的測定法裝置，其中所述膜載體包含在其中固定所述第一種抗體的笫一個(gè)膜栽體，和在其中固定所述第一種抗體的第二個(gè)膜栽體。52.根據(jù)權(quán)利要求51的測定法裝置，其中所述第二種抗體在所述第一個(gè)膜載體上進(jìn)行制備，和所述第三種抗體在所述第二個(gè)膜栽體上進(jìn)行制備。53.根據(jù)權(quán)利要求52的測定法裝置，其中所述第二種和第三種抗體進(jìn)行制備同時(shí)灌注到部件內(nèi)，所述部件分別排列在所述第一個(gè)和第二個(gè)膜載體上。54.根據(jù)權(quán)利要求53的測定法裝置，其中所述第一個(gè)膜載體和所述笫二個(gè)膜栽體都具有延伸形式，和排列在所述分別的膜載體上的所述灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)所述2個(gè)膜栽體彼此平行放置。55.根據(jù)權(quán)利要求53的測定法裝置，其中所述第一個(gè)膜載體和所述笫二個(gè)膜載體都具有延伸形式，和排列在所述分別的膜栽體上的所述灌注部件彼此相隔一定距離放置，同時(shí)所述2個(gè)膜載體放射狀或相對地放置。56.根據(jù)權(quán)利要求46的測定法裝置，其中所述笫二種和第三種抗體用金屬膠體顆粒或乳膠顆粒進(jìn)行標(biāo)記。57.根據(jù)權(quán)利要求56的測定法，其中所述膜栽體是硝化纖維素。58.根據(jù)權(quán)利要求46的測定法裝置，其中所述膜載體容納在外殼中。59.根據(jù)權(quán)利要求58的測定法裝置，其中所述第二種抗體和/或所述第三種抗體貯藏在所述外殼內(nèi)或外。60.用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、和膜載體，其中所述第二種抗體先前固定在所述膜載體的預(yù)定位置中，以便形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶，和所述第一種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中所述第一種抗體在遠(yuǎn)離所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在所述膜載體中針對所述第一個(gè)捕獲區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。61.用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒林的免疫層析測定法裝置，其至少包含與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體、和膜載體，其中所述第一種抗體先前固定在所述膜載體的預(yù)定位置中，以便形成第一個(gè)捕獲區(qū)帶，和所述第二種抗體用合適的標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記，并且其中所述第二種抗體在遠(yuǎn)離所迷第一個(gè)捕獲區(qū)帶的位置上進(jìn)行制備，用于在所述膜載體中針對所述第一個(gè)捕荻區(qū)帶層析法地顯現(xiàn)。62.單克隆抗體，其不與流感病毒A的強(qiáng)毒林反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)。63.根據(jù)權(quán)利要求62的單克隆抗體，其不與流感病毒A的強(qiáng)毒林的核蛋白反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒林外的所有流感病毒A亞型的核蛋白反應(yīng)。64.根據(jù)權(quán)利要求63的單克隆抗體，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒林是選自亞型H5N1以及亞型H5N2和H7N1的強(qiáng)毒林中的至少一種。65.根據(jù)權(quán)利要求64的單克隆抗體，其中所述流感病毒A的強(qiáng)毒株是亞型H5N1。全文摘要本發(fā)明提供了用于以特異性、快速和簡單的方式檢測流感病毒的強(qiáng)毒株的方法，和為此的測定法裝置。提供了用于檢測流感病毒A的強(qiáng)毒株的方法，其包括提供與所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第一種抗體、和不與流感病毒A的強(qiáng)毒株反應(yīng)但與除所述強(qiáng)毒株外的所有流感病毒A亞型反應(yīng)的第二種抗體，且進(jìn)行免疫測定法以檢測在與所述第一種抗體的反應(yīng)中顯示陽性應(yīng)答、和在與所述第二種抗體的反應(yīng)中顯示陰性應(yīng)答的抗原。文檔編號C12P21/08GK101336375SQ20068005239公開日2008年12月31日申請日期2006年12月26日優(yōu)先權(quán)日2005年12月26日發(fā)明者難波靖治申請人:株式會(huì)社比爾生命