專利名稱：微生物酶法制備大豆異黃酮苷元的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及同大豆異黃酮制作大豆異黃酮苷元的方法，特別是涉及微生物酶法由β-葡萄糖苷酶轉(zhuǎn)化為大豆異黃酮苷元的制備方法。
背景技術(shù)：
大豆異黃酮(sorbean isoflovone)是指以3-苯基色原酮為母核的一類化合物，是具有多種生物活性的大豆?fàn)I養(yǎng)成份。目前，科學(xué)家已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的大豆異黃酮共有15種異構(gòu)體，分為游離型的苷元和結(jié)合型的糖苷兩大類。其中糖苷約占大豆異黃酮總量的95-98％(w/w)，苷元占大豆異黃酮總量的2-5％(w/w)。日本東京rakult微生物研究中心最新研究表明游離型的苷元相對(duì)于結(jié)合型糖苷分子較小，疏水性更強(qiáng)，所以生物利用性更好。研究還表明大豆中只含有0.5-2.5％的大豆異黃酮，而大豆異黃酮的生物利用率也只有10-40％，這主要是由于糖苷型或其衍生物很難被人體直接吸收。只有生成苷元形式，才易被吸收利用。由此可見，把大豆異黃酮糖苷型及糖苷衍生物轉(zhuǎn)化成苷元形式，是提高其生物利用率的前提。近年來(lái)國(guó)外學(xué)者的專利報(bào)道了制備大豆苷元的方法有利用商品酶(如β-葡萄糖苷酶、酯酶等)將異黃酮水解成苷元，利用化學(xué)方法合成、提取大豆苷元，強(qiáng)酸、強(qiáng)堿水解方法制備大豆苷元，這些方法由于存在著操作復(fù)雜、收率低、反應(yīng)條件劇烈、成本高、有機(jī)溶劑殘留造成環(huán)境污染等缺點(diǎn)，都未能得到廣泛的應(yīng)用。已經(jīng)公開的黑龍江雙河松嫩大豆生物工程有限責(zé)任公司的200410058379.3號(hào)專利申請(qǐng)，披露了用β-葡萄糖和膜技術(shù)生產(chǎn)大豆異黃酮苷元的工藝方法，該方法是以大豆異黃酮粉為基本原料，以大豆蛋白和大豆異黃酮作誘導(dǎo)劑，用培養(yǎng)霉菌釋放的胞外酶β-葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮，并利用選自超濾和透析的膜技術(shù)進(jìn)行酶水解液的后處理，得到大豆異黃酮苷元。該方法在原料適用性和工藝方面還存在一定缺陷1、由于采用含量20％以上的大豆異黃酮粉，轉(zhuǎn)化率達(dá)90％以上，實(shí)驗(yàn)表明，如大豆異黃酮粉含量低于20％，轉(zhuǎn)化率會(huì)明顯降低；特別是原料含量低于10％時(shí)，如果采用上述工藝，會(huì)因?yàn)殡s質(zhì)多，大大增加過(guò)濾精制成本；2、工藝流程較長(zhǎng)，發(fā)酵制備β-葡萄糖苷酶原料較多，對(duì)過(guò)濾設(shè)備及技術(shù)條件要求較苛刻。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，不受原料純度的限制，其工藝條件的設(shè)計(jì)同樣適應(yīng)低于20％的原料純度，轉(zhuǎn)化率均達(dá)到90％以上，在制作成本和原料的適應(yīng)性方面具有更大的優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種微生物酶法制備大豆異黃酮苷元的方法，該方法不受原料純度限制，在原料成份低于20％，甚至更低時(shí)，仍然具有較高轉(zhuǎn)化率，并且工藝流程縮短，轉(zhuǎn)化成本低，生物利用率明顯提高，可直接用作醫(yī)藥、保健食品原料。
本發(fā)明方法即微生物酶法制備大豆異黃酮苷元的方法，是以大豆異黃酮粉為原料，用培養(yǎng)米曲霉菌發(fā)酵制備β-葡萄糖苷酶，將大豆異黃酮苷轉(zhuǎn)化為大豆異黃酮苷元，其特征是該制備方法包括以下步驟a)所述原料為2～90％的大豆異黃酮粉；b)篩選的菌種為米曲霉菌3042，用該菌種制備種子培養(yǎng)液；c)制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基，得到含有β-葡萄糖苷酶的發(fā)酵物；d)將大豆異黃酮粉加入到經(jīng)發(fā)酵提取的β-葡萄糖苷酶溶液中制取酶的轉(zhuǎn)化液，再進(jìn)行離心固液分離，沉淀物低溫干燥得到大豆異黃酮苷元。
本發(fā)明更詳細(xì)的制備大豆異黃酮苷元的方法包括以下步驟一、原料基本原料為2～90％的大豆異黃酮粉，本發(fā)明工藝也同樣適于含量為5～20％的大豆異黃酮粗粉。
二、菌種篩選用菌種為米曲霉菌(Aspergillus oryzae)3042菌種斜面?zhèn)鞔囵B(yǎng)基制備方法PDA培養(yǎng)基制備法三、固體發(fā)酵法制備β-葡萄糖苷酶及純化、酶活力測(cè)定
1、種子培養(yǎng)液的制備及培養(yǎng)方法可溶性淀粉2％，葡萄糖1％，磷酸二氫鉀0.1％，硫酸鎂0.1％，酵母膏0.5％，硝酸鈉0.2％，PH自然，于121℃滅菌15min；無(wú)菌操作，挑取適量新鮮斜面上的孢子轉(zhuǎn)入到80ml種子培養(yǎng)基中，于20～28℃、160～180r/min震蕩培養(yǎng)38～48hr。
2、固體發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法將麩皮∶水按照1∶1.5～3.0的重量比配合，PH自然，121℃滅菌30min，以1～7％的接種量將制備好的種子接入固體培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)20～28℃，濕度60～70％，培養(yǎng)時(shí)間60～84hr，得到含β-葡萄糖苷酶的固體發(fā)酵物；3、β-葡萄糖苷酶粗酶液的提取將上述固體發(fā)酵物加入10倍量的蒸餾水，攪拌均勻浸泡2～6hr，于4～10℃，5000～10000r/min條件下離心進(jìn)行液固分離，所得上清液為β-葡萄糖苷酶粗酶液。
4、β-葡萄糖苷酶初步純化為便于保存，需對(duì)粗酶液進(jìn)行純化處理，將粗酶液用75％的乙醇，于4～10℃下進(jìn)行醇沉過(guò)夜，在此溫度下以5000～10000r/min離心分離，沉淀物用蒸餾水溶解得到初步純化的β-葡萄糖苷酶液，或在-40～-50下冷凍干燥獲得固體β-葡萄糖苷酶。初步純化后，用DEAE-sephadexA-50離子交換樹脂純化，用SDS測(cè)定β-葡萄糖苷酶的分子量為45kb。
5、β-葡萄糖苷酶的活力測(cè)定方法(1)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作采用分光光度法。取8只帶有刻度的比色管，精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml；用蒸餾水補(bǔ)充2ml；分別加入1.5mlDNS試液，沸水浴5min，用蒸餾水定溶至10ml，于540nm比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)樣品中β-葡萄糖苷酶活力的測(cè)定取4只帶有刻度的比色管，分別加入0.5％的水楊苷0.5ml，對(duì)照管加入DNS試液1ml，將樣品管與對(duì)照管同時(shí)放在50℃環(huán)境下水浴5min；各管分別加入酶液0.5ml，50℃水浴30min后，樣品管加入DNS試液1ml，沸水浴5分鐘，用蒸餾水定容至10ml，于540nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。酶活單位規(guī)定為每小時(shí)由底物生成1umol的葡萄糖所需要的酶量為一個(gè)酶活單位(U)。
四、大豆異黃酮的β-葡萄糖苷酶生物轉(zhuǎn)化本步驟用以轉(zhuǎn)化的酶液可以是上述步驟中制取的粗酶液或經(jīng)過(guò)純化的酶液。
1、大豆異黃酮苷元的制備原料與β-葡萄糖苷酶的比例為1000～4000U/g，轉(zhuǎn)化溫度40～50℃，PH4.5～7.0，攪拌速度為160～180r/min，轉(zhuǎn)化時(shí)間6～10hr，得到酶的轉(zhuǎn)化液，再將該轉(zhuǎn)化液于4～10℃，5000～10000r/min的條件下離心進(jìn)行液固分離，沉淀物低溫干燥得到大豆異黃酮苷元。
2、分離液的處理轉(zhuǎn)化液進(jìn)行液固分離后的上清液用75％食用乙醇進(jìn)行醇沉淀過(guò)夜，在4～10℃，5000～10000r/min條件下離心進(jìn)行液固分離，沉淀的β-葡萄糖苷酶，用蒸餾水溶解，測(cè)定酶活力后重新利用；回收上清液中乙醇，獲得浸膏于50～80℃減壓干燥得大豆異黃酮苷元，與轉(zhuǎn)化后第一次液固分離得到的大豆異黃酮苷元合并。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1、不受原料純度限制，在原料含量2～20％時(shí)，轉(zhuǎn)化率仍能達(dá)到90％以上，工藝流程明顯縮短，轉(zhuǎn)化成本低，生物利用率提高數(shù)10倍，可直接用作醫(yī)藥、保健食品原料；2、利用米曲3042發(fā)酵生產(chǎn)的Bata-葡萄糖苷酶進(jìn)行大豆異黃酮的轉(zhuǎn)化無(wú)有機(jī)溶劑殘留，工藝簡(jiǎn)單、操作性強(qiáng)、可規(guī)?；a(chǎn)；3、培養(yǎng)基成份簡(jiǎn)單，培養(yǎng)條件易控制，轉(zhuǎn)化所用的酶及乙醇都可重復(fù)回收利用，無(wú)環(huán)境污染；4、提高了大豆異黃酮的生物利用率及生物活性，填補(bǔ)了高活性大豆異黃酮制備工藝的空白。
下面用具體的實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的方法，本發(fā)明的具體實(shí)施例中的實(shí)施方式不會(huì)構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的任何限制。
附圖
為本發(fā)明的工藝流程示意圖。
實(shí)施例1原料采用含量10％的大豆酮黃酮粗粉(天津尖峰天然產(chǎn)物有限公司產(chǎn)品)菌種米曲霉菌(Aspergillus oryzae)3042上海釀造研究所菌種斜面?zhèn)鞔囵B(yǎng)基制備方法PDA培養(yǎng)基制備1、固體發(fā)酵法β-葡萄糖苷酶的制備及酶活力測(cè)定(1)種子培養(yǎng)基的制備及其菌種培養(yǎng)精密稱取可溶性淀粉10.0g，葡萄糖5.0g，磷酸二氫鉀0.5g，硫酸鎂0.5g，酵母膏2.5g，硝酸鉀1.0g，用蒸餾水溶解并稀釋至500ml，PH6.5，分裝到500ml三角瓶中，每瓶80ml，121℃滅菌15min。無(wú)菌操作，挑取適量的新鮮斜面上米曲3042的孢子轉(zhuǎn)入到種子培養(yǎng)基中，于27℃、160r/min震蕩培養(yǎng)42h。即得到固體發(fā)酵所需要的液體菌種。(注釋以上所需要的化學(xué)試劑均為分析純)(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備及其菌種的培養(yǎng)稱取麩皮1000g，按照麩皮∶水1∶2(w/v)的比例進(jìn)行配置固體發(fā)酵培養(yǎng)基，PH自然，121℃滅菌30min。無(wú)菌操作以5％的接種量將制備好的液體菌種接入固體培養(yǎng)基中，混勻后裝入培養(yǎng)槽內(nèi)，培養(yǎng)基的厚度約為3cm，在無(wú)菌發(fā)酵室內(nèi)發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為27℃，濕度保持在65-70％，培養(yǎng)時(shí)間為84小時(shí)。
(3)β-葡萄糖苷酶提取及初步純化將上述固體發(fā)酵物按照1∶10的比例加入蒸餾水，攪拌均勻，于4℃條件條件下浸泡4小時(shí)，在4℃，5000r/min條件下離心，收集上清液即為β-葡萄糖苷酶粗酶液。
取粗酶液500ml，緩慢加入食用酒精，使酒精濃度達(dá)75％，4℃條件下醇沉過(guò)夜，10000r/min、4℃條件下離心，收集沉淀，用500ml蒸餾水溶解或者在-40℃的條件下冷凍干燥保存。用初步純化的酶液經(jīng)過(guò)DEAE-sephadexA-50離子交換樹脂吸附、氯化鈉溶液梯度洗脫、透析、濃縮后用12％的SDS電泳測(cè)定米曲3042β-葡萄糖苷酶分子量在45kb。
(4)β-葡萄糖苷酶活力測(cè)定方法a)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作采用分光光度法。取8只帶有刻度的比色管，精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml；用蒸餾水補(bǔ)足2ml；分別加入1.5mlDNS試液，沸水浴5min，用蒸餾水定容至10ml，于540nm比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
b)樣品中β-葡萄糖苷酶活力的測(cè)定取4只帶有刻度的比色管，分別加入0.5％的水楊苷0.5ml，對(duì)照管加入DNS試液1ml，將樣品管與對(duì)照管同時(shí)放在50℃環(huán)境下水浴5min；各管分別加入酶液0.5ml，50℃水浴30min后，樣品管加入DNS試液1ml，沸水浴5分鐘，用蒸餾水定容至10ml，于540nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。酶活單位規(guī)定為每小時(shí)由底物生成1umol的葡萄糖所需要的酶量為一個(gè)酶活單位(U)。
按照實(shí)施案例中的方法制備5批的β-葡萄糖苷酶粗酶液的平均酶活力為1201U/ml，初步純化后的平均酶活力為4750U/ml。
2、大豆異黃酮苷元的制備水解所用的酶液如上所述的粗酶液或者初步純化的酶，所用原料為10％的大豆異黃酮(華北制藥股份有限公司)轉(zhuǎn)化前大豆苷含量為6.42％、染料木苷含量為2.02％、黃豆苷2.24％、大豆苷元0.46％、木素0.03％、黃豆黃素0.10％。
(1)稱取10％的大豆異黃酮100g，按照底物與酶2250U/g的比例加入粗酶液187.3ml，加入蒸餾水至1000ml(底物濃度為0.1g/ml)，PH自然，在溫度45℃攪拌速度180轉(zhuǎn)/分條件下，轉(zhuǎn)化8小時(shí)，終止反應(yīng)，將酶轉(zhuǎn)化液在10000r/min，4℃條件下離心，收集沉淀于70℃，-0.1Mpa條件下減壓干燥，粉碎后即可得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉末80.1g。
(2)向“(1)”步驟中離心收集的上清液中緩慢加入食用酒精至75％，4℃條件下醇沉過(guò)夜，10000rmin、4℃條件下離心，收集上清液回收乙醇，獲得的膏體同上述條件減壓干燥，粉碎后得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉10.4g。
(3)將兩次得到的產(chǎn)品合并共得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉90.5g，用HPLC法測(cè)定主要活性成份大豆苷0.347％、染料木苷0.094％、大豆苷元4.667％、染料木素1.227％；大豆苷轉(zhuǎn)化率為95.1％，染料木苷轉(zhuǎn)化率95.8％。
3、β-葡萄糖苷酶的回收利用將本制備工序中的第“(2)”步驟中離心后獲得的沉淀部分用適量的蒸餾水溶解與第1工序中第(3)步驟中獲得的粗酶液合并使用。
實(shí)施例21、5％大豆異黃酮粉水解制備大豆異黃酮苷元水解所用的酶液同10％大豆異黃酮粉水解實(shí)驗(yàn)所用原料5％大豆異黃酮(用華北制藥股份有限公司生產(chǎn)的10％的大豆異黃酮粉添加1倍量的提取大豆異黃酮后干燥的脫脂豆粉調(diào)配而成)轉(zhuǎn)化前大豆苷含量為3.37％、染料木苷含量為1.12％、黃豆苷1.21％、大豆苷元0.25％、染料木素0.02％、黃豆黃素0.04％。
(1)稱取5％的大豆異黃酮100g，按照底物與酶2300U/g的比例加入粗酶液192ml，加入蒸餾水至1000(底物濃度為0.1g/ml)，PH自然，在溫度45℃攪拌速度180轉(zhuǎn)/分條件下，轉(zhuǎn)化8小時(shí)，終止反應(yīng)，將酶轉(zhuǎn)化液在10000r/min，4℃條件下離心，收集沉淀于70℃。-0.1Mpa條件下減壓干燥，粉碎后即可得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉末80.6g。
(2)向“(1)”步驟中離心收集上清液中緩慢加入食用酒精，使酒精濃度至75％，4℃條件下醇沉過(guò)夜，10000rmin、4℃條件下離心，收集上清液回收乙醇，獲得的膏體同上述條件減壓干燥，粉碎后得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉9.7g。
(3)將兩次得到的產(chǎn)品合并共得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉91.3g，用HPLC法測(cè)定主要活性成份大豆苷0.236％、染料木苷0.071％、大豆苷元2.112％、染料木素0.731％；大豆苷轉(zhuǎn)化率為93.6％，染料木苷轉(zhuǎn)化率94.2％。
2、β-葡萄糖苷酶的回收利用與實(shí)施例1中10％大豆異黃酮水解實(shí)驗(yàn)中的回收步驟相同。
實(shí)施例31、20％大豆異黃酮粉水解制備大豆異黃酮苷元水解所用的酶液同10％大豆異黃酮粉水解實(shí)驗(yàn)所用原料為20％大豆異黃酮粉(天津尖峰天然產(chǎn)物有限公司)中的大豆苷含量為7.98％、染料木苷含量為9.51％、黃豆苷2.62％、大豆苷元0.72％、染料木素0.61％、黃豆黃素0.19％。
(1)稱取20％的大豆異黃酮100g，按照底物與酶3000U/g的比例加入粗酶液250ml，加入蒸餾水至1000(底物濃度為0.1g/ml)，PH自然，在溫度45℃攪拌速度180轉(zhuǎn)/分條件下，轉(zhuǎn)化8小時(shí)，終止反應(yīng)，將酶轉(zhuǎn)化液在10000r/min，4℃條件下離心，收集沉淀于70℃。-0.1Mpa條件下減壓干燥，粉碎后即可得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉末82.3g。
(2)向“(1)”步驟中離心收集的上清液中緩慢加入食用酒精，使酒精濃度至75％，4℃條件下醇沉過(guò)夜，10000rmin、4℃條件下離心，收集上清液回收乙醇，獲得的膏體同上述條件減壓干燥，粉碎后得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉10.3g。
(3)將兩次得到的產(chǎn)品合并共得到轉(zhuǎn)化后的大豆異黃酮粉92.6g，用HPLC法測(cè)定主要活性成份大豆苷0.370％、染料木苷0.359％、大豆苷元5.874％、染料木素5.709％；大豆苷轉(zhuǎn)化率為95.7％，染料木苷轉(zhuǎn)化率96.5％。
2、β-葡萄糖苷酶的回收利用與10％大豆異黃酮水解實(shí)驗(yàn)中的回收步驟相同。
權(quán)利要求
1.微生物酶法制備大豆異黃酮苷元的方法，是以大豆異黃酮粉為原料，用培養(yǎng)米曲霉菌發(fā)酵制備β-葡萄糖苷酶，將大豆異黃酮苷轉(zhuǎn)化為大豆異黃酮苷元，其特征是該制備方法包括以下步驟a)所述原料為2～90％的大豆異黃酮粉；b)篩選的菌種為米曲霉菌(Aspergillus oryzae)3042，用該菌種制備種子培養(yǎng)液；c)制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基，得到含有β-葡萄糖苷酶的發(fā)酵物；d)將大豆異黃酮粉加入到經(jīng)發(fā)酵提取的β-葡萄糖苷酶溶液中制取酶的轉(zhuǎn)化液，再進(jìn)行離心固液分離，沉淀物低溫干燥得到大豆異黃酮苷元。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是原料與β-葡萄糖苷酶的比例為1000～4000U/g，轉(zhuǎn)化溫度40～50℃，PH4.5～7.0，攪拌速度為160～180r/min，轉(zhuǎn)化時(shí)間6～10hr，得到酶的轉(zhuǎn)化液，再將該轉(zhuǎn)化液于4～10℃，5000～10000r/min的條件下離心進(jìn)行液固分離，沉淀物低溫干燥得到大豆異黃酮苷元。
3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征是轉(zhuǎn)化液進(jìn)行液固分離后的上清液用75％食用乙醇進(jìn)行醇沉淀過(guò)夜，在4～10℃，5000～10000r/min條件下離心進(jìn)行液固分離，沉淀的β-葡萄糖苷酶，用蒸餾水溶解，測(cè)定酶活力后重新利用；回收上清液中乙醇，獲得浸膏于50～80℃減壓干燥得大豆異黃酮苷元。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是固體發(fā)酵法制備含β-葡萄糖苷酶的步驟如下a)種子培養(yǎng)液的制備及培養(yǎng)方法可溶性淀粉2％，葡萄糖1％，磷酸二氫鉀0.1％，硫酸鎂0.1％，酵母膏0.5％，硝酸鈉0.2％，PH自然，于121℃滅菌15min；挑取適量斜面上的孢子轉(zhuǎn)入到種子培養(yǎng)基中，于20～28℃、160～180r/min震蕩培養(yǎng)38～48hr；b)固體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)方法將麩皮∶水按照1∶1.5～3.0的重量比配合，PH自然，121℃滅菌30min，以1～7％的接種量將制備好的種子接入固體培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)20～28℃，濕度60～70％，培養(yǎng)時(shí)間60～84hr，得到含β-葡萄糖苷酶的固體發(fā)酵物；c)β-葡萄糖苷酶粗酶液的提取將上述固體發(fā)酵物加入10倍量的蒸餾水，攪拌均勻浸泡2～6hr，于4～10℃，5000～10000r/min條件下離心進(jìn)行液固分離，所得上清液為β-葡萄糖苷酶粗酶液。
5.按照權(quán)利要求4所述的方法，其特征是所述c)步驟中的粗酶液的初步純化法是將粗酶液用75％的乙醇，于4～10℃下進(jìn)行醇沉過(guò)夜，在此溫度下以5000～10000r/min離心分離，沉淀物用蒸餾水溶解得到初步純化的β-葡萄糖苷酶液，或在-40～-50℃下冷凍干燥獲得固體β-葡萄糖苷酶，初步純化后，用DEAE-sephadexA-50離子交換樹脂純化，用SDS電泳測(cè)定其分子量在45kb。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是原料大豆異黃酮粉的純度選用5～20％。
7.按照權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征是用以轉(zhuǎn)化的β-葡萄糖苷酶溶液是粗酶液或經(jīng)過(guò)純化的酶液。
全文摘要
微生物酶法制備大豆異黃酮苷元的方法，是以大豆異黃酮粉為原料，用培養(yǎng)米曲霉菌發(fā)酵制備β－葡萄糖苷酶，將大豆異黃酮苷轉(zhuǎn)化為大豆異黃酮苷元，其特征是該制備方法包括以下步驟所述原料為2～90％的大豆異黃酮粉；篩選的菌種為米曲霉菌3042，用該菌種制備種子培養(yǎng)液；制備固體發(fā)酵培養(yǎng)基，得到含有β－葡萄糖苷酶的發(fā)酵物；將大豆異黃酮粉加入到經(jīng)發(fā)酵提取的β－葡萄糖苷酶溶液中制取酶的轉(zhuǎn)化液，再進(jìn)行離心固液分離，沉定物低溫干燥得到大豆異黃酮苷元。本發(fā)明不受原料純度限制，在原料含量2～20％時(shí)、轉(zhuǎn)化率仍能達(dá)到90％以上，工藝流程明顯縮短，制作成本低，生物利用率明顯提高。
文檔編號(hào)C12R1/69GK1966705SQ20061013413
公開日2007年5月23日 申請(qǐng)日期2006年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月30日
發(fā)明者李劍梅, 劉艷玲, 李莉, 王振麗, 宗玉麗 申請(qǐng)人:遼寧省微生物科學(xué)研究院