專利名稱：重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物的人工繁殖和栽培方法技術(shù)領(lǐng)域；特別涉及一種重金屬超富 集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法。
背景技術(shù)：
天藍(lán)遏藍(lán)菜(r/z/a^/caera/^cera)是一種一年生或多年生的草本植物，原產(chǎn)于 歐洲中部、西部和南部，是一種典型的重金屬超富集植物，其中，累積鋅含量高達(dá) 25000—30000毫克/千克，未表現(xiàn)出任何受傷癥狀或生長(zhǎng)受到抑制，而大多數(shù)植物累 積鋅達(dá)到100毫克/千克時(shí)即表現(xiàn)中毒癥狀；同時(shí)，累積鎘含量高達(dá)1800毫克/千克, 遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出其它普通植物所能忍受的極限。自20世紀(jì)80年代以來，利用植物修復(fù)重 金屬污染的土壤和水體的思想日益得到國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界的密切關(guān)注，并有望 迅速發(fā)展成為一項(xiàng)新產(chǎn)業(yè)。天藍(lán)遏藍(lán)菜具有吸收和富集土壤或水體中重金屬的特征， 通過收割植物帶走重金屬，進(jìn)而以其為工業(yè)原料提煉重金屬，達(dá)到清除土壤污染和 有害物質(zhì)變害為寶的雙重目的。利用遏藍(lán)菜的快速繁育和種植技術(shù)可以開發(fā)出廉價(jià)、 徹底的土壤重金屬污染的治理修復(fù)技術(shù)，其花費(fèi)不僅少(僅是常規(guī)技術(shù)的幾十到幾 百分之一)，而且是進(jìn)行土層原位修復(fù)，既保護(hù)了地表生態(tài)環(huán)境，又金屬冶煉提供礦 源，因此國(guó)際上將其稱之為"廉價(jià)的綠色修復(fù)技術(shù)"。然而，天藍(lán)遏藍(lán)菜生長(zhǎng)緩慢， 生物量小，在生產(chǎn)應(yīng)用上造成了限制。如何利用現(xiàn)代生物技術(shù)在短期內(nèi)培育出大量 健壯的幼苗，成為國(guó)內(nèi)外急切解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種天藍(lán)遏藍(lán)菜組織培養(yǎng)快速繁殖方法，以滿足遏藍(lán) 菜的工廠化生產(chǎn)和環(huán)境污染治理的研究與應(yīng)用的需求。 本發(fā)明的技術(shù)方案如下
本發(fā)明提供的重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法，其步驟如下-
1) 啟動(dòng)培養(yǎng)
將經(jīng)消毒處理過的天藍(lán)遏藍(lán)菜植株的莖尖/莖節(jié)剪成0.8-1.2厘米帶葉的莖 尖/莖節(jié)，或者經(jīng)消毒處理過的天藍(lán)遏藍(lán)菜種子實(shí)生苗的具芽莖段接種到啟動(dòng)培養(yǎng) 基中，置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)21—28天，生成叢生芽苗；
所述啟動(dòng)培養(yǎng)基所含組分及配比為每升啟動(dòng)基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、
水解乳蛋白250毫克、維生素B2 0.5_3毫克和二種植物生長(zhǎng)激素各0.2—2毫克， pH=5.8;所述二種植物生長(zhǎng)激素為6—芐基嘌呤和萘乙酸； 所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
2) 增殖培養(yǎng)
將經(jīng)啟動(dòng)培養(yǎng)的不少于2.5厘米的叢生芽苗修剪成帶2 — 3個(gè)節(jié)的莖段接種到 增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)21—28天；
所述增殖培養(yǎng)基所含組分及配比為每升增殖基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白250毫克、維生素B2 0.5—3毫克和二種或三種植物生長(zhǎng)激素各0.2—2 毫克，pH=5.8;
所述二種植物生長(zhǎng)激素為6 —芐基嘌呤和萘乙酸；所述三種植物生長(zhǎng)激素為6 一節(jié)基嘌呤、赤霉素和萘乙酸；
所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
3) 壯苗培養(yǎng)
將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的不少于3厘米的試管叢生芽苗修剪成帶2-3個(gè)節(jié)的莖段，接 種到壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)21—28天；
所述壯苗培養(yǎng)基所含組分及配比為每升壯苗基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白150毫克、維生素820.5—3毫克和二種植物生長(zhǎng)激素各0.2—2毫克， pH=5.8;所述二種植物生長(zhǎng)激素為6—芐基嘌呤和萘乙酸；
所述壯苗基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
4) 生根培養(yǎng)
剪取經(jīng)壯苗培養(yǎng)3.5-5厘米的叢生芽苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)15 —25天，長(zhǎng)出生根苗；
所述生根培養(yǎng)基所含組分及配比為每升生根基本培養(yǎng)基中含植物生長(zhǎng)激素 0.2—4毫克和蔗糖15克；pH=5.8;所述的植物生長(zhǎng)激素為吲哚丁酸或萘乙酸；
所述生根基本培養(yǎng)基為2368.22毫克/升的MS生根基本培養(yǎng)基；
5) 水培壯苗
將經(jīng)生根培養(yǎng)的生根苗取出，洗去附著的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至荷格蘭特液體培養(yǎng) 基中進(jìn)行水培壯苗培養(yǎng)；其培養(yǎng)條件為以泡沫板作為幼苗支持物，泡沫板大小 應(yīng)與水培槽口大小一致，盡量避免根部見光導(dǎo)致綠藻滋生；每5天更換一次荷格 蘭特液體培養(yǎng)基；22_25°C，光照16小時(shí)/天，濕度80 —85%;
6) 移栽定植
待經(jīng)水培壯苗生長(zhǎng)至根長(zhǎng)不少于5厘米時(shí)取出，移栽到苗圃基質(zhì)中，進(jìn)行移 栽定植；所述苗圃基質(zhì)由重量份配比為l:l花土和姪石組成；
幼苗移栽前，將苗圃基質(zhì)用荷格蘭特液體培養(yǎng)基淋透；移栽后，用聚氯乙烯 薄膜覆蓋，保持濕度90_95%，注意通風(fēng)；每5天噴水1次，14天噴施1次荷格 蘭特液體培養(yǎng)基；移栽苗定植10天后揭去覆膜；再保持溫室內(nèi)濕度80%,溫度 20 — 3(TC,每天噴水3次，14天噴施1次荷格蘭特液體培養(yǎng)基，21天噴施1次尿 素，進(jìn)行速生培養(yǎng)，完成天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織繁殖培養(yǎng)。
所述歩驟2)中所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基中所述的二種植物生長(zhǎng)激素中的6 —芐基嘌 呤為0.5—2毫克/升，所述的萘乙酸為0.2—2毫克/升時(shí)，效果較佳。
所述的步驟3)中所述的增殖培養(yǎng)基中所述的二種植物生長(zhǎng)激素中的6 —芐基 嘌呤1.0—2毫克/升，所述的萘乙酸為0.2—2毫克/升時(shí)，效果較佳。
所述的歩驟4)中所述的壯苗培養(yǎng)基中涉及的二種植物生長(zhǎng)激素中的6—芐基 嘌呤為0.5 — 2毫克/升，所述的赤霉素為0.5—2毫克/升時(shí)，效果較佳。
采用本發(fā)明方法進(jìn)行快速繁殖天藍(lán)遏藍(lán)菜，可以在短期內(nèi)得到大量健壯幼苗， 不受外界環(huán)境條件影響，四季皆可進(jìn)行。而且節(jié)約育苗占地，降低生產(chǎn)成本。植 物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用細(xì)胞的全能性，采用植物體上的細(xì)胞團(tuán)或一塊組織，通過 人為條件的控制，使之形成大量植株，并且保存了母體的全部?jī)?yōu)良性狀，且遺傳 性狀穩(wěn)定。通過這種方法得到的大量健壯天藍(lán)遏藍(lán)菜試管苗，對(duì)重金屬鎘、鋅等 富集水平?jīng)]有變化，完全可以滿足栽培研究和應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合天藍(lán)遏藍(lán)菜組培繁殖實(shí)施例和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的天藍(lán)遏藍(lán)菜遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)
施例進(jìn)一步描述本發(fā)明 實(shí)施例l:天藍(lán)遏藍(lán)菜的組培繁殖
1、 剪取成年天藍(lán)遏藍(lán)菜植株莖尖，流水沖洗干凈，70%酒精表面消毒30秒，
0.1%二氯化汞消毒8 — 10分鐘，無菌水沖洗3—5次，用濾紙吸干表面水分；
2、 將消毒處理過的材料剪成1厘米帶葉的莖尖，接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基中，置于
培養(yǎng)室內(nèi)，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，出現(xiàn)叢生芽苗；
所述啟動(dòng)培養(yǎng)基所含組分及配比為每升啟動(dòng)基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、
水解乳蛋白250毫克、維生素B2 1毫克、6 —芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸0.2毫克， pH=5.8;所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
3、 將培育不少于2.5厘米的試管叢生芽苗修剪成帶2 —3個(gè)節(jié)的莖段，接種到 增殖培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，出現(xiàn)大量密集叢生 芽；所述增殖培養(yǎng)基所含組分及配比為每升增殖基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白250毫克、維生素B2 1毫克、6 —芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸0.2毫克， pH=5.8;所述增殖基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
4、 將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的不少于3厘米以上的試管叢生芽苗修剪成帶2—3個(gè)節(jié) 的莖段，接種到壯苗培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，株 高顯著增加，葉片明顯增大；
所述壯苗培養(yǎng)基所含組分及配比為每升壯苗基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白150毫克、維生素B2 1毫克、6 —芐基腺嘌呤1毫克，赤霉素0.5毫克， pH = 5.8;所述壯苗基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
5、 剪取4厘米左右的叢生芽試管苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)15 一25天，生根率98%，平均根數(shù)15條，平均根長(zhǎng)4.8厘米；
所述生根培養(yǎng)基所含組分及配比為每升生根基本培養(yǎng)基中含吲哚丁酸1毫 克和蔗糖15克；pH=5.8;
所述生根基本培養(yǎng)基為2368.22毫克/升的MS生根基本培養(yǎng)基；
6、 將試管生根苗取出，洗去附著的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至荷格蘭特液體培養(yǎng)基中進(jìn)
行水培壯苗培養(yǎng)；培養(yǎng)條件為以泡沫板作為幼苗支持物，泡沫板大小應(yīng)與水培 槽口大小一致，盡量避免根部見光導(dǎo)致綠藻滋生；每5天更換一次培養(yǎng)液；培養(yǎng)
條件22—25 。C，光照16小時(shí)/天，濕度80—85 %;
7、 待水培苗長(zhǎng)至根長(zhǎng)5厘米以上時(shí)取出，移栽到苗圃基質(zhì)中進(jìn)行移栽定植；
所述苗圃基質(zhì)由重量份配比為l:l花土和蛭石組成；幼苗移栽前，將基質(zhì)用荷格蘭 特營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)基淋透；移栽后，用聚氯乙烯薄膜覆蓋，保持濕度90—95 %，注意 通風(fēng)；每5天噴水1次，14天噴施1次荷格蘭特營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)基；移栽苗在10天后 揭去覆膜；保持溫室內(nèi)濕度80 %，溫度20—30 °C;每天噴水3次，14天噴施1 次培養(yǎng)液，21天噴施1次尿素，進(jìn)行速生培養(yǎng)得到天藍(lán)遏藍(lán)菜組織。
實(shí)施例2:天藍(lán)遏藍(lán)菜組培繁殖
1、 剪取成年天藍(lán)遏藍(lán)菜植株莖尖，流水沖洗干凈，70%酒精表面消毒30秒， 0.1%二氯化汞消毒8 — 10分鐘，無菌水沖洗3 — 5次，用濾紙吸千表面水分；
2、 將消毒處理過的材料剪成l厘米帶葉的莖尖接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基中，置于培 養(yǎng)室內(nèi)，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，出現(xiàn)叢生芽苗；
所述啟動(dòng)培養(yǎng)基所含組分及配比為每升啟動(dòng)基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、
水解乳蛋白250毫克、維生素B2 2毫克、6—芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸0.2毫克， pH=5.8;所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
3、 將培育不少于2.5厘米的試管叢生芽苗修剪成帶2 — 3個(gè)節(jié)的莖段接種到增 殖培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，出現(xiàn)大量密集叢生芽； 所述增殖培養(yǎng)基所含組分及配比為每升增殖基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、水 解乳蛋白250毫克、維生素B2 2毫克、6—芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸0.2毫克， 赤霉素0.5毫克，pH=5.8;所述增殖基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
4、 將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的不少于3厘米以上的試管叢生芽苗修剪成帶2 — 3個(gè)節(jié) 的莖段，接種到壯苗培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，株 高顯著增加，葉片明顯增大；
所述壯苗培養(yǎng)基所含組分及配比為每升壯苗基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克/升， 水解乳蛋白150毫克/升，維生素B2 1毫克/升，6—芐基腺嘌呤1毫克/升，赤霉素 0.5毫克/升，pH = 5.8;所述壯苗基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
5、 剪取3.8—4.2厘米的叢生芽試管苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng) 15—25天，生根率68%，平均根數(shù)14條，平均根長(zhǎng)2厘米；
所述生根培養(yǎng)基所含組分及配比為每升生根基本培養(yǎng)基中含萘乙酸0.5毫克和蔗 糖15克；pH=5.8;所述生根基本培養(yǎng)基為2368.22毫^/升的MS生根基本培養(yǎng)基；
6、 將試管生根苗取出，洗去附著的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至荷格蘭特液體培養(yǎng)基中進(jìn)
行水培壯苗培養(yǎng)；培養(yǎng)條件為以泡沫板作為幼苗支持物，泡沫板大小應(yīng)與水培 槽口大小一致，盡量避免根部見光導(dǎo)致綠藻滋生；每5天更換一次培養(yǎng)液；培養(yǎng) 條件22—25°C，光照16小時(shí)/天，濕度80—85 %;
7、待水培苗長(zhǎng)至根長(zhǎng)5厘米以上時(shí)取出，移栽到苗圃基質(zhì)中進(jìn)行移栽定植； 所述苗圃基質(zhì)由重量份配比為l:l花土和蛭石組成；幼苗移栽前，將基質(zhì)用荷格蘭 特營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)基淋透；移栽后，用聚氯乙烯薄膜覆蓋，保持濕度90 — 95 %，注意 通風(fēng)；每5天噴水1次，14天噴施1次荷格蘭特營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)基；移栽苗在10天后 揭去覆膜；保持溫室內(nèi)濕度80 %，溫度20—30 。C;每天噴水3次，14天噴施1 次培養(yǎng)液，21天噴施1次尿素，進(jìn)行速生培養(yǎng)得到天藍(lán)遏藍(lán)菜成熟植株。
實(shí)施例3:天藍(lán)遏藍(lán)菜組培繁殖
1、 將剪取的天藍(lán)遏藍(lán)菜種子實(shí)生苗具芽莖段接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng) 室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，出現(xiàn)叢生芽；
所述啟動(dòng)培養(yǎng)基所含組分及配比為每升啟動(dòng)基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白250毫克、維生素B2 2毫克、6—芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸O.毫克， pH=5.8;所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
2、 將培育2.5厘米以上的試管叢生芽苗修剪成帶2 — 3個(gè)節(jié)的莖段，接種增殖 培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，出現(xiàn)大量密集叢生芽；
所述增殖培養(yǎng)基所含組分及配比為每升增殖基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白250毫克、維生素B2 2毫克、6—芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸0.2毫克， pH=5.8;所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
3、 將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的、3厘米以上的試管叢生芽苗修剪成帶2—3個(gè)節(jié)的莖段， 接種到壯苗培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中，16小時(shí)光照/天，培養(yǎng)21天，株高顯著增 加，葉片明顯增大；
所述壯苗培養(yǎng)基所含組分及配比為每升壯苗基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、 水解乳蛋白150毫克、維生素B2 2毫克、6—芐基腺嘌呤1毫克，萘乙酸0.5毫克， pH=5.8;所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；
4、 剪取4厘米左右的叢生芽試管苗，轉(zhuǎn)接到本發(fā)明的生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生 根培養(yǎng)15—25天，生根率95%，平均根數(shù)20條，平均根長(zhǎng)5.4厘米；
所述生根培養(yǎng)基所含組分及配比為:每升生根基本培養(yǎng)基中含吲哚丁酸1毫克和蔗
糖15克；pH =5.8;所述生根基本培養(yǎng)基為2368.22毫忠升的MS生根基本培養(yǎng)基；
5、 將試管生根苗取出，洗去附著的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至荷格蘭特液體培養(yǎng)基中進(jìn) 行水培苗培養(yǎng)；以泡沬板作為幼苗支持物，泡沬板大小應(yīng)與水培槽口大小一致， 盡量避免根部見光導(dǎo)致綠藻滋生；每5天更換一次培養(yǎng)液。培養(yǎng)條件22—25'C， 光照16小時(shí)/天，濕度80—85 %;
6、 待水培苗長(zhǎng)至根長(zhǎng)5厘米以上時(shí)取出，移栽到苗圃基質(zhì)中進(jìn)行移栽定植； 所述苗圃基質(zhì)由重量份配比為l:l花土和蛭石組成；幼苗移栽前，將基質(zhì)用荷格蘭 特營(yíng)養(yǎng)液淋透；移栽后，用聚氯乙烯薄膜覆蓋，保持濕度90 — 95%，注意通風(fēng)；每 5天噴水1次，14天噴施1次培養(yǎng)液；移栽苗在10天后揭去覆膜，保持溫室內(nèi)濕度 80%，溫度20—30。C;每天噴水3次，14天噴施1次培養(yǎng)液，21天噴施1次尿素， 進(jìn)行速生培養(yǎng)得到天藍(lán)遏藍(lán)菜成熟植株。
權(quán)利要求
1、一種重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法，其步驟如下1)啟動(dòng)培養(yǎng)將經(jīng)消毒處理過的天藍(lán)遏藍(lán)菜植株的莖尖/莖節(jié)剪成0.8-1.2厘米帶葉的莖尖/莖節(jié)，或者經(jīng)消毒處理過的天藍(lán)遏藍(lán)菜種子實(shí)生苗的具芽莖段接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)21-28天，生成叢生芽苗；所述啟動(dòng)培養(yǎng)基所含組分及配比為每升啟動(dòng)基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、水解乳蛋白250毫克、維生素B2 0.5-3毫克和二種植物生長(zhǎng)激素各0.2-2毫克，pH＝5.8；所述二種植物生長(zhǎng)激素為6-芐基嘌呤和萘乙酸；所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；2)增殖培養(yǎng)將經(jīng)啟動(dòng)培養(yǎng)的不少于2.5厘米的叢生芽苗修剪成帶2-3個(gè)節(jié)的莖段接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)21-28天；所述增殖培養(yǎng)基所含組分及配比為每升增殖基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、水解乳蛋白250毫克、維生素B2 0.5-3毫克和二種或三種植物生長(zhǎng)激素各0.2-2毫克，pH＝5.8；所述二種植物生長(zhǎng)激素為6-芐基嘌呤和萘乙酸；所述三種植物生長(zhǎng)激素為6-芐基嘌呤、赤霉素和萘乙酸；所述啟動(dòng)基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；3)壯苗培養(yǎng)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的不少于3厘米的試管叢生芽苗修剪成帶2-3個(gè)節(jié)的莖段，接種到壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)21-28天；所述壯苗培養(yǎng)基所含組分及配比為每升壯苗基本培養(yǎng)基中含肌醇100毫克、水解乳蛋白150毫克、維生素B2 0.5-3毫克和二種植物生長(zhǎng)激素各0.2-2毫克，pH＝5.8；所述二種植物生長(zhǎng)激素為6-芐基嘌呤和萘乙酸；所述壯苗基本培養(yǎng)基為4736.43毫克/升的MS培養(yǎng)基；4)生根培養(yǎng)剪取經(jīng)壯苗培養(yǎng)3.5-5厘米的叢生芽苗，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)15--25天，長(zhǎng)出生根苗；所述生根培養(yǎng)基所含組分及配比為每升生根基本培養(yǎng)基中含植物生長(zhǎng)激素0.2-4毫克和蔗糖15克；pH＝5.8；所述的植物生長(zhǎng)激素為吲哚丁酸或萘乙酸；所述生根基本培養(yǎng)基為2368.22毫克/升的MS生根基本培養(yǎng)基；5)水培壯苗將經(jīng)生根培養(yǎng)的生根苗取出，洗去附著的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至荷格蘭特液體培養(yǎng)基中進(jìn)行水培壯苗培養(yǎng)；其培養(yǎng)條件為以泡沫板作為幼苗支持物，泡沫板大小應(yīng)與水培槽口大小-致；盡量避免根部見光導(dǎo)致綠藻滋生；每5天更換一次荷格蘭特液體培養(yǎng)基；22-25℃，光照16小時(shí)/天，濕度80-85％；6)移栽定植待經(jīng)水培壯苗生長(zhǎng)至根長(zhǎng)不少于5厘米時(shí)取出，移栽到苗圃基質(zhì)中，進(jìn)行移栽定植；所述苗圃基質(zhì)由重量份配比為1∶1花土和蛭石組成；幼苗移栽前，將苗圃基質(zhì)用荷格蘭特液體培養(yǎng)基淋透；移栽后，用聚氯乙烯薄膜覆蓋，保持濕度90-95％，注意通風(fēng)；每5天噴水1次，14天噴施1次荷格蘭特液體培養(yǎng)基；移栽苗定植10天后揭去覆膜；再保持溫室內(nèi)濕度80％，溫度20-30℃，每天噴水3次，14天噴施1次荷格蘭特液體培養(yǎng)基，21天噴施1次尿素，進(jìn)行速生培養(yǎng)，完成天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織繁殖培養(yǎng)。
2、 按權(quán)利要求1所述的重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于，所述歩驟2)中所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基中所，述的二種植物生長(zhǎng)激素中 的6—芐基嘌呤為0.5—2毫克Z升，所述的萘乙酸為0.2—2毫克/升。
3、 按權(quán)利要求1所述的重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法， 其特征在于，所述的步驟3)中所述的增殖培養(yǎng)基中所述的二種植物生長(zhǎng)激素中的6 一芐基嘌呤1.0 — 2毫克/升，所述的萘乙酸為0.2—2毫克/升。
4、 按權(quán)利要求1所述的重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法， 其特征在于，所述的步驟4)中所述的壯苗培養(yǎng)基中涉及的二種植物生長(zhǎng)激素中的6 —芐基嘌呤為0.5—2毫克/升，所述的赤霉素為0.5—2毫克/升。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種重金屬超富集植物天藍(lán)遏藍(lán)菜的組織培養(yǎng)繁殖方法將經(jīng)消毒處理過的剪成0.8-1.2厘米帶葉天藍(lán)遏藍(lán)菜莖尖/莖節(jié)，或者或者經(jīng)消毒處理過的天藍(lán)遏藍(lán)菜種子實(shí)生苗具芽莖段依次接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)生成叢生芽苗；接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)生成密集叢生芽；置入壯苗基本培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)；轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得生根苗；轉(zhuǎn)移至荷格蘭特液體培養(yǎng)基中進(jìn)行水培壯苗培養(yǎng)，之后再將水培壯苗后的壯苗移栽到苗圃基質(zhì)中進(jìn)行移栽定植培養(yǎng)，得到藍(lán)遏藍(lán)菜的組織；本方法不僅可以排除外界條件的影響，四季可行，節(jié)約育苗占地，降低生產(chǎn)成本；而且可以在短期內(nèi)得到大量健壯幼苗，進(jìn)行規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101112173SQ200610089010
公開日2008年1月30日 申請(qǐng)日期2006年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月28日
發(fā)明者張玉秀, 進(jìn) 徐 申請(qǐng)人:中國(guó)礦業(yè)大學(xué)(北京)