專利名稱：淋巴細(xì)胞分離管及分離血液中淋巴細(xì)胞的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞分離裝置，特別是涉及一種淋巴細(xì)胞分離管。
背景技術(shù)：
分離血液中的淋巴細(xì)胞，通常采用密度梯度離心的方法。也就是在一只離心管中，先加入一定體積的(比如3毫升)淋巴細(xì)胞分離液，然后小心翼翼的在分離液的界面上鋪上血液。由于分離液的密度比紅細(xì)胞低，比淋巴細(xì)胞高，所以經(jīng)過離心之后，紅細(xì)胞沉到分離液底部，而淋巴細(xì)胞懸浮在分離液和血漿之間。這就達(dá)到了分離血液中淋巴細(xì)胞的目的。如圖1所示，圖1中從左到右依次為在離心管中加入分離液；小心翼翼的鋪上待分離的全血；經(jīng)過離心，紅細(xì)胞沉到管底，淋巴細(xì)胞懸浮于血漿和分離液界面之間。在淋巴細(xì)胞分離液的界面上鋪血液是一步很困難的操作，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，并且還要有相當(dāng)?shù)募记?，否則，會(huì)把血液與分離液的界面弄混，使得分離效果變差，甚至分離不出淋巴細(xì)胞來。
有鑒于此，國外的一些公司，開發(fā)出了一種淋巴細(xì)胞分離管。比如挪威的Axis Shield公司的Lympho-tube以及美國GreinerBio公司的Leuco-Septube。其做法是在普通的離心管中間粘上一層濾網(wǎng)，通過濾網(wǎng)，把離心管內(nèi)的空間分成兩部分。濾網(wǎng)下面的這部分離心管裝上淋巴細(xì)胞分離液，濾網(wǎng)上部分空間空出來，等待實(shí)驗(yàn)者加入血液。濾網(wǎng)的孔徑較小，可以把血液與分離液分隔開，因此可以直接倒入血液而不必?fù)?dān)心會(huì)弄混二者的界面。但是，濾網(wǎng)的孔徑又比血細(xì)胞要大，所以，在離心的時(shí)候，血細(xì)胞可以自由通過濾網(wǎng)，不影響細(xì)胞的分層。如圖2所示，圖2中從左到右依次為分離液分隔在濾網(wǎng)下面；加入全血，血液和分離液被濾網(wǎng)隔開；經(jīng)過離心，紅細(xì)胞透過濾網(wǎng)，沉到管底，淋巴細(xì)胞懸浮于血漿和分離液界面之間。
基于濾網(wǎng)的淋巴細(xì)胞分離管使得淋巴細(xì)胞分離的操作步驟大大簡化。但是它也存在以下幾點(diǎn)不足之處第一，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，目前只有國外幾家公司能夠生產(chǎn)加工。在離心管光滑的內(nèi)壁表面粘上一層薄薄的濾網(wǎng)是很困難的事情。濾網(wǎng)外周要與離心管壁緊閉的粘在一起，不能留下空隙，否則無法起到隔開血液與分離液的目的；粘連要有一定的機(jī)械強(qiáng)度，否則在運(yùn)輸或者離心的時(shí)候就會(huì)脫落；整個(gè)加工過程要在嚴(yán)格無菌的環(huán)境中完成，不能染菌，也不能殘留內(nèi)毒素。
第二，用于粘黏的膠水有毒性，對分離的血細(xì)胞有不利影響。不論是用水溶性膠水、脂溶性膠水還是聚合物膠水，都不可避免地會(huì)有未聚合的毒性小分子殘留。即使采用烘烤或者洗滌的方法也不能完全除去。并且，洗滌、烘烤也增加了生產(chǎn)工藝的復(fù)雜性。
第三，價(jià)格昂貴。由于生產(chǎn)工藝復(fù)雜，并且生產(chǎn)技術(shù)壟斷在國外公司手中，所以目前此類淋巴細(xì)胞分離管的價(jià)格十分昂貴。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了針對現(xiàn)有技術(shù)的問題，提供一種方便實(shí)用、生產(chǎn)工藝簡單、安全無毒且成本低廉的淋巴細(xì)胞分離管。
本發(fā)明的再一目的是提供一種采用上述淋巴細(xì)胞分離管分離血液中的淋巴細(xì)胞的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案本發(fā)明公開了一種淋巴細(xì)胞分離管，包括管體，所述管體底部設(shè)置有疏松多孔材料。
所述疏松多孔材料的平均孔徑為0.2～0.8毫米。
所述疏松多孔材料吸附有淋巴細(xì)胞分離液。
所述淋巴細(xì)胞分離管用于分離血液中的淋巴細(xì)胞。
本發(fā)明還公開了一種分離血液中的淋巴細(xì)胞的方法，所述方法包括步驟將全血加入淋巴細(xì)胞分離管中并離心，所述淋巴細(xì)胞分離管包括管體，所述管體底部設(shè)置有疏松多孔材料，該疏松多孔材料吸附有淋巴細(xì)胞分離液。
優(yōu)選的，上述方法中，離心力為600～1000g，優(yōu)選800g，離心時(shí)間為10～30分鐘，優(yōu)選20分鐘。
由于采用了以上的技術(shù)方案，使本發(fā)明具備的有益效果在于由于疏松多孔材料能夠?qū)⒘馨图?xì)胞分離液吸附使成為半固態(tài)，在進(jìn)行血液淋巴細(xì)胞分離時(shí)，可以將血液直接倒入，而不必?fù)?dān)心弄混血液與分離液二者的界面，與傳統(tǒng)方法相比具有方便實(shí)用的特點(diǎn)。
此外，本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管與基于濾網(wǎng)的分離管相比較還具有如下優(yōu)點(diǎn)第一，生產(chǎn)工藝簡單。只需要在潔凈環(huán)境中把一定量疏松多孔材料置于離心管底部，然后加入一定體積的淋巴分離液即可。疏松多孔材料與管體之間通過摩擦力即可相互固定，無須粘黏，完全可以在普通的潔凈車間中生產(chǎn)。
第二，完全無毒。由于采用了醫(yī)用級別的疏松多孔材料，材料自身無毒；由于不需要粘黏固定，完全排除了膠水毒性的問題。
第三，成本低廉。由于生產(chǎn)工藝簡單，無須投入高昂的設(shè)備費(fèi)用，所以生產(chǎn)成本大幅降低。


圖1是傳統(tǒng)淋巴細(xì)胞分離液分離血細(xì)胞的過程示意圖。
圖2是采用濾網(wǎng)淋巴細(xì)胞分離管分離血細(xì)胞的過程示意圖。
圖3是采用本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管分離血細(xì)胞的過程示意圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管，包括管體，并且在管體底部設(shè)置有疏松多孔材料。管體加管體底部的疏松多孔材料，可以作為本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管的最簡單的產(chǎn)品形式。使用者在應(yīng)用此種分離管進(jìn)行血液淋巴細(xì)胞分離操作時(shí)，只需先往疏松多孔材料中滴加適量淋巴細(xì)胞分離液，使分離液被疏松多孔材料吸附成為半固態(tài)，之后即可往分離管中倒入血液進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離。也可將淋巴細(xì)胞分離液預(yù)先加入管體的疏松多孔材料中，制成本發(fā)明的另一種可以直接進(jìn)行血液淋巴細(xì)胞分離的產(chǎn)品形式。
本發(fā)明所用的管體，可以根據(jù)需要采用常見的各種容量規(guī)格的離心管制備。所用的疏松多孔材料，可以選用安全無毒的醫(yī)學(xué)材料，如特種海綿等。在本發(fā)明中，疏松多孔材料的孔徑大小需要滿足以下條件既能使血液中的紅細(xì)胞順利通過，同時(shí)又能將淋巴細(xì)胞分離液吸附成為半固態(tài)。本發(fā)明的疏松多孔材料的平均孔徑優(yōu)選為0.2～0.8毫米。
本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管，所述的疏松多孔材料置于管體的底部。為了增強(qiáng)淋巴細(xì)胞層的分離效果，疏松多孔材料的上表面通常制作成一個(gè)基本上平的平面。疏松多孔材料可以完全將管體底部填滿，也可在底部管尖保留少量空隙?？障兜拇嬖诓挥绊懕景l(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管的使用效果。但是疏松多孔材料的體積一方面應(yīng)能保證與管壁之間存在足夠的摩擦力，使在產(chǎn)品運(yùn)輸或使用過程中，疏松多孔材料不會(huì)從管體內(nèi)滑出；另一方面，還需要保證能將分離液吸附住，從而即使在倒置時(shí)，分離液也不至于從疏松多孔材料中滴落或流出。
本發(fā)明中所用的淋巴細(xì)胞分離液，可以使用與傳統(tǒng)分離方法中完全一樣的配方，比如基于傳統(tǒng)葡聚糖-泛影葡胺(Ficol-Isopaque)的分離液。
本發(fā)明中，“半固態(tài)”或“半固體”是指淋巴細(xì)胞分離液經(jīng)疏松多孔材料吸附后，形成不流動(dòng)、不滴落的狀態(tài)，也不會(huì)與所加入的血液混合。
本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管，與濾網(wǎng)淋巴細(xì)胞分離管相比，采用了完全不同的原理實(shí)現(xiàn)血液與淋巴細(xì)胞分離液的分隔。應(yīng)用本發(fā)明的分離管進(jìn)行血液淋巴細(xì)胞分離時(shí)，可以直接將血液倒入分離管內(nèi)，并進(jìn)行離心。離心時(shí)的離心力通常為600～1000g，優(yōu)選800g，離心時(shí)間通常為10～30分鐘，優(yōu)選為20分鐘。在離心的時(shí)候，紅細(xì)胞可以輕易進(jìn)入疏松多孔的材料中，置換出淋巴細(xì)胞分離液。而淋巴細(xì)胞屆時(shí)就會(huì)懸浮于分離液的上方。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程與基于濾網(wǎng)的淋巴細(xì)胞分離管一樣輕松與便捷。具體操作過程如圖3所示，圖3中，左淋巴細(xì)胞分離液被疏松多孔材料吸附，呈半固態(tài)；中加入全血，血液和半固態(tài)分離液不會(huì)混合；右經(jīng)過離心，紅細(xì)胞鉆入疏松多孔材料內(nèi)部，同時(shí)置換出一部分游離的分離液，淋巴細(xì)胞懸浮于血漿和分離液界面之間。
利用本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)分離血液淋巴細(xì)胞的效果非常理想。本發(fā)明的半固體淋巴細(xì)胞分離管加入全血，經(jīng)過離心之后，血細(xì)胞分層清晰。密度大的紅細(xì)胞可以輕易鉆入底部疏松多孔的材料中，置換出一部分分離液。淋巴細(xì)胞層就懸浮在血漿和游離的分離液之間。聚層明顯，條帶清晰。
采用本發(fā)明的半固體淋巴細(xì)胞分離管的淋巴細(xì)胞獲得率與傳統(tǒng)的直接使用分離液分離以及國外的濾網(wǎng)淋巴細(xì)胞分離作了對比。具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表一。其中實(shí)驗(yàn)中所用的半固體淋巴細(xì)胞分離管中，疏松多孔材料的平均孔徑為0.5毫米，疏松多孔材料所吸附的淋巴細(xì)胞分離液與表一中直接使用分離液分離方法中所用的淋巴細(xì)胞分離液相同，離心時(shí)的離心力為800g，離心時(shí)間為20分鐘。
表一分離液、濾網(wǎng)分離管、半固體分離管分血的PBMC得率1

1每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)六次，取平均值。
2選用挪威Axis Shield公司Lympho-prep產(chǎn)品作為對照，該產(chǎn)品在國內(nèi)使用廣泛。
3選用挪威Axis Shield公司Lympho-tube產(chǎn)品作為對照，該產(chǎn)品在國內(nèi)已經(jīng)有少量使用。
4采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)三種細(xì)胞分離方法分離出的細(xì)胞數(shù)量，在兩兩之間是否有顯著差別。
實(shí)驗(yàn)表明，三種分離方案分得細(xì)胞的得率均沒有顯著性差別。
淋巴細(xì)胞分離時(shí)，不僅要求得率高，而且要求活力強(qiáng)。
我們采用臺盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法比較了同樣三種方案分得細(xì)胞的活力。實(shí)驗(yàn)重復(fù)六次，取平均值。細(xì)胞存活率見表二。
表二分離液、濾網(wǎng)分離管、半固體分離管分血的PBMC細(xì)胞存活率5

5實(shí)驗(yàn)重復(fù)六次，取平均值。
6采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)三種細(xì)胞分離方法分離出的細(xì)胞數(shù)量，在兩兩之間是否有顯著差別。
實(shí)驗(yàn)表明，三種分離方案分得細(xì)胞的活力都非常高，三者沒有顯著性差別。
權(quán)利要求
1.一種淋巴細(xì)胞分離管，包括管體，其特征在于所述管體底部設(shè)置有疏松多孔材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淋巴細(xì)胞分離管，其特征在于所述疏松多孔材料的平均孔徑為0.2～0.8毫米。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種淋巴細(xì)胞分離管，其特征在于所述疏松多孔材料吸附有淋巴細(xì)胞分離液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種淋巴細(xì)胞分離管，其特征在于所述淋巴細(xì)胞分離管用于分離血液中的淋巴細(xì)胞。
5.一種分離血液中淋巴細(xì)胞的方法，所述方法包括步驟將全血加入淋巴細(xì)胞分離管中并離心，所述淋巴細(xì)胞分離管包括管體，所述管體底部設(shè)置有疏松多孔材料，該疏松多孔材料吸附有淋巴細(xì)胞分離液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種分離血液中淋巴細(xì)胞的方法，其特征在于血液直接倒入分離管中。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種分離血液中淋巴細(xì)胞的方法，其特征在于離心時(shí)離心力為600～1000g，離心時(shí)間為10～30分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種淋巴細(xì)胞分離管，包括管體，所述管體底部設(shè)置有疏松多孔材料。本發(fā)明還公開了采用上述淋巴細(xì)胞分離管進(jìn)行血液淋巴細(xì)胞分離的方法。本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管方便實(shí)用、生產(chǎn)工藝簡單、安全無毒且制作成本低廉。
文檔編號C12N5/08GK1958776SQ20061006312
公開日2007年5月9日 申請日期2006年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月13日
發(fā)明者朱義鑫 申請人:深圳市達(dá)科為生物技術(shù)有限公司