專(zhuān)利名稱(chēng)：復(fù)合酶水解丹參強(qiáng)化提取丹參多酚酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用酶解技術(shù)強(qiáng)化提取丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)的方法，屬于通過(guò)生物酶獲取天然產(chǎn)物的技術(shù)。
背景技術(shù)：
丹參具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)之功效，是臨床上治療冠心病和心絞痛的特效藥物，全國(guó)每年總消耗量達(dá)億噸。已確定結(jié)構(gòu)的丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)有十余種，如丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、丹酚酸(salvianolic acid)A、B、C、D、E、F、G、H、I、J，丹參酸乙、丙，迷迭香酸(rosmarinic acid)，紫草酸(lithospermic acid)和異丹酚酸C(isosalvianolic acid)等，其中丹參素即D-(+)-β-3，4-二羥基苯乳酸是丹參的主要水溶性成分之一，也是丹參發(fā)揮抗心肌缺血、改善微循環(huán)等藥理作用的主要功效成分?！吨袊?guó)藥典》(2005年版)中收載的復(fù)方丹參滴丸即是以水提丹參素為主成分的一劑名方。
丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)的各種提取工藝中，較為傳統(tǒng)的水煎法、冷凝回流法、索氏提取法，均能耗過(guò)大，而超臨界二氧化碳循環(huán)逆流萃取、超聲波溫控提取、密閉微波輔助萃取、動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取、毛細(xì)管電泳處理等方法又普遍存在設(shè)備要求高、溶劑與能源消耗大、處理能力低等多方面問(wèn)題，而且無(wú)論采用何種方法，都不能將目標(biāo)物有效充分地提取出來(lái)，這對(duì)于上億噸的丹參原料而言，無(wú)疑是一種極大的浪費(fèi)，因此迫切需要設(shè)計(jì)一套能夠制得功效好、成本低、純度高的丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)，并能大幅度提高提取率的新工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)合酶水解丹參強(qiáng)化提取丹參多酚酸的方法。該方法過(guò)程簡(jiǎn)單，制得的丹參多酚酸純度高、功效好、成本低，可直接作為藥品使用。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)先將丹參粉碎為20～35目的顆粒，并按丹參質(zhì)量g與水相體積mL之比為1∶10～1∶20，將丹參浸于濃度為0.1～0.2mol/L、pH為4.6～5.6的醋酸-醋酸鈉緩沖液中；再將纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶的兩種或多種酶粉溶于水配成濃度為0.01～0.05g/ml復(fù)合酶溶液；然后按酶粉與丹參質(zhì)量比為1∶100～1∶300，將復(fù)合酶液加入浸有丹參的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，并充分?jǐn)嚢?，通過(guò)水浴加熱維持體系溫度為30～50℃，通過(guò)緩沖溶液維持體系pH值5～6，提取時(shí)間60～100min；所得提取液以1000～5000r/min離心分離10～30min或經(jīng)孔徑為1～10μm的微濾膜過(guò)濾除渣；所得濾渣再按固液比1∶5～1∶15進(jìn)行20～40min的二次抽提；合并兩次提取液，在溫度40～50℃區(qū)間，以轉(zhuǎn)速20～50r/min進(jìn)行旋蒸濃縮；濃縮液再經(jīng)噴霧干燥，其操作條件為進(jìn)口溫度150～200℃、出口溫度70～85℃、進(jìn)料速度1.0～1.5L/h、操作壓力0.1～1MPa，或經(jīng)冷凍干燥，其操作條件為真空度＜133bar、溫度＜-40℃，即得丹參水溶性多酚酸提取物，包括丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、丹酚酸、迷迭香酸、紫草酸和異丹酚酸多種縮酚酸類(lèi)功效物質(zhì)。
本發(fā)明集酶解與萃取工藝于一體，充分利用了酶解破壁，促進(jìn)溶出的原理，相比現(xiàn)有工藝——傳統(tǒng)水煎法等具有高效、溫和、節(jié)能、環(huán)保等多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)強(qiáng)化了提取工藝過(guò)程，使丹參水溶性多酚酸的提取率比傳統(tǒng)水提法高3.55％，降低了生產(chǎn)成本；常溫常壓操作，溫和易控；溫度從100℃降至50℃，大幅度降低了能耗，節(jié)約能源；且無(wú)有毒有害試劑污染環(huán)境，屬綠色工藝；此外，提取時(shí)間比傳統(tǒng)工藝縮短1小時(shí)，減輕了設(shè)備損害，同時(shí)避免了多糖類(lèi)物質(zhì)的糊化，也減小了丹參素等多酚酸類(lèi)物質(zhì)在提取過(guò)程中被氧化的可能。
具體實(shí)施例方式
下面舉例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例1將丹參適度粉碎，得到粒度為30目的丹參顆粒；稱(chēng)取100g，并按固液比1(g)∶15(ml)，配制1500ml、0.15mol/L、pH為5.0的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液作為丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)的提取劑，并將丹參顆粒浸于該提取劑；再按酶粉與丹參顆粒質(zhì)量比為1∶200，配制l0ml濃度為0.05g/ml的復(fù)合酶液作為破壁劑，其中纖維素酶∶半纖維素酶∶木聚糖酶∶果膠酶∶淀粉酶∶脂肪酶∶蛋白酶＝60∶25∶5∶5∶2∶2∶1(質(zhì)量比)；將酶液與浸有丹參顆粒的緩沖溶液倒入3L提取器中，水浴恒溫50℃，并持續(xù)攪拌，共進(jìn)行80min的酶解回流集成高效提?。凰锰崛∫航?jīng)孔徑為10μm的微濾膜或?yàn)V紙分離過(guò)濾，得到130ml濾液(提取液1)和25g藥渣；再按固液比1(g)∶9(ml)，向藥渣中加入225ml蒸餾水，繼續(xù)在50℃下回流提取40min，分離得到70ml濾液(提取液2)；將兩部分提取液合并，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中在45℃，轉(zhuǎn)速為30r/min的條件下濃縮至約20ml；再經(jīng)冷凍干燥處理，條件為真空度133bar、溫度-40℃；最終制得丹參水溶性多酚酸干粉9.53g，提取率達(dá)9.53％，比傳統(tǒng)水煎法多獲得3.55克目標(biāo)產(chǎn)物。
實(shí)施例2稱(chēng)取粉碎至20目的丹參顆粒600g，按固液比1(g)∶20(ml)，配制12L、0.1mol/L、pH為5.4的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液作為丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)的提取劑，并將丹參顆粒浸于該提取劑；再按酶與丹參顆粒質(zhì)量比為1∶300，配制100ml濃度為0.02g/ml的復(fù)合酶液作為破壁劑，其中纖維素酶∶半纖維素酶∶木聚糖酶∶果膠酶∶淀粉酶＝50∶30∶15∶3∶2(質(zhì)量比)；將酶液與浸有丹參顆粒的緩沖溶液倒入20L提取器中，夾套水浴恒溫40℃，并持續(xù)攪拌，共進(jìn)行100min的提取；所得提取液以2000r/min離心分離20min，得到1.2L上清液；直接進(jìn)行噴霧干燥，條件為進(jìn)口溫度180℃，出口溫度80℃、進(jìn)料速度1.0L/h、操作壓力0.5MPa；最終制得丹參水溶性多酚酸干粉51.42g，提取率達(dá)8.57％，比傳統(tǒng)水煎法多獲得約18克目標(biāo)產(chǎn)物。
實(shí)施例3所用復(fù)合酶液破壁劑配方為纖維素酶∶半纖維素酶∶果膠酶＝60∶35∶5(質(zhì)量比)，其余同實(shí)施例2。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合酶水解丹參強(qiáng)化提取丹參多酚酸的方法，其特征在于包括以下過(guò)程先將丹參粉碎為20～35目的顆粒，并按丹參質(zhì)量g與水相體積mL之比為1∶10～1∶20，將丹參浸于濃度為0.1～0.2mol/L、pH為4.6～5.6的醋酸-醋酸鈉緩沖液中；再將纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶的兩種或多種酶粉溶于水配成濃度為0.01～0.05g/ml復(fù)合酶溶液；然后按酶粉與丹參質(zhì)量比為1∶100～1∶300，將復(fù)合酶液加入浸有丹參的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，并充分?jǐn)嚢?，通過(guò)水浴加熱維持體系溫度為30～50℃，通過(guò)緩沖溶液維持體系pH值5～6，提取時(shí)間60～100min；所得提取液以1000～5000r/min離心分離10～30min或經(jīng)孔徑為1～10μm的微濾膜過(guò)濾除渣；所得濾渣再按固液比1∶5～1∶15進(jìn)行20～40min的二次抽提；合并兩次提取液，在溫度40～50℃區(qū)間，以轉(zhuǎn)速20～50r/min進(jìn)行旋蒸濃縮；濃縮液再經(jīng)噴霧干燥，其操作條件為進(jìn)口溫度150～200℃、出口溫度70～85℃、進(jìn)料速度1.0～1.5L/h、操作壓力0.1～1MPa，或經(jīng)冷凍干燥，其操作條件為真空度＜133bar、溫度＜-40℃，即得到含有水溶性的丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、丹酚酸、迷迭香酸、紫草酸和異丹酚酸的丹參多酚酸提取物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種酶法強(qiáng)化提取丹參多酚酸類(lèi)物質(zhì)的工藝。該工藝包括丹參的粉碎、浸泡、復(fù)合酶液的配制、料液混合、提取、過(guò)濾、濃縮、干燥過(guò)程。該工藝充分利用復(fù)合酶系有效破壁、促進(jìn)溶出的原理，制得了具有多種縮酚酸類(lèi)功效物質(zhì)的丹參水溶性提取物干粉。本發(fā)明集成酶解與萃取工藝，相比現(xiàn)有方法具有高效、溫和、節(jié)能、環(huán)保等多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)使丹參多酚酸的提取率明顯提高，較傳統(tǒng)水煎法約增加3.5％，達(dá)到9.5％；溫度從100℃降至50℃；提取時(shí)間縮短1小時(shí)，同時(shí)避免了多糖類(lèi)物質(zhì)的糊化和丹參素等多酚酸類(lèi)物質(zhì)的氧化；且工藝無(wú)毒無(wú)害，產(chǎn)品可直接作為功能性物質(zhì)或藥品使用。
文檔編號(hào)C12P1/00GK1884558SQ20061001396
公開(kāi)日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2006年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月30日
發(fā)明者齊崴, 何志敏 申請(qǐng)人:天津大學(xué)