專利名稱：利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦膠原肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)酶工程領(lǐng)域，涉及利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦魚鱗膠原肽的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
魚鱗是魚真皮層的變形物，魚鱗中的主要成分是膠原蛋白?，F(xiàn)代研究表明膠原蛋白酶解生產(chǎn)的膠原肽具有廣泛的生理活性，如保護胃粘膜及抗?jié)冏饔?、抗過敏、降血壓、降膽固醇、抗衰老、促進傷口愈合、增強骨強度和預(yù)防骨質(zhì)疏松、預(yù)防關(guān)節(jié)炎、促進角膜上皮損傷的修復(fù)和促進角膜上皮細胞的生長等多種生理活性功能。
但是肽類物質(zhì)特有的苦味在很大程度上限制膠原肽在食品、保健品等行業(yè)的應(yīng)用。蛋白質(zhì)水解物的苦味主要來自水解物中肽類物質(zhì)的末端的疏水性氨基酸，天然蛋白質(zhì)本身沒有苦味。大部分疏水性的氨基酸被包裹在蛋白質(zhì)分子內(nèi)部，無法與味覺細胞接觸；另一方面，完整的蛋白質(zhì)有較大的分子量和復(fù)雜的分子構(gòu)型，疏水性氨基酸基與味蕾上的味覺接受器在空間上存在距離，因而不會產(chǎn)生苦味。酶水解蛋白質(zhì)生成分子量較低的多肽后，疏水性的氨基酸、多肽與味覺細胞接觸而產(chǎn)生苦味。
目前國內(nèi)外利用魚鱗生產(chǎn)出的膠原肽具有一定的苦味，利用內(nèi)肽酶和端肽酶生產(chǎn)無苦膠原肽的尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦膠原肽，對魚鱗進行深加工的工藝。
本發(fā)明的目的可以通過如下措施來實施。
一種利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦膠原肽的方法1.將洗凈晾干的魚鱗通過粉碎機粉碎，過80～200目標(biāo)準(zhǔn)篩，得到魚鱗粉；2.將魚鱗粉按其重量的6～20倍加水?dāng)嚢杈鶆?，得到混懸液?.將上述混懸物送進反應(yīng)罐，升溫至35℃～70℃，用10％的堿液調(diào)節(jié)pH為6～10，按魚鱗粉重量的0.5％～5％加入內(nèi)肽酶進行第一次酶解，酶解時間為3～12小時，酶解完畢，將得到的酶解液升溫至90℃，保持10分鐘，使內(nèi)肽酶失活。
4.將酶解液降溫到35℃～70℃，在自然pH下，按魚鱗粉重量的0.1％～3％加入端肽酶進行第二次酶解，利用端肽酶對酶解液中多肽末端的疏水性氨基酸進行修飾脫苦，酶解時間為6～16小時。酶解完畢，將得到的酶解液升溫至90℃，保持10分鐘，使端肽酶失活。
5.將酶解液過濾得到上清夜和濾渣。
6.將上清液濃縮、干燥得到無苦魚鱗膠原肽。
本發(fā)明的附圖
是利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦膠原肽的工藝流程圖。
從附圖中可以清楚的了解到利用本發(fā)明工藝提取無苦魚鱗膠原肽的全過程。
所述內(nèi)肽酶為胰蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶中的一種或幾種。
所述端肽酶為羧肽酶和端肽酶中的一種或兩種。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點1.采用本發(fā)明所述工藝生產(chǎn)的魚鱗膠原肽由于利用了端肽酶對產(chǎn)生苦味的疏水性氨基酸進行修飾，生產(chǎn)出的膠原肽無任何苦味，提高了魚鱗膠原的口感和品質(zhì)，拓寬了魚鱗膠原在食品和保健品領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。
2.采用本發(fā)明所述工藝生產(chǎn)的魚鱗膠原肽中含有很多具有各種生理功能的活性肽，分子量小，不但利于人體吸收利用，還可以調(diào)節(jié)人體生理功能。
3.本發(fā)明的技術(shù)生產(chǎn)工藝簡單、獨特、生產(chǎn)周期短。
具體實施方式
以下用實例來進一步說明所提供的技術(shù)方案實施的全過程實施例一準(zhǔn)確稱取洗凈、晾干的魚鱗1千克，送進粉碎機中粉碎，并過100目標(biāo)準(zhǔn)篩，將過篩后的魚鱗粉加入8千克蒸餾水，攪拌均勻，至魚鱗粉呈混懸液狀態(tài)。將混懸液升溫至35℃～70℃，用堿液調(diào)節(jié)pH＝7.5，加入10克木瓜蛋白酶進行第一次酶解，酶解時間為5小時，酶解完畢，升溫到90℃保持10分鐘使酶失活，然后降溫至40℃～60℃，加入15克氨肽酶進行第二次酶解，酶解時間為8小時，酶解完畢，升溫到90℃保持10分鐘使酶失活，然后將酶解液過濾得到上清液和濾渣，上清液經(jīng)濃縮、干燥得到魚鱗小分子膠原蛋白。
實施例二準(zhǔn)確稱取洗凈、晾干的魚鱗3千克，送進粉碎機中粉碎，并過200目標(biāo)準(zhǔn)篩，將過篩后的魚鱗粉加入30千克蒸餾水，攪拌均勻，至魚鱗粉成混懸液狀態(tài)。將混懸液升溫至35℃～55℃，用堿液調(diào)節(jié)pH＝8.5，加入30克胰蛋白酶進行第一次酶解，酶解時間為8小時，酶解完畢，升溫到90℃保持10分鐘使酶失活，然后降溫至40℃～60℃，加入30克羧肽酶進行第二次酶解，酶解時間為10小時，酶解完畢，升溫到90℃保持10分鐘使酶失活，然后將酶解液過濾得到上清液和濾渣，上清液經(jīng)濃縮、干燥得到魚鱗小分子膠原蛋白。
實施例三準(zhǔn)確稱取洗凈、晾干的魚鱗8千克，送進粉碎機中粉碎，并過120目標(biāo)準(zhǔn)篩，將過篩后的魚鱗粉加入80千克蒸餾水，攪拌均勻，至魚鱗粉呈混懸液狀態(tài)。將混懸液升溫至35℃～70℃，用堿液調(diào)節(jié)pH＝8.0，同時加入80克堿性蛋白酶和80克復(fù)合蛋白酶進行第一次酶解，酶解時間為4小時，酶解完畢，升溫到90℃保持10分鐘使酶失活，然后降溫至40℃～60℃，同時加入50克羧肽酶和50克氨肽酶進行第二次酶解，酶解時間為5小時，酶解完畢，升溫到90℃保持10分鐘使酶失活，然后將酶解液過濾得到上清液和濾渣，上清液經(jīng)濃縮、干燥得到魚鱗小分子膠原蛋白。
權(quán)利要求
1.一種利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦味膠原肽的方法，其特征在于包括以下制作工藝(1)采用洗凈晾干的魚鱗作為提取膠原肽的原料，將魚鱗粉碎并過80～200目標(biāo)準(zhǔn)篩。(2)將過篩后的魚鱗粉按其重量的6～20倍配水?dāng)嚢杈鶆?，得到混懸液?3)控制溫度為35℃-70℃，pH在6～10，按魚鱗重量的0.5％～5％加入內(nèi)肽酶進行第一次酶解，酶解時間為3～12小時。升溫到90℃，保持10分鐘滅酶；(4)所述內(nèi)肽酶為胰蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶中的一種或幾種。(5)將滅酶后的第一次酶解液在35～70℃時，按魚鱗重量的0.1％～3％加入端肽酶，進行第二次酶解，酶解時間為6～16小時，酶解完畢升溫到90℃，保持10分鐘滅酶，經(jīng)過濾、濃縮、干燥得到無苦魚鱗膠原肽。
2.如權(quán)利要求1所述的一種利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦味膠原肽的方法，其特征在于所述無苦魚鱗膠原肽可以作為添加劑廣泛用于食品、保健品、化妝品，亦可用于醫(yī)藥。
全文摘要
利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦膠原肽的方法。包括采用魚鱗作為本發(fā)明的主要原料，并利用內(nèi)肽酶和端肽酶從魚鱗中提取無苦魚鱗膠原肽。所述魚鱗膠原肽須經(jīng)將魚鱗粉碎過80～200目標(biāo)準(zhǔn)篩，按魚鱗重量加入6～20倍的水?dāng)嚢杈鶆颉⒌玫降幕鞈乙嚎刂茰囟葹?5℃－70℃，pH在6～10，按魚鱗重量的0.5％～5％加入內(nèi)肽酶酶解3～12小時，并滅酶。將酶解液降溫至35～70℃時，按魚鱗重量的0.1％～3％加入端肽酶酶解6～16小時，并滅酶。然后經(jīng)過濃縮、干燥、粉碎得到無苦魚鱗膠原肽粉末。
文檔編號C12P21/02GK1814781SQ20051012654
公開日2006年8月9日 申請日期2005年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月28日
發(fā)明者程云開, 凌海軍 申請人:海南萊頓生物技術(shù)有限公司