專利名稱：α－葡萄糖苷酶活性抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由植物制備物構(gòu)成的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的利用。
背景技術(shù)：
被稱為生活習(xí)慣病的糖尿病患者有增加的傾向。我國“強(qiáng)烈疑似為糖尿病的人”估計有690萬人、如果包括“不排除糖尿病可能性的人”則升至約1370萬人(厚生勞動省平成9年糖尿病實(shí)況調(diào)查)，廣泛要求糖尿病改善的選擇方法。糖尿病以由于胰島素供給低下或作用不足而導(dǎo)致的慢性高血糖為特征，是伴有各種代謝異常的疾病群。根據(jù)代謝異常的程度，顯示了從無癥狀到酮酸中毒、昏迷的較寬范圍的病態(tài)。如果代謝異常長時間持續(xù)的話，則易引起視網(wǎng)膜、腎、神經(jīng)中特有的并發(fā)癥，并且也會促進(jìn)動脈硬化。糖尿病的治療通過利用食物療法、運(yùn)動療法、藥物療法來控制血糖值而進(jìn)行。
糖尿病的口服劑有磺酰脲(SU)劑、縮二胍(BG)劑、胰島素抵抗劑、α-葡萄糖苷酶抑制劑等。其中，α-葡萄糖苷酶抑制劑為競爭性地抑制存在于小腸粘膜微絨毛的麥芽糖酶、蔗糖酶等糖類水解酶、并延緩腸管內(nèi)糖類吸收的藥劑。稱為阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)的α-葡萄糖苷酶抑制劑已在臨床中使用。α-葡萄糖苷酶抑制劑具有抑制食后的顯著血糖上升、同時減小血糖日內(nèi)變化幅度的效果，并且被認(rèn)為還可適于胰島素依存型糖尿病患者(日醫(yī)大志1999第66卷第3號)。阿卡波糖是從放線菌Actinoplanes strain SE50的培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)的，伏格列波糖是從放線菌Streptomyces hygroscopicus subsp.limoneus的培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)的。
另一方面，目前報道有存在于植物中的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的物質(zhì)(日本特開2003-81858、日本特開2000-229875)。
專利文獻(xiàn)1日本特開2003-81858專利文獻(xiàn)2日本特開2000-229875專利文獻(xiàn)3日本特開平8-198769非專利文獻(xiàn)1日醫(yī)大志1999第66卷第3號p.195-198發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明鑒于此種狀況而完成，其目的在于提供來自于植物的新型α-葡萄糖苷酶抑制作用物質(zhì)和使用了α-葡萄糖苷酶抑制作用物質(zhì)的糖尿病治療或預(yù)防藥。
本發(fā)明人等為了解決上述課題、為了尋求來自于植物的具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的物質(zhì)，進(jìn)行了深入的研究。
本發(fā)明人等著眼于作為蓮科多年草的蓮。蓮的根作為食用而被利用，此外種子、葉子等也廣泛用于中藥的處方和健康食品等中。眾所周知，蓮葉具有肥胖改善效果(日本特開平8-198769)，但對于血糖值上升抑制效果卻不為人所知。
本發(fā)明人等制備蓮提取物，使其與α-葡萄糖苷酶和作為其底物的蔗糖反應(yīng)，測定生成的葡萄糖量。利用葡萄糖測定值計算蓮提取物的添加對酶反應(yīng)的影響時，發(fā)現(xiàn)蓮提取物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。本發(fā)明人等將蓮提取物和蔗糖投予給小鼠并測定血糖值時，發(fā)現(xiàn)蓮提取物導(dǎo)致血糖值被抑制。另外，本發(fā)明人等對投予了蓮提取物的人實(shí)施葡萄糖耐量試驗(yàn)，確認(rèn)了蓮提取物導(dǎo)致血糖值的上升被抑制。即，本發(fā)明人等在發(fā)現(xiàn)蓮提取物具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的同時，還發(fā)現(xiàn)該蓮提取物可用于血糖值的控制。
本發(fā)明具體提供以下內(nèi)容(1)由蓮科植物的制備物構(gòu)成的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑；(2)含有上述(1)所述的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的糖尿病治療用或預(yù)防用醫(yī)藥組合物；
(3)含有上述(1)所述的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的糖尿病治療用或預(yù)防用食品組合物。


圖1是表示蔗糖負(fù)荷小鼠的蓮葉提取物的血糖抑制作用的圖。平均值±S.D.(n＝4)圖2是表示蓮葉提取物投予組(人)與對照組(人)的葡萄糖耐量試驗(yàn)結(jié)果的圖。將相對于葡萄糖負(fù)荷前的血糖值的各經(jīng)過時間后的血糖值作為葡萄糖相對值(％)。平均值±S.D.S組(無效對照)n＝30，T組(蓮葉提取干燥物1g/日)n＝34，R組(蓮葉提取干燥物2g/日)n＝具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供由蓮科植物的制備物構(gòu)成的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑。如實(shí)施例所示，蓮制備物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。本發(fā)明只要是期待將二糖類分解為單糖類的α-葡萄糖苷酶(麥芽糖酶、蔗糖酶等)的作用抑制的用途，則可用于任何用途。特別是，將α-葡萄糖苷酶活性抑制劑投予給動物，可以期待抑制利用小腸內(nèi)麥芽糖酶等將二糖類分解為單糖類、并延遲腸管內(nèi)的糖類吸收，作為結(jié)果可帶來血糖值上升抑制效果。本發(fā)明的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑導(dǎo)致的血糖值上升抑制效果如實(shí)施例所示，在動物實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)。
在蓮科植物中有蓮(Nelumbo nucifera)、黃蓮花等。α-葡萄糖苷酶活性抑制作用不僅限于蓮，也存在于其他蓮科植物、近緣的睡蓮屬、芡屬、萍蓬草屬、莼菜屬的制備物中。因此，α-葡萄糖苷酶活性抑制作用物質(zhì)也可從這些植物中得到。本發(fā)明中的植物制備物是指對植物的整體或部分實(shí)施了一些加工的產(chǎn)物。例如，植物提取物、植物的榨汁、植物浸膏、干燥的植物、將植物粉碎得到的物質(zhì)都包含在本發(fā)明的植物制備物中。用于制備物制造中的植物部位，只要是從該部位得到的制備物具有α-葡萄糖苷酶活性抑制作用，則沒有限定。在為蓮的情況下，葉子是可優(yōu)選使用的部位的一例。植物制備物的制造方法沒有特別限定，只要是可將α-葡萄糖苷酶活性抑制作用引出的方法即可。也可以是利用溶劑進(jìn)行提取、將植物制成粉末狀的方法。提取中使用的溶劑除了水(也可含有酸類、堿類、鹽類、表面活性劑類)、甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇等醇類以外，還可選擇乙酸乙酯、丙酮、四氫呋喃、氯仿、二氯甲烷、丙腈等通常用于提取操作的有機(jī)溶劑，這些溶劑可單獨(dú)使用或作為多個溶劑的混合溶劑使用。另外，還可以是超臨界流體。水作為溶劑是優(yōu)選例之一。如果例示具體例的話，則可通過實(shí)施例的方法進(jìn)行制造。
對α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的確認(rèn)可如下評價在α-葡萄糖苷酶和作為其底物的二糖類中添加被測物質(zhì)并進(jìn)行酶反應(yīng)試驗(yàn)，求出酶反應(yīng)的抑制率，由此評價。抑制率的求出，基本地說，可以在被測物質(zhì)存在下和非存在下的條件下測定通過酶反應(yīng)從底物中產(chǎn)生的產(chǎn)物的量，將兩測定結(jié)果的差除以被測物質(zhì)非存在下的測定值。從底物中產(chǎn)生的酶反應(yīng)產(chǎn)物的量可以利用作為本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)常識的各種方法進(jìn)行測定。例如，如果是葡萄糖，則可以從吸光度測定、電極法、葡萄糖氧化酶法、HK/G-6-PD法、液相色譜法等方法中適當(dāng)選擇進(jìn)行測定。
本發(fā)明提供含有上述α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的糖尿病治療用或預(yù)防用藥品。上述α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的血糖值上升抑制效果如上所述，在人和小鼠中被證實(shí)，可知上述α-葡萄糖苷酶活性抑制劑可作為人、包含嚙齒類的哺乳類的糖尿病治療用或預(yù)防用藥品使用。本發(fā)明的糖尿病治療或預(yù)防，除了糖尿病患者的治療、有糖尿病發(fā)病可能的人的所謂的臨界組的發(fā)病預(yù)防以外，還包括不論是否是糖尿病患者，都以抑制食后血糖上升為目的而使用。
本發(fā)明的糖尿病治療或預(yù)防用醫(yī)藥組合物可作為通常的醫(yī)藥制劑進(jìn)行制備。例如，將上述α-葡萄糖苷酶活性抑制劑與制劑方面可容許的載體(賦形劑、結(jié)合劑、崩解劑、矯味劑、除臭劑、乳化劑、稀釋劑、溶解輔助劑等)混合而得到的醫(yī)藥組合物或者作為片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、錠劑、糖漿劑、液劑、乳劑、混懸劑、注射劑等制劑適于口服給藥或非口服給藥形態(tài)的處方。作為賦形劑，如可列舉出乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、血漿纖維素等。作為粘合劑，如可列舉出聚乙烯阿拉伯樹膠、黃芪膠、明膠、蟲膠、羥丙基纖維素、羥丙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮等。
藥劑對糖尿病是否有效可如實(shí)施例所示進(jìn)行確認(rèn)在給受試動物喂食的同時投予藥劑，在喂食后隨時間變化測定血糖值，通過看到該血糖值的上升抑制效果來確認(rèn)。另外，也可通過將藥劑投予給糖尿病發(fā)病了的動物，測定該受試動物的血糖值，由此進(jìn)行確認(rèn)。在被測物質(zhì)投予組和對照組之間比較藥劑投予前后的隨時間變化的血糖值，如果藥劑投予組的血糖值低于對照組，則該藥劑對糖尿病有效。
另外，本發(fā)明提供含有上述由蓮科植物的制備物構(gòu)成的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑的糖尿病治療用或預(yù)防用食品組合物。蓮科植物一直以來被作為食物攝取，安全性高，能夠加工成食品組合物。蓮科植物制備物具有穩(wěn)定糖的吸收、抑制血糖值上升的效果。對糖尿病患者的治療有用是理所當(dāng)然的，不僅是糖尿病患者，所謂的臨界區(qū)域的人或也被稱為擔(dān)心血糖的糖尿病后備軍的人們通過攝取本發(fā)明的食品，也能夠以藥品以外的方法有效地控制血糖值，并預(yù)防糖尿病，在此點(diǎn)上是特別有用的。
作為本發(fā)明的食品組合物，如可列舉出糖尿病用食品、特別用途食品、特定保健用食品、可標(biāo)榜血糖值上升抑制作用、食后血糖值上升抑制作用、血糖值降低作用的功能性食品、營養(yǎng)功能食品、健康食品、營養(yǎng)輔助食品、經(jīng)腸營養(yǎng)食品等，只要是以糖尿病的預(yù)防或治療為目的或者以血糖值上升抑制為目的而被使用的食品即可，并不限定于這些食品。一日的投予量或攝取量只要安全且在可有效攝取的范圍內(nèi)，則沒有特別限定。如果列舉出攝取量的例子，則在對象為人的情況下，攝取量可為0.01g/日～100g/日、優(yōu)選為0.1g/日～10g/日。
該組合物的制造方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是周知的慣用技術(shù)。即，將本發(fā)明的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑和食品衛(wèi)生上可允許的配合物相混合，可加工成糖尿病用食品、特別用途食品、特定保健用食品、可標(biāo)榜血糖值下降作用的功能性食品、營養(yǎng)功能食品、健康食品、營養(yǎng)輔助食品、經(jīng)腸營養(yǎng)食品等。也可在已有的食品中添加本發(fā)明的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑。例如，可制成適于穩(wěn)定劑、保存劑、著色劑、香料、維生素等配合物顆粒狀、粉末狀、膠囊狀、液狀、膏狀、飲料等組合物的形態(tài)。
本說明書中所引用的所有現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)作為參考編入本說明書中。
實(shí)施例以下，通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于這些實(shí)施例。
蓮科植物提取物的制備相對于1kg干燥的蓮葉加入10L水。將pH調(diào)整至6.0，在室溫下靜置30分鐘。其后在減壓、90℃下沸騰提取1小時。分離濾液(i)、殘渣，在殘渣中添加10倍量的水，在減壓、90℃下沸騰提取1小時。分離濾液(ii)和殘渣，合并濾液(i)和濾液(ii)。在減壓下通過加熱濃縮，濃縮至比重為1.1后，使用噴霧式干燥機(jī)得到約100g的干燥粉體。
α-葡萄糖苷酶溶液的制備使用液氮進(jìn)一步固化冷凍過的大鼠小腸組織切片，精細(xì)粉碎。在其中加入以重量比計為5倍量的50mM甘露醇/2mM Tris鹽酸緩沖液，在冰凍下勻漿2分鐘后，加入1M氯化鈣溶液，使最終濃度達(dá)到10mM，進(jìn)一步在4℃下攪拌20分鐘。將其在3000rpm下離心分離30分鐘，取上清，進(jìn)一步在4℃、15000rpm下將該上清離心30分鐘，回收沉淀物。使用10mM馬來酸氫氧化鈉緩沖液(pH為5.8)洗滌該沉淀物2次，最后將用10mL的10mM馬來酸氫氧化鈉緩沖液混懸得到的溶液作為α-葡萄糖苷酶溶液。
α-葡萄糖苷酶抑制反應(yīng)試驗(yàn)混合10μL的α-葡萄糖苷酶溶液、10μL被測樣品(各種濃度的蓮葉提取液)、20μL底物溶液(20mg/mL蔗糖、20mM磷酸緩沖液)、10μL的20mM磷酸緩沖液生理鹽水，在37℃下培養(yǎng)40分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，使用葡萄糖CII-Test Wako(和光純藥工業(yè)(株))測定生成的葡萄糖量。由于試樣溶液的顏色可能影響葡萄糖測定時的吸光度，因此采用空白(酶反應(yīng)后添加被測物的樣品)，用該值校正葡萄糖值，由下式求出抑制率。
抑制率(％)＝(酶反應(yīng)后添加被測物的葡萄糖濃度-添加被測物的葡萄糖濃度)/酶反應(yīng)后添加被測物的葡萄糖濃度×100結(jié)果如表1所示。蓮葉提取干燥物以最終濃度為4mg/mL將以蔗糖作為底物的α-葡萄糖苷酶活性抑制了約50％。由此結(jié)果可證明，本發(fā)明的有效成分抑制在糖消化吸收中必需的α-葡萄糖苷酶的活性，由此抑制糖攝取后的血糖上升。
表1

A酶反應(yīng)后添加被測物的葡萄糖濃度(mg/dL)B添加被測物的葡萄糖濃度(mg/dL)[實(shí)施例4]蔗糖負(fù)荷小鼠的蓮葉提取物的血糖抑制作用的研究購入5周齡雄性ICR小鼠，進(jìn)行1周的預(yù)備飼養(yǎng)。預(yù)備飼養(yǎng)后，根據(jù)體重將小鼠分為4組，每組6只。其中的2組，同時口服蔗糖和蓮葉提取物。投予的蓮葉提取物的濃度為1g/kg或2g/kg，蔗糖的濃度為2g/kg。另外，作為對照組，同樣地同時口服3mg/kg的阿卡波糖和蔗糖。剩余的1組僅投予蔗糖。對各組小鼠測定血糖值。血糖值測定在被測物質(zhì)正要口服前和投予后30、60、90、120、180和240分鐘進(jìn)行。測定結(jié)果如圖1所示。與僅投予蔗糖的組相比，可知蓮葉提取物投予組中血糖值上升被抑制。特別是，蔗糖投予后30分鐘的血糖上升抑制效果大。
蓮葉提取干燥物對高脂肪食物負(fù)荷肥胖小鼠的肥胖改善效果的研究5-(1)實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法對高脂肪食物負(fù)荷小鼠投予蓮葉提取干燥物作為被測物質(zhì)，研究其影響。6周齡的雌性ICR小鼠購自日本CLEA株式會社，在與試驗(yàn)同樣的飼養(yǎng)環(huán)境下進(jìn)行14天的檢疫和馴化飼養(yǎng)。將40只在投予開始日檢疫和馴化期間中的體重增加順利且一般狀態(tài)中也未見異常的動物用于試驗(yàn)，通過以體重分層隨機(jī)取樣法為基準(zhǔn)的方法進(jìn)行分組。試驗(yàn)組構(gòu)成分為4組，A組基本飼料攝取組、B組高脂肪食物攝取組、C組含有2％蓮葉提取干燥物的高脂肪食物攝取組、D組含有5％蓮葉提取干燥物的高脂肪食物攝取組，每組10只。同組的小鼠每5只放在1個籠子中，以每組2個籠子進(jìn)行飼養(yǎng)?；撅暳鲜褂梅勰╋暳螩E-2(日本CLEA株式會社)。對于其它飼料高脂肪食物、含有蓮葉提取干燥物的高脂肪食物，示于表2中。表中的數(shù)值表示制備1kg總量的混合飼料時的各混合量。
表2 高脂肪食物的制備和被測物質(zhì)的稱取量

所有組中，喂食方法為將飼料放在粉末喂食器中自由攝取。給水為將自來水放在給水瓶中，通過噴嘴自由攝取。在上述條件下將被測物質(zhì)投予給小鼠，連續(xù)進(jìn)行10周，對該小鼠進(jìn)行一般狀態(tài)觀察、體重測定、攝食量測定、解剖學(xué)檢查，得到以下結(jié)果。以下結(jié)果所示的數(shù)據(jù)中，體重、攝食量和器官重量以平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差(mean±S.D.)表示?；撅暳蠑z取組與高脂肪食物攝取組的顯著性差異檢驗(yàn)和高脂肪食物攝取組與被測物質(zhì)攝取組的顯著性差異檢驗(yàn)通過Student’s t-test或多重比較檢驗(yàn)(Dunnett’s test)進(jìn)行。
5-(2)一般狀態(tài)觀察一般狀態(tài)觀察為1日1次對每個籠子進(jìn)行。整個試驗(yàn)期間中，各個體的一般癥狀中未見任何異常。
5-(3)體重體重是使用電子上皿天平，每周1次在被測物質(zhì)正要投予前和投予后進(jìn)行測定。將各組的結(jié)果分別示于表3中。
表3 小鼠高脂肪食物耐量試驗(yàn)中的體重(g)

各值表示平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝10)。
*p＜0.05、**p＜0.01(基本飼料組vs高脂肪食物組Student’s t-test)#p＜0.05、##p＜0.01(高脂肪食物組vs高脂肪食物+蓮葉提取干燥物投予組Dunnett’s test)
為了研究高脂肪食物導(dǎo)致的影響，比較A組(基本飼料攝取組)和B組(高脂肪食物攝取組)，在試驗(yàn)開始后兩組的體重都順利增加，但B組體重比A組體重增加較多。從試驗(yàn)開始2周后至結(jié)束時，兩組的體重值有顯著性差異，試驗(yàn)結(jié)束時在兩組之間產(chǎn)生平均6.9g的差異(A組39.3±3.0g、B組46.2±5.6gp＜0.01)。
為了研究蓮葉提取干燥物導(dǎo)致的影響，比較B組和C組(含有2％蓮葉提取干燥物的高脂肪食物攝取組)、D組(含有5％蓮葉提取干燥物的高脂肪食物攝取組)，任何組在試驗(yàn)開始后體重增加都順利，但C組和D組的體重增加量有少于B組的傾向。特別是在D組中，在試驗(yàn)開始5、7、8和9周后的時間點(diǎn)與B組之間有顯著性差異，確認(rèn)了蓮葉提取干燥物的體重增加抑制作用。
5-(4)攝食量攝食量在被測物質(zhì)投予后1周測定2次、即每3天或4天進(jìn)行測定。使用電子上皿天平測定每個籠子包括喂食器的重量，從喂食量中減掉剩余食量進(jìn)行計算。
每個籠子求出的每只每日平均攝食量示于表4。各籠子n＝5、各組n＝10。
表4 各飼養(yǎng)籠中每只的平均攝食量


A組的每只每日平均攝食量為5.2～7.9g/日，B組的每只每日平均攝食量為3.0～6.8g/日，C組的每只每日平均攝食量為2.7～6.1g/日，D組的每只每日平均攝食量為3.1～5.6g/日。很明顯，A組的攝食量多于其它組。B～D組中有試驗(yàn)開始前半段(第二周左右)的攝食量多、后半段(第6周后)的攝食量少的傾向，但未見B～D各組的特異性變化。
5-(5)器官重量從試驗(yàn)開始至10周后的觀察期間終止時，解剖小鼠，測定器官重量(肝、腎、脂肪濕重量)。結(jié)果示于表5。各組n＝10。
表5小鼠的高脂肪食物耐量試驗(yàn)在試驗(yàn)結(jié)束時的器官重量

各值表示平均±標(biāo)準(zhǔn)偏差。
*p＜0.05、**p＜0.01(基本飼料組vs高脂肪食物組Student’s t-test或Aspin-Welch’s t-test)#p＜0.05、##p＜0.01(高脂肪食物組vs高脂肪食物+蓮葉提取干燥物投予組Dunnett’s test)為了研究高脂肪食物導(dǎo)致的影響，比較A組和B組，肝臟重量未見有顯著性差異，但腎臟重量在B組中顯著地輕、脂肪重量在B組中顯著地重。
為了研究蓮葉提取干燥物導(dǎo)致的影響，比較B組和C組、D組，肝臟和腎臟重量未見顯著性差異，但脂肪重量在C組和D組都顯示低值。特別是在D組與B組之間有顯著性差異，可見脂肪減少作用。
5-(6)總結(jié)如上所述，在2％蓮葉提取干燥物攝取組中可見體重增加抑制傾向，但不是顯著的作用，另一方面，在5％蓮葉提取干燥物攝取組中可見顯著的體重增加抑制。但是由于攝食量存在一些差異，因此有必要研究體重減少是由攝食量導(dǎo)致的效果、還是由蓮葉提取干燥物導(dǎo)致的效果。所以，當(dāng)從各組在試驗(yàn)結(jié)束時的體重增加量和試驗(yàn)中的總攝食量求出用于增加1g體重所需的飼料的量時，高脂肪食物攝取組為19.1g、2％蓮葉提取干燥物攝取組(高脂肪食物+2％蓮葉提取干燥物)為20.2g、5％蓮葉提取干燥攝取組(高脂肪食物+5％蓮葉提取干燥物)為22.7g，有依賴于用量而增加的傾向。因此，可得出以下結(jié)論在本實(shí)施例中所觀察的體重增加抑制是由蓮葉提取干燥物導(dǎo)致的效果。另外，解剖時的脂肪重量在2％蓮葉提取干燥物攝取組中有減少的傾向，在5％蓮葉提取干燥物攝取組中確認(rèn)有顯著的脂肪重量減少，這是可支持上述結(jié)論的結(jié)果。
蓮葉提取干燥物對人的糖代謝和脂質(zhì)代謝的作用6-(1)實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)施例的目的在于研究蓮葉提取干燥物對人的糖代謝和脂質(zhì)代謝的影響。在進(jìn)行上述目的研究時，人受試者必須滿足一定條件。作為本實(shí)施例的受試者所應(yīng)滿足的條件如下所示。
(1)是所謂的臨界型，即空腹時血糖值為110～126mg/dl或75g葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)的2小時血糖值為140～200mg/dl。由于空腹時血糖值在126mg/dl或以上或75g OGTT 2小時值為200mg/dl或以上即成為糖尿病型，因此從本實(shí)施例的受試者中去除。
(2)BMI(Body Mass Index)為22或以上。BMI也被稱為體格指數(shù)，是指體重(kg)除以身高(m)的平方而得到的數(shù)值。BMI＝體重(kg)÷身高(m)2。
(3)沒有糖尿病的藥物治療經(jīng)驗(yàn)。
(4)未患有嚴(yán)重的肝功能衰竭、腎功能衰竭、心血管功能衰竭、食物過敏疾病。
(5)年齡為男性40～58歲、女性40～55歲、且進(jìn)行與健康人同樣的日常生活。
(6)一日的茶飲料在2L或以下。
在滿足以上6條件的人中實(shí)施調(diào)查等來選擇受試者。在調(diào)查和問診表中，對A.一日卡路里攝取量、B.飲食的嗜好、C.以往病史、家族史、工作及生活環(huán)境、運(yùn)動習(xí)慣、吸煙和飲酒進(jìn)行詢問。
選拔了滿足上述受試者條件的95名受試者。將所選受試者分為蓮葉提取干燥物攝取組2組(T組、R組)、無效對照攝取組(S組)的3組，使他們在年齡、性別、空腹時血糖值上沒有差別。作為對照組，將攝取不含蓮葉提取物的基礎(chǔ)茶飲料(200ml/瓶)的組作為S組，作為被測物質(zhì)攝取組，將攝取含有0.5g/200ml蓮葉提取干燥粉末的茶飲料的組作為T組、將攝取含有1.0g/200ml蓮葉提取干燥粉末的茶飲料的組作為R組。各組的構(gòu)成和平均年齡示于表6。S組(無效對照)n＝30，T組(蓮葉提取干燥物1g/日)n＝34，R組(蓮葉提取干燥物2g/日)n＝31。
表6 人試驗(yàn)組構(gòu)成及平均年齡

試驗(yàn)通過以無效對照作為對照的雙盲檢驗(yàn)法進(jìn)行。受試者在攝取被測食品前的2周觀察期間后，將上述茶飲料分為上午和下午、每日2瓶(200ml×2/日)進(jìn)行攝取，歷時12周。對受試者實(shí)施身體測定和糖耐量試驗(yàn)，研究蓮葉提取干燥物的影響。
6-(2)身體測定對各受試者，在攝取前、攝取6周后、攝取12周后的各時間點(diǎn)實(shí)施身體測定。測定項(xiàng)目測定了身高、體重、腰圍、BMI、臀圍、體脂肪率、內(nèi)臟脂肪水平。體脂肪率和內(nèi)臟脂肪水平的測定使用OmronBody Composition Monitor HBF-352進(jìn)行實(shí)施。內(nèi)臟脂肪水平10相當(dāng)于內(nèi)臟脂肪面積100cm2。結(jié)果示于表7和表8。在表7和表8中，S組(無效對照)n＝30，T組(蓮葉提取干燥物1g/日)n＝34，R組(蓮葉提取干燥物2g/日)n＝31。
表7 人體試驗(yàn)(體格指數(shù)1)平均值±S.D.
p＜0.05#[S vs R]p＜0.05*(Dunnett’s test)
表8 人試驗(yàn)(體格指數(shù)2)平均值±S.D.
p＜0.05#[S vs R]p＜0.05*(Dunnett’s test)通過攝取6和12周的2g/日的蓮葉提取干燥物，體重、BMI、體脂肪率、內(nèi)臟脂肪水平、腰圍、臀圍與對照組相比顯著降低，可見蓮葉提取干燥物導(dǎo)致的降低作用。另外，通過攝取6周的1g/日的蓮葉提取干燥物，與對照組相比，體重、體脂肪率顯著降低。12周的攝取中，體重、BMI、體脂肪率、內(nèi)臟脂肪水平、腰圍與對照組相比，顯著降低。
6-(3)糖耐量試驗(yàn)對各受試者在攝取前、攝取12周后實(shí)施2次糖耐量試驗(yàn)(75g葡萄糖/人)。受試者避免在采血前夜21點(diǎn)以后進(jìn)食。試驗(yàn)當(dāng)天，最初在空腹?fàn)顟B(tài)下采血，作為葡萄糖負(fù)荷前的血液。接著負(fù)荷75g葡萄糖，隨時間變化采集負(fù)荷30、60、90分鐘后的血液。試驗(yàn)在上午11點(diǎn)前結(jié)束。使用日立自動分析裝置7075測定血漿中的血糖值。
結(jié)果如圖2所示。在圖2中，將相對于葡萄糖負(fù)荷前血糖值的各經(jīng)過時間后的血糖值作為葡萄糖相對值(％)表示。以各經(jīng)過時間的葡萄糖相對值為基礎(chǔ)求出0～120分鐘的AUC(Area Under Curve)。S組(無效對照)n＝30，T組(蓮葉提取干燥物1g/日)n＝34，R組(蓮葉提取干燥物2g/日)n＝31。通過攝取12周的蓮葉干燥提取物，可見葡萄糖負(fù)荷30分鐘后及60分鐘后的血糖上升抑制。
6-(4)總結(jié)如上所述，與動物試驗(yàn)相同，對人也可見蓮葉提取干燥物導(dǎo)致的體脂肪降低作用，對人來說，通過將2g/日的蓮葉干燥提取物作為1日攝取量攝取6周，體脂肪量降低，反映為體重的降低。另外，攝取12周的1g/日時也得到同樣效果。由這些效果和葡萄糖耐量試驗(yàn)的結(jié)果認(rèn)為，在降低體脂肪量的同時有減輕胰島素抵抗性的作用。
綜上所述，通過由蓮科植物制備物構(gòu)成的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑能夠抑制血糖上升。對于有患者增加傾向的糖尿病，可提供治療或預(yù)防藥的新的一個選擇。
權(quán)利要求
1.一種α-葡萄糖苷酶活性抑制劑，其由蓮科植物的制備物構(gòu)成。
2.一種糖尿病治療用或預(yù)防用醫(yī)藥組合物，其含有權(quán)利要求1所述的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑。
3.一種糖尿病治療用或預(yù)防用食品組合物，其含有權(quán)利要求1所述的α-葡萄糖苷酶活性抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明著眼于植物中的蓮，制備蓮提取物。在使其與α－葡萄糖苷酶和作為其底物的蔗糖反應(yīng)、并計算蓮提取物的添加對酶反應(yīng)的影響時，明確了蓮提取物具有α－葡萄糖苷酶抑制活性。進(jìn)而，將蓮提取物和蔗糖投予給小鼠測定血糖值時，明確了蓮提取物導(dǎo)致血糖值被抑制。即，在明確蓮提取物具有α－葡萄糖苷酶抑制作用的同時，發(fā)現(xiàn)該蓮提取物可用于血糖值的控制。
文檔編號C12N9/99GK1901927SQ200480039799
公開日2007年1月24日 申請日期2004年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月4日
發(fā)明者坪井洋, 池上秀二, 紀(jì)再思, 伊藤裕之, 小田宗宏, 進(jìn)和男 申請人:明治乳業(yè)株式會社