專利名稱：微生物數(shù)測(cè)定方法及微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物數(shù)測(cè)定方法及供該測(cè)定方法的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
為了實(shí)現(xiàn)例如食品的衛(wèi)生管理，要求測(cè)定食品中含有的微生物數(shù)。作為測(cè)定食品等檢體中所含有的微生物數(shù)的方法，已知有氧電極法(DOX溶解氧電極法)(例如專利文獻(xiàn)1、2)。通過氧電極法進(jìn)行的微生物數(shù)的測(cè)定，按照以下步驟實(shí)施。
首先，將食品材料等檢體添加到稀釋液中(例如生理鹽水等)，稀釋至規(guī)定的濃度，從而調(diào)制檢體液。此時(shí)，也可以進(jìn)行所謂的消化(stomaching)處理，即將檢體與稀釋液一起粉碎、混合。這樣，包含在檢體中的微生物被萃取到檢體液中。
將調(diào)制的檢體液添加到規(guī)定的液體培養(yǎng)基中，并注入到測(cè)定用單元內(nèi)。該測(cè)定用單元安裝在測(cè)定裝置上。
測(cè)定用單元在內(nèi)側(cè)具有氧電極。氧電極將液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)。測(cè)定裝置測(cè)定由氧電極輸出的電信號(hào)，并基于該電信號(hào)求出包含在液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度。該電信號(hào)通常采用氧電極輸出的電流。并且，溶解氧濃度越高，該電流值越大。
液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度因微生物的代謝例如呼吸而發(fā)生變化。因而，來自氧電極的輸出電流由于微生物的代謝而發(fā)生變化。
例如，圖10中表示了采用細(xì)菌作為微生物針對(duì)不同液體培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)于測(cè)定時(shí)間的流失而測(cè)定的來自氧電極的輸出電流的結(jié)果，所述液體培養(yǎng)基中添加有初期菌數(shù)105、104、103、102、101CFU/ml及“沒有初期細(xì)菌”的檢體液。測(cè)定開始時(shí)的電流值與初期細(xì)菌數(shù)沒有關(guān)系，均相等。隨著的時(shí)間的流失，由于液體培養(yǎng)基中細(xì)菌的代謝而消耗氧，電流值會(huì)降低。此時(shí)，電流值減少至接近零的規(guī)定閾值Ith或Ith以下所需的時(shí)間根據(jù)初期菌數(shù)而不同。即，初期菌數(shù)越多，所需時(shí)間越短。這是由于，液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌數(shù)多，相應(yīng)地氧的消耗量也多，從而溶解氧濃度會(huì)迅速地降低。
因此，對(duì)應(yīng)于測(cè)定時(shí)間的流失測(cè)定氧電極輸出的電流并求出輸出電流減少至規(guī)定閾值Ith或Ith以下所需的時(shí)間，從而基于例如標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以算出包含在液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌等微生物的個(gè)體數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線由例如圖10中所示的結(jié)果，即已知的初期菌數(shù)及與之對(duì)應(yīng)的規(guī)定時(shí)間可以求出。
如上所述，對(duì)于氧電極法，初期菌數(shù)越多則可以越快地得到測(cè)定結(jié)果，即輸出電流減少至規(guī)定閾值Ith或Ith以下所需的時(shí)間。具體來說，在初期菌數(shù)為105CFU/ml或其以上的情況測(cè)定的所需時(shí)間約為4小時(shí)或4小時(shí)以下。另一方面，例如對(duì)于以往的瓊脂培養(yǎng)法，需要在培養(yǎng)基中進(jìn)行12～48小時(shí)左右的細(xì)菌培養(yǎng)。因此，氧電極法是可以用非常短的時(shí)間進(jìn)行微生物數(shù)測(cè)定的方法。
另外，瓊脂培養(yǎng)法需要測(cè)定者以目視計(jì)數(shù)在培養(yǎng)基中生成的細(xì)菌的菌落數(shù)，但是氧電極法通過監(jiān)控電信號(hào)就可以測(cè)定。因此，采用氧電極法容易實(shí)現(xiàn)測(cè)定的自動(dòng)化、測(cè)定結(jié)果的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)化、測(cè)定系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)化。進(jìn)而，氧電極法具有的優(yōu)點(diǎn)還有通過測(cè)定自動(dòng)化，可以排除測(cè)定結(jié)果因每個(gè)測(cè)定者的個(gè)人差異，不需要測(cè)定者學(xué)會(huì)專門的技術(shù)。
另外，與本發(fā)明相關(guān)的技術(shù)表示如下。
專利文獻(xiàn)1特開2000-287699號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2特開2001-252066號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)青木智，《影響茶葉單離細(xì)胞的活性及穩(wěn)定性的多酚吸附劑的效果》，茶葉技術(shù)研究，1980年，第58號(hào)，p.42-44發(fā)明內(nèi)容測(cè)定微生物數(shù)時(shí)，檢體中含有烯丙基硫或蒜素(包含在蔥類中)這樣的硫化物、兒茶素(包含在綠茶等中)這樣的多酚等。另外，有時(shí)也含有乙酸、檸檬酸、抗壞血酸等。
硫化物會(huì)抑制作為微生物的細(xì)菌的增殖或者代謝。如果像這樣的抑制細(xì)菌的增殖或者代謝的成分包含在檢體中，則會(huì)影響細(xì)菌數(shù)的測(cè)定。這樣的影響對(duì)于以往的瓊脂培養(yǎng)法也是問題，但是特別是對(duì)于氧電極法等快速測(cè)定法的情況，其成為嚴(yán)重問題。其理由如下。
在瓊脂培養(yǎng)法中，檢體液和培養(yǎng)基以1∶20左右的比例混合。另一方面，在氧電極法等中，一般地檢體液和培養(yǎng)基以1∶1左右的比例混合。因此，包含在氧電極法中使用的檢體中的成分對(duì)測(cè)定的影響與瓊脂培養(yǎng)法相比約為10倍左右。
并且，對(duì)于通過瓊脂培養(yǎng)法的細(xì)菌數(shù)測(cè)定，細(xì)菌的培養(yǎng)至少需要24～48小時(shí)。因此，即使在檢體液中含有抑制細(xì)菌的增殖或者代謝的成分，在培養(yǎng)過程中該成分由于揮發(fā)等而失活，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響小。另一方面，對(duì)于通過氧電極法的細(xì)菌數(shù)測(cè)定，細(xì)菌的培養(yǎng)時(shí)間(測(cè)定時(shí)間)比較短，因而多數(shù)情況是在該成分失活前測(cè)定就結(jié)束。從而，該成分對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響大。
另外，對(duì)于通過氧電極法等快速測(cè)定法及瓊脂培養(yǎng)法的細(xì)菌數(shù)測(cè)定的任意一種情況，如果檢體中含有抑制細(xì)菌增殖或者代謝的成分，都會(huì)導(dǎo)致測(cè)定時(shí)間的長(zhǎng)期化。特別是，對(duì)于通過氧電極法的細(xì)菌數(shù)測(cè)定，由于具有包含在培養(yǎng)基中的細(xì)菌數(shù)越多則可以越快地得到測(cè)定結(jié)果的特點(diǎn)，檢體中含有抑制細(xì)菌增殖或者代謝的成分時(shí)，測(cè)定時(shí)間的長(zhǎng)期化顯著。
在通過氧電極法等快速測(cè)定法的細(xì)菌數(shù)測(cè)定中，硫化物會(huì)進(jìn)一步降低來自電極的輸出電流，從而影響測(cè)定。多酚也會(huì)降低該輸出電流。
具體來說，對(duì)于氧電極法的情況，輸出電流與測(cè)定開始時(shí)的培養(yǎng)基中的溶解氧量無關(guān)，自測(cè)定開始來自氧電極的輸出電流就立刻開始降低。有時(shí)甚至直接達(dá)到閾值Ith。因而，針對(duì)含有硫化物、多酚等成分的檢體通過氧電極法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)測(cè)定時(shí)，從測(cè)定開始時(shí)直到輸出電流達(dá)到閾值Ith所需時(shí)間有時(shí)與初期菌數(shù)無關(guān)，并且該時(shí)間大致是一定的。對(duì)于這樣的狀況，由該所需時(shí)間算出液體培養(yǎng)基中的初期菌數(shù)是困難的。
本發(fā)明是為了解決上述的課題而進(jìn)行的，其目的是，即使是檢體中含有影響測(cè)定的成分的情況也可以減小該影響。
本發(fā)明的第1方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是測(cè)定包含在檢體中的微生物的個(gè)體數(shù)的微生物數(shù)測(cè)定方法，包括步驟(a)，向培養(yǎng)基中添加所述檢體；步驟(b)，求出在所述步驟(a)中添加的所述檢體中所包含的所述微生物數(shù)；所述檢體含有具有抑制所述微生物增殖或者代謝作用的成分，在實(shí)行所述步驟(b)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有吸附所述成分的吸附劑。
根據(jù)本發(fā)明的第1方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于具有抑制包含在檢體中的微生物的增殖或者代謝作用的成分被吸附劑所吸附，因而該成分對(duì)步驟(b)的影響減小。具體來說，可以防止由于微生物的增殖或者代謝被抑制而使測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)期化，或者避免不能算出初期微生物數(shù)。
本發(fā)明的第2方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第1方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(b)中，測(cè)定所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流，從而求出所述微生物數(shù)。
根據(jù)本發(fā)明的第2方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于培養(yǎng)基中的含氧量隨著微生物的代謝而變動(dòng)，因而可以適用于第1方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法。
本發(fā)明的第3方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第1方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(a)中，所述檢體被含有所述吸附劑的稀釋液稀釋后再添加到所述培養(yǎng)基中。
根據(jù)本發(fā)明的第3方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于抑制包含在檢體中的微生物的增殖或者代謝的成分被稀釋液中含有的吸附劑所吸附，因而可以避免抑制微生物的增殖或者代謝。
本發(fā)明的第4方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第3方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(b)中，測(cè)定所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流，從而求出所述微生物數(shù)。
根據(jù)本發(fā)明的第4方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于培養(yǎng)基中的含氧量隨著微生物的代謝而變動(dòng)，因而可以適用于第3方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法。
本發(fā)明的第5方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第1方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在實(shí)行所述步驟(a)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有所述吸附劑。
根據(jù)本發(fā)明的第5方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于具有抑制包含在檢體中的微生物的增殖或者代謝作用的成分被培養(yǎng)基中含有的吸附劑所吸附，因而可以避免抑制微生物的增殖或者代謝。
本發(fā)明的第6方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第5方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(b)中，測(cè)定所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流，從而求出所述微生物數(shù)。
根據(jù)本發(fā)明的第6方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于培養(yǎng)基中的含氧量隨著微生物的代謝而變動(dòng)，因而可以適用于第5方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法。
本發(fā)明的第7方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第1～6方案的任意一項(xiàng)所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述微生物為細(xì)菌，所述作用為靜菌作用。
根據(jù)本發(fā)明的第7方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于對(duì)細(xì)菌具有靜菌作用的成分被吸附劑所吸附，因而可以避免抑制細(xì)菌的增殖或者代謝。
本發(fā)明的第8方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第7方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為硫化物。
根據(jù)本發(fā)明的第8方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于硫化物被吸附劑所吸附，因而可以避免由硫化物具有的靜菌作用而引起對(duì)細(xì)菌的增殖或者代謝的抑制。特別是，在步驟(b)中采用氧電極法時(shí)，可以防止來自氧電極的輸出電流因硫化物的影響而降低。從而即使對(duì)于由于含有硫化物而測(cè)定困難的檢體也可以容易地采用氧電極法進(jìn)行測(cè)定。
本發(fā)明的第9方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第8方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
根據(jù)本發(fā)明的第9方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于鈷酞菁四羧酸吸附硫化物，因而可以減少硫化物對(duì)步驟(b)的影響。
本發(fā)明的第10方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是測(cè)定包含在檢體中的微生物的個(gè)體數(shù)的微生物數(shù)測(cè)定方法，包括步驟(a)，向培養(yǎng)基中添加所述檢體；步驟(b)，測(cè)定伴隨著在所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)的所述微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量，求出在所述步驟(a)中添加的所述檢體中所包含的所述微生物數(shù)；所述檢體含有使所述步驟(b)中測(cè)定的所述可測(cè)定量的值降低的成分，在實(shí)行所述步驟(b)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有吸附所述成分的吸附劑。
根據(jù)本發(fā)明的第10方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于使可測(cè)定量的值降低的成分被吸附劑所吸附，因而可以減少該成分對(duì)步驟(b)的影響。具體來說，可以減少在步驟(b)中測(cè)定的可測(cè)定量的值降低。從而，避免不能算出初期微生物數(shù)。
本發(fā)明的第11方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第10方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(a)中，所述檢體被含有所述吸附劑的稀釋液稀釋后再添加到所述培養(yǎng)基中。
根據(jù)本發(fā)明的第11方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于包含在檢體中的使可測(cè)定量的值降低的成分被稀釋液中含有的吸附劑所吸附，因而可以抑制其對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第12方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第10方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在實(shí)行所述步驟(a)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有所述吸附劑。
根據(jù)本發(fā)明的第12方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于包含在檢體中的使可測(cè)定量的值降低的成分被培養(yǎng)基中含有的吸附劑所吸附，因而可以抑制對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第13方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第10～12方案的任意一項(xiàng)所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述可測(cè)定量是在所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流。
根據(jù)本發(fā)明的第13方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于培養(yǎng)基中的含氧量隨著微生物的代謝而變動(dòng)，因而可以適用于第10～12方案的任意一項(xiàng)所述的微生物數(shù)測(cè)定方法。
本發(fā)明的第14方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第13方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為多酚。
根據(jù)本發(fā)明的第14方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，多酚會(huì)使作為可測(cè)定量的電流值降低，但是由于其被吸附劑所吸附，因而可以抑制其對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第15方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第14方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述吸附劑為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉中的至少一種。
根據(jù)本發(fā)明的第15方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉吸附多酚，因而通過采用至少一種作為吸附劑可以減少步驟(b)中測(cè)定的可測(cè)定量的值降低。
本發(fā)明的第16方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第13方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為硫化物。
根據(jù)本發(fā)明的第16方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，硫化物會(huì)使作為可測(cè)定量的電流值降低，但是由于其被吸附劑所吸附，因而可以其抑制對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第17方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第16方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
根據(jù)本發(fā)明的第17方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于鈷酞菁四羧酸吸附硫化物，因而可以減少步驟(b)中測(cè)定的可測(cè)定量的值降低。
本發(fā)明的第18方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是測(cè)定包含在檢體(1)中的微生物的個(gè)體數(shù)的微生物數(shù)測(cè)定方法，包括步驟(a)，使培養(yǎng)基(2)的營(yíng)養(yǎng)成分及氧經(jīng)過半透膜(3)向所述檢體浸透；步驟(b)，在所述培養(yǎng)基側(cè)測(cè)定伴隨著所述微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量，求出在所述檢體中所包含的所述微生物數(shù)；所述檢體含有使所述步驟(b)中測(cè)定的所述可測(cè)定量的值降低的成分，所述半透膜可以防止所述成分從所述檢體向所述培養(yǎng)基透過。
根據(jù)本發(fā)明的第18方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于通過半透膜可以防止使可測(cè)定量的值降低的成分向培養(yǎng)基側(cè)透過，因而可以減少該成分對(duì)步驟(b)中測(cè)定的可測(cè)定量的影響。具體來說，可以減少步驟(b)中測(cè)定的可測(cè)定量的值降低，從而避免不能算出初期微生物數(shù)。
本發(fā)明的第19方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第18方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述可測(cè)定量是在所述培養(yǎng)基(2)中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流。
根據(jù)本發(fā)明的第19方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于培養(yǎng)基中的含氧量隨著微生物的代謝而變動(dòng)，因而可以適用于第18方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法。
本發(fā)明的第20方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第19方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為多酚。
根據(jù)本發(fā)明的第20方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，多酚會(huì)使作為可測(cè)定量的電流值降低，但是由于通過半透膜可以防止其向培養(yǎng)基側(cè)透過，因而可以抑制其對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第21方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，其是第19方案所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為硫化物。
根據(jù)本發(fā)明的第21方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，硫化物會(huì)使作為可測(cè)定量的電流值降低，但是由于通過半透膜可以防止其向培養(yǎng)基側(cè)透過，因而可以抑制其對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第22方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其含有吸附劑，所述吸附劑吸附具有抑制微生物增殖或者代謝作用的成分。
根據(jù)本發(fā)明的第22方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于具有抑制微生物的增殖或者代謝作用的成分被吸附劑所吸附，因而對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)的影響減小。具體來說，例如在測(cè)定微生物數(shù)的時(shí)候，可以防止其測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)期化，或者避免不能算出初期微生物數(shù)。
本發(fā)明的第23方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第22方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述微生物為細(xì)菌，所述作用為靜菌作用。
根據(jù)本發(fā)明的第23方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于對(duì)細(xì)菌具有靜菌作用的成分被吸附劑所吸附，因而可以避免抑制細(xì)菌的增殖或者代謝。
本發(fā)明的第24方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第23方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述成分為硫化物。
根據(jù)本發(fā)明的第24方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于硫化物被吸附劑所吸附，因而可以避免由硫化物具有的靜菌作用而引起對(duì)細(xì)菌的增殖或者代謝的抑制。特別是，在采用氧電極法測(cè)定微生物數(shù)時(shí)，可以防止氧電極的輸出電流因硫化物的影響而降低。從而即使對(duì)于由于含有硫化物而測(cè)定困難的檢體也可以容易地采用氧電極法進(jìn)行測(cè)定。
本發(fā)明的第25方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第24方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
根據(jù)本發(fā)明的第25方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于鈷酞菁四羧酸吸附硫化物，因而可以避免由硫化物具有的靜菌作用而引起對(duì)細(xì)菌的增殖或者代謝的抑制。
本發(fā)明的第26方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是在測(cè)定伴隨著微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量時(shí)用于培養(yǎng)所述微生物的培養(yǎng)基，其含有吸附劑，所述吸附劑吸附使所述可測(cè)定量的值降低的成分。
根據(jù)本發(fā)明的第26方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于使可測(cè)定量的值降低的成分被吸附劑所吸附，因而可以減少對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)的影響。具體來說，可以減少可測(cè)定量的值的降低。
本發(fā)明的第27方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第26方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述可測(cè)定量是在所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流。
根據(jù)本發(fā)明的第27方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于培養(yǎng)基中的含氧量隨著微生物的代謝而變動(dòng)，因而可以適用于第26方案涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法。
本發(fā)明的第28方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第27方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述成分為多酚。
根據(jù)本發(fā)明的第28方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，多酚會(huì)使作為可測(cè)定量的電流值降低，但是由于其被吸附劑所吸附，因而可以抑制其對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第29方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第28方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述吸附劑為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉中的至少一種。
根據(jù)本發(fā)明的第29方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉吸附多酚，因而通過采用至少一種作為吸附劑可以減少可測(cè)定量的值降低。
本發(fā)明的第30方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第27方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述成分為硫化物。
根據(jù)本發(fā)明的第30方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，硫化物會(huì)使作為可測(cè)定量的電流值降低，但是由于其被吸附劑所吸附，因而可以抑制其對(duì)可測(cè)定量的影響。
本發(fā)明的第31方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第30方案所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
根據(jù)本發(fā)明的第31方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于鈷酞菁四羧酸吸附硫化物，因而可以減少可測(cè)定量的值降低。
本發(fā)明的第32方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是第22～31方案的任意一項(xiàng)所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述培養(yǎng)基為液體。
根據(jù)本發(fā)明的第32方案涉及的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，由于培養(yǎng)基是液體，因而電流的測(cè)定容易。
通過以下的詳細(xì)說明和附圖，本發(fā)明的目的、特征、局面和優(yōu)點(diǎn)會(huì)更清楚。


圖1是表示第1實(shí)施方式中說明的微生物數(shù)測(cè)定方法的流程圖；圖2是表示第2實(shí)施方式中說明的微生物數(shù)測(cè)定方法的流程圖；圖3是抽象表示第3實(shí)施方式中說明的測(cè)定用單元的截面圖；圖4是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖；圖5是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖；圖6是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖；圖7是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖；圖8是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖；圖9是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖；圖10是表示用氧電極法測(cè)定的輸出電流的隨時(shí)間變化的圖。
具體實(shí)施例方式
作為實(shí)施本發(fā)明用的最佳方式，示出由氧電極法測(cè)定微生物數(shù)時(shí)應(yīng)用本發(fā)明的例子。
1、第1實(shí)施方式對(duì)于第1實(shí)施方式涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，根據(jù)圖1中所示的流程進(jìn)行說明。采用含有抑制微生物增殖或代謝的成分的食品材料等作為該微生物數(shù)測(cè)定的對(duì)象即檢體。具體來說，其為蔥類或者干酪等食品材料，這些材料中含有作為抑制微生物增殖或代謝的成分的硫化物。
硫化物等成分作用于附著在食品材料等上的細(xì)菌，會(huì)抑制該細(xì)菌的增殖或者代謝。這樣的所述成分對(duì)細(xì)菌的作用一般被理解為靜菌作用。以下說明采用作為吸附硫化物的吸附劑的鈷酞菁四羧酸來避免硫化物的靜菌作用所引起的弊病的方式。
首先，準(zhǔn)備含有鈷酞菁四羧酸的稀釋液(步驟101)。例如，可以通過以規(guī)定比例混合不含有吸附劑的普通稀釋液(例如生理鹽水)和鈷酞菁四羧酸的溶液(步驟100)，從而準(zhǔn)備含有吸附劑的稀釋液。
隨后，使用準(zhǔn)備好的稀釋液對(duì)檢體進(jìn)行消化處理，同時(shí)稀釋至規(guī)定的濃度，從而調(diào)制檢體液(步驟102)。通過該處理，檢體內(nèi)的細(xì)菌被萃取至檢體液中。與此相伴，包含在檢體中的硫化物也向稀釋液擴(kuò)散，但是其在稀釋液中被鈷酞菁四羧酸吸附。硫化物如果被吸附劑所吸附，則喪失其靜菌作用。
接著，和以往的氧電極法同樣地進(jìn)行細(xì)菌數(shù)的測(cè)定。具體如下進(jìn)行。首先，向生理鹽水等液體培養(yǎng)基中添加檢體液(步驟103)，再將其注入到在內(nèi)側(cè)具有氧電極的測(cè)定用單元中(步驟104)。隨后，將該測(cè)定用單元安裝在測(cè)定裝置上。然后，開始測(cè)定細(xì)菌數(shù)(步驟105)。
在測(cè)定時(shí)測(cè)定用單元的氧電極將液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度轉(zhuǎn)換成輸出電流。輸出電流可以理解為隨著液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)菌等微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量。隨后，測(cè)定裝置通過檢測(cè)出該輸出電流隨時(shí)間的變化而測(cè)定包含在液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌的初期菌數(shù)。
根據(jù)上述的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于包含在檢體中的硫化物被鈷酞菁四羧酸吸附，因而可以減少該硫化物對(duì)由氧電極法進(jìn)行的細(xì)菌數(shù)測(cè)定的影響。具體來說，可以防止因抑制細(xì)菌的增殖或者代謝而使測(cè)定時(shí)間變長(zhǎng)，或者避免不能算出初期菌數(shù)。
在本實(shí)施方式中由氧電極法測(cè)定微生物數(shù)時(shí)所使用的液體培養(yǎng)基中也可以含有用于吸附硫化物的吸附劑。此時(shí)，由于沒有被吸附劑吸附的硫化物的存在率進(jìn)一步降低，因而可以進(jìn)一步減少硫化物對(duì)通過氧電極法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)測(cè)定的影響。
另外，在本實(shí)施方式中，通過使用預(yù)先準(zhǔn)備的含有吸附劑的稀釋液(步驟100，101)進(jìn)行檢體液的調(diào)制，但是，也可以準(zhǔn)備例如不含吸附劑的普通稀釋液和吸附劑溶液，在調(diào)整檢體液(步驟102)時(shí)分別將其添加到檢體中。
再者，可以在檢體稀釋之前也可以在之后向稀釋液添加吸附劑。對(duì)于任意一種情況，其結(jié)果均是在微生物數(shù)測(cè)定(步驟105)時(shí)添加了檢體的液體培養(yǎng)基中含有吸附劑。
2、第2實(shí)施方式對(duì)于第2實(shí)施方式涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，根據(jù)圖2中所示的流程進(jìn)行說明。本實(shí)施方式中的所述微生物數(shù)測(cè)定的對(duì)象和第1實(shí)施方式是同樣的。因而，作為具有靜菌作用的成分采用硫化物，作為吸附該成分的吸附劑采用鈷酞菁四羧酸。
首先，使用稀釋液對(duì)檢體進(jìn)行消化處理，同時(shí)稀釋至規(guī)定的濃度，從而調(diào)制檢體液(步驟201)。通過該處理，檢體內(nèi)的細(xì)菌被萃取至檢體液中。與此相伴，包含在檢體中的硫化物也會(huì)向檢體液擴(kuò)散。
隨后，準(zhǔn)備含有鈷酞菁四羧酸的液體培養(yǎng)基。例如，可以通過以規(guī)定比例混合不含有吸附劑的液體培養(yǎng)基(例如生理鹽水)和鈷酞菁四羧酸的溶液(步驟200)，從而準(zhǔn)備含有吸附劑的液體培養(yǎng)基。
然后，向在步驟200中準(zhǔn)備的液體培養(yǎng)基中添加調(diào)制好的檢體液(步驟202)。此時(shí)，硫化物會(huì)向液體培養(yǎng)基中擴(kuò)散，但是這些硫化物會(huì)被鈷酞菁四羧酸吸附，喪失其靜菌作用。
接著，將添加了檢體液的液體培養(yǎng)基注入到在內(nèi)側(cè)具有氧電極的測(cè)定用單元中(步驟203)，并將該測(cè)定用單元安裝在測(cè)定裝置上。以后的操作和第1實(shí)施方式的步驟105同樣地進(jìn)行測(cè)定(步驟204)。由此測(cè)定包含在液體培養(yǎng)基中的細(xì)菌的初期菌數(shù)。
根據(jù)本實(shí)施方式涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，可以得到與第1實(shí)施方式中所示的微生物數(shù)測(cè)定方法所得到的效果同樣的效果。
在本實(shí)施方式中進(jìn)行消化處理時(shí)所使用的稀釋液中也可以含有用于吸附硫化物的吸附劑。此時(shí)，由于沒有被吸附劑吸附的硫化物的存在率進(jìn)一步降低，因而可以進(jìn)一步減少硫化物對(duì)通過氧電極法進(jìn)行的細(xì)菌數(shù)測(cè)定的影響。
另外，在本實(shí)施方式中，向事先準(zhǔn)備的含有吸附劑的液體培養(yǎng)基(步驟200)中添加了檢體液(步驟202)，但是，例如也可以分別準(zhǔn)備不含有吸附劑的普通液體培養(yǎng)基和吸附劑溶液，再依次向液體培養(yǎng)基中添加檢體液及吸附劑溶液。向液體培養(yǎng)基中添加吸附劑可以是在添加檢體之前也可以在之后添加吸附劑。對(duì)于任意一種情況，其結(jié)果均是在微生物數(shù)測(cè)定(步驟204)時(shí)添加了檢體的液體培養(yǎng)基中含有吸附劑。
在上述的任意一個(gè)實(shí)施方式中，微生物數(shù)測(cè)定時(shí)采用氧電極法的情況下，可以防止氧電極的輸出電流即可測(cè)定量因硫化物的影響而降低。也就是說，可以減少對(duì)微生物數(shù)測(cè)定的影響。從而，即使對(duì)于因含有硫化物而難以測(cè)定的檢體，也可以采用氧電極法容易地進(jìn)行測(cè)定。
可測(cè)定量降低這樣的現(xiàn)象被認(rèn)為是硫化物降低氧電極法的測(cè)定電流而引起的，盡管是氧飽和狀態(tài)也會(huì)產(chǎn)生這種現(xiàn)象。
這樣的現(xiàn)象也可以在通過氧電極法針對(duì)含多酚的檢體進(jìn)行微生物數(shù)測(cè)定時(shí)看到。對(duì)于多酚包括例如兒茶素。
該情況下，也可以通過用吸附劑吸附多酚來防止氧電極的輸出電流即可測(cè)定量因多酚的影響而降低。對(duì)于吸附多酚的吸附劑可以采用例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉的至少一種。關(guān)于這些吸附劑吸附多酚的情況，在例如上述非專利文獻(xiàn)1中已作介紹。
在以上的實(shí)施方式中，說明了將本發(fā)明應(yīng)用于通過氧電極法進(jìn)行的微生物數(shù)測(cè)定的例子。但是，本發(fā)明的應(yīng)用并不限于此，可以廣泛應(yīng)用于使用培養(yǎng)基(含有稀釋液)的所有微生物數(shù)測(cè)定方法例如快速測(cè)定法、瓊脂培養(yǎng)法。
3、第3實(shí)施方式對(duì)第3實(shí)施方式涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法進(jìn)行說明。對(duì)于作為該微生物數(shù)測(cè)定的對(duì)象的檢體，采用食品材料等，這些材料含有使隨著微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量降低的成分。具體來說為綠茶等，在這些綠茶等材料中含有兒茶素等多酚作為使可測(cè)定量降低的成分。并且，在本實(shí)施方式中由于氧電極法被應(yīng)用于微生物數(shù)的測(cè)定，因而可以采用對(duì)應(yīng)于液體培養(yǎng)基中溶解氧濃度而變化的輸出電流作為可測(cè)定量。
圖3抽象地表示本實(shí)施方式涉及的用于微生物數(shù)測(cè)定的氧電極法測(cè)定裝置上的測(cè)定用單元103。測(cè)定用單元103在內(nèi)側(cè)具有氧電極101，102和半透膜3。
氧電極101，102，一個(gè)是作用極，另一個(gè)是對(duì)極，并位于后述的管狀半透膜3的外側(cè)。并且在測(cè)定時(shí)氧電極將液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度變換為電流而輸出。
與氧電極101，102連接的測(cè)定裝置，通過檢測(cè)出輸出電流隨時(shí)間的變化而測(cè)定包含在液體培養(yǎng)基中的微生物的初期微生物數(shù)。
半透膜3是例如一端可以開閉的管，檢體液1從其一端注入管的內(nèi)側(cè)。檢體液1例如和第1實(shí)施方式同樣，通過使用稀釋液對(duì)檢體進(jìn)行消化處理而得到。檢體內(nèi)的微生物被萃取到檢體液1中，并且多酚也向檢體液1中擴(kuò)散。
將液體培養(yǎng)基2注入到測(cè)定用單元103內(nèi)，并保證分別浸過管狀半透膜3中用檢體液1填充的部分的至少一部分和氧電極101，102。液體培養(yǎng)基2中含有營(yíng)養(yǎng)成分及氧。
半透膜3可使液體培養(yǎng)基2中的營(yíng)養(yǎng)成分及氧透過，但可阻止檢體液1中的多酚透過。作為所述半透膜3可以采用透析用管，例如フナコシ株式會(huì)社制造的光譜/微孔毛細(xì)管電泳(CE)透析用管。透析用管通過采用100作為其截流分子量(MWCOMolecular Weight Cut Off)，從而可以阻止分子量大于100的分子透過。例如，作為多酚的例子的兒茶素，由于其分子量為290，因而不能透過該透析用管。另一方面，由于氧分子的分子量為32，因而可以透過該透析用管。
用具有這樣的測(cè)定用單元103的測(cè)定裝置測(cè)定微生物數(shù)時(shí)，可以如下理解。也就是說，通過使液體培養(yǎng)基2中的營(yíng)養(yǎng)成分及氧經(jīng)過半透膜3向檢體液1滲透，并在培養(yǎng)基側(cè)測(cè)定作為可測(cè)定量的輸出電流，可以求出微生物的初期微生物數(shù)。
根據(jù)本實(shí)施方式涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法，由于氧電極101，102幾乎不和多酚接觸，因而可以減少多酚對(duì)輸出電流的影響。具體來說，減少了輸出電流的降低，從而可以避免不能算出初期微生物數(shù)的情況。
圖4分別針對(duì)存在半透膜3的情況和沒有半透膜3的情況表示出在通過氧電極法進(jìn)行的微生物數(shù)測(cè)定中測(cè)定的輸出電流的結(jié)果。在此，采用截流分子量為100的上述透析用管作為半透膜3，采用兒茶素作為多酚。虛線所示的曲線表示沒有半透膜的以往的微生物數(shù)測(cè)定方法的測(cè)定結(jié)果。實(shí)線所示的曲線表示應(yīng)用了半透膜的本發(fā)明的微生物數(shù)測(cè)定方法的測(cè)定結(jié)果。
根據(jù)該測(cè)定結(jié)果，雖然截至到測(cè)定開始后200分鐘沒有看到因有無半透膜而引起的顯著差異，但是在200分鐘以后對(duì)于應(yīng)用了半透膜的情況輸出電流的降低減少了。從而，容易算出初期微生物數(shù)。
本實(shí)施方式涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法也可以適用于檢體液1中含有硫化物的情況。如第2實(shí)施方式中所陳述的，硫化物會(huì)使作為可測(cè)定量的輸出電流降低。由于作為硫化物的烯丙基硫的分子量為114，因而通過采用例如上述截流分子量為100的透析用管作為半透膜3，可以阻止烯丙基硫向液體培養(yǎng)基側(cè)透過。
這樣，由于氧電極101，102幾乎不和硫化物接觸，因而可以減少硫化物對(duì)輸出電流的影響。具體來說，減少了輸出電流的降低，從而可以避免不能算出初期微生物數(shù)的情況。
實(shí)施例作為第1及第2實(shí)施方式的實(shí)施例，其表示本發(fā)明涉及的微生物數(shù)測(cè)定的具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在本實(shí)驗(yàn)中選擇成分中含有硫化物的代表性食品材料的洋蔥、干蔥、白蔥、萬能蔥、干酪作為檢體，對(duì)應(yīng)于各檢體通過氧電極法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)的測(cè)定。并且，使用鈷酞菁四羧酸作為吸附硫化物的吸附劑。對(duì)于吸附劑的添加量，當(dāng)檢體為洋蔥、干蔥、白蔥、萬能蔥時(shí)相對(duì)于每1個(gè)測(cè)定用單元(檢體液1ml)，吸附劑的添加量為500μg，檢體為干酪時(shí)相對(duì)于每1個(gè)測(cè)定用單元(檢體液1ml)添加量為1mg。
圖5～圖9表示伴隨著各自的測(cè)定時(shí)間的流失，氧電極的輸出電流的變化。圖5、圖6、圖7、圖8、圖9分別表示洋蔥、干蔥、白蔥、萬能蔥、干酪的測(cè)定結(jié)果。并且各圖(a)表示添加了檢體的培養(yǎng)基不含有吸附劑的以往的細(xì)菌數(shù)測(cè)定方法的測(cè)定結(jié)果。各圖(b)表示添加了檢體的培養(yǎng)基中含有吸附硫化物的吸附劑的本發(fā)明涉及的微生物數(shù)測(cè)定方法的測(cè)定結(jié)果。
各圖中分別表示出對(duì)初期菌數(shù)為105CFU/g的檢體液測(cè)定2次的結(jié)果和對(duì)初期菌數(shù)為103CFU/g的檢體液測(cè)定2次的結(jié)果。并且，初期菌數(shù)為105CFU/g的檢體液所對(duì)應(yīng)的測(cè)定結(jié)果用實(shí)線的曲線表示，而初期菌數(shù)為103CFU/g的檢體液所對(duì)應(yīng)的測(cè)定結(jié)果用虛線的曲線表示。另外，閾值Ith設(shè)定為300nA，用于測(cè)定直到氧電極的輸出電流充分減少為止所需的時(shí)間。
以下基于測(cè)定結(jié)果，針對(duì)抑制作為吸附劑的效果的靜菌作用和防止可測(cè)定量值降低，進(jìn)行說明。
<抑制靜菌作用>
根據(jù)圖5～圖7各自所示的測(cè)定結(jié)果，與不含有吸附劑的情況(圖5(a)～圖7(a))相比，培養(yǎng)基含有吸附劑的情況(圖5(b)～圖7(b))下電流達(dá)到閾值Ith所需的時(shí)間短。換言之，通過吸附劑而防止了測(cè)定時(shí)間的長(zhǎng)期化。這被認(rèn)為是，由于培養(yǎng)基含有吸附劑的情況下抑制了硫化物的靜菌作用，因而與培養(yǎng)基不含有吸附劑的情況相比可以避免細(xì)菌的增殖或者代謝被抑制，并且氧的消耗量多。
(防止可測(cè)定量值降低>
根據(jù)圖5(a)和圖7(a)所示的測(cè)定結(jié)果，從測(cè)定開始直至輸出電流的時(shí)間變化率大致恒定這段期間，輸出電流雖沒有達(dá)到閾值Ith，但已經(jīng)顯著降低到閾值Ith附近了。
另外，根據(jù)圖8(a)和圖9(a)所示的測(cè)定結(jié)果，在輸出電流的時(shí)間變化率大致恒定之前，輸出電流顯著降低并到達(dá)閾值Ith。此時(shí)，由初期菌數(shù)為105CFU/g、103CFU/g的各曲線得到的所需時(shí)間大致相等，由對(duì)應(yīng)的所需時(shí)間算出細(xì)菌數(shù)是非常困難的。
因此，如圖5(b)、圖7(b)、圖8(b)和圖9(b)所示，通過使用添加了吸附劑的培養(yǎng)基，可以減少輸出電流的降低。據(jù)認(rèn)為，這是由于在氧飽和狀態(tài)，抑制了硫化物降低輸出電流的現(xiàn)象。特別是在圖8(b)和圖9(b)中，通過減少輸出電流的降低，由初期菌數(shù)為105CFU/g、103CFU/g的各曲線得到的所需時(shí)間存在差異。從而可以容易地由對(duì)應(yīng)的所需時(shí)間算出細(xì)菌數(shù)。
以上詳細(xì)地說明了本發(fā)明，但是上述的說明僅是所有方式中的例示，本發(fā)明并不限于此?？梢岳斫鉃椋诓怀霰景l(fā)明的范圍可以想象出沒有例示的無數(shù)變形例。
權(quán)利要求
1.微生物數(shù)測(cè)定方法，其是測(cè)定包含在檢體中的微生物的個(gè)體數(shù)的微生物數(shù)測(cè)定方法，包括步驟(a)，向培養(yǎng)基中添加所述檢體；步驟(b)，求出在所述步驟(a)中添加的所述檢體中所包含的所述微生物數(shù)；所述檢體含有具有抑制所述微生物增殖或者代謝作用的成分，在實(shí)行所述步驟(b)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有吸附所述成分的吸附劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(b)中，測(cè)定所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流，從而求出所述微生物數(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(a)中，所述檢體被含有所述吸附劑的稀釋液稀釋后再添加到所述培養(yǎng)基中。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(b)中，測(cè)定所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量流通的電流，從而求出所述微生物數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在實(shí)行所述步驟(a)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有所述吸附劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(b)中，測(cè)定所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量流通的電流，從而求出所述微生物數(shù)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6的任意一項(xiàng)所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述微生物為細(xì)菌，所述作用為靜菌作用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為硫化物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
10.微生物數(shù)測(cè)定方法，其是測(cè)定包含在檢體中的微生物的個(gè)體數(shù)的微生物數(shù)測(cè)定方法，包括步驟(a)，向培養(yǎng)基中添加所述檢體；步驟(b)，測(cè)定伴隨著在所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)的所述微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量，求出在所述步驟(a)中添加的所述檢體中所包含的所述微生物數(shù)；所述檢體含有使所述步驟(b)中測(cè)定的所述可測(cè)定量的值降低的成分，在實(shí)行所述步驟(b)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有吸附所述成分的吸附劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在所述步驟(a)中，所述檢體被含有所述吸附劑的稀釋液稀釋后而添加到所述培養(yǎng)基中。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，在實(shí)行所述步驟(a)時(shí)的所述培養(yǎng)基中含有所述吸附劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求10～12的任意一項(xiàng)所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述可測(cè)定量是在所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為多酚。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述吸附劑為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉中的至少一種。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為硫化物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
18.微生物數(shù)測(cè)定方法，其是測(cè)定包含在檢體(1)中的微生物的個(gè)體數(shù)的微生物數(shù)測(cè)定方法，包括步驟(a)，使培養(yǎng)基(2)的營(yíng)養(yǎng)成分及氧經(jīng)過半透膜(3)向所述檢體浸透；步驟(b)，在所述培養(yǎng)基側(cè)測(cè)定伴隨著所述微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量，求出在所述檢體中所包含的所述微生物數(shù)；所述檢體含有使所述步驟(b)中測(cè)定的所述可測(cè)定量的值降低的成分，所述半透膜可以防止所述成分從所述檢體向所述培養(yǎng)基透過。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述可測(cè)定量是在所述培養(yǎng)基(2)中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為多酚。
21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的微生物數(shù)測(cè)定方法，其中，所述成分為硫化物。
22.微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其含有吸附劑，所述吸附劑吸附具有抑制微生物增殖或者代謝作用的成分。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述微生物為細(xì)菌，所述作用為靜菌作用。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述成分為硫化物。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
26.微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其是在測(cè)定伴隨著微生物的代謝而變動(dòng)的可測(cè)定量時(shí)用于培養(yǎng)所述微生物的培養(yǎng)基，其含有吸附劑，所述吸附劑吸附使所述可測(cè)定量的值降低的成分。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述可測(cè)定量是在所述培養(yǎng)基中對(duì)應(yīng)其中的含氧量而流通的電流。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述成分為多酚。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述吸附劑為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、離子交換樹脂、牛血清白蛋白(BSA)及異抗壞血酸鈉中的至少一種。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述成分為硫化物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其中，所述吸附劑為鈷酞菁四羧酸。
32.根據(jù)權(quán)利要求22～31的任意一項(xiàng)所述的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基，其特征在于，其為液體。
全文摘要
本發(fā)明涉及微生物數(shù)測(cè)定方法及供給于該測(cè)定方法的微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基。其目的是，即使檢體中含有影響測(cè)定的成分也可以減小該影響。為了實(shí)現(xiàn)上述目的采用如下的步驟。準(zhǔn)備含有鈷酞菁四羧酸的稀釋液(步驟101)。使用稀釋液對(duì)檢體進(jìn)行消化處理，同時(shí)稀釋至規(guī)定的濃度，從而調(diào)制檢體液(步驟102)。借此，雖然包含在檢體中的硫化物向稀釋液擴(kuò)散，但會(huì)被鈷酞菁四羧酸吸附，喪失其靜菌作用。接著，通過氧電極法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)的測(cè)定首先，向生理鹽水等液體培養(yǎng)基中添加檢體液(步驟103)，再將其注入到在內(nèi)側(cè)具有氧電極的測(cè)定用單元中(步驟104)。將該測(cè)定用單元安裝在測(cè)定裝置上后，開始測(cè)定細(xì)菌數(shù)(步驟105)。
文檔編號(hào)C12Q1/06GK1798849SQ20048000179
公開日2006年7月5日 申請(qǐng)日期2004年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月1日
發(fā)明者福井直樹, 赤松惠 申請(qǐng)人:大金工業(yè)株式會(huì)社