專利名稱：殺蟲劑天山菌素及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物保護(hù)及農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種殺蟲劑天山菌素及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
殺蟲抗生素是重要的生物農(nóng)藥之一，它是一種天然生物殺蟲劑，具有對(duì)人畜毒性低、降解迅速等特點(diǎn)，無(wú)“三致”作用，符合無(wú)公害防治蔬菜等作物害蟲的要求，因而成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究開發(fā)的熱點(diǎn)之一。一般的殺蟲化學(xué)藥劑容易使害蟲對(duì)藥劑產(chǎn)生抗藥性，而且也很難避免對(duì)環(huán)境的污染，同時(shí)缺乏針對(duì)抗性小菜蛾和水蛛的防治效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，提供一種殺蟲劑天山菌素及其應(yīng)用。該殺蟲劑天山菌素由一個(gè)新的鏈霉菌屬菌種產(chǎn)生，它適用于防治昆蟲等，特別是鱗翅目(Lepidoptera)和雙翅目(Diptera)的害蟲，而且它不污染環(huán)境，具有吸引人的殺蟲效果。
本發(fā)明首先提供一個(gè)新的鏈霉菌屬菌種的菌株，所述菌株被命名為Streptomyces sp.GAAS7310，它是從土壤樣品中分離所得，所述菌株于2003年7月7日在位于武漢的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NOM 203058。
本發(fā)明所述的一種殺蟲劑天山菌素是新化合物，其特征是，它具有如下分子式
本發(fā)明所述的一種殺蟲劑天山菌素的應(yīng)用，其特征是，它適用于防治螨、蜱和其它昆蟲，包括甜菜夜蛾、煙夜蛾、棉鈴蟲、菜粉蝶、玉米螟、小菜蛾、卷葉蛾、地老虎、亞熱帶粘蟲、谷蛾科、印度谷斑螟、紅鈴麥蛾；也對(duì)鞘翅目和象鼻蟲有效果，包括馬鈴薯甲蟲、黃瓜十一星葉甲、黃瓜三條葉甲、日本狐麗金龜、棉象蟲；還對(duì)雙翅目害蟲有效，包括對(duì)家蠅、蚊科、果蠅、角蠅以及潛蠅科有效；對(duì)虱目、等翅目和膜翅目蟻和螨有效，包括柑橘紅蜘蛛、葉螨；同時(shí)對(duì)動(dòng)物寄生蟲有很好防治效果，包括水蚤、中華錨頭虱。
為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，所述殺蟲劑天山菌素在應(yīng)用時(shí)配制成乳油制劑，其重量百分配比為殺蟲劑天山菌素1～30％、乳化劑5～20％、溶劑50～94％；其最佳配比為殺蟲劑天山菌素5～10％、乳化劑8～15％、溶劑75～87％，配制過(guò)程為把殺蟲劑天山菌素和增效劑與所選用的表面活性劑置于反應(yīng)釜中，在溫度35℃、轉(zhuǎn)速為320轉(zhuǎn)/分鐘的條件下反應(yīng)35分鐘，然后再加入有機(jī)溶劑，繼續(xù)攪拌35分鐘，攪拌均勻后即可。其中，乳化劑包括農(nóng)乳2201、農(nóng)乳0203B、YZ960；溶劑包括異丙醇、丙酮、二甲基甲酰胺。
本發(fā)明所述的殺蟲劑天山菌素，可以通過(guò)下述方法制得第一步將GAAS7310接種入營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，在28℃和250rpm的振蕩下生長(zhǎng)48小時(shí)；取成熟的第一階段營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)物接種營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，取得二次營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)物，在28℃和300rpm條件下培養(yǎng)48小時(shí)，將成熟的菌種發(fā)酵培養(yǎng)，在28℃和300rpm下保持培養(yǎng)4天。
第二步 發(fā)酵完畢，用板框壓濾的方法分離獲取菌絲，將菌絲用1∶2的丙酮溶液浸取10小時(shí)，將浸取液濃縮去丙酮，再用乙酸乙酯萃取有效物，將乙酸乙酯萃取液減壓濃縮獲取油狀物，提取濃縮液拌硅膠過(guò)柱，用乙酸乙酯、石油醚多次硅膠柱層析和濃縮，獲得油狀物質(zhì)純品。
本發(fā)明所述菌株GAAS7310的培養(yǎng)物特征如表1所示。
本發(fā)明所述菌株GAAS7310的形態(tài)特征為其生產(chǎn)菌株為鏈霉菌金色類群。
本發(fā)明所述菌株GAAS7310的生理特征為明膠不液化，牛奶胨化，水解淀粉，纖維素上微弱生長(zhǎng)，不產(chǎn)生H2S，細(xì)胞壁化學(xué)成分為I型，全細(xì)胞糖屬于C型?？衫蒙嚼嫣?、甘露糖、菊糖，不利用麥芽糖、果糖、乳糖、半乳糖、鼠李糖、肌醇。
表1 GAAS7310的培養(yǎng)物特征

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果1.本發(fā)明的抗生素為新結(jié)構(gòu)化合物，其制劑制備工藝簡(jiǎn)單、易操作、易制備。
2.本發(fā)明的殺蟲劑天山菌素對(duì)小菜蛾等害蟲防治效果好，比常規(guī)藥劑用量少，可以克服小菜蛾等害蟲對(duì)常規(guī)農(nóng)藥的抗藥性。
3.本發(fā)明的殺蟲劑天山菌素使用安全，不污染環(huán)境，是一種無(wú)公害的生物農(nóng)藥。


圖1是本發(fā)明所述菌株GAAS7310產(chǎn)孢絲和孢子的形狀示意圖。
本發(fā)明菌株Streptomyces sp.GAAS7310于2003年7月7日在位于武漢的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NOM 203058。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例一通過(guò)在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株GAAS7310而制備殺蟲劑天山菌素。將1ml的冷凍的GAAS7310營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基融化，接種入500ml三角瓶?jī)?nèi)的100ml營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，在28℃和250rpm的振蕩下生長(zhǎng)48小時(shí)。
取3500ml成熟的第一階段營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)物用于接種50L攪拌式發(fā)酵罐的35L的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的二次營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)物，在28℃和300rpm條件下培養(yǎng)48小時(shí)，將成熟的菌種接種到500L的攪拌式發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)在28℃300rpm下保持培養(yǎng)4天?？捎煤线m的溶劑提取成熟的發(fā)酵物，并通過(guò)色譜分離而獲得代謝物——?dú)⑾x劑天山菌素。
表2營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基成分成分名稱 含量(％)葡萄糖2淀粉 1大米粉1酵母膏1豆餅粉1.5NaCl 0.5(NH4)2SO40.5CaCO30.5pH7.2實(shí)施例二本發(fā)明通過(guò)測(cè)試發(fā)酵液的提取物而在發(fā)酵期間跟蹤殺蟲劑天山菌素的制備，例如通過(guò)生物測(cè)定法分析發(fā)酵液提取物。
發(fā)酵完畢，來(lái)自500L的發(fā)酵物，用板框壓濾的方法分離獲取菌絲，將菌絲用1∶2的丙酮溶液浸取10小時(shí)，將浸取液濃縮去丙酮，再用乙酸乙酯萃取有效物，將乙酸乙酯萃取液減壓濃縮獲取油狀物，提取濃縮液拌硅膠過(guò)柱，用乙酸乙酯、石油醚多次硅膠柱層析和濃縮，獲得油狀物質(zhì)純品。
該化合物為油狀液體，從1H和13CNMR可知分子為具有長(zhǎng)鏈的化合物。MSm/z327[M-1]+，結(jié)合13CNMR及DEPT可推出該化合物的分子式為C19H36O4，不飽和度U＝2。
IR(KBr)在1734cm-1處的峰和13C NMR譜在δ173.6(C)處的信號(hào)，說(shuō)明分子中存在一個(gè)羰基。13C NMR譜中δ130.5(CH)，128.1(C)和1H NMR譜中δ5.3(t，5.5Hz，1H)說(shuō)明分子中存在一個(gè)三取代雙鍵，13CNMR譜中δ70.7(CH)，66.1(CH2)和63.9(CH2)和1HNMR譜中δ4.10(d，5Hz，1H)，4.05(dd，6，11Hz，1H)，3.74(dd，6，6Hz，1H)，3.56(dd，5，10Hz，1H)，3.53(dd，6，11Hz，1H)揭示了分子中存在-OCH、-2×OCH2基團(tuán)；1H NMR譜中δ1.30ppm處的甲基呈單峰，說(shuō)明它與季碳相連，而13CNMR中顯示的季碳除羰基外，只有一個(gè)三取代雙鍵[δ128.1(C)]，說(shuō)明這個(gè)甲基與雙鍵碳相連。另有兩個(gè)甲基裂分為兩重峰且偶合常數(shù)相同[δ0.86(d，6.5Hz，6H)]，說(shuō)明分子中存在末端異丙基。
實(shí)施例三、四、五發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的試驗(yàn)、研究，有很多成功的實(shí)施例，下面舉三例列于下表所示表3

實(shí)施例六本發(fā)明所述殺蟲劑天山菌素適用于防治昆蟲、螨和蜱，包括在昆蟲、螨和蜱的場(chǎng)所使用昆蟲、螨和蜱抑制量。昆蟲、螨和蜱的場(chǎng)所表示這樣的環(huán)境其中，昆蟲、螨和蜱的幼蟲、成蟲和卵，包括空氣、食物和所接觸的物體。例如，食植物的昆蟲或螨可通過(guò)將所述活性化合物適用到昆蟲和螨食或寄生的植物部分(特別是葉子)來(lái)控制。通過(guò)本發(fā)明所述殺蟲劑天山菌素來(lái)防治昆蟲的效果與使用次數(shù)和使用方法有關(guān)，同時(shí)與被防治的昆蟲的種有關(guān)。
將小白菜盆栽，長(zhǎng)至5片葉時(shí)，每盆接入低齡抗性小菜蛾幼蟲50～60頭，待試蟲活動(dòng)穩(wěn)定后噴本發(fā)明制劑，處理兩天后開始調(diào)查死亡蟲數(shù)量、死亡狀態(tài)。每個(gè)處理設(shè)4次重復(fù)，計(jì)算死亡率，使用結(jié)果如下表所示。
表4殺蟲劑天山菌素對(duì)抗性小菜蛾的防治效果

實(shí)施例七用池塘里自然繁殖生長(zhǎng)的水蛛作為參照物，來(lái)檢測(cè)本發(fā)明制劑的殺蟲效果。取含有水蛛的池塘水，分別加入不同濃度的本發(fā)明制劑及晶體敵百蟲，同時(shí)設(shè)不加藥物的對(duì)照組，連續(xù)觀察3天，統(tǒng)計(jì)計(jì)算本發(fā)明制劑對(duì)水蛛的殺滅效果。使用結(jié)果如下表所示。
表5殺蟲劑天山菌素對(duì)水蛛的殺滅效果

從試驗(yàn)結(jié)果看出，本發(fā)明制劑效果很好，不但對(duì)抗性小菜蛾防治效果很好，而且對(duì)水蛛的效果也很好，對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染。同時(shí)，可以克服害蟲對(duì)藥劑的抗藥性。作為害蟲的防治劑，將有利于農(nóng)業(yè)的穩(wěn)產(chǎn)和高產(chǎn)，從而產(chǎn)生較大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
如上所述，即可較好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.一種鏈霉菌屬菌種的菌株，其特征是，它是從土壤樣品中分離所得，所述菌株Streptomyces sp.GAAS7310在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NOM 203058。
2.一種殺蟲劑天山菌素，其特征是，它具有如下分子式
3.一種殺蟲劑天山菌素的應(yīng)用，其特征是，它適用于防治螨、蜱和其它昆蟲，包括甜菜夜蛾、煙夜蛾、棉鈴蟲、菜粉蝶、玉米螟、小菜蛾、卷葉蛾、地老虎、亞熱帶粘蟲、谷蛾科、印度谷斑螟、紅鈴麥蛾；也對(duì)鞘翅目和象鼻蟲有效果，包括馬鈴薯甲蟲、黃瓜十一星葉甲、黃瓜三條葉甲、日本狐麗金龜、棉象蟲；還對(duì)雙翅目害蟲有效，包括對(duì)家蠅、蚊科、果蠅、角蠅以及潛蠅科有效；對(duì)虱目、等翅目和膜翅目蟻和螨有效，包括柑橘紅蜘蛛、葉螨；同時(shí)對(duì)動(dòng)物寄生蟲有很好防治效果，包括水蚤、中華錨頭虱。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種殺蟲劑天山菌素的應(yīng)用，其特征是，所述殺蟲劑天山菌素在應(yīng)用時(shí)配制成乳油制劑，其重量百分配比為殺蟲劑天山菌素1～30％、乳化劑5～20％、溶劑50～94％；配制過(guò)程為把殺蟲劑天山菌素和增效劑與所選用的表面活性劑置于反應(yīng)釜中，在溫度35℃、轉(zhuǎn)速為320轉(zhuǎn)/分鐘的條件下反應(yīng)35分鐘，然后再加入有機(jī)溶劑，繼續(xù)攪拌35分鐘，攪拌均勻后即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種殺蟲劑天山菌素的應(yīng)用，其特征是，殺蟲劑天山菌素在應(yīng)用時(shí)配制成乳油制劑的最佳配比為殺蟲劑天山菌素5～10％、乳化劑8～15％、溶劑75～87％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種殺蟲劑天山菌素的應(yīng)用，其特征是，所述乳化劑包括農(nóng)乳2201、農(nóng)乳0203B、YZ960。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種殺蟲劑天山菌素的應(yīng)用，其特征是，所述溶劑包括異丙醇、丙酮、二甲基甲酰胺。
全文摘要
本發(fā)明是一種殺蟲劑天山菌素及其應(yīng)用，該殺蟲劑天山菌素的分子式為(見右式)，該殺蟲劑天山菌素適用于防治螨、蜱和其它昆蟲，對(duì)鞘翅目和象鼻蟲、雙翅目害蟲、虱目、等翅目和膜翅目蟻和螨以及動(dòng)物寄生蟲有很好防治效果。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單、易操作，比常規(guī)藥劑用量少，可以克服小菜蛾等害蟲對(duì)常規(guī)農(nóng)藥的抗藥性，使用安全，不污染環(huán)境，是一種無(wú)公害的生物農(nóng)藥。
文檔編號(hào)C12N1/20GK1557942SQ0314009
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2003年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月6日
發(fā)明者林壁潤(rùn), 謝雙大, 江學(xué)斌, 周小毛, 冼海輝, 沈會(huì)芳, 楊麗梅, 陳光英, 林永成 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所