專利名稱：用于治療病毒感染和異常細(xì)胞增殖的修飾核苷類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明包括用于治療黃病毒科(Flaviviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)感染和異常細(xì)胞增殖的化合物和方法。
本申請(qǐng)要求下列美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)其中一件申請(qǐng)?zhí)枮?0/241,488，于2000年10月18日提交；另一件申請(qǐng)?zhí)枮?0/282,156，于2001年4月6日提交。
背景技術(shù)：
黃病毒科黃病毒科是一組正單鏈RNA病毒，其基因組大小為9-15kb。它們是約40-50nm的有包膜病毒。國(guó)際病毒分類學(xué)委員會(huì)給出了黃病毒科分類的概述。黃病毒科由3個(gè)屬組成。
1.黃病毒屬.該屬包括登革熱病毒群(登革熱病毒、1型登革熱病毒、2型登革熱病毒、3型登革熱病毒、4型登革熱病毒)、日本腦炎病毒群(Alfuy病毒、日本腦炎病毒α、Kookaburra病毒、Koutango病毒、Kunjin病毒、澳洲墨萊溪谷(Murray Valley)腦炎病毒、圣路易斯腦炎病毒、Stratford病毒、Usutu病毒、西尼羅河病毒)、Modoc病毒群、Rio Bravo病毒群(Apoi病毒、Rio Brovo病毒、Saboya病毒)、恩塔亞病毒群、蜱傳腦炎群(蜱傳腦炎病毒)、Tyuleniy病毒群、烏干達(dá)S病毒群和黃熱病病毒群。除了這些主要群以外，還有某些未分類的其他黃病毒。
2.Hepaciviruses.該屬僅含有一類病毒，即丙型肝炎病毒(HCV)，其由多種分枝、型和亞型組成。
3.瘟病毒屬.該屬包括牛病毒性腹瀉病毒-2(BVDV-2)、1型瘟病毒(包括BVDV)、2型瘟病毒(包括豬霍亂病毒)和3型瘟病毒(包括Border病病毒)。
人類中最重要的黃病毒科病毒感染之一是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的。這是病毒性肝炎的第二號(hào)主要原因，據(jù)估計(jì)全球有一億七千萬(wàn)攜帶者(世界衛(wèi)生組織；丙型肝炎全球流行，WeeklyEpidemiological Record，1997，72，341)，其中在美國(guó)有三百九十萬(wàn)(疾病控制中心；未公布的數(shù)據(jù)，http://www.cdc.gov/ncidod/diseases/hepatitis/heptab3.htm)。
黃病毒科病毒的基因組結(jié)構(gòu)具有很多共有特征。丙型肝炎病毒(HCV)基因組經(jīng)常被用作模型。HCV是小的有包膜的病毒，在核殼內(nèi)具有~9.6kb的正單鏈RNA基因組。該基因組含有一個(gè)開(kāi)放讀框(ORF)，其編碼剛好3000個(gè)以上氨基酸的多蛋白，該蛋白裂解以產(chǎn)生成熟的結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)病毒蛋白。ORF的旁側(cè)是長(zhǎng)度為幾百個(gè)核苷酸的5′和3′未翻譯區(qū)域(NTRs)，該區(qū)域?qū)τ赗NA翻譯和復(fù)制很重要。翻譯的多蛋白含有結(jié)構(gòu)核(C)和在N-末端的包膜蛋白(E1、E2、p7)，之后是非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。成熟的結(jié)構(gòu)蛋白是通過(guò)被宿主信號(hào)肽酶裂解而產(chǎn)生的(參見(jiàn)Hijikata，M.等人.Proc.Nat.Acad.Sci.，USA，1991，88，5547；Hussy，P.等人.Virology，1996，224，93；Lin，C.等人.J.Virol.，1994，68，5063；Mizushima，H.等人.J.Virol.，1994，68，2731；Mizushima，H.等人.J.Virol.，1994，68，6215；Santolini，E.等人.J.Virol.，1994，68，3631；Selby，M.J.等人.Virology，1994，204，114和Grakoui，A.等人.Proc.Nat.Acad.Sci.，USA，1993，90，10538)。NS2與NS3之間的連接被NS2/NS3蛋白酶自催化地裂解(參見(jiàn)Hijikata，M.等人.J.Virol.，1993，67，4665和Bartenschlager，R.等人.J.Virol.，1994，68，5045)，而剩余的4個(gè)連接被與NS4A復(fù)合的NS3的N-末端絲氨酸蛋白酶域裂解(參見(jiàn)Failla，C.等人.J.Virol.，1994，68，3753；Lin，C.等人.J.Virol.，1994，68，8147；Tanji，Y.等人.J.Virol.，1995，69，1575和Tai，C.L.等人.J.Virol.，1996，70，8477)。NS3蛋白還含有NTP-依賴性解旋酶活性，其在復(fù)制期間解開(kāi)雙螺旋RNA。NS5B蛋白具有RNA-依賴性RNA聚合酶(RDRP)活性(參見(jiàn)Behrens，S.E.等人.EMBO J.，1996，15，12；Lohmann，V.等人.J.Virol.，1997，71，8416-8428和Lohmann，V.等人.Virology，1998，249，108)，這是病毒復(fù)制所必需的(Ferrari，E.等人.J.Virol.，1999，73，1649)。在此需要強(qiáng)調(diào)的是，與HBV或HIV不同，沒(méi)有DNA參與HCV的復(fù)制。最近，用鳥(niǎo)苷5′-一磷酸(GMP)、5′-二磷酸(GDP)、5′-三磷酸(GTP)以及2′-脫氧和2′，3′-二脫氧鳥(niǎo)苷的5′-三磷酸(分別是dGTP和ddGTP)進(jìn)行了使用NS5B-HCV-RDRP的底物特異性的體外實(shí)驗(yàn)。該作者聲稱，HCV-RDRP對(duì)核糖核苷5′-三磷酸有嚴(yán)格的特異性，并需要2′-和3′-OH基團(tuán)(Lohmann；Virology，108)。他們的實(shí)驗(yàn)表明，存在2′-和3′-取代基是核苷5′-三磷酸與HCV-RDRP相互作用以及起底物或抑制劑作用的必要條件。
已經(jīng)鑒定出的具有抗丙型肝炎黃病毒活性的抗病毒劑的實(shí)例包括1.干擾素和利巴韋林(Battaglia，A.M.等人.Ann.Pharmacother.2000，34，487；Berenguer，M.等人.Antivir.Ther.1998，3(Suppl.3)，125)；2.基于底物的NS3蛋白酶抑制劑(Attwood等人.PCT WO 98/22496，1998；Attwood等人.Antiviral Chemistry and Chemotherapy1999，10，259；Attwood等人.德國(guó)專利公開(kāi)DE 19914474；Tung等人.PCT WO98/17679)，包括α-酮基酰胺類和肼基脲類，以及末端是親電體例如硼酸或膦酸酯的抑制劑(Llinas Brunet等人.PCT WO 99/07734)；3.非基于底物的抑制劑例如2，4，6-三羥基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等人.，Biochemical and Biophysical ResearchCommunications，1997，238，643和Sudo K.等人.Antiviral Chemistryand Chemotherapy1998，9，186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前者在酰胺上被具有14個(gè)碳的鏈取代，后者具有對(duì)苯氧基苯基；4.在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物進(jìn)行的反相HPLC測(cè)定中表現(xiàn)出相關(guān)抑制作用的噻唑烷衍生物(Sudo K.等人，Antiviral Research1996，32，9)，尤其是具有被長(zhǎng)烷基鏈取代的稠合肉桂?；糠值幕衔颮D-1-6250、RD4 6205和RD4 6193；5.在Kakiuchi N.等人.J.EBS Letters421，217和Takeshita Ni等人.Analytical Biochemistry1997，247，242中確定的噻唑烷類化合物和苯甲酰基苯胺化合物；6.在SDS-PAGE和放射自顯影測(cè)定中具有抗HCV蛋白酶活性的從鏈霉菌屬發(fā)酵培養(yǎng)肉湯中分離出來(lái)的菲醌化合物Sch 68631(Chu M.等人.Tetrahedron Letters1996，37，7229)，和在閃爍親近測(cè)定中表現(xiàn)出活性的從真菌Penicillium griscofuluum中分離出來(lái)的Sch 351633(Chu M.等人.，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters9，1949)；7.基于大分子elginc的從水蛭中分離出來(lái)的選擇性NS3抑制劑(Qasim M.A.等人.Biochemistry 1997，36，1598)；8.HCV解旋酶抑制劑(Diana G.D.等人.，U.S.專利5,633,358和DianaG.D.等人.PCT WO 97/36554)；9.HCV聚合酶抑制劑例如核苷酸類似物、膠霉毒素(Ferrari R.等人.Journal of Virology1999，73，1649)和天然產(chǎn)物淺藍(lán)菌素(LohmannV.等人.Virology1998，249，108)；10.與下列序列互補(bǔ)的反義硫代磷酸寡脫氧核苷酸(S-ODN)至少一部分HCV的序列(Anderson等人.U.S.專利6,174,868)，特別是在5′非編碼區(qū)域(NCR)中延伸的序列(Alt M.等人.Hepatology1995，22，707)，或包含NCR的3′末端的核苷酸326-348和位于HCV RNA的核編碼區(qū)域中的核苷酸371-388(Alt M.等人.Archives of Virology1997，142，589和Galderisi U.等人.，Journal of Cellular Physiology1999，812151)；11.IRES-依賴性翻譯抑制劑(Ikeda N等人.日本專利公開(kāi)JP-08268890；Kai Y.等人.日本專利公開(kāi)JP-10101591)；12.核酸酶-抗性核酶(Maccjak D.J.等人.，Hepatology1999，30，abstract 995)；13.金剛烷胺例如金剛乙胺(Smith，Abstract from Annual Meeting oftheAmerican Gastoenterological Association and AASLD，1996)；14.喹諾酮類例如氧氟沙星、環(huán)丙沙星和左氟沙星(AASLD Abstracts，Hepatology，Oct.1994，Program Issue，20(4)，pt.2，abstractno.293)；15.核苷類似物(Ismaili等人.WO 01/60315；Storer WO 01/32153)，包括2′-脫氧-L-核苷(Watanabe等人.WO 01/34618)和1-(β-L-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺(levovirinTM)(Tam WO 01/46212)；和16.其它各種化合物，包括1-氨基-烷基環(huán)己烷(Gold等人.U.S.專利6,034,134)、烷基脂類(Chojkier等人.U.S.專利5,922,757)、維生素E和其它抗氧化劑(Chojkier等人.U.S.專利5,922,757)、角鯊烯、膽汁酸(Ozeki等人.U.S.專利5,846,964)、N-(膦?；阴；?-L-天冬氨酸(Diana等人.U.S.專利5,830,905)、苯二甲酰胺類(Diana等人.U.S.專利5,633,388)、多聚腺苷酸衍生物(Wang等人.U.S.專利5,496,546)、2′，3′-二脫氧肌苷(Yarchoan等人.U.S.專利5,026,687)、苯并咪唑類(Colacino等人.U.S.專利5,891,874)、葡糖胺類(Mueller等人.WO 01/08672)、取代的-1，5-亞氨基-D-山梨醇化合物(Mueller等人.WO 00/47198)。
正粘病毒科正粘病毒科是一組分節(jié)段的負(fù)單鏈RNA病毒，其基因組大小為10-13.6kb。它們是約80-120nm的有包膜病毒。國(guó)際病毒分類學(xué)委員會(huì)給出了正粘病毒科分類的概述。正粘病毒科由3個(gè)屬組成，這3個(gè)屬是根據(jù)其核殼(NP)與基質(zhì)蛋白(M)之間的抗原差異來(lái)劃分的。
1.甲型流感病毒屬和乙型流感病毒屬.該屬包括分別含有8個(gè)不同的RNA片段的甲型流感病毒和乙型流感病毒。乙型流感病毒在其表面糖蛋白中表現(xiàn)出很小的變異性，并僅感染人類。另一方面，甲型流感病毒在其表面糖蛋白中有很大的變異性，并且可根據(jù)其血凝素(HA)和神經(jīng)酰胺酶(NA)糖蛋白的抗原性將它們分為亞型，其感染人以及豬、馬、海豹、家禽、鴨子和多種其它種類的鳥(niǎo)。
2.丙型流感病毒屬.該屬僅包括一類病毒-丙型流感病毒，其只包含7個(gè)不同的RNA片段。丙型流感病毒僅具有一個(gè)多功能糖蛋白，并且主要感染人類，但是在中國(guó)也從豬中分離出了該病毒。
3.丁型流感病毒屬.該屬包括丁型流感病毒，其僅是蜱傳病毒，在結(jié)構(gòu)和基因方面與甲型、乙型和丙型流感病毒類似。
人類中最重要的正粘病毒科病毒感染之一是由甲型流感病毒引起的。這些病毒是高度觸染性的，并引起急性呼吸道疾病，從很早以前就由于流行而給人類社會(huì)帶來(lái)了很大災(zāi)難。關(guān)于甲型流感流行病的一個(gè)最早記錄可追溯到公元前412年的希波克拉底。這些流行病相當(dāng)頻繁，并且對(duì)于老年人經(jīng)常是致命的，然而，這些流行病非常不可預(yù)測(cè)。這些病毒是獨(dú)特的呼吸道病毒，因?yàn)樗鼈兘?jīng)歷顯著的抗原變異。血凝素(HA)和神經(jīng)酰胺酶(NA)糖蛋白都能夠發(fā)生抗原漂移和轉(zhuǎn)變。有14種已知的血凝素(H1-H14)糖蛋白和9種已知的神經(jīng)酰胺酶(Nl-N9)糖蛋白。例如，因?yàn)樽钤绲娜肆鞲胁《臼窃?933年分離出來(lái)的，所以大部分抗原轉(zhuǎn)變已發(fā)生了。在1957年，H2N2亞型(亞洲流感)代替了H1N1亞型(西班牙流感)。目前，流感的主要亞型是在1977年重新出現(xiàn)的H1N1和在1968年重新出現(xiàn)的H3N2。
已經(jīng)用甲型流感病毒進(jìn)行了針對(duì)流感病毒基因表達(dá)和RNA復(fù)制的大量研究。甲型流感病毒顆粒的最顯著特征是有一層從脂質(zhì)包膜向外輻射的約500個(gè)刺突(10-14nm)。這些刺突有兩種類型棒形的HA刺突和蘑菇型的NA刺突。HA與NA的比例不定，但是通常為4-5∶1。每個(gè)基因片段編碼其各自的蛋白，除了第7個(gè)片段編碼M1和M2，第8個(gè)片段編碼NS1和NS2。每個(gè)vRNA的在3′-末端的前12個(gè)核苷酸和在5′-末端的前13個(gè)核苷酸在所有8個(gè)RNA片段中都存在。具有其確定的核苷酸序列的第一個(gè)基因是HA。從那時(shí)以來(lái)，已經(jīng)確定了所有14種已知的HA抗原亞型和在這些亞型內(nèi)的許多變種。
在感染細(xì)胞中，vRNA都轉(zhuǎn)錄成mRNA并復(fù)制。mRNA的合成是不同的，因?yàn)镽NA是以源自新合成的宿主細(xì)胞RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄物的5′加帽的片段作為引物。mRNA鏈延長(zhǎng)直至尿苷殘基長(zhǎng)度達(dá)到在vRNA 5′-末端前面的15-22個(gè)核苷酸，在此處轉(zhuǎn)錄末端和聚腺苷酸被加到mRNAs中。為了開(kāi)始復(fù)制，需要導(dǎo)致生成vRNA的全長(zhǎng)拷貝的另一種轉(zhuǎn)錄。在mRNA合成期間，全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄不用引物即可開(kāi)始，并且在聚(A)位點(diǎn)不終止。復(fù)制的第二步是將模板RNA拷貝成vRNA。該合成也不用引物即可開(kāi)始，這是因?yàn)関RNA含有5′-三磷?；┒?。所有這三類病毒特異性RNA-mRNA、模板RNA和vRNA-都是在細(xì)胞核中合成的。
已經(jīng)鑒定出的具有抗甲型流感病毒活性的抗病毒劑的實(shí)例包括1.放線菌素D(Barry，R.D.等人.“脫氧核糖核酸參與流感病毒增殖”Nature，1962，194，1139-1140)；2.金剛烷胺(Van Voris，L.P.等人.“用于化學(xué)預(yù)防和治療流感的抗病毒劑”Semin Respir Infect，1992，7，61-70)；3.4-氨基-或4-胍基-2-脫氧-2，3-二去氫-D-N-乙酰神經(jīng)氨酸-4-氨基-或4-胍基-Neu 5 Ac2en(von Itzstein，M.等人.“流感病毒復(fù)制的基于唾液酸酶的有效抑制劑的合理設(shè)計(jì)”Nature，1993，363，418-423)；4.利巴韋林(Van Voris，L.P.等人.“用于化學(xué)預(yù)防和治療流感的抗病毒劑”Semin Respir Infect，1992，7，61-70)；
5.干擾素(Came，P.E.等人.“干擾素引起的合成聚合物的抗病毒活性”P(pán)roc Soc Exp Biol Med，1969，131，443-446；Gerone，P.J.等人.“用合成雙鏈核糖核酸的氣霧劑抑制小鼠的呼吸道病毒感染”Infect Immun，1971，3，323-327；Takano，K.等人.“小鼠流感中的被動(dòng)干擾素保護(hù)”J Infect Dis，1991，164，969-972)；6.滅活的甲型和乙型流感病毒疫苗(“流感疫苗的臨床研究-1978”Rev Infect Dis，1983，5，721-764；Galasso，G.T.等人.“流感疫苗的臨床研究-1976”J Infect Dis，1977，136(suppl)，S341-S746；Jenning s，R.等人.“志愿者對(duì)滅活的流感病毒疫苗的反應(yīng)”J Hyg，1981，86，1-16；Kilbourne，E.D.“滅活的流感疫苗”InPlothin SA，Mortimer EA，eds.VaccinesPhiladelphiaSaunders，1988，420-434；Meyer，H.M.，Jr.等人.“現(xiàn)有流感疫苗綜述”Am J ClinPathol，1978，70，146-152；“每周死亡率和發(fā)病率報(bào)告.預(yù)防和控制流感第I部分，疫苗.Recommendations of the Advisory Committeeon Immunication Practices(ACIP)”MMWR，1993，42(RR-6)，1-14；Palache，A.M.等人.“用不同劑量的疫苗進(jìn)行流感免疫接種后的抗體反應(yīng)在老年療養(yǎng)院和年輕志愿者中進(jìn)行的雙盲、安慰劑對(duì)照、多中心、劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)”Vaccine，1993，11，3-9；Potter，C.W.“滅活的流感病毒疫苗”InBeare AS，ed.Basic and applied influezaresearch，Boca Raton，F(xiàn)LCRC Press，1982，119-158)。
副粘病毒科副粘病毒科是一組負(fù)單鏈RNA病毒，其基因組大小為16-20kb。它們是約150-300nm的有包膜病毒。國(guó)際病毒分類學(xué)委員會(huì)給出了副粘病毒科分類的概述。副粘病毒科由2個(gè)亞科組成。
1.副粘病毒亞科.該亞科含有3個(gè)屬a)副粘病毒屬.該屬的代表是仙臺(tái)病毒，并包括人副流感病毒1和3；b)腮腺炎病毒屬.該屬的代表是流行性腮腺炎病毒、猴病毒5、新城病病毒和人副流感病毒2和4；c)麻疹病毒屬.該屬的代表是麻疹病毒；和2.肺病毒亞科.該亞科編碼比其它亞科多的mRNA(10種，其它亞科是6種或7種)，并且僅包括一個(gè)屬
a)肺病毒屬.該屬的最典型代表是呼吸道合胞體病毒(RSV)，但是也包括牛RSV(BRSV)、綿羊RSV(ORSC)、山羊RSV(CRSV)、小鼠肺炎病毒(PVM)和火雞鼻氣管炎病毒(TRTV)。
人類中最主要的正粘病毒科病毒感染之一是由呼吸道合胞體病毒(RSV)引起的。RSV是世界范圍內(nèi)嬰兒和兒童中病毒性下呼吸道疾病的最主要原因。在大部分地區(qū)，RSV比所有其它微生物病原體都更值得關(guān)注，因?yàn)樗遣粷M一歲的嬰兒發(fā)生肺炎和細(xì)支氣管炎的原因。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，RSV感染是免疫抑制成人和老年人的重要致病體。此外，BRSV已經(jīng)在牛中表現(xiàn)出給經(jīng)濟(jì)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失的疾病。
基因組RSV RNA的3′-末端由一個(gè)44-核苷酸基因外前導(dǎo)區(qū)構(gòu)成，據(jù)假設(shè)該前導(dǎo)區(qū)包含主要的病毒啟動(dòng)子。該前導(dǎo)區(qū)后面是10個(gè)病毒基因，之后是一個(gè)155-核苷酸基因外尾隨區(qū)。88％的基因組RNA通過(guò)ORF形成10種主要蛋白。每個(gè)基因都由保守的9-核苷酸基因開(kāi)始信號(hào)開(kāi)始。對(duì)于每個(gè)基因，轉(zhuǎn)錄都是在該信號(hào)的第一個(gè)核苷酸上開(kāi)始的。每個(gè)基因都以指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄終止和多腺苷酸化的半保守的12至13核苷酸基因末端信號(hào)終止。前9個(gè)基因是未重疊的，并且通過(guò)大小為1-52個(gè)核苷酸的基因間區(qū)域隔開(kāi)?；蜷g區(qū)域不含任何保守序列基序或任何明顯的二級(jí)結(jié)構(gòu)特征。最后兩個(gè)RSV基因通過(guò)68個(gè)核苷酸重疊。因此，一個(gè)基因開(kāi)始信號(hào)位于另一個(gè)基因內(nèi)部，而不是在另一個(gè)基因后面。
已經(jīng)鑒定出的具有抗RSV活性的抗病毒劑的實(shí)例包括1.利巴韋林(Hruska，J.F.等人.“通過(guò)利巴韋林在體內(nèi)抑制呼吸道合胞體病毒”Antimicrob Agents Chemother，1982，21，125-130)；和2.純化的人靜脈內(nèi)IgG-IVIG(Prince，G.A.等人.“在棉大鼠呼吸道合胞體病毒感染的實(shí)驗(yàn)免疫治療中局部施用的中和性抗體的有效性”J Virol，1987，61，1851-1954；Prince，G.A.等人.“免疫預(yù)防和免疫治療棉大鼠中的呼吸道合胞體病毒感染”Infect Immun，1982，42，81-87)。
異常細(xì)胞增殖在多細(xì)胞生物體中，細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)、功能和死亡是由復(fù)雜的機(jī)制網(wǎng)絡(luò)在分子水平上調(diào)控的。在健康的動(dòng)物或人中，這些機(jī)制讓細(xì)胞進(jìn)行其設(shè)計(jì)的功能，然后以程序化速度死亡。
異常細(xì)胞增殖，尤其是過(guò)度增殖可由于多種因素所致，包括基因突變、感染、暴露于毒素、自身免疫性障礙和良性或惡性腫瘤誘導(dǎo)。
有多種與細(xì)胞過(guò)度增殖有關(guān)的皮膚病癥。例如，牛皮癬是人皮膚的良性疾病，其特征一般是被增厚的鱗屑覆蓋的斑。該疾病是由未知原因的表皮細(xì)胞增殖增加引起的。在正常細(xì)胞中，細(xì)胞從基礎(chǔ)層移動(dòng)到上顆粒層所需的時(shí)間大約是5周。在牛皮癬中，該時(shí)間僅為6-9天，部分原因是增殖的細(xì)胞數(shù)目增加以及分裂的細(xì)胞所占的比例增加(G.Grove，Int.J.Dermatol.18111，1979)。在美國(guó)，大約2％的人患有牛皮癬，在美國(guó)白人中該比例大約是3％，在美國(guó)黑人中該比例大約是1％，而在美國(guó)土著人當(dāng)中很少有人患該疾病。慢性濕疹也與嚴(yán)重的表皮過(guò)度增殖有關(guān)。由皮膚細(xì)胞過(guò)度增殖引起的其它疾病包括特應(yīng)性皮炎、扁平苔癬、疣、尋常天皰瘡、光化性角化病、基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌。
其它過(guò)度增殖性細(xì)胞病癥包括血管增殖病癥、纖維變性病癥、自身免疫性病癥、移植物對(duì)宿主排斥、腫瘤和癌癥。
血管增殖性病癥包括血管生成和血管發(fā)生病癥。在血管組織的斑塊發(fā)展過(guò)程中的平滑肌細(xì)胞增殖引起例如再狹窄、視網(wǎng)膜病和動(dòng)脈粥樣硬化。嚴(yán)重的動(dòng)脈粥樣硬化損傷是由于對(duì)動(dòng)脈壁的內(nèi)皮和平滑肌的損傷的過(guò)度炎性增殖性反應(yīng)所致(Ross，R.Nature，1993，362801-809)。細(xì)胞遷移和細(xì)胞增殖都在動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成中起作用。
纖維變性病癥經(jīng)常是由于細(xì)胞外基質(zhì)的異常形成所致。纖維變性病癥的實(shí)例包括肝臟硬化和腎小球系膜增殖性細(xì)胞病癥。肝臟硬化的特征是細(xì)胞外基質(zhì)組分增加，從而導(dǎo)致形成肝臟瘢痕。肝臟硬化可引起疾病例如肝硬化。導(dǎo)致肝臟瘢痕的細(xì)胞外基質(zhì)增加還可能由病毒感染例如肝炎引起。脂細(xì)胞似乎在肝臟硬化中起主要作用。
腎小球系膜病癥是由腎小球系膜細(xì)胞的異常增殖引起的。腎小球系膜過(guò)度增殖性細(xì)胞病癥包括各種人腎疾病例如腎小球性腎炎、糖尿病性腎病、惡性腎硬化、血栓形成性微血管病綜合征、移植排斥和腎小球病。
增殖性成分的另一種疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎一般被認(rèn)為是自身免疫性疾病，據(jù)信其與自反應(yīng)性T細(xì)胞的活性有關(guān)(參見(jiàn)例如Harris，E.D.，Jr.，The New England Journal of Medicine，1990，3221277-1289)，以及由產(chǎn)生的抗膠原和IgE的自身抗體引起。
可包括異常細(xì)胞增殖成分的其它病癥包括貝赫切特病、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、缺血性心臟病、透析后綜合征、白血病、獲得性免疫缺陷綜合征、結(jié)節(jié)性脈管炎、脂性組織細(xì)胞增多癥、膿毒性休克和一般的炎癥。
也稱為新生物的腫瘤是其中細(xì)胞增殖失控且進(jìn)行性的組織新生長(zhǎng)。良性腫瘤是沒(méi)有侵襲和轉(zhuǎn)移性質(zhì)的腫瘤，并且通常環(huán)繞著纖維性被膜。惡性腫瘤(即癌癥)是既能侵襲又能轉(zhuǎn)移的腫瘤。與良性腫瘤相比，惡性腫瘤還表現(xiàn)出更大程度的退行發(fā)育(即失去細(xì)胞分化及其彼此之間和對(duì)其軸構(gòu)架組織的定向)。
每年大約1200萬(wàn)美國(guó)人被診斷為癌癥患者，其中8000位患者為兒童。此外，僅在美國(guó)每年就有500000人死于癌癥。前列腺癌和肺癌是男性死亡的頭號(hào)原因，而乳腺癌和肺癌是女性死亡的頭號(hào)原因。據(jù)估計(jì)，在美國(guó)，涉及癌癥的花費(fèi)占疾病治療總花費(fèi)的大約10％(CNN.Cancer.Fact shttp://www.cnn.com/HEALTH/9511/conquer_Gancer/facts/index.html，page 2 of 2，July 18，1999)。
增殖性病癥目前是用各類化合物進(jìn)行治療，包括烷化劑、抗代謝物、天然產(chǎn)物、酶、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、各種其它治療劑、放療藥物(例如標(biāo)記在激素或抗體上的Y-90)、激素和拮抗劑例如下面列出的那些。
烷化劑氮芥類氮芥(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺(急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、維爾姆斯瘤、子宮頸、睪丸、軟組織肉瘤)、馬法蘭(L-苯丙氨酸氮芥)(多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌)、瘤可寧(慢性淋巴細(xì)胞白血病、原發(fā)性巨球蛋白血癥、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)。
乙烯亞胺類和甲基蜜胺類六甲蜜胺(卵巢癌)、噻替哌(膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌)。
烷基磺酸酯類白消安(慢性粒細(xì)胞性白血病)。
亞硝基脲卡氮芥(BCNU)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)性腦腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑素瘤)、羅氮芥(CCNU)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)性腦腫瘤、小細(xì)胞肺癌)、甲環(huán)亞硝脲(甲基-CCNU)(原發(fā)性腦腫瘤、胃癌、結(jié)腸癌)、鏈脲霉素(STR)(惡性胰腺胰島瘤、惡性類癌瘤(carcinoin))。
三氮烯屬達(dá)卡巴嗪(DTIC；二甲基三氮烯基咪唑甲酰胺)(惡性黑素瘤、霍奇金病、軟組織肉瘤)。
抗代謝物葉酸類似物甲氨蝶呤(氨甲蝶呤)(急性淋巴細(xì)胞白血病、絨膜癌、蕈樣真菌病、乳腺癌、頭頸癌、肺癌、骨原性肉瘤)。
嘧啶類似物氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脫氧尿苷；FUdR)(乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、頭頸癌、泌尿膀胱癌、惡化惡習(xí)前皮膚損害)(局部)、阿糖胞苷(阿糖胞苷)(急性粒細(xì)胞和急性淋巴細(xì)胞白血病)。
嘌呤類似物和相關(guān)抑制劑巰基嘌呤(6-巰基嘌呤；6-MP)(急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病和慢性粒細(xì)胞白血病)、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-硫鳥(niǎo)嘌呤；TG)(急性粒細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性粒細(xì)胞白血病)、噴司他丁(2′-deoxycyoformycin)(多毛細(xì)胞白血病、蕈樣真菌病、慢性淋巴細(xì)胞白血病)。
長(zhǎng)春花屬生物堿長(zhǎng)春花堿(VLB)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、睪丸癌)、長(zhǎng)春新堿(急性淋巴細(xì)胞白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、維爾姆斯瘤、橫紋肌肉瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、小細(xì)胞肺癌)。
表鬼臼毒素依托泊苷(睪丸癌、小細(xì)胞肺癌和其它肺癌、乳腺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性粒細(xì)胞白血病、卡波西肉瘤)、替尼泊苷(睪丸癌、小細(xì)胞肺癌和其它肺癌、乳腺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性粒細(xì)胞白血病、卡波西肉瘤)。
天然產(chǎn)物抗生素更生霉素(放線菌素D)(絨膜癌、維爾姆斯瘤、橫紋肌肉瘤、睪丸癌、卡波西肉瘤)、柔紅霉素(道諾霉素；正定霉素)(急性粒細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病)、阿霉素(軟組織肉瘤、骨原性肉瘤骨原性肉瘤和其它肉瘤；霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性白血病、乳腺癌、泌尿生殖器癌、甲狀腺癌、肺癌、胃癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤)、博萊霉素(睪丸癌、頭頸癌、皮膚和食道癌、肺癌和泌尿生殖道癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)、普卡霉素(光輝霉素)(睪丸癌、惡性高鈣血)、絲裂霉素(自力霉素C)(胃癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、頭頸癌)。
酶L-天冬酰胺酶(急性淋巴細(xì)胞白血病)。
生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑α-干擾素(多毛細(xì)胞白血病、卡波西肉瘤、黑素瘤、類癌瘤、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤、蕈樣真菌病，多發(fā)性骨髓瘤、慢性粒細(xì)胞白血病)。
各種其它治療劑鉑配位絡(luò)合物順鉑(順式-DDP)、卡鉑(睪丸癌、卵巢癌、膀胱癌、頭頸癌、肺癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、骨原性肉瘤)。
蒽二酮類Mixtozantrone(急性粒細(xì)胞白血病、乳腺癌)。
取代的脲類羥基脲(慢性粒細(xì)胞白血病、紅細(xì)胞增多癥、特發(fā)性血小板增多癥、惡性黑素瘤)。
甲基肼衍生物丙卡巴肼(N-甲基肼，MIH)(霍奇金病)。
腎上腺皮質(zhì)抑制劑米托坦(o，p′-DDD)(腎上腺皮層癌)、氨魯米特(乳腺癌)。
腎上腺類皮質(zhì)激素類強(qiáng)的松(急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、乳腺癌)。
孕激素類己酸羥孕酮、乙酸甲羥孕酮、乙酸甲地孕酮(子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌)。
抗血管生成劑Angiostatin、Endostatin。
激素和拮抗劑雌激素類己烯雌酚、乙炔雌二醇(乳腺癌、前列腺癌)。
抗雌激素類他莫昔芬(乳腺癌)。
雄激素類丙酸睪酮、氟甲睪酮(乳腺癌)。
抗雄激素類氟他胺(前列腺癌)。
促性腺素釋放激素類似物亮丙瑞林(前列腺癌)。
與治療包括癌癥在內(nèi)的異常增殖性細(xì)胞有關(guān)的毒性部分是由于藥物在疾病和正常細(xì)胞之間缺乏選擇性。為了克服該限制，現(xiàn)在正在探索增加治療增殖性病癥的藥物的特異性并由此減小藥物毒性的治療策略。一種正在積極研究的策略是藥物靶向作用。
從這些疾病的嚴(yán)重性以及它們?cè)诎ㄈ嗽趦?nèi)的動(dòng)物中的流行來(lái)看，本發(fā)明的目的是提供用于治療感染任何上述病毒，包括黃病毒或瘟病毒、流感病毒或呼吸道合胞體病毒(“RSV”)的宿主，包括動(dòng)物和尤其是人的化合物、方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療患有異常細(xì)胞增殖的宿主，包括動(dòng)物和尤其是人的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療感染丙型肝炎病毒或BVDV的宿主，包括動(dòng)物和尤其是人的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療感染流感病毒的宿主，包括動(dòng)物和尤其是人的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療感染RSV的宿主，包括動(dòng)物和尤其是人的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于治療患有腫瘤，包括惡性腫瘤的宿主，包括動(dòng)物和尤其是人的方法和組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供定量測(cè)定宿主，包括動(dòng)物、尤其是人中的病毒負(fù)載量，特別是BVDV或HCV負(fù)載量的更有效方法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于治療感染屬于黃病毒科、正粘病毒科和副粘病毒科的病毒的宿主的式(I)-(XXIII)所示的β-D或β-L核苷或其可藥用鹽或前藥?；蛘?，本發(fā)明β-D或β-L核苷(I)-(XXIII)或其可藥用鹽或前藥可用于治療異常細(xì)胞增殖。
具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明還包括治療或預(yù)防下列病癥的方法(a)黃病毒科病毒感染，包括所有Hepacivirus屬(HCV)、瘟病毒屬(BVDV、CSFV、BDV)或黃病毒屬(登革熱病毒、日本腦炎病毒群(包括西尼羅河病毒)和黃熱病病毒)病毒感染；(b)正粘病毒科病毒感染，包括所有甲型流感病毒屬和乙型流感病毒屬，特別是甲型流感病毒和所有相關(guān)亞型，包括H1N1和H3N2以及乙型流感病毒感染；(c)副粘病毒科病毒感染，包括呼吸道合胞體病毒(RSV)感染；和(d)異常細(xì)胞增殖，包括惡性腫瘤。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(I)或(II)的β-D核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D是氫、烷基、酰基、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；每個(gè)W1和W2獨(dú)立地為CH或N；每個(gè)X1和X2獨(dú)立地為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR4、NR4R4′、NHOR4、NR4NR4′R4″、OH、OR4、SH或SR4；每個(gè)Y1是O、S或Se；每個(gè)Z是CH2或NH；每個(gè)R1和R1′獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)炔基、芳基、烷基芳基、鹵素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR5、NR5R5′、NHOR5、NR5NHR5′、NR5NR5′R5″、OH、OR5、SH、SR5、NO2、NO、CH2OH、CH2OR5、CO2H、CO2R5、CONH2、CONHR5、CONR5R5′或CN；每個(gè)R2和R2′獨(dú)立地為氫或鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；
每個(gè)R3和R3′獨(dú)立地為氫或鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH3、C2H5、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每個(gè)R4、R4′、R4″、R5、R5′和R5″獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或芐基；條件是對(duì)于每個(gè)通式(I)或(II)的核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(IIII)或(IV)的β-L核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，條件是對(duì)于每個(gè)通式(III)或(IV)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(V)-(VII)的β-D-carba-糖核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，條件是對(duì)于每個(gè)通式(V)或(VI)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(VIII)-(X)的β-L-carba-糖核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，條件是對(duì)于每個(gè)通式(VIII)或(IX)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L-核苷分別是通式(XI)或(XII)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，每個(gè)Z1和Z2獨(dú)立地為O、S、CH2、NR6或Se；每個(gè)R6是氫、低級(jí)烷基或低級(jí)?；?。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L-核苷，盡管優(yōu)選B-D-核苷，是通式(XIII)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中
每個(gè)D、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)Y2是O、S、NH或NR7；每個(gè)Y3是O、S、NH或NR8；每個(gè)X3是OR9或SR9；且每個(gè)R7、R8和R9是氫、C1-C6低級(jí)烷基、芳基烷基或芳基；條件是對(duì)于每個(gè)通式(XIII-d)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的化合物是β-D或β-L-核苷，優(yōu)選B-D-核苷，所述核苷是這樣獲得的將小分子例如次氯酸烷基酯、次溴酸烷基酯、次溴酸或酰鹵加成到合適的嘧啶核苷上以形成式(XIV)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、X1、Y1、Z1、R1、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，每個(gè)L1是氫、Cl或Br；每個(gè)L2是OH、OCH3、OC2H5、OC3H7、OCF3、OAc或OBz；每個(gè)Z3可以是O或CH2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XV)二聚核苷(每個(gè)核苷呈β-D或β-L構(gòu)型)，其中這兩個(gè)核苷是通過(guò)二硫鍵連接的
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、Y1、Z3、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XVI)的β-D或β-L C-核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、X1、X2、Y1、Z、R1、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)W3獨(dú)立地為N、CH或CR1；每個(gè)W4和W5獨(dú)立地為N、CH、CX1或CR1′；且每個(gè)Z4和Z5獨(dú)立地為NH或C(＝Y(jié)1)；條件是如果Z4和Z5是通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合的，則當(dāng)Z5是C(＝Y(jié)1)時(shí)，Z4不是C(＝Y(jié)1)；并且環(huán)氮原子不超過(guò)3個(gè)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XVII)的β-D或β-L-支鏈糖核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z3、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)X4和X5獨(dú)立地為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、N3、NH2、NHR8、NR8R8′、OH、OR8、SH或SR8；且每個(gè)R8和R8′獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或芐基；條件是對(duì)于每個(gè)通式(XVII-a)或(XVII-b)核苷，X4不是OH或OR8。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XVIII)的α-D或α-L-核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前。
在一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XIX)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、R1、R4和R4′的定義同上；每個(gè)R9是氫、鹵素(F、Cl、Br或I)或OP3；
每個(gè)P1是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基、芳基烷基(例如未取代或取代的苯基或芐基)、OH、OR4、NH2、NHR4或NR4R4′；和每個(gè)P2和P3獨(dú)立地為氫、烷基、?；?、-Ms、-Ts、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸，優(yōu)選為氫。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XIX)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D和P2的定義同前。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D和P2獨(dú)立地為氫。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XX)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4、R4′和R9的定義同前。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XXI)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同前。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XXI)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同前。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D、P2和P3獨(dú)立地為氫。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XXII)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1和R1的定義同前。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D和P2獨(dú)立地為氫。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XXII)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷，優(yōu)選β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中D的定義同前，且優(yōu)選為H。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XXIII)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同前。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XXIII)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同前。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D、P2和P3獨(dú)立地為氫。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在合適的基于細(xì)胞的測(cè)定中測(cè)試時(shí)，本發(fā)明核苷的EC50(達(dá)到50％病毒抑制的有效濃度)小于15μM，更特別地，小于10或5μM。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核苷是對(duì)映體富集的。
本發(fā)明還包括至少下述特征(a)如本文所述的式(I)-(XXIII)的β-D核苷或β-L核苷或其可藥用鹽或前藥在醫(yī)療中的應(yīng)用，即作為抗病毒或抗腫瘤/抗癌劑的應(yīng)用，例如在治療或預(yù)防黃病毒科病毒感染，包括丙型肝炎病毒感染中的應(yīng)用；(b)如本文所述的式(I)-(XXIII)的β-D核苷或β-L核苷或其可藥用鹽或前藥在制備用于治療黃病毒科病毒感染，包括丙型肝炎病毒感染的藥物中的應(yīng)用；(c)藥物組合物，其中包含抗病毒有效量的如本文所述的式(I)-(XXIII)的β-D核苷或β-L核苷或其可藥用鹽或前藥和依據(jù)本發(fā)明的可藥用載體或稀釋劑；(d)藥物組合物，其中包括如本文所述的式(I)-(XXIII)的β-D核苷或β-L核苷或其可藥用鹽或前藥與一種或多種其它能有效抗病毒的活性劑；和(e)制備如本文所述的式(I)-(XXIII)的β-D核苷或β-L核苷及其可藥用鹽和前藥的方法。
本文所述的化合物的活性和毒性可依據(jù)任何已知方法評(píng)價(jià)。下文提供了使用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(“RT-PCR”)來(lái)定量測(cè)定宿主中病毒負(fù)載量的一種有效方法。該方法包括使用可雜交到靶病毒DNA或RNA上的猝滅熒光探針?lè)肿?。?jīng)過(guò)核酸外切降解，可監(jiān)測(cè)可檢測(cè)的熒光信號(hào)。使用該技術(shù)，通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的存在可實(shí)時(shí)探測(cè)RT-PCR擴(kuò)增的DNA或RNA。
本說(shuō)明書(shū)描述了(a)如本文所述的使用RT-PCR實(shí)時(shí)定量測(cè)定病毒負(fù)載量的方法；(b)如本文所述的使用RT-PCR實(shí)時(shí)定量測(cè)定宿主中黃病毒科病毒，包括宿主中BVDV和HCV的病毒負(fù)載量的方法；(c)如本文所述的使用RT-PCR實(shí)時(shí)定量測(cè)定MDBK細(xì)胞系或宿主樣本中BVDV的病毒負(fù)載量的方法；(d)如本文所述的設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與BVDV NADLNS5B區(qū)域互補(bǔ)的探針?lè)肿?；?e)探針?lè)肿?，所述探針?lè)肿泳哂行蛄?′-6-fam-AAATCCTCCTAACAAGCGGGTTCCAGG-tamara-3′(Sequence ID No 1)，和引物，所述引物具有正義序列5′-AGCCTTCAGTTTCTTGCTGATGT-3′(Sequence ID No 2)和反義序列5′-TGTTGCGAAAGCACCAACAG-3′(Sequence ID No 3)；(f)如本文所述的使用RT-PCR實(shí)時(shí)定量測(cè)定宿主衍生樣本或細(xì)胞系中HCV的病毒負(fù)載量的方法；(g)如本文所述的設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與HCV 5′-未編碼區(qū)域互補(bǔ)的探針?lè)肿?；?h)如本文所述的設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與HCV編碼區(qū)域互補(bǔ)的探針?lè)肿?；?i)如本文所述的設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與HCV 3′-未編碼區(qū)域互補(bǔ)的探針?lè)肿?；?j)探針?lè)肿?，所述探針?lè)肿泳哂行蛄? 5′-6-fam-CCTCCAGGACCCCCCCTCCC-tamara-3′(Sequence ID No 4)，和引物，所述引物具有正義序列5′-AGCCATGGCGTTAGTA(T/C)GAGTGT-3′(Sequence ID No 5)和反義序列5′-TTCCGCAGACCACTATGG-3′(Sequence ID No 6)。
附圖概述附

圖1表示的是，如實(shí)施例51所述，在細(xì)胞培養(yǎng)物中用增加濃度的牛病毒性腹瀉病毒(“BVDV”)使得噬斑形成單位增多。附圖1表明，實(shí)施例51的方法提供了BVDV的可靠定量測(cè)定，其中檢測(cè)靈敏度為4倍病毒的log PFU/mL。
附圖2表示的是，如實(shí)施例52所述，決定最佳收獲時(shí)間(感染后小時(shí)數(shù)對(duì)噬斑形成單位(“PFU”)的log)，即感染后22小時(shí)的MDBK細(xì)胞中的BVDV復(fù)制周期，最佳收獲時(shí)間大體上相當(dāng)于其中所產(chǎn)生的病毒量等于接種到細(xì)胞內(nèi)的病毒量的一個(gè)復(fù)制周期。
附圖3是一個(gè)柱形圖表，其表明的是如實(shí)施例40所述的一些抗BVDV的測(cè)試化合物抑制噬斑形成單位數(shù)目的能力。
附圖4是一個(gè)柱形圖表，其表明的是可通過(guò)聯(lián)合施用天然核苷，即胞嘧啶核苷和尿嘧啶核苷來(lái)防止“carba-糖”核苷在CEM細(xì)胞(人T-細(xì)胞淋巴瘤)和SUDHL-1細(xì)胞(人退行發(fā)育性T-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系)中的細(xì)胞毒性。
附圖5提供了本發(fā)明核苷的各個(gè)非限制性實(shí)例以及在本發(fā)明中用作比較實(shí)例的已知核苷利巴韋林的結(jié)構(gòu)。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用于治療感染屬于黃病毒科、正粘病毒科、或副粘病毒科病毒的宿主的通式(I)-(XXIII)核苷或其可藥用鹽或前藥?；蛘?，本發(fā)明通式(I)-(XXIII)核苷或其可藥用鹽或前藥可用于治療異常細(xì)胞增殖。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用抗病毒劑或抗增殖劑的治療或預(yù)防方法，例如治療或預(yù)防病毒感染，包括黃病毒科病毒感染，包括丙型肝炎病毒感染，流感病毒感染，包括甲型流感病毒(例如H1N1和H3N2)與乙型流感病毒和RSV感染，以及異常細(xì)胞增殖的方法，包括施用抗病毒或抗增殖有效量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用抗病毒劑或抗增殖劑的治療或預(yù)防方法，例如治療或預(yù)防黃病毒科病毒感染的方法，包括在用于治療的藥物的制備中施用抗病毒量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用抗病毒劑或抗增殖劑的治療或預(yù)防方法，例如治療或預(yù)防流感病毒感染的方法，包括在治療藥物的制備中施用抗病毒有效量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用抗病毒劑或抗增殖劑的治療或預(yù)防方法，例如治療或預(yù)防RSV感染的方法，包括在治療藥物的制備中施用抗病毒有效量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用抗病毒劑或抗增殖劑的治療或預(yù)防方法，例如治療或預(yù)防其特征是異常細(xì)胞增殖的疾病的方法，包括施用抗增殖有效量的本發(fā)明核苷。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本文所述的化合物在制備用于治療病毒感染或異常細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種本文所述的化合物在治療表現(xiàn)出病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主中的應(yīng)用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其中包括抗病毒或抗增殖有效量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥和依據(jù)本發(fā)明的可藥用載體或稀釋劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其中包含本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥與一種或多種其它能有效抗病毒或抗增殖的活性劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明核苷及其可藥用鹽和前藥的方法。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療患有與病毒有關(guān)的病癥的哺乳動(dòng)物的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療患有與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的哺乳動(dòng)物的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的本發(fā)明核苷或其可藥用鹽或前藥。
本發(fā)明特別包括在治療或預(yù)防下述疾病的方法中的所述化合物，或所述化合物在治療或預(yù)防下述疾病中的應(yīng)用，或所述化合物在制備用于治療或預(yù)防下述疾病的藥物中的應(yīng)用(a)黃病毒科病毒感染，包括所有Hepacivirus屬(HCV)、瘟病毒屬(BVDV、CSFV、BDV)或黃病毒屬(登革熱病毒、日本腦炎病毒群(包括西尼羅河病毒)和黃熱病病毒)病毒感染；(b)正粘病毒科病毒感染，包括所有甲型流感病毒屬和乙型流感病毒屬，特別是甲型流感病毒和所有相關(guān)亞型，包括H1N1和H3N2以及乙型流感病毒感染；(c)副粘病毒科病毒感染，包括呼吸道合胞體病毒(RSV)感染；和(d)異常細(xì)胞增殖，包括惡性腫瘤。
I.本發(fā)明化合物在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(I)或(II)的β-D核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D是氫、烷基、酰基、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸，優(yōu)選為氫；每個(gè)W1和W2獨(dú)立地為CH或N；每個(gè)X1和X2獨(dú)立地為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR4、NR4R4′、NHOR4、NR4NR4′R4″、OH、OR4、SH或SR4；每個(gè)Y1是O、S或Se；
每個(gè)Z是CH2或NH；每個(gè)R1和R1′獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)炔基、芳基、烷基芳基、鹵素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR5、NR5R5′、NHOR5、NR5NHR5′、NR5NR5′R5″、OH、OR5、SH、SR5、NO2、NO、CH2OH、CH2OR5、CO2H、CO2R5、CONH2、CONHR5、CONR5R5′或CN；每個(gè)R2和R2′獨(dú)立地為氫或鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每個(gè)R3和R3′獨(dú)立地為氫或鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH3、C2H5、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每個(gè)R4、R4′、R4″、R5、R5′和R5″獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或芐基；條件是對(duì)于每個(gè)通式(I)或(II)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(IIII)或(IV)的β-L核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，條件是對(duì)于每個(gè)通式(III)或(IV)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(V)-(VII)的β-D-carba-糖核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，條件是對(duì)于每個(gè)通式(V)或(VI)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(VIII)-(X)的β-L-carba-糖核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，
條件是對(duì)于每個(gè)通式(VIII)或(IX)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L-核苷分別是通式(XI)或(XII)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，每個(gè)Z1和Z2獨(dú)立地為O、S、NR6或Se；每個(gè)R6是氫、低級(jí)烷基或低級(jí)?；?br> 在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L-核苷，優(yōu)選B-D-核苷是通式(XIII)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)Y2是O、S、NH或NR7；每個(gè)Y3是O、S、NH或NR8；每個(gè)X3是OR9或SR9；且每個(gè)R7、R8和R9是氫、C1-C6低級(jí)烷基、芳基烷基或芳基；條件是對(duì)于每個(gè)通式(XIII-d)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的化合物是β-D或β-L-核苷，優(yōu)選B-D-核苷，所述核苷是這樣獲得的將小分子例如次氯酸烷基酯、次溴酸烷基酯、次溴酸或酰鹵加成到合適的嘧啶核苷上以形成式(XIV)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、X1、Y1、Z1、R1、R2、R2′、R3和R3′的定義同上，每個(gè)L1是氫、Cl或Br；
每個(gè)L2是OH、OCH3、OC2H5、OC3H7、OCF3、OAc或OBz；每個(gè)Z3可以是O或CH2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XV)二聚核苷(每個(gè)核苷呈β-D或β-L構(gòu)型)，其中這兩個(gè)核苷是通過(guò)二硫鍵連接的 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、Y1、Z3、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同上。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XVI)的β-D或β-L C-核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、X1、X2、Y1、Z、R1、R2、R2′、R3和R3′的定義同上；每個(gè)W3獨(dú)立地為N、CH或CR1；每個(gè)W4和W5獨(dú)立地為N、CH、CX1或CR1′；且每個(gè)Z4和Z5獨(dú)立地為NH或C(＝Y(jié)1)；條件是如果Z4和Z5是通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合的，則當(dāng)Z5是C(＝Y(jié)1)時(shí)，Z4不是C(＝Y(jié)1)；并且環(huán)氮原子不超過(guò)3個(gè)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XVII)的β-D或β-L-支鏈糖核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z3、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同上；每個(gè)X4和X5獨(dú)立地為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、N3、NH2、NHR8、NR8R8′、OH、OR8、SH或SR8；且每個(gè)R8和R8′獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或芐基；條件是對(duì)于每個(gè)通式(XVII-a)或(XVII-b)核苷，X4不是OH或OR8。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的核苷是通式(XVIII)的α-D或α-L-核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同上。
在一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XIX)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、R1、R4和R4′的定義同上；每個(gè)R9是氫、鹵素(F、Cl、Br或I)或OP3；每個(gè)P1是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基、芳基烷基(例如未取代或取代的苯基或芐基)、OH、OR4、NH2、NHR4或NR4R4′；且每個(gè)P2和P3獨(dú)立地為氫、烷基、?；?、-Ms、-Ts、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸，優(yōu)選為氫。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XIX)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D和P2的定義同上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D和P2獨(dú)立地為氫。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XX)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4、R4′和R9的定義同上。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XXI)核苷 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同上。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XXI)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D、P2和P3獨(dú)立地為氫。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，N-羥基胞嘧啶用作為連接到本申請(qǐng)中所述的任何糖或carba-糖部分上的堿基，仿若每個(gè)單獨(dú)的具體實(shí)施方案都被完全描述過(guò)那樣。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XXII)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1和R1的定義同上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D和P2獨(dú)立地為氫。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XXII)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷，優(yōu)選β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中D的定義同上，且優(yōu)選為H。
在另一個(gè)本發(fā)明子實(shí)施方案中，抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷是式(XXIII)核苷
或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同上。
在一個(gè)本發(fā)明特別的子實(shí)施方案中，式(XXIII)所示抗病毒或抗增殖有效的β-D或β-L核苷如下 或其可藥用鹽或前藥，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，D、P2和P3獨(dú)立地為氫。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I-a)和(III-a)的β-D和β-L核苷由表1提供的非限制性實(shí)例代表。
表1 IDX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′AANH2OHHOHHHOHABNH2OHHOHHHIACNH2OHHOHHHClADNH2OHHOHHHBrAENH2OHHOHHHS-CN
ID X1Y1R1R1′R2R2′PR3R3′AF NH2O H H OH H HN3AG NH2O H H H Cl HOHAH NH2O H H H Br HOHAI NH2O H H H OH Br HAJ NH2O H H H OH HHAK NH2O H H H OH O-Ms HAL NH2O H H H OH O-Ts HAM NH2O H H O-Ms H HOHAN NH2O H H Cl H HOHAO NH2O D D OH H HOHAP NH2O F H OH H HOHAQ NH2O F H H OH HOHAR NH2O F H H OH HHAS NH2O F H H OH Cl HAT NH2O F H H OH Br HAU NH2O F H H Cl HOHAV NH2O F H H OH O-Ts HAW NH2O F H H OH O-Ms HAX NH2O Cl H H OH O-Ms H
ID X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′AY NH2OBr HHOH O-Ms HAZ NH2OBr HHOH O-Ts HBA NH2OBr HHOH Cl HBB NH2OBr HHOH HOHBC NH2OBr HOH H HOHBD NH2OIHHOH O-Ms HBE NH2OIHHOH Br HBF NH2OIHHOH O-Ts HBG NH2OIHHCl HOHBH NH2OIHBr H HOHBI NH2OOH HOH H HOHBJ NH2ONH2HHOH HOHBK NH2OCH3HHOH Cl HBL NH2NH HH OH HHOHBM NH2SHHHSe-苯基 HHBN NH-(2-Ph-Et)OHHOHH HOHBO NH-COCH3OHHOHH HOHBP NH-NH2OHHOHH HOHBQ NH-NH2OFHOHH HOH
ID X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′BR NH-NH2O CH3H H OH H OHBS NH-OH O H H H OH H OHBT NH-OH O F H H OH H OHBU NH-OH O Br H H OH H OHBV NH-OH O I H H OH H OHBW NH-OH O H H OH H H OHBX OH O OH H OH H H OHBY OH O NH2H H OH H OHBZ OH O F H OH H H OHCA OH O F H H O-TsH OHCB OH O F H H O-MsH O-MsCC OH O F H H OH H OHCD OH O F H H OH H O-TsCE OH O F H H H H OHCF O-Et O H H H O-BzH O-BzCG S-CH3O H H H F H OHCH SH O H H H OH H OHCI SH O F H H OH H OHCJ N3O H H H H H H
IDX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′CKNH-(2-Ph-Et) OH H HOHHOHCLOHOOHH HOHHOHCMOHOH H HOHHH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(I-b)和(III-b)的β-D和β-L核苷由表2提供的非限制性實(shí)例代表。
表2 IDX1X2W1R2R2′R3R3′DAOHNH2N H OH H OHDBOHNH2CH F H H OHDCNH-環(huán)己基 HCH H H H HDDNH2HCH H OH H FDENH2HCH H H H H
IDX1X2W1R2R2′R3R3′DFNH2NH2N HOHHOHDGNH2NH2CHHOHHOHDHCl H CHFH HHDICl I CHHO-Ac HO-AcDJCl H CHHOHHOHDKNH2H CHHOHHHDLCl H CHHOHHH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(II-a)和(IV-a)的β-D和β-L核苷由表3提供的非限制性實(shí)例代表。
表3 IDX1Y1R1R1′R2R3EANH-Bz-(m-NO2) O F H HH
IDX1Y1R1R1′R2R3EBNH-Bz-(o-NO2) O F H HHECNH2O F H FH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(II-b)和(IV-b)的β-D和β-L核苷由表4提供的非限制性實(shí)例代表。
表4 ID X1X2W1R2R3FA Cl H CHFHFB OH H CHHHFC NH2F CHHHFD NH2F CHFHFE NH2H CHHHFF OH NH2CHHH
IDX1X2W1R2R3FGOHH CHH H在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(V-a)和(VIII-a)的β-D和β-L核苷由表5提供的非限制性實(shí)例代表。
表5 IDX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′GANH2O F H HOHHOHGBOH H CH3H HH HHGCOH O H H HH HHGDNH2O H H HOHHOHGENH2O H H HH HHGFOH O F H HOHHOHGGNH2O I H HH HH
ID X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′GHNH2O I H H OH H OHGINH2O ClH H OH H OH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(VII-a)和(X-a)的β-D和β-L核苷由表6提供的非限制性實(shí)例代表。
表6 ID X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′HA NH2O H H H OHHOHHB NH2O F H H OHHOHHC NH-OHO H H H OHHOH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(VII-b)和(X-b)的β-D和β-L核苷由表7提供的非限制性實(shí)例代表。
表7 IDX1X2W1R2R2′R3R3′IANH2H CHH OHHOH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XI-a)或(XII-a)的β-D或β-L核苷由表8提供的非限制性實(shí)例代表。
表8 IDX1Y1Z1Z2R1R1’JANH2OO O H HJBNH2OO S F HJCNH2OO O F H在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XII-b)的β-L核苷由表9提供的非限制性實(shí)例代表。
表9 IDX1X2W1Z1Z2KACl H CHOSKBCl NH2CHOSKCNH2F CHOSKDOH H CHOO在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XIII-a)的β-D核苷由表10提供的非限制性實(shí)例代表。
表10 IDY2Y3R1R1′R2R2′R3R3′LAOO F H H OH H OH
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XIII-c)的β-D核苷由表11提供的非限制性實(shí)例代表。
表11 IDY2Y3R1R1′R3R3′MAO O F H HOHMBO O F H HO-MsMCNHO H H HO-Ms IDY2Y3R1R1′R3R3′MAO O F H HOHMBO O F H HO-MsMCNHO H H HO-Ms在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XIII-d)的β-D核苷由表12提供的非限制性實(shí)例代表。
表12 IDY2X3R1R1′R2R2′R3R3′NAO O-CH3H H H O-AcH O-Ac在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XIV)的β-D核苷由表13提供的非限制性實(shí)例代表。
表13 IDX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′L1L2OANH2ONH-OH OHOHH HOHH OHOBOHOO F H OHHOHClO-CH3OCOHOO H H OHHOHBrO-CH3ODOHOO F H OHHOHBrO-COCH3OEOHOO F H OHHOHBrO-CH3OFOHOO F H OHHOHBrO-EtOGOHOO ClH OHHOHBrO-CH3在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XV-a)核苷由表14提供的非限制性實(shí)例代表。
表14 IDY1Z3R1R1′R2R2′R3R3′PAO O H H H OH HOH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XV-b)核苷由表15提供的非限制性實(shí)例代表。
表15 IDX1W1Z3R2R2′R3R3′QANH2CHO H OH H OH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XVI-a)核苷由表16提供的非限制性實(shí)例代表。
表16 IDW3Z4W5W4Z5R2R2′R3R3′RACH NCH3C-OH N C＝OHOHHO-TsRBCH NHC-NH2N C＝OHOHHOHRCCH NHC-NHAcN C＝OHOHHOHRDCH NHC-OH N C＝OHOHHOHRECH NCH3C-NH2N C＝OHOHHOHRFCH NHC-NHBzN C＝OHOHHOHRGCH C＝O C-NH2C-SH NH HOHHOHRHCH NHC-OH N C＝OHClHOHRICH NHC-NH2N C＝OHBrHOH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XVI-c)核苷由表17提供的非限制性實(shí)例代表。
表17 ID W3Z4Z5W4R2R2′R3R3′SA CHN-CH3C＝ON H OHH O-Ac在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XVI-d)核苷由表18提供的非限制性實(shí)例代表。
表18 IDW3Z4Z5W4R3R3′TACHNC＝NHN H OH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XVI-f)核苷由表19提供的非限制性實(shí)例代表。
表19
ID X1X2W1R2R2′R3R3′UA NH2H N H OH H OH在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通式(XVII-d)核苷由表20提供的非限制性實(shí)例代表。
表20 IDX1X2W1X4X5VANH2FCHH OH在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在合適的基于細(xì)胞的測(cè)定中測(cè)試時(shí)，本發(fā)明核苷的EC50(達(dá)到50％病毒抑制的有效濃度)小于15μM，更特別地，小于10或5μM。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核苷是對(duì)映體的富集。
II.立體異構(gòu)現(xiàn)象和多晶現(xiàn)象具有手性中心的本發(fā)明化合物可以以旋光和外消旋形式存在以及被分離出來(lái)。某些化合物可表現(xiàn)出多晶現(xiàn)象。本發(fā)明包括具有本文所述有用性質(zhì)的外消旋、旋光、多晶或立體異構(gòu)體形式的本發(fā)明化合物或其混合物。旋光形式可通過(guò)例如下述方法制得通過(guò)重結(jié)晶技術(shù)拆分外消旋形式，由旋光性原料合成，手性合成，使用手性固定相進(jìn)行色譜分離，或酶拆分。
如下所示，核苷含有至少兩個(gè)關(guān)鍵的手性碳原子(*)。一般情況下，核苷手性碳上的取代基[具體來(lái)說(shuō)是嘌呤或嘧啶堿基(當(dāng)使用糖環(huán)中間體編號(hào)方式時(shí)，稱為C1取代基)和CH2OH(稱為C4中間體)]相對(duì)于糖環(huán)系可以呈順式(在相同一側(cè))或反式(在相反側(cè))。順式和反式外消旋體都由一對(duì)旋光異構(gòu)體組成。因此，每個(gè)化合物具有4個(gè)獨(dú)立的立體異構(gòu)體。這4個(gè)立體異構(gòu)體由下述構(gòu)型代表(當(dāng)在水平面中確定糖部分的方向時(shí)，-O-部分以黑色表示)(1)兩個(gè)基團(tuán)都“在上面”的順式，稱為β-D；(2)鏡像，即兩個(gè)基團(tuán)都“在下面”的順式，鏡像稱為β-L；(3)C4取代基“在上面”，且C1取代基“在下面”的反式(稱為α-D)；和(4)C4取代基“在下面”，且C1取代基“在上面”的反式(稱為α-L)。這兩種順式對(duì)映體一起稱為β-對(duì)映體的外消旋混合物，這兩種反式對(duì)映體一起稱為α-對(duì)映體的外消旋混合物。
本發(fā)明化合物的4種可能的立體異構(gòu)體如下所示。
順式(β) 反式(α)III.定義除非另有說(shuō)明，否則本文所用術(shù)語(yǔ)“烷基”是指飽和直鏈、支鏈或環(huán)狀伯、仲或叔烴，包括但不限于C1-C16烴基，并具體包括甲基、乙基、丙基、異丙基、環(huán)丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、環(huán)戊基、異戊基、新戊基、己基、異己基、環(huán)己基、環(huán)己基甲基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基和2，3-二甲基丁基。烷基可任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列基團(tuán)的部分取代烷基、鹵素、鹵代烷基、羥基、羧基、?；?、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、疊氮基、巰基、亞胺、磺酸、硫酸酯、磺?；?、硫烷基、亞磺?；?、氨磺?；?、酯、羧酸、酰胺、膦?；⒀蹯⒒?、磷酰基、膦、硫代酸酯、硫醚、酰鹵、酸酐、肟、hydrozine、氨基甲酸酯、膦酸、磷酸酯、膦酸酯，或不抑制該化合物藥理活性的任何可使用的其它官能團(tuán)，這些取代基是未保護(hù)或按照需要保護(hù)的，這種保護(hù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，參見(jiàn)例如Greene，等人.，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wileyand Sons，Second Edition，1991，其引入本文以供參考。
除非另有說(shuō)明，否則本文所用術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”是指C1-C4飽和直鏈、支鏈或如果適當(dāng)?shù)脑挱h(huán)狀(例如環(huán)丙基)烷基，包括取代和未取代的形式。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”或“鏈烯基”是指直鏈或支鏈構(gòu)型的飽和烴二基，包括但不限于具有1-10個(gè)碳原子的那些。包括在該術(shù)語(yǔ)范圍內(nèi)的有亞甲基、1，2-乙烷-二基、1，1-乙烷-二基、1，3-丙烷-二基、1，2-丙烷-二基、1，3-丁烷-二基、1，4-丁烷-二基等。本文所公開(kāi)的亞烷基或其它二價(jià)基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代烷基、鹵素、鹵代烷基、羥基、羧基、?；?、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、疊氮基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、巰基、亞胺、磺酰基、硫烷基、亞磺酰基、氨磺酰基、酯、羧酸、酰胺、膦?；?、氧膦基、磷?；㈧?、硫代酸酯、硫醚、酰鹵、酸酐、肟、hydrozine、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯，或不抑制該化合物藥理活性的任何可使用的其它官能團(tuán)，這些取代基是未保護(hù)或按照需要保護(hù)的，這種保護(hù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，參見(jiàn)例如Greene，等人.，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，Second Edition，1991，其引入本文以供參考。
除非另有說(shuō)明，否則本文所用術(shù)語(yǔ)“芳基”是指苯基、聯(lián)苯基或萘基，優(yōu)選苯基。該術(shù)語(yǔ)包括取代和未取代的基團(tuán)。芳基可被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代溴、氯、氟、碘、羥基、疊氮基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸酯、膦酸、磷酸酯或膦酸酯，這些取代基是未保護(hù)或按照需要保護(hù)的，這種保護(hù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，參見(jiàn)例如Greene，等人.，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，Second Edition，1991。
除非另有說(shuō)明，否則本文所用術(shù)語(yǔ)“芳烷基”是指經(jīng)由如上所定義的烷基連接在分子上的如上所定義的芳基。除非另有說(shuō)明，否則本文所用術(shù)語(yǔ)“烷芳基”或“烷基芳基”是指經(jīng)由如上所定義的芳基連接在分子上的如上所定義的烷基。在每個(gè)這些基團(tuán)中，烷基可任選如上所述被取代，且芳基可任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代烷基、鹵素、鹵代烷基、羥基、羧基、?；?、酰氧基、氨基、酰氨基、疊氮基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、巰基、亞胺、磺?；?、硫烷基、亞磺酰基、氨磺?；?、酯、羧酸、酰胺、膦?；⒀蹯⒒?、磷酰基、膦、硫代酸酯、硫醚、酰鹵、酸酐、肟、hydrozine、氨基甲酸酯、膦酸、膦酸酯，或不抑制該化合物藥理活性的任何可使用的其它官能團(tuán)，這些取代基是未保護(hù)或按照需要保護(hù)的，這種保護(hù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，參見(jiàn)例如Greene，等人.，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley and Sons，Second Edition，1991，其引入本文以供參考。具體包括在術(shù)語(yǔ)芳基范圍內(nèi)的有苯基；萘基；苯基甲基；苯基乙基；3，4，5-三羥基苯基；3，4，5-三甲氧基苯基；3，4，5-三乙氧基苯基；4-氯苯基；4-甲基苯基；3，5-二叔丁基-4-羥基苯基；4-氟苯基；4-氯-1-萘基；2-甲基-1-萘基甲基；2-萘基甲基；4-氯苯基甲基；4-叔丁基苯基；4-叔丁基苯基甲基等。
術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”或“芳基氨基”分別是指具有一個(gè)或兩個(gè)烷基或芳基取代基的氨基。
本文所用術(shù)語(yǔ)“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。
在本說(shuō)明書(shū)中使用的術(shù)語(yǔ)“對(duì)映體富集的”描述的是包含至少約95％、優(yōu)選至少96％、更優(yōu)選至少97％、甚至更優(yōu)選至少98％、甚至更優(yōu)選至少約99％或更多的核苷的單一對(duì)映體的核苷。除非另有說(shuō)明，當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中提及特定構(gòu)型(D或L)的核苷時(shí)，假定該核苷是對(duì)映體富集的核苷。
本文所用術(shù)語(yǔ)“宿主”是指病毒可在其中復(fù)制的單細(xì)胞或多細(xì)胞生物體，包括細(xì)胞系和動(dòng)物，優(yōu)選人?；蛘?，宿主可攜帶其復(fù)制或功能可被本發(fā)明化合物改變的一部分病毒基因組。術(shù)語(yǔ)宿主具體指感染的細(xì)胞，用所有或部分病毒基因組轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，和動(dòng)物，特別是靈長(zhǎng)目動(dòng)物(包括黑猩猩)和人。當(dāng)涉及異常細(xì)胞增殖時(shí)，術(shù)語(yǔ)“宿主”是指可在其中模擬異常細(xì)胞增殖的單細(xì)胞或多細(xì)胞生物體。術(shù)語(yǔ)宿主具體指由于自然原因或非自然原因(例如分別由于基因突變或基因工程)而異常增殖的細(xì)胞，和動(dòng)物，特別是靈長(zhǎng)目動(dòng)物(包括黑猩猩)和人。在大多數(shù)本發(fā)明動(dòng)物應(yīng)用中，宿主是人患者。然而，對(duì)于某些適應(yīng)癥，可清楚地預(yù)見(jiàn)到本發(fā)明的獸醫(yī)應(yīng)用(例如在牛中的牛病毒性腹瀉病毒、在豬中的豬霍亂病毒和在綿羊中的border病病毒)。
在本說(shuō)明書(shū)中使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽或前藥”是用于描述任何可藥用形式(例如酯、磷酸酯、酯的鹽或相關(guān)組)的化合物，當(dāng)施用給患者后它們能提供活性化合物?？伤幱名}包括衍生自可藥用無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和酸的那些。合適的鹽包括衍生自堿金屬例如鉀和鈉，堿土金屬例如鈣和鎂，以及藥物領(lǐng)域眾所周知的多種其它酸的那些?？伤幱们八幨侵冈谒拗髦写x例如水解或氧化以形成本發(fā)明化合物的化合物。前藥的典型實(shí)例包括在活性化合物的官能團(tuán)上具有生物不穩(wěn)定保護(hù)基的化合物。前藥包括可氧化、還原、胺化、脫氨基化、羥基化、脫羥基化、水解、脫水、烷基化、脫烷基化、?；?、脫酰化、磷酸化、脫磷酸化以生成活性化合物的化合物。
IV.可藥用鹽和前藥當(dāng)化合物的堿性或酸性足以形成穩(wěn)定的無(wú)毒酸或堿加成鹽時(shí)，將化合物作為可藥用鹽給藥可能是合適的?？伤幱名}包括衍生自可藥用無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和酸的那些。合適的鹽包括衍生自堿金屬例如鉀和鈉，堿土金屬例如鈣和鎂，以及藥物領(lǐng)域眾所周知的多種其它酸的那些。特別是，可藥用鹽的實(shí)例是與形成生理可接受陰離子的酸形成的有機(jī)酸加成鹽，例如甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、α-酮戊二酸鹽和α-甘油磷酸鹽。還可以形成合適的無(wú)機(jī)鹽，包括硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。
可藥用鹽可用本領(lǐng)域眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得，例如通過(guò)將具有足夠堿性的化合物例如胺與能給予生理可接受陰離子的合適的酸反應(yīng)來(lái)獲得。還可以制得羧酸的堿金屬(例如鈉、鉀或鋰)或堿土金屬(例如鈣)鹽。
本文所述的任何核苷都可作為核苷酸前藥施用以提高活性、生物利用度、穩(wěn)定性或改變核苷的性質(zhì)。已知有多種核苷酸前藥配體。一般情況下，核苷的一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯的烷基化、?；蚱渌H脂性修飾將提高核苷酸的穩(wěn)定性?？纱媪姿狨セ鶊F(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫的取代基的實(shí)例是烷基、芳基、甾族化合物、碳水化合物，包括糖、1，2-二?；视秃痛肌.Jones和N.Bischofberger，Antiviral Research，27(1995)1-17中描述了多種取代基。任意這些取代基可以與本發(fā)明所公開(kāi)的核苷聯(lián)合使用以達(dá)到所需效果。
本發(fā)明活性核苷也可以作為如在下述文獻(xiàn)中公開(kāi)的5′-磷醚(phospho ether)脂質(zhì)或5′-醚脂質(zhì)提供，這些文獻(xiàn)引入本文以供參考Kucera，L.S.，N.Iyer，E.Leake，A.Raben，Modest E.K.，D.L.W.，和C.Piantadosi.1990.“抑制感染性HIV-1生成和引起缺損病毒形成的新的膜相互作用醚脂質(zhì)類似物.”AIDS Res.Hum.RetroViruses.6491-501；Piantadosi，C.，J.Marasco C.J.，S.L.Morris-Natschke，K.L.Meyer，F(xiàn).Gumus，J.R.Surles，K.S.Ishaq，L.S.Kucera，N.Iyer，C.A.Wallen，S.Piantadosi，和E.J.Modest.1991.“合成和評(píng)價(jià)新的醚脂質(zhì)核苷綴合物的抗-HIV活性.”J.Med.Chem.341408.1414；Hosteller，K.Y.，D.D.Richman，D.A.Carson，L.M.Stuhmiller，G.M.T.van Wijk，和H.van den Bosch.1992.“3′-脫氧胸苷二磷酸酯二肉豆蔻基甘油-3′-脫氧胸苷的一種脂質(zhì)前藥大大提高了對(duì)1型人免疫缺陷病毒在CEM和HT4-6C細(xì)胞種復(fù)制的抑制作用.”Antimicrob.Agents Chemother.362025.2029；Hosetler，K.Y.，L.M.Stuhmiller，H.B.Lenting，H.van den Bosch，和D.D.Richman，1990.“疊氮胸苷和其它抗病毒核苷的磷脂類似物的合成和抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的活性.”J.Biol.Chem.26561127。
公開(kāi)了可共價(jià)引入到核苷內(nèi)、優(yōu)選引入到核苷5′-OH位置上的合適的親脂性取代基或親脂性制劑的U.S.專利的非限制性實(shí)例包括U.S.專利5,149,794(1992年9月22日，Yatvin等人.)；5,194,654(1993年3月16日，Hostetler等人.)；5,223,263(1993年6月29日，Hostetler等人.)；5,256,641(1993年10月26日，Yatvin等人.)；5,411,947(1995年5月2日，Hostetler等人.)；5,463,092(1995年10月31日，Hostetler等人.)；5,543,389(1996年8月6日，Yatvin等人.)；5,543,390(1996年8月6日，Yatvin等人.)；5,543,391(1996年8月6日，Yatvin等人.)；和5,554,728(1996年9月10日；Basava等人.)，所有這些專利都引入本文以供參考。公開(kāi)了可連接到本發(fā)明核苷上的親脂性取代基或親脂性制劑的國(guó)外專利申請(qǐng)包括WO89/02733、WO 90/00555、WO 91/16920、WO 91/18914、WO 93/00910、WO 94/26273、WO 96/15132、EP 0350287、EP 93917054.4和WO91/19721。
V.藥物組合物基于式(I)-(XXIII)β-D或β-L化合物或其可藥用鹽或前藥的藥物組合物可以以治療黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的治療有效量制得，并任選聯(lián)合使用可藥用添加劑、載體或賦形劑。治療有效量可隨所治療的感染或病癥、其嚴(yán)重程度、所采用的治療方案、所用活性劑的藥動(dòng)學(xué)特征以及所治療的患者而變。
在本發(fā)明的一個(gè)方面，優(yōu)選將本發(fā)明化合物與可藥用載體混合。一般情況下，優(yōu)選以口服給藥形式施用藥物組合物，但是制劑也可以通過(guò)非胃腸道、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、透皮、頰、皮下、栓劑或其它途徑給藥。靜脈內(nèi)和肌內(nèi)制劑優(yōu)選在無(wú)菌鹽水中給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員可修飾在本說(shuō)明書(shū)教導(dǎo)內(nèi)的制劑以提供適于特定給藥途徑，同時(shí)不導(dǎo)致本發(fā)明組合物不穩(wěn)定或不破壞其治療活性的多種制劑。特別是，為了使其更溶于水或其它載體而對(duì)所需化合物作的修飾可通過(guò)例如常規(guī)修飾(成鹽、酯化等)來(lái)容易地完成。
在一些藥物劑型中，前藥形式的化合物，尤其包括?；?乙?；蚱渌；?和醚衍生物、磷酸酯和各種鹽形式的本發(fā)明化合物是優(yōu)選的。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道如何方便地將本發(fā)明化合物修飾成前藥形式以有助于將活性化合物遞送到宿主生物體或患者內(nèi)的靶位點(diǎn)上。本領(lǐng)域技術(shù)人員還知道利用適用的前藥形式的有利藥動(dòng)學(xué)參數(shù)以將所需化合物遞送到宿主生物體或患者內(nèi)的靶位點(diǎn)上，從而實(shí)現(xiàn)化合物治療黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的最大預(yù)期作用。
包括在本發(fā)明治療活性制劑中的化合物的量是治療感染或病癥的有效量，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，是治療黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的有效量。一般情況下，根據(jù)所用的化合物、所治療的病癥或感染以及給藥途徑，本發(fā)明化合物在藥物劑型中的治療有效量通常為約0.1mg/kg-約100mg/kg或更多。對(duì)于本發(fā)明目的，本發(fā)明組合物的預(yù)防有效量在上述治療有效量的相同濃度范圍內(nèi)，并且通常與治療有效量相同。
本發(fā)明活性化合物的給藥可以從連續(xù)給藥(靜脈內(nèi)滴注)到每天口服給藥數(shù)次(例如Q.I.D.、B.I.D.等)不等，并且可包括口服、局部、非胃腸道、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、透皮(可包含滲透促進(jìn)劑)、頰和栓劑給藥以及其它給藥途徑。也可以使用腸包衣口服片劑來(lái)提高通過(guò)口服途徑施用的化合物的生物利用度和穩(wěn)定性。最有效的劑型將取決于所選特定治療劑的藥動(dòng)學(xué)特征以及患者疾病的嚴(yán)重程度。由于便于給藥和可預(yù)見(jiàn)的患者良好配合，口服劑型是特別優(yōu)選的。
為了制備本發(fā)明藥物組合物，優(yōu)選依據(jù)常規(guī)藥物混合技術(shù)將治療有效量的一種或多種本發(fā)明化合物與可藥用載體混合以制得劑型。根據(jù)給藥例如口服或非胃腸道給藥所需的制劑形式，載體可呈多種形式。在制備口服劑型形式的藥物組合物時(shí)，可使用任何常規(guī)藥物介質(zhì)。因此，對(duì)于液體口服制劑例如懸浮液、酏劑和溶液，可使用合適的載體和添加劑，包括水、二醇、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑等。對(duì)于固體口服制劑例如粉劑、片劑、膠囊以及固體制劑例如栓劑，可使用合適的載體和添加劑，包括淀粉，糖載體例如葡萄糖、甘露醇、乳糖和相關(guān)載體，稀釋劑、制粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。如果需要的話，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)給片劑或膠囊包上腸溶衣以持續(xù)釋放。使用這些劑型可顯著影響化合物在患者中的生物利用度。
對(duì)于非胃腸道給藥制劑，載體通常包括無(wú)菌水或氯化鈉水溶液，還可以包括其它組分，包括輔助分散的組分。當(dāng)使用無(wú)菌水并且保持無(wú)菌狀態(tài)時(shí)，組合物和載體必須也是無(wú)菌的。還可以制備可注射的懸浮液，其中可使用合適的液體載體、懸浮劑等。
還可以通過(guò)常規(guī)方法制備脂質(zhì)體懸浮液(包括以病毒抗原為靶向的脂質(zhì)體)以獲得可藥用載體。這可適于遞送游離核苷、?；塑栈蛄姿狨デ八幮问降谋景l(fā)明核苷化合物。
在特別優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案中，使用本發(fā)明化合物和組合物來(lái)治療、預(yù)防或延遲黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的發(fā)作。優(yōu)選地，為了治療、預(yù)防或延遲所述感染或病癥的發(fā)作，將組合物在口服劑型中以每天約250微克至最高達(dá)約1克或更高的量施用，每天給藥至少一次，優(yōu)選每天給藥最高達(dá)4次。本發(fā)明化合物優(yōu)選口服給藥，但是可以非胃腸道給藥、局部給藥或以栓劑形式給藥。
由于在一些情況下對(duì)宿主細(xì)胞的毒性很低，所以本發(fā)明化合物可有利地預(yù)防性地使用來(lái)預(yù)防黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥，或者預(yù)防出現(xiàn)與所述病毒感染或病癥有關(guān)的臨床癥狀。因此，本發(fā)明還包括預(yù)防性地治療病毒感染，特別是黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的方法。在本發(fā)明的該方面中，使用本發(fā)明組合物來(lái)預(yù)防或延遲黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的發(fā)生。該預(yù)防方法包括給需要這樣的治療的患者或有發(fā)展成所述病毒感染或病癥的危險(xiǎn)性的患者施用減輕、預(yù)防或延遲所述病毒感染或病癥發(fā)作有效量的本發(fā)明化合物。在依據(jù)本發(fā)明的預(yù)防性治療中，所用的抗病毒或抗增殖化合物應(yīng)當(dāng)具有低的毒性，并優(yōu)選對(duì)患者沒(méi)有毒性。在本發(fā)明該方面中特別優(yōu)選的是，所用的化合物應(yīng)當(dāng)最大有效地抗病毒或病癥，并且應(yīng)當(dāng)對(duì)患者表現(xiàn)出最小毒性。對(duì)于黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥，可用于治療這些疾病狀態(tài)的本發(fā)明化合物可以以與作為預(yù)防劑預(yù)防黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染的增殖或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥，或延長(zhǎng)自身表現(xiàn)出臨床癥狀的黃病毒科(包括HCV)、正粘病毒科(包括甲型流感病毒和乙型流感病毒)、副粘病毒科(包括RSV)病毒感染或與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥的發(fā)作所用治療性治療相同的劑量范圍施用(即對(duì)于口服劑型，每天約250微克至最多1克或更多，每天給藥1-4次)。
此外，本發(fā)明化合物可以與一種或多種抗病毒劑、抗HBV劑、抗HCV劑或抗皰疹劑或干擾素、抗癌劑或抗菌劑，包括其它本發(fā)明化合物聯(lián)合或者交替施用。一些本發(fā)明化合物可通過(guò)降低其它化合物的代謝、異化或失活而有效地提高一些本發(fā)明活性劑的生物活性，因此對(duì)于該預(yù)期作用可聯(lián)合給藥。
在下述部分中進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明。提供實(shí)驗(yàn)詳述部分和包含在其中的實(shí)施例是為了幫助理解本發(fā)明。這部分不是為了，并且也不應(yīng)當(dāng)理解為以任何方式限制如在其后的權(quán)利要求書(shū)中所提出的本發(fā)明范圍。
VI.治療黃病毒科病毒感類的療法已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，用抗病毒劑長(zhǎng)期治療后，可出現(xiàn)抗藥性病毒變種?？顾幮宰钔ǔ５厥怯捎诰幋a病毒復(fù)制周期所用酶-最通常地，對(duì)于HCV，是RNA-依賴性-RNA聚合酶-的基因發(fā)生突變所致。已經(jīng)證實(shí)，通過(guò)與第二種、也許是第三種誘導(dǎo)與主要藥物所引起的突變不同的突變的抗病毒化合物聯(lián)合或交替施用本發(fā)明化合物，可延長(zhǎng)、增強(qiáng)或恢復(fù)抗病毒感染藥物的效力?；蛘?，通過(guò)這樣的聯(lián)合或交替療法可改變藥物的藥動(dòng)學(xué)、生物分布或其它參數(shù)。一般情況下，與交替療法相比，聯(lián)合治療是更優(yōu)選的，因?yàn)槠渫瑫r(shí)引起多種對(duì)病毒的抑制。
已經(jīng)鑒定出具有抗丙型肝炎病毒活性，并因此可以與一種或多種通式(I)-(XXIII)核苷聯(lián)合或交替使用的活性劑的實(shí)例包括(a)干擾素和利巴韋林(Battaglia，A.M.等人.Ann.Pharmacother.2000，34，487；Berenguer，M.等人.Antivir.Ther.1998，3(Suppl.3)，125)；(b)基于底物的NS3蛋白酶抑制劑(Attwood等人.PCT WO 98/22496，1998；Attwood等人.Antiviral Chemistry and Chemotherapy1999，10，259；Attwood等人.德國(guó)專利公開(kāi)DE 19914474；Tung等人.PCT WO98/17679)，包括α-酮基酰胺類和肼基脲類，以及末端是親電體例如硼酸或膦酸酯的抑制劑(Llinas Brunet等人.PCT WO 99/07734)；(c)非基于底物的抑制劑例如2，4，6-三羥基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等人.，Biochemical and Biophysical ResearchCommunications，1997，238，643和Sudo K.等人.Antiviral Chemistryand Chemotherapy1998，9，186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前者在酰胺上被具有14個(gè)碳的鏈取代，后者具有對(duì)苯氧基苯基；(d)在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物進(jìn)行的反相HPLC測(cè)定中表現(xiàn)出相關(guān)抑制作用的噻唑烷衍生物(Sudo K.等人，Antiviral Research1996，32，9)，尤其是具有被長(zhǎng)烷基鏈取代的稠合肉桂?；糠值幕衔颮D-1-6250、RD4 6205和RD4 6193；(e)在Kakiuchi N.等人.J.EBS Letters421，217和Takeshita N.等人.Analytical Biochemistry1997，247，242中確定的噻唑烷類化合物和苯甲?；桨奉惢衔铮?f)在SDS-PAGE和放射自顯影測(cè)定中具有抗HCV蛋白酶活性的從鏈霉菌屬發(fā)酵培養(yǎng)肉湯中分離出來(lái)的菲醌化合物Sch 68631(Chu M.等人.Tetrahedron Letters1996，37，72 29)，和在閃爍親近測(cè)定中表現(xiàn)出活性的從真菌Penicillium griscofuluum中分離出來(lái)的Sch351633(Chu M.等人.，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters9，1949)；(g)基于大分子elgin c的從水蛭中分離出來(lái)的選擇性NS3抑制劑(Qasim M.A.等人.Biochemistry 1997，36，1598)；(h)HCV解旋酶抑制劑(Diana G.D.等人.，U.S.專利5,633,358和DianaG.D.等人.PCT WO 97/36554)；(i)HCV聚合酶抑制劑例如核苷酸類似物、膠霉毒素(Ferrari R.等人.Journal of Virology1999，73，1649)和天然產(chǎn)物淺藍(lán)菌素(LohmannV.等人.Virology1998，249，108)；(j)與下列序列互補(bǔ)的反義硫代磷酸寡脫氧核苷酸(S-ODN)至少一部分HCV的序列(Anderson等人.U.S.專利6,174,868)，特別是在5′非編碼區(qū)域(NCR)中延伸的序列(Alt M.等人.Hepatology 1995，22，707)，或包含NCR的3′末端的核苷酸326-348和位于HCV RNA的核編碼區(qū)域中的核苷酸371-388(Alt M.等人.Archives of Virology1997，142，589和Galderisi U.等人.，Journal of Cellular Physiology1999，812151)；(k)IRES-依賴性翻譯抑制劑(Ikeda N等人.日本專利公開(kāi)JP-08268890；Kai Y.等人.日本專利公開(kāi)JP-10101591)；(l)核酸酶-抗性核酶(Maccjak D.J.等人.，Hepatology 1999，30，abstract 995)；(m)金剛烷胺例如金剛乙胺(Smith，Abstract from Annual Meeting ofthe American Gastoenterological Association and AASLD，1996)；(n)喹諾酮類例如氧氟沙星、環(huán)丙沙星和左氟沙星(AASLD Abstracts，Hepatology，Oct.1994，Program Issue，20(4)，pt.2，abstractno.293)；(o)核苷類似物(Ismaili等人.WO 01/60315；Storer WO 01/32153)，包括2′-脫氧-L-核苷(Watanabe等人.WO 01/34618)和1-(β-L-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺(levovirinTM)(Tam WO 01/46212)；和
(p)其它各種化合物，包括1-氨基-烷基環(huán)己烷(Gold等人.U.S.專利6,034,134)、烷基脂類(Chojkier等人.U.S.專利5,922,757)、維生素E和其它抗氧化劑(Chojkier等人.U.S.專利5,922,757)、角鯊烯、膽汁酸(Ozeki等人.U.S.專利5,846,964)、N-(膦?；阴；?-L-天冬氨酸(Diana等人.U.S.專利5,830,905)、苯二甲酰胺類(Diana等人.U.S.專利5,633,388)、多聚腺苷酸衍生物(Wang等人.U.S.專利5,496,546)、2′，3′-二脫氧肌苷(Yarchoan等人.U.S.專利5,026,687)、苯并咪唑類(Colacino等人.U.S.專利5,891,874)、葡糖胺類(Mueller等人.WO 01/08672)、取代的-1，5-亞氨基-D-山梨醇(glucitol)化合物(Mueller等人.WO 00/47198)。
VII.治療正粘病毒科病毒感染的療法已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，用抗病毒劑長(zhǎng)期治療后，可出現(xiàn)流感病毒的抗藥性變種。抗藥性最通常地是由于編碼病毒復(fù)制周期所用酶的基因發(fā)生突變，導(dǎo)致抗原轉(zhuǎn)變或漂移所致。已經(jīng)證實(shí)，通過(guò)與第二種、也許是第三種誘導(dǎo)與主要藥物所引起的突變不同的突變的抗病毒化合物聯(lián)合或交替施用本發(fā)明化合物，可延長(zhǎng)、增強(qiáng)或恢復(fù)抗流感病毒感染藥物的效力?；蛘?，通過(guò)這樣的聯(lián)合或交替療法可改變藥物的藥動(dòng)學(xué)、生物分布或其它參數(shù)。一般情況下，與交替治療相比，聯(lián)合治療是更優(yōu)選的，因?yàn)槠渫瑫r(shí)引起多種對(duì)病毒的抑制。
已經(jīng)鑒定出具有抗流感病毒活性，并因此可以與一種或多種通式(I)-(XXIII)核苷聯(lián)合或交替使用的活性劑的實(shí)例包括(a)放線菌素D(Barry，R.D.等人.“脫氧核糖核酸參與流感病毒增殖”Nature，1962，194，1139-1140)；(b)金剛烷胺(Van Voris，L.P.等人.“用于化學(xué)預(yù)防和治療流感的抗病毒劑”Semin Respir Infect，1992，7，61-70)；(c)4-氨基-或4-胍基-2-脫氧-2，3-二去氫-D-N-乙酰神經(jīng)氨酸-4-氨基-或4-胍基-Neu 5 Ac2en(von Itzstein，M.等人.“流感病毒復(fù)制的基于唾液酸酶的有效抑制劑的合理設(shè)計(jì)”Nature，1993，363，418-423)；(d)利巴韋林(Van Voris，L.P.等人.“用于化學(xué)預(yù)防和治療流感的抗病毒劑”Semin Respir Infect，1992，7，61-70)；(e)干擾素(Came，P.E.等人.“干擾素引起的合成聚合物的抗病毒活性”P(pán)roc Soc Exp Biol Med，1969，131，443-44 6；Gerone，P.J.等人.“用合成雙鏈核糖核酸的氣霧劑抑制小鼠的呼吸道病毒感染”Infect Immun，1971，3，323-327；Takano，K.等人.“小鼠流感中的被動(dòng)干擾素保護(hù)”J Infect Dis，1991，164，969-972)；(f)滅活的甲型和乙型流感病毒疫苗(“流感疫苗的臨床研究-1978”Rev Infect Dis，1983，5，721-764；Galasso，G.T.等人.“流感疫苗的臨床研究-1976”J Infect Dis，1977，136(suppl)，S341-S746；Jennings，R.等人.“志愿者對(duì)滅活的流感病毒疫苗的反應(yīng)”J Hyg，1981，86，1-16；Kilbourne，E.D.“滅活的流感疫苗”InPlothin SA，Mortimer EA，eds.VaccinesPhi1adelphiaSaunders，1988，420-434；Meyer，H.M.，Jr.等人.“現(xiàn)有流感疫苗綜述”Am J ClinPathol，1978，70，146-152；“每周死亡率和發(fā)病率報(bào)告.預(yù)防和控制流感第I部分，疫苗.Recommendations of the Advisory Committeeon Immunication Practices(ACIP)”MMWR，1993，42(RR-6)，1-14；Palache，A.M.等人.“用不同劑量的疫苗進(jìn)行流感免疫接種后的抗體反應(yīng)在老年療養(yǎng)院和年輕志愿者中進(jìn)行的雙盲、安慰劑對(duì)照、多中心、劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)”Vaccine，1993，11，3-9；Potter，C.W.“滅活的流感病毒疫苗”InBeare AS，ed.Basic and applied influezaresearch，Boca Raton，F(xiàn)LCRC Press，1982，119-158)。
VIII.治療副粘病毒科病毒感染的療法已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，用抗病毒劑長(zhǎng)期治療后，可出現(xiàn)RSV的抗藥性變種?？顾幮宰钔ǔ５厥怯捎诰幋a病毒復(fù)制周期所用酶的基因發(fā)生突變所致。已經(jīng)證實(shí)，通過(guò)與第二種、也許是第三種誘導(dǎo)與主要藥物所引起的突變不同的突變的抗病毒化合物聯(lián)合或交替施用本發(fā)明化合物，可延長(zhǎng)、增強(qiáng)或恢復(fù)抗RSV感染藥物的效力?；蛘撸ㄟ^(guò)這樣的聯(lián)合或交替療法可改變藥物的藥動(dòng)學(xué)、生物分布或其它參數(shù)。一般情況下，與交替療法相比，聯(lián)合治療一般是更優(yōu)選的，因?yàn)槠渫瑫r(shí)引起多種對(duì)病毒的抑制。
已經(jīng)鑒定出具有抗RSV活性，并因此可以與一種或多種通式(I)-(XXIII)核苷聯(lián)合或交替使用的活性劑的實(shí)例包括(a)利巴韋林(Hruska，J.F.等人.“通過(guò)利巴韋林在體內(nèi)抑制呼吸道合胞體病毒”Antimicrob Agents Chemother，1982，21，125-130)；和(b)純化的人靜脈內(nèi)IgG-IVIG(Prince，G.A.等人.“在棉大鼠呼吸道合胞體病毒感染的實(shí)驗(yàn)免疫治療中局部施用的中和性抗體的有效性”J Virol，1987，61，1851-1954；Prince，G.A.等人.“免疫預(yù)防和免疫治療棉大鼠中的呼吸道合胞體病毒感染”Infect Immun，1982，42，81-87)。
IX.治療異常細(xì)胞增殖的療法已經(jīng)鑒定出具有抗異常細(xì)胞增殖活性，并因此可以與一種或多種通式(I)-(XXIII)核苷聯(lián)合或交替使用的活性劑的實(shí)例包括A.烷化劑氮芥類氮芥(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺(急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、維爾姆斯瘤、子宮頸、睪丸、軟組織肉瘤)、馬法蘭(L-苯丙氨酸氮芥)(多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌)、瘤可寧(慢性淋巴細(xì)胞白血病、原發(fā)性巨球蛋白血癥、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)。
乙烯亞胺類和甲基蜜胺類六甲蜜胺(卵巢癌)、噻替哌(膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌)。
烷基磺酸酯類白消安(慢性粒細(xì)胞性白血病)。
亞硝基脲卡氮芥(BCNU)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)性腦腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤、惡性黑素瘤)、羅氮芥(CCNU)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、原發(fā)性腦腫瘤、小細(xì)胞肺癌)、甲環(huán)亞硝脲(甲基-CCNU)(原發(fā)性腦腫瘤、胃癌、結(jié)腸癌)、鏈脲霉素(STR)(惡性胰腺胰島瘤、惡性類癌瘤)。
三氮烯屬達(dá)卡巴嗪(DTIC；二甲基三氮烯基咪唑甲酰胺)(惡性黑素瘤、霍奇金病、軟組織肉瘤)。
B.抗代謝物葉酸類似物甲氨蝶呤(氨甲蝶呤)(急性淋巴細(xì)胞白血病、絨膜癌、蕈樣真菌病、乳腺癌、頭頸癌、肺癌、骨原性肉瘤)。
嘧啶類似物氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脫氧尿苷；FUdR)(乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、頭頸癌、泌尿膀胱癌、惡化惡習(xí)前皮膚損害)(局部)、阿糖胞苷(阿糖胞苷)(急性粒細(xì)胞和急性淋巴細(xì)胞白血病)。
嘌呤類似物和相關(guān)抑制劑巰基嘌呤(6-巰基嘌呤；6-MP)(急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病和慢性粒細(xì)胞白血病)、硫鳥(niǎo)嘌呤(6-硫鳥(niǎo)嘌呤；TG)(急性粒細(xì)胞白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性粒細(xì)胞白血病)、噴司他丁(2′-deoxycyoformycin)(多毛細(xì)胞白血病、蕈樣真菌病、慢性淋巴細(xì)胞白血病)。
長(zhǎng)春花屬生物堿長(zhǎng)春花堿(VLB)(霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、睪丸癌)、長(zhǎng)春新堿(急性淋巴細(xì)胞白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、維爾姆斯瘤、橫紋肌肉瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、小細(xì)胞肺癌)。
表鬼臼毒素依托泊苷(睪丸癌、小細(xì)胞肺癌和其它肺癌、乳腺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性粒細(xì)胞白血病、卡波西肉瘤)、替尼泊苷(睪丸癌、小細(xì)胞肺癌和其它肺癌、乳腺癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性粒細(xì)胞白血病、卡波西肉瘤)。
C.天然產(chǎn)物抗生素更生霉素(放線菌素D)(絨膜癌、維爾姆斯瘤、橫紋肌肉瘤、睪丸癌、卡波西肉瘤)、柔紅霉素(道諾霉素；正定霉素)(急性粒細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病)、阿霉素(軟組織肉瘤、骨原性肉瘤和其它肉瘤；霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、急性白血病、乳腺癌、泌尿生殖器癌、甲狀腺癌、肺癌、胃癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤)、博萊霉素(睪丸癌、頭頸癌、皮膚和食道癌、肺癌和泌尿生殖道癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤)、普卡霉素(光輝霉素)(睪丸癌、惡性高鈣血)、絲裂霉素(自力霉素C)(胃癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、頭頸癌)。
酶L-天冬酰胺酶(急性淋巴細(xì)胞白血病)。
生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑α-干擾素(多毛細(xì)胞白血病、卡波西肉瘤、黑素瘤、類癌瘤、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤、蕈樣真菌病，多發(fā)性骨髓瘤、慢性粒細(xì)胞白血病)。
D.各種治療劑鉑配位絡(luò)合物順鉑(順式-DDP)、卡鉑(睪丸癌、卵巢癌、膀胱癌、頭頸癌、肺癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、骨原性肉瘤)。
蒽二酮類Mixtozantrone(急性粒細(xì)胞白血病、乳腺癌)。
取代的脲類羥基脲(慢性粒細(xì)胞白血病、紅細(xì)胞增多癥、特發(fā)性血小板增多癥、惡性黑素瘤)。
甲基肼衍生物丙卡巴肼(N-甲基肼，MIH)(霍奇金病)。
腎上腺皮質(zhì)抑制劑米托坦(o，p′-DDD)(腎上腺皮層癌)、氨魯米特(乳腺癌)。
腎上腺類皮質(zhì)激素類強(qiáng)的松(急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、乳腺癌)。
孕激素類己酸羥孕酮、乙酸甲羥孕酮、乙酸甲地孕酮(子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌)。
E.抗血管生成劑Angiostatin、Endostatin。
F.激素和拮抗劑雌激素類己烯雌酚、乙炔雌二醇(乳腺癌、前列腺癌)。
抗雌激素類他莫昔芬(乳腺癌)。
雄激素類丙酸睪酮、氟甲睪酮(乳腺癌)。
抗雄激素類氟他胺(前列腺癌)。
促性腺素釋放激素類似物亮丙瑞林(前列腺癌)。
X.合成方案式(I)-(XXIII)化合物可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法合成。特別是，這些化合物可通過(guò)3條不同途徑制得(a)由預(yù)形成的核苷合成，(b)將修飾的糖或未修飾的核糖與嘌呤或嘧啶縮合，和(c)這兩條途徑的聯(lián)合。因?yàn)樵诤塑疹惪股赜枷x(chóng)草菌素中發(fā)現(xiàn)了3-脫氧-D-赤呋喃戊糖結(jié)構(gòu)，所以在二十世紀(jì)六十年代報(bào)道了很多有關(guān)該抗生素的全合成(參見(jiàn)Lee，W.W.等人.J.Am.Chem.Soc.，1961，83，1906；Walton，E.等人.J.Am.Chem.Soc.，1964，86，2952；Suhadolnik，R.J.等人.Carbohydr.Res.，1968，61，545；Ikehara，M.等人.Chem.Pharm.Bull.，1967，15，94；Kaneko，M.等人.Chem.Pharm.Bull.1972，20，63)。在優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方案中，由預(yù)形成的核苷類制備3′-脫氧核苷是以下述方法進(jìn)行的A.Ia-c和IIIa-c型化合物(i)由預(yù)形成的核苷類合成按照Marumoto，R等人，Chem.Pharm.Bull.1974，22，128的教導(dǎo)，該文獻(xiàn)描述了用乙酰溴處理N4-乙?；找陨?′，5′-二-O-乙?；?3′-溴-3′-脫氧-β-D-呋喃木糖基-胞嘧啶(2，R＝Ac)，可如反應(yīng)方案1所示將N4-保護(hù)的胞苷核苷類衍生化以形成嘧啶核苷類(I-a)。
反應(yīng)方案1 可用酰鹵例如乙酰溴處理N4-保護(hù)的-D-胞苷核苷1以生成相應(yīng)的3′-鹵代-木糖型-核苷2。將2去乙?；陨?，然后還原脫鹵，獲得了所需的3′-脫氧胞苷衍生物4。用酸，優(yōu)選煮沸的乙酸水溶液處理2，生成了相應(yīng)的保護(hù)的尿嘧啶核苷5，可將5容易地轉(zhuǎn)化成游離3′-溴-木糖型核苷6a，通過(guò)還原脫溴可由6a獲得3′-脫氧尿苷衍生物6b。按照類似方法，由N4-保護(hù)的-L-胞苷開(kāi)始可合成4和6的L-對(duì)映體(III-a)。
在制備核苷類化合物I-a的另一個(gè)實(shí)施方案中，將核糖核苷進(jìn)行2′，5′-二-O-三苯甲基化，生成了7(R2′＝R5′＝Tr)，將其轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的3′-O-甲磺酸酯8(反應(yīng)方案2)。用稀的氫氧化鉀或氫氧化鈉處理8，經(jīng)由脫水核苷9生成了相應(yīng)的木糖型衍生物10，將其去-O-三苯甲基化后，獲得了12。將10甲磺?；?，然后去-O-三苯甲基化，生成了3′-O-甲磺?；咎切?核苷。用溴化鋰或碘化鈉處理8，經(jīng)由9形成了相應(yīng)的3′-脫氧-3′-鹵代衍生物11，將其去-O-三苯甲基化，然后氫解，將11轉(zhuǎn)化成了所需的3′-脫氧尿苷衍生物6b。按照類似方法，由L-核糖核苷開(kāi)始，可合成4和6的L-核苷(III-a)對(duì)應(yīng)物。
反應(yīng)方案2 制備I-b型化合物-嘌呤核苷的一個(gè)實(shí)例是合成3′-脫氧嘌呤核苷類化合物(反應(yīng)方案3)。用2-甲氧基異丁酰鹵(X＝Cl或Br)處理核糖核苷13，生成了3′-鹵代-呋喃木糖基和2′-鹵代-阿拉伯呋喃糖基衍生物(14和15)的混合物。氫解，然后色譜分離，獲得了相應(yīng)的3′-脫氧核苷17和2′-脫氧核苷16。將17皂化，獲得了獲得了所需的3′-脫氧核苷20。用堿處理14與15的反應(yīng)混合物，以定量產(chǎn)率生成了單環(huán)氧化物18，用碘化銨或碘化鈉處理后，僅獲得了3′-木糖型碘化物19。將19氫解，獲得了20。用還原劑例如阮內(nèi)鎳、氫化鋰鋁或硼氫化鈉將18還原，也生成20。
按照類似方法，由嘌呤L-核糖核苷開(kāi)始，可合成屬于III-b的20的L-核苷對(duì)應(yīng)物。
反應(yīng)方案3 為了合成式I-c化合物，原料是5-硝基嘧啶或吡啶核苷(反應(yīng)方案4)。在溶劑例如醇或二甲基甲酰胺中于20℃-100℃、優(yōu)選25℃-80℃溫度范圍下，用疊氮化物離子處理5-硝基尿苷(21，參見(jiàn)上文)。疊氮化物離子親核攻擊21的C-6，形成了酸式-硝基鹽22，鹽22環(huán)合生成23。將23中和，生成了二環(huán)核苷24。
反應(yīng)方案4 (ii)通過(guò)將合適的糖與堿縮合來(lái)合成合適的糖衍生物必須通過(guò)與所選的堿縮合來(lái)制得。雖然有幾種合成3-脫氧-D-赤呋喃戊糖(3-脫氧-D-呋喃核糖)衍生物的方法(參見(jiàn)Lee，W.W.等人.J.Am.Chem.Soc.，1961，83，1906；Walton，E.等人.J.Am.Chem.Soc.，1964，86，2952；Lin，T.S.等人.J.Med.Chem.，1991，34，693；Ozols，A.M.等人.Synthesis，1980，557)，但是本發(fā)明開(kāi)發(fā)了如反應(yīng)方案5所示的新方法。
反應(yīng)方案5 將1，2-O-亞異丙基-5-O-甲氧基羰基-α-D-呋喃木糖(25)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的3-硫代羰基衍生物26，然后在自由基引發(fā)劑例如2，2′-偶氮二異丁腈存在下使用三烷基氫化錫進(jìn)行自由基脫氧。用乙酸、乙酸酐和硫酸的混合物將脫氧產(chǎn)物27?；?，生成28，然后通過(guò)Vorbruggen′s方法(參見(jiàn)Niedballa，U.等人.J.Org.Chem.，1976，41，2084；Vorbruggen，H.等人.Chem.Ber.，1981，114，1234；Kazinierczuk，Z.等人.J.Am.Chem.Soc.，1984，106，6379)將其與甲硅烷化的堿縮合，獲得了嘧啶核苷29(I-a型)或相關(guān)的嘌呤核苷(I-b型)。或者可用其它?；绫郊柞；?duì)硝基苯甲酰基、對(duì)氯苯甲?；?qū)籽趸郊柞；约捌渌坠柰榛缡宥』谆坠柰榛蚴宥』交鶎?-OH保護(hù)。類似地，可將L-木糖轉(zhuǎn)化成25的L-糖對(duì)應(yīng)物，之后可將其進(jìn)一步衍生化以獲得30的L-核苷。
或者，如反應(yīng)方案6所示，可在吡啶中用甲磺酰氯、甲苯磺酰氯或三氟乙磺酰氯將1，2-O-亞異丙基-5-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-α-D-呋喃木糖(31)磺?；垣@得32。將32進(jìn)行甲醇分解后，可用堿例如甲醇鈉的甲醇溶液處理甲基木糖苷33，以獲得核糖-環(huán)氧化物34。用氫化鋰鋁打開(kāi)環(huán)氧化物34，立體選擇性地生成了3-脫氧糖36。在丙酮或2-丁酮中用溴化鋰或碘化鈉處理34，生成了3-鹵代-3-脫氧木糖苷35。將35還原脫鹵，獲得了36。用氟離子源例如三正丁基氟化銨的四氫呋喃溶液或三乙基氟化氫銨除去5′-甲硅烷基保護(hù)基，生成了37。在硫酸存在下用乙酸酐和乙酸將37?；闪巳?O-乙?；?3-脫氧-D-呋喃核糖38。還可以通過(guò)氟化物處理將33轉(zhuǎn)化成39，經(jīng)過(guò)乙?；?，獲得了40?？墒褂肰orbrueggen′s方法將這些乙酰化的糖38和40與全三甲基甲硅烷基化的嘧啶或嘌呤堿縮合，以生成3′-修飾的核苷。叔丁基二苯基甲硅烷基保護(hù)基可用叔丁基二甲基甲硅烷基代替。
反應(yīng)方案6 (iii)合成后修飾(1-6)(a)在嘧啶核苷的C-4上修飾(I-a和III-a)將28或38與尿嘧啶或5-取代的尿嘧啶縮合后，在吡啶中用五硫化磷或者在甲苯中用Lawesson′s試劑處理保護(hù)的3′-脫氧尿苷衍生物(29，R5′＝CH3OCO，R2′＝Ac或R5′＝R2′＝Ac)以生成4-硫尿嘧啶核苷41，通過(guò)用氨處理將41轉(zhuǎn)化成3′-脫氧胞苷(43，R1＝R2＝H)。或者，在堿中用甲基碘或者硫酸二甲酯將41甲基化，生成了4-S-甲基衍生物42。用各種親核試劑置換42的4-S-甲基，獲得了相應(yīng)的N4-取代的3′-脫氧胞苷43。還可以將29轉(zhuǎn)化成4-(三唑-2-基)衍生物44，可將44與氨或各種胺反應(yīng)以生成43。或者，用各種醇或苯酚處理44，以獲得相應(yīng)的4-O-取代的-3′-脫氧尿苷。
反應(yīng)方案7 或者，將尿嘧啶核苷例如糖-保護(hù)的尿苷45(R＝H)轉(zhuǎn)化成4-(甲基咪唑鎓)46(反應(yīng)方案8)或4-O-(2，4，6-三異丙基苯磺酰基)中間體47，然后用親核試劑例如羥基胺處理，以生成相應(yīng)的C-4修飾的核苷，例如N4-羥基胞苷(48，R＝H)。
反應(yīng)方案8 按照類似方法，由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始可制得相應(yīng)的III-a核苷。(b)在嘧啶核苷的C-5上修飾(I-a和III-a)(i)鹵化(反應(yīng)方案9)可用氟化劑將3′-脫氧尿苷(6，R＝H)氟化，氟化劑的某些非限制性實(shí)例包括在乙酸中的氟、在一種或多種惰性溶劑例如四氫呋喃中的selectfluor或在醇中的氟磺酸(fluoroxisulfate)銫(參見(jiàn)Stovber，S.等人.J.Chem.Soc.Chem.Commun.，1983，563)，以生成5-氟-3′-脫氧尿苷(49)。使用合適的N-鹵代琥珀酰亞胺獲得5-氯、5-溴和5-碘尿苷衍生物(50-52)。于氧化劑例如硝酸存在下在水中用溴或者在乙酸中用碘處理6，分別獲得了5-溴-或5-碘-尿嘧啶核苷。還可以將胞嘧啶衍生物43(R＝H)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的5-鹵代衍生物(44-56)。5-氟-3′-脫氧胞苷(53，R＝H)是通過(guò)將28或38與5-氟胞嘧啶縮合，然后皂化而制得的。
反應(yīng)方案9 按照類似方法，由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，可制得相應(yīng)的III-a核苷。反應(yīng)方案10描述了通過(guò)用碳酸氫鈉溶液處理將溴化的化合物51轉(zhuǎn)化成5-羥基-3′-脫氧尿苷(63)。用烷基碘和堿將55烷基化，獲得了62。51與堿金屬氰化物的延長(zhǎng)反應(yīng)生成了5-氰基-尿嘧啶衍生物57，可將其水合以生成5-羧酰胺58和5-羧酸59。將59轉(zhuǎn)化成烷基酯60，然后用硼氫化鈉還原，生成了5-羥基甲基衍生物61。或者，可用二氫吡喃和催化量的酸例如鹽酸、硫酸或?qū)妆交撬崽幚砘衔?0，以獲得2′，5′-二-O-保護(hù)的核苷64。用硼氫化鈉將64還原，獲得了65。由于65的烯丙型性質(zhì)，用甲磺酰氯或甲苯磺酰氯處理生成了5-氯甲基-尿嘧啶衍生物66。用醇化物處理66，然后脫保護(hù)，生成了相應(yīng)的5-烷氧基甲基-3′-脫氧尿苷(69)。類似地，用各種胺與66反應(yīng)，獲得了67，通過(guò)弱酸性水解將其轉(zhuǎn)化成68。將66與硫脲反應(yīng)，生成了相應(yīng)的巰基甲基衍生物(70，R＝H)，用硫醇鈉處理，生成了烷硫基衍生物70(R＝烷基)，可用過(guò)氧化氫將其氧化成相應(yīng)的砜(71)。按照類似方法由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，制得了相應(yīng)的III-a核苷。
反應(yīng)方案10 (ii)硝化(反應(yīng)方案11)在環(huán)丁砜中用四氟硼酸硝鎓處理尿苷6(參見(jiàn)Huang，G.-F.等人.J.Org.Chem.，1977，42，3821；Huang，G.-F.等人.J.Carbohyd.NucleosidesNucleotides，1978，5，317)，獲得了相應(yīng)的5-硝基衍生物72。將硝基-核苷72催化氫化，生成了相應(yīng)的5-氨基衍生物73。用亞硝酸將73重氮化，生成了5-重氮基-3′-脫氧尿苷(74)，通過(guò)水解可將其轉(zhuǎn)化成1，2，3-三唑75。已報(bào)道過(guò)將5-氨基尿苷轉(zhuǎn)化成核糖甲硅烷基三唑的類似轉(zhuǎn)化(參見(jiàn)Roberts，M.等人.J.Am Chem.Soc.，1952，74，668；Thurber，T.C.等人.J.Am.Chem.Soc.，1973，95，3081；J.Org.Chem.，1976，41，1041)。將72與疊氮化鈉在二甲基甲酰胺中反應(yīng)，獲得了三唑并嘧啶(8-氮雜嘌呤)核苷76。
按照類似方法，由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，可制得相應(yīng)的III-a核苷。
反應(yīng)方案11 反應(yīng)方案12顯示了類似反應(yīng)順序，其中是由3′-脫氧胞苷4生成5-硝基-3′-脫氧胞苷(77)，然后獲得5-氨基-3′-脫氧胞苷(78)。然而，用亞硝酸處理78導(dǎo)致形成另一8-氮雜嘌呤核苷79。該相同反應(yīng)順序可適用于相應(yīng)的L-核苷III-a。
反應(yīng)方案12
(iii)羥基甲基化如反應(yīng)方案13所示，在堿例如氫氧化鉀或氫氧化鈉水溶液中用甲醛處理6(R＝H，R5′＝R3′＝R3″＝H)，生成了5-羥基甲基-3′-脫氧尿苷(80)，通過(guò)用氯化氫的乙醇溶液處理將其轉(zhuǎn)化成5-乙氧基甲基-3′-脫氧尿苷(81，X＝OCH2CH3)?；衔?0(R5′＝R3′＝TBDPS)還可以這樣制得通過(guò)光化學(xué)溴化將胸腺嘧啶衍生物6(R＝CH3，R5′＝R3′＝TBDPS)轉(zhuǎn)化成81(X＝Br)，然后水解(Matulic-Adamic，J.等人.Chem.Pharm.Bull.，1988，36，1554)。通過(guò)鹽酸的作用將化合物80轉(zhuǎn)化成5-氯甲基衍生物(81，X＝Cl)，或者通過(guò)用二乙基氨基三氟化硫(DAST)處理將化合物80轉(zhuǎn)化成5-氟甲基衍生物(81，X＝F)。用二氧化錳將80(R5′＝R2′＝TBDPS，R3″＝H)氧化，獲得5-甲?；苌?2，其是多種反應(yīng)，包括Wittig、Wittig-Horner、Grignard或Reformatsky反應(yīng)的良好反應(yīng)物。例如，用乙氧基亞甲基三苯基正膦[EtOC(＝O)CH＝PPh3]處理82，生成了5-(2-乙氧基羰基)亞乙基-3′-脫氧尿苷衍生物(83)，可經(jīng)由5-(亞乙基-2-羧酸)衍生物84將其轉(zhuǎn)化成5-亞乙基-、5-(2-氯亞乙基)-或5-(2-溴亞乙基)-3′-脫氧尿苷衍生物(85)。通過(guò)用DAST處理82可獲得5-二氟甲基衍生物86。這些合成途徑如反應(yīng)方案13所示。
該相同反應(yīng)順序可適用于相應(yīng)的L-核苷III-a。
反應(yīng)方案13
(iv)金屬化在水緩沖液中，可用乙酸汞處理6或4，然后用氯化鈉處理，分別以定量產(chǎn)率生成了相應(yīng)的5-氯汞基衍生物87或91(反應(yīng)方案14)。將87或91與碘在乙醇中反應(yīng)，分別生成了5-碘衍生物52或56。通過(guò)在碘化亞銅和三乙胺存在下與1-炔烴和二(三苯基膦)氯化鈀(Ph3P)2PdCl2反應(yīng)可將化合物52轉(zhuǎn)化成5-乙炔基衍生物88。另一方面，通過(guò)用三氟碘甲烷和銅粉處理，將52轉(zhuǎn)化成5-三氟甲基-3′-脫氧尿苷89。用氯化鋰鈀(Li2PdCl4)和烯丙基氯處理87，獲得了5-烯丙基-3′-脫氧尿苷(90)。在Li2PdCl2存在下將丙烯酸甲酯與87或91反應(yīng)，以分別生成5-(E)-(2-甲氧基-羰基)乙烯基-3′-脫氧尿苷(83)或-胞苷(92)。將83皂化生成84，然后用N-鹵代琥珀酰亞胺，生成了5-(E)-鹵代乙烯基尿嘧啶核苷85(X＝Cl、Br或I)。將84熱脫羧，生成了5-乙烯基尿嘧啶衍生物85(X＝H)?；衔?5(X＝H)還可以通過(guò)在乙酸鈀-三苯基膦絡(luò)合物存在下用乙酸乙烯酯處理52來(lái)制得。類似地，可將91轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的丙烯酸酯衍生物92，將其水解成93后，與N-鹵代琥珀酰亞胺反應(yīng)以生成5-(E)-(2-鹵代乙烯基)-3′-脫氧胞苷(94)。應(yīng)當(dāng)注意，將5-乙烯基衍生物催化氫化可生成相應(yīng)的5-乙基-嘧啶核苷。用稀硫酸將5-乙炔基-3′-脫氧尿苷(88，R＝H)水合，以高產(chǎn)率生成了5-乙酰基-3′-脫氧尿苷。
按照類似方法，但是由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，制得了相應(yīng)的III-a核苷。
反應(yīng)方案14 (c)在嘧啶核苷的C-6上的修飾(I-a和III-a)在二甲基甲酰胺中于室溫用氰化鈉或氰化鉀處理5-溴-3′-脫氧尿苷(51，反應(yīng)方案15)，以高產(chǎn)率獲得了6-氰基-3′-脫氧尿苷(95)。通過(guò)在高溫下進(jìn)一步處理將95轉(zhuǎn)化成5-氰基異構(gòu)體59。將95水解，獲得了3′-脫氧乳清酸核苷96。將95進(jìn)行甲醇分解，生成了甲酯97，通過(guò)氨解將其轉(zhuǎn)化成98，其中R′是C1-C6低級(jí)烷基或芐基或苯基。用硼氫化鈉將97還原，獲得了6-羥基甲基衍生物99，通過(guò)鹽酸的作用將其轉(zhuǎn)化成6-氯甲基尿嘧啶核苷100。通過(guò)與各種胺反應(yīng)，將100轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的6-氨基甲基-3′-脫氧尿苷(101)。采用類似反應(yīng)順序，經(jīng)由6-氰基中間體102由3′-脫氧胞苷(55)開(kāi)始生成3′-脫氧胞苷-6-基-羧酸(103)或其甲酯104。各種6-羧酰氨基胞嘧啶核苷105可通過(guò)用相應(yīng)的胺處理104來(lái)獲得。使用氫硼化物將104還原，獲得了6-羥基甲基衍生物104，可通過(guò)鹽酸的作用將其轉(zhuǎn)化成6-氯甲基-3′-脫氧胞苷107。通過(guò)與各種胺反應(yīng)可將化合物107轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的6-氨基甲基-3′-脫氧胞苷(108)。該相同反應(yīng)順序可適用于相應(yīng)的L-核苷III-a。
反應(yīng)方案15 反應(yīng)方案16顯示了另外的衍生化。在尿嘧啶和胞嘧啶核苷的C-6位上鋰化(參見(jiàn)Tanaka，H.等人.Tetrahedron Lett.，1979，4755；Sergueeva，Z.A.等人.Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids，2000，19，275)。因此，在-45℃用正丁基鋰處理全三甲基甲硅烷基化的3′-脫氧胞苷(109，R3′＝R3″＝H)，然后用甲基碘或二氧化碳處理，分別生成了6-甲基-3′-脫氧胞苷(110)或3′-脫氧胞苷-6-甲酸(103)。按照類似方法，但是由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，制得了相應(yīng)的III-a核苷。
反應(yīng)方案16 在四氫呋喃中于-78℃用二異丙基氨基鋰處理2′，5′-二-O-(四氫吡喃-2-基)-3′-脫氧尿苷(6，R2′＝R5′＝THP，R3′＝R3″＝H)，然后與烷基鹵反應(yīng)，形成了6-烷基-3′-脫氧尿苷(111)。用二氧化硒將111(n＝0)氧化，生成了3′-脫氧尿苷-6-甲醛(112)，在堿存在下用硝基甲烷處理后生成了硝基烯烴113。將化合物112與各種Wittig試劑反應(yīng)以生成相應(yīng)的烯烴114-117。用格氏試劑處理112，生成6-羥基烷基衍生物121。將121氧化，獲得了相應(yīng)的6-?；苌?20(R＝烷基)。另一方面，將鋰化的6(R5′＝R2′＝THP，R3′＝R3″＝H)與苯甲醛反應(yīng)，生成了6-羥基芐基衍生物119，通過(guò)弱氧化將其轉(zhuǎn)化成6-苯甲?；?3′-脫氧尿苷(120，R＝Ph)。如反應(yīng)方案17所示，還將鋰化的6與二苯基二硫化物反應(yīng)，獲得了6-苯硫基-3′-脫氧尿苷118。
按照類似方法，但是由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，制得了相應(yīng)的III-a核苷。
反應(yīng)方案17
(d)在嘌呤核苷的C-6上修飾(I-b和III-b)通過(guò)用氯化氫或溴化氫在乙酸中處理或者用溴化氫在二氯甲烷中處理將化合物28或38轉(zhuǎn)化成鹵化物(halogenase)122(反應(yīng)方案18)，并通過(guò)鈉方法在乙腈中與6-氯嘌呤縮合，獲得了3′-脫氧核苷123。用氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液處理123，生成了3′-脫氧肌苷(124)。用甲醇鈉的甲醇溶液處理123，獲得了6-O-甲基-3′-脫氧肌苷(125)。進(jìn)行弱皂化，然后將123催化氫解，生成了3′-脫氧水松蕈素(126)。將硫脲與123反應(yīng)，生成了6-硫嘌呤核苷127，將其S-烷基化以生成128?；衔?23、127和128易于與各種胺、羥基胺、肼和氨基醇反應(yīng)以生成3′-脫氧腺苷類似物129-133。用疊氮化鈉處理123，生成了6-疊氮基嘌呤核苷134。
該相同反應(yīng)順序可適用于相應(yīng)的L-核苷III-b。
反應(yīng)方案18
這些化合物還可以通過(guò)用亞硝酸處理6-酰肼基嘌呤核苷130來(lái)合成。將129、130或134還原，生成了3′-脫氧腺苷(即蛹蟲(chóng)草菌素)。預(yù)計(jì)在體內(nèi)通過(guò)腺苷脫氨基酶的作用化合物125或蛹蟲(chóng)草菌素可轉(zhuǎn)化成124。在體內(nèi)可將6-未取代的嘌呤核苷126氧化成124。
將122與2-取代的-6-氯嘌呤縮合，生成了123的2-取代的類似物。通過(guò)親核取代反應(yīng)可將6-氯官能團(tuán)轉(zhuǎn)化成各種官能團(tuán)。因此，將2-氨基-6-氯嘌呤轉(zhuǎn)化成135(反應(yīng)方案19)，可將135轉(zhuǎn)化成各種2-氨基嘌呤核苷(136-147)。應(yīng)當(dāng)注意，2，6-二氨基-(141)和2-氨基-嘌呤(138)核苷是3′-脫氧-鳥(niǎo)苷(136)的可能前體。按照類似方法，但是由L-核苷對(duì)應(yīng)物開(kāi)始，可制得相應(yīng)的III-b核苷。
反應(yīng)方案19 按照類似方法可合成2-氧代-、2-甲氧基-、2-硫代-、2-烷基巰基-、2-甲基-、2-甲基-氨基-或2-二甲基氨基-嘌呤核苷(148-154)(反應(yīng)方案20)。而且，按照類似方法，但是由相應(yīng)的L-核苷開(kāi)始，可制得III-b類型的化合物。
反應(yīng)方案20
(e)在嘌呤核苷的C-2上修飾(I-b和III-b)可通過(guò)用各種鏈烷酰氯或芳酰氯酰化將135-147的2-氨基修飾以獲得155(反應(yīng)方案21)。然后，通過(guò)用硼烷-胺絡(luò)合物還原將155進(jìn)一步衍生化成相應(yīng)的2-烷基氨基或2-芳基氨基衍生物156(Sergueeva，Z.A.等人.Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids，2000，19，275)?；蛘?，通過(guò)Schiemann反應(yīng)，在氟硼酸鹽存在下重氮化，可將化合物135的2-氨基取代，然后通過(guò)熱分解，以生成2-氟-6-氯嘌呤核苷157。此外，可用各種如上所述的親核試劑置換這些核苷的6-氯取代基。應(yīng)當(dāng)注意，存在的2-氟取代基保護(hù)了6-氨基不被腺苷脫氨基酶攻擊。
反應(yīng)方案21
(f)在嘌呤核苷的C-8上修飾(I-b)應(yīng)當(dāng)注意，在嘌呤核苷的8-位上修飾特別重要，因?yàn)樵谠撐恢玫娜〈鷮⒑塑盏膬?yōu)選構(gòu)象改變?yōu)轫樖健?br> 通過(guò)在乙酸鈉存在下用溴在乙酸中處理，可將蛹蟲(chóng)草菌素(158，R3′＝R3″＝H)、3′-脫氧肌苷(124，R3′＝R3″＝H)和3′-脫氧鳥(niǎo)苷(136，R3′＝R3″＝H)在C-8位溴化，以生成159-161(反應(yīng)方案22)。通過(guò)硫脲的作用，用硫置換159-161中的C-8溴取代基，以獲得162-164，可在堿例如碳酸鈉或碳酸鉀存在下，在極性溶劑例如水、醇或二甲基甲酰胺中用烷基鹵或芳烷基鹵將其烷基化或芳烷基化，以生成165-167?？蓪⒓谆鶐€基衍生物165-167(R＝甲基)氧化成相應(yīng)的砜168-170。通過(guò)用各種胺處理這些砜，可獲得相應(yīng)的8-氨基衍生物171-173。通過(guò)用胺處理可直接由159-161獲得多種8-氨基衍生物。而且，通過(guò)在乙酸酐中用乙酸鈉處理，然后水解，可將159轉(zhuǎn)化成8-氧代衍生物174。用氟硼酸三乙基氧鎓將174 O-烷基化，生成了8-乙氧基蛹蟲(chóng)草菌素175。
反應(yīng)方案22
8-烷基衍生物176(反應(yīng)方案23)是這樣制得的在四氫呋喃中于-70℃以下用二異丙基氨基鋰處理123(R5′＝R2′＝THP)，然后用烷基鹵處理。該方法被成功地用于其它核糖核苷(Tanaka，H.等人.Chem.Pharm.Bull.，1983，31，787)，但是從來(lái)沒(méi)有應(yīng)用于3′-脫氧核苷。當(dāng)使用二氧化碳來(lái)代替烷基鹵時(shí)，獲得了嘌呤核苷8-羧酸177。將其酯化成178，然后氨解，獲得了酰胺181，將其脫水以生成8-氰基嘌呤核苷182。用硼烷-二甲基硫醚將178還原，獲得了醇179。用二甲亞砜和草酸進(jìn)行弱氧化，獲得醛180?；衔?79和180是用于各種修飾的多用途中間體。
反應(yīng)方案23 B.IIa-c和IVa-c型化合物(i)由由預(yù)形成的核苷合成可使用幾種方法以給預(yù)形成的核苷引入2′，3′-不飽和。反應(yīng)方案24中顯示了一個(gè)實(shí)例。
在堿中、優(yōu)選在吡啶中，在0℃-80℃、優(yōu)選在室溫，優(yōu)選用叔丁基二甲基甲硅烷基鹵或叔丁基二苯基甲硅烷基鹵將核苷7選擇性地O-甲硅烷化，然后在堿中、優(yōu)選在吡啶中，在0℃-80℃、優(yōu)選在室溫，優(yōu)選用甲磺酰氯或甲苯磺酰氯磺?；?，以高產(chǎn)率生成了8，可通過(guò)用堿處理將8容易地轉(zhuǎn)化成來(lái)蘇糖酸環(huán)氧化物183。將183與鹵離子、優(yōu)選碘離子反應(yīng)，例如用碘化鈉在丙酮或甲基乙基酮中處理，僅生成了反式-碘代醇184，X＝I)。將184甲磺酰化，經(jīng)由185以高產(chǎn)率生成了烯烴186。經(jīng)過(guò)短的反應(yīng)時(shí)間后，可以以不佳的產(chǎn)率分離到化合物185。用氟化物例如四丁基氟化銨將186去-O-甲硅烷化，以高產(chǎn)率獲得了所需烯烴187，II-a型核苷。
反應(yīng)方案24 由2′-脫氧核苷例如188(反應(yīng)方案25)開(kāi)始也可以制得II-a型烯屬糖核苷。在吡啶中，在-10℃-80℃溫度范圍下、優(yōu)選在室溫，優(yōu)選用甲磺酰氯將188磺?；?，生成了二-O-甲磺酸酯189，通過(guò)用堿水溶液例如氫氧化鈉水溶液處理，生成了3′，5′-脫水糖核苷190。通過(guò)用無(wú)水強(qiáng)堿例如叔丁醇鉀的二甲亞砜溶液在-10℃-80℃溫度下、優(yōu)選在室溫處理10分鐘至過(guò)夜、優(yōu)選1.5-3小時(shí)，可容易地將核苷190以高產(chǎn)率轉(zhuǎn)化成所需的187。
反應(yīng)方案25 反應(yīng)方案26顯示了制備II-a型2′-取代的烯屬糖核苷的一個(gè)實(shí)例。在吡啶中，優(yōu)選用三苯甲基氯或叔丁基二甲基甲硅烷基氯或叔丁基二苯基甲硅烷基氯將1-(2′-脫氧-2′-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)胸腺嘧啶(191)選擇性地脫保護(hù)以生成192。在吡啶中，優(yōu)選用甲磺酰氯將192磺酰化，生成了甲磺酸酯193，通過(guò)在無(wú)水惰性溶劑例如二氯甲烷中用非親核性堿例如DBU或DBN處理，獲得了2，3′-脫水核苷194。通過(guò)用叔丁醇鉀的二甲亞砜溶液處理，可容易地將該化合物轉(zhuǎn)化成2′-氟-烯屬糖核苷195。將195脫保護(hù)，生成了所需的2′-氟化II-a型核苷196。5′-O-甲硅烷基保護(hù)可獲得比三苯甲基保護(hù)更好的總產(chǎn)率。
反應(yīng)方案26 所有這些反應(yīng)都可適用于相應(yīng)的嘧啶L-核苷以制備IV-a型核苷。
II-b型核苷可易于由197制得(反應(yīng)方案27)。用例如叔丁基二甲基甲硅烷基或叔丁基二苯基甲硅烷基將197在5′-位上選擇性地保護(hù)，獲得了198。在堿中例如在吡啶中用甲苯磺酰鹵或甲磺酰鹵將其磺酰化，獲得了保護(hù)的烯屬核苷199。用氟化物例如四丁基氟化銨將199去-O-甲硅烷化，以高產(chǎn)率獲得了所需烯烴200，II-b型核苷。
或者，用乙酸鉻處理15(參見(jiàn)反應(yīng)方案3)，用堿脫保護(hù)后，以良好產(chǎn)率生成了200。
反應(yīng)方案27 通過(guò)相同方法，但是使用嘌呤L-核苷，可獲得相應(yīng)的IV-b型烯屬糖L-核苷。
(ii)通過(guò)堿和不飽和糖衍生物的縮合來(lái)合成在堿、優(yōu)選在吡啶中，優(yōu)選用叔丁基二甲基甲硅烷基鹵將市售4-羥基甲基-2-戊烯酮(201，反應(yīng)方案28)甲硅烷化，以生成202，用硼氫化物將其還原，以獲得203。乙?；?，將產(chǎn)物204與甲硅烷化的堿例如5-取代的尿嘧啶縮合。獲得了復(fù)雜的混合物，其中正位異構(gòu)核苷(205)是主要組分。通過(guò)色譜法分離出正位異構(gòu)體206和207，然后將每種正位異構(gòu)體去甲硅烷基化，分別獲得β-核苷208(II-a型)和α-核苷209(XVIII-c型)。
反應(yīng)方案28 反應(yīng)方案29顯示了另一實(shí)例。通過(guò)醛210與Ph3P＝CFCO2Et的Wittig縮合可制得2-氟-內(nèi)酯212。用甲硅烷基保護(hù)，并用DIBAH還原，然后將產(chǎn)物乙?；?，獲得了213。在惰性溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，在路易斯酸例如三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯或四氯化錫存在下，用甲硅烷基化的嘌呤例如6-氯嘌呤與213縮合，獲得了正位異構(gòu)體混合物214。使用硅膠柱分離這些正位異構(gòu)體。將各種正位異構(gòu)體去甲硅烷基化后，可獲得相應(yīng)的β-核苷215(II-b型)和α-核苷216(XVIII-d型)。
反應(yīng)方案29
C.合成carba-糖核苷(V-X)迄今為止在自然界中發(fā)現(xiàn)的carba-核苷僅有腺嘌呤核苷，即aristeromycin和neplanocins，并且它們非常昂貴或者不能通過(guò)商購(gòu)獲得。因此，由零開(kāi)始來(lái)化學(xué)合成這些類型的核苷。首先制備carba-糖衍生物，然后在糖上構(gòu)建雜環(huán)糖苷配基以制備carba-糖核苷，或者對(duì)于嘌呤核苷，直接將該堿與carba-糖縮合。
反應(yīng)方案30舉例說(shuō)明了5-氟-carba-胞苷(227，V-a型)的合成。carba-糖中間體219可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法合成。Ali等人.(Tetrahedron Letters，1990，31，1509)公開(kāi)了將D-核糖酸內(nèi)酯(ribonolactone)217轉(zhuǎn)化成戊烯酮中間體218。然后可通過(guò)任何已知的還原劑，優(yōu)選硼氫化鈉在甲醇中于0℃將酮218還原1小時(shí)，以獲得醇219。在二氯甲烷中，在三乙胺存在下，于0℃優(yōu)選用甲磺酰氯將219磺酰化2小時(shí)，以生成220，然后在DMF中于140℃用疊氮化鈉將其處理過(guò)夜，以生成221。然后可通過(guò)任何已知的還原劑例如Ph3P(Staudinger法)或催化氫解、優(yōu)選用披鈀炭催化氫解將疊氮化物221容易地還原。將所得胺222與β-甲氧基丙烯?；惽杷狨ピ贒MF中進(jìn)行Warrener-Shaw反應(yīng)，然后用氫氧化銨處理，以經(jīng)由直鏈中間體223形成保護(hù)的carba-尿苷224。通過(guò)用任何氟化劑將224氟化可獲得保護(hù)的5-氟-carba-尿苷(225)。氟化劑優(yōu)選是在乙酸中的氟。用堿、優(yōu)選三乙胺中止反應(yīng)后，可按照類似于反應(yīng)方案7中描述的方法將尿嘧啶核苷225轉(zhuǎn)化成保護(hù)的carba-5-氟胞苷(226)。用酸，優(yōu)選用三氟乙酸/水(2∶1 v/v)于5 0℃處理3小時(shí)來(lái)除去226的保護(hù)基，以生成227。
在三乙胺存在下，在二氯甲烷中用三氟甲磺酰氯將219磺?；?，生成了三氟甲磺酸酯，與嘌呤堿例如腺嘌呤和氫化鈉在惰性溶劑例如乙腈或DMF中反應(yīng)后，直接獲得了相應(yīng)的嘌呤核苷(V-b型)。
通過(guò)使用相同方法，但是由L-核糖酸內(nèi)酯開(kāi)始，可獲得相應(yīng)的L-核苷對(duì)應(yīng)物(VIII型核苷)。
反應(yīng)方案30 或者，通過(guò)用四氧化鋨氧化將市售(1R)-(-)-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(228，反應(yīng)方案31)轉(zhuǎn)化成2，3-二羥基-內(nèi)酰胺229。將氯化氫的甲醇溶液將229進(jìn)行甲醇分解后，用2，2-二甲氧基丙烷在丙酮中或者用1，1-二甲氧基環(huán)己烷在環(huán)己醇中處理產(chǎn)物230，生成了酮縮醇例如231，用硼氫化鈉將其還原成232。通過(guò)與β-甲氧基丙烯?；惽杷狨シ磻?yīng)，然后用氨處理，將氨基醇232轉(zhuǎn)化成2′，3′-O-亞環(huán)己基-carba-尿苷。用酸處理，優(yōu)選用三氟乙酸在甲醇中處理，生成了carba-尿苷(233)。carba-5-氟胞苷(227)可通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的方法由233容易地獲得。
反應(yīng)方案31 按照類似方法，但是由另一旋光異構(gòu)體(1R)-(+)-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-5-烯-3-酮開(kāi)始，可獲得相應(yīng)的L-核苷類似物(VIII型)。
VI型核苷是由V型核苷制得的。反應(yīng)方案32中顯示了另一個(gè)實(shí)例。通過(guò)用二甲基甲酰胺酮縮二甲醇在DMF中處理，然后三苯甲基化，將Aristeromycin(234)或任何carba-核糖核苷轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的N-[(二甲基氨基)亞甲基]-5′-O-三苯甲基衍生物235。將235與硫代羰基二咪唑反應(yīng)，生成了2′，3′-O-硫代碳酸酯236，在2，2′-氮雜二(2-甲基丙腈)存在下用三正丁基氫化錫進(jìn)行自由基還原后，分別獲得了烯烴237以及3′-脫氧-和2′-脫氧-aristeromycine衍生物238和239。可在硅膠柱上將這些產(chǎn)物容易地分離。用酸處理后，每一這些產(chǎn)物分別生成了相應(yīng)的游離核苷，240、241和242。該方法特別適于在短時(shí)間內(nèi)制備用于篩選的少量幾種核苷。
通過(guò)相同方法，但是用VIII型核苷代替V型核苷，可獲得相應(yīng)的L-核苷，IX型。
反應(yīng)方案32 如反應(yīng)方案33所示，將V型立體選擇性地轉(zhuǎn)化成VI型也是可能的。將5-氟-carba-尿苷(233)轉(zhuǎn)化成5′-O-三苯甲基-2′，3′-二-O-甲磺?；苌?43。用堿的水溶液處理243，經(jīng)由2，2′-脫水核苷中間體244獲得了來(lái)蘇糖環(huán)氧化物245。用碘化鈉在丙酮或丁酮中將環(huán)氧化物的環(huán)打開(kāi)，生成了反式-碘代醇246，進(jìn)行甲磺?；?，經(jīng)由247獲得了烯烴248。將247去-O-三苯甲基化，獲得了249。還可以使用叔丁基二甲基甲硅烷基或叔丁基二苯基甲硅烷基保護(hù)的甲硅烷基保護(hù)來(lái)代替5′-O-三苯甲基保護(hù)。還可以用通過(guò)試劑例如甲苯磺酰氯、三氟甲磺酰氯或三氟甲磺酸酐進(jìn)行的其它磺?；瘉?lái)代替甲磺?；?br> 通過(guò)相同方法，但是使用VIII型核苷代替V型核苷，可獲得相應(yīng)的IX型L-核苷。
反應(yīng)方案33 VI-b型核苷還可以由2-環(huán)戊烯-1-酮(250，反應(yīng)方案34)合成。將叔丁氧基甲基銅酸鋰[(t-BuOCH2)2CuLi]與250進(jìn)行邁克爾加成，生成了加合物251。依據(jù)Wilson等人的方法(Synthesis，1995，1465)將251進(jìn)行苯基硒化，該苯基硒化主要在相對(duì)于叔丁氧基甲基呈反式的位置上發(fā)生，生成了252。DIBAH還原以立體選擇方式將羰基還原成羥基，生成了253。在堿中優(yōu)選用三氟甲磺酰氯或三氟甲磺酸酐將其磺?；?，生成了254，在惰性溶劑例如乙腈中，與鈉-嘌呤(由例如腺嘌呤和NaH制得的)縮合，以立體選擇方式獲得了255。用過(guò)氧化氫在吡啶中將硒化物255氧化，結(jié)果順利地將255轉(zhuǎn)化成了烯烴256。用弱酸處理256，生成了游離核苷240。
或者，將253乙?；缓笤谌谆撬崛谆坠柰榛ゴ嬖谙屡c甲硅烷化的嘧啶例如三(三甲基甲硅烷基)-5-氟胞嘧啶縮合，以高產(chǎn)率生成了相應(yīng)的嘧啶核苷，通過(guò)氧化并用酸除去產(chǎn)物的叔丁基可由其容易地制得VI-a型核苷。
使用相同方法，但是用VIII型核苷代替V型核苷，可獲得相應(yīng)的IX型L-核苷。
反應(yīng)方案34 此外，2′，3′-不飽和核苷的外消旋carba類似物可通過(guò)Shi等人的方法(J.Med.Chem.，1999，42，859)制得，其中在Shi等人的方法中，是由環(huán)戊烯-4-羧酸乙酯經(jīng)過(guò)多個(gè)步驟制得外消旋順式-3，4-環(huán)氧-環(huán)戊烷甲醇257(反應(yīng)方案35)。用二苯基聯(lián)硒化物打開(kāi)環(huán)氧化物后，獲得了258，將其乙?；缓笥眠^(guò)氧化物處理，生成了二乙酸酯259。在Pd(PPh3)4存在下，在惰性溶劑例如四氫呋喃中，用鈉嘧啶(通過(guò)將尿嘧啶或胞嘧啶衍生物與NaH在二甲亞砜中反應(yīng)而制得的)處理259，將產(chǎn)物脫乙?；?，以10-70％的產(chǎn)率獲得了260。
反應(yīng)方案35 反應(yīng)方案36顯示了由Wolfe等人(J.Org.Chem.，1990，55，4712)用D-核糖酸內(nèi)酯制得的261來(lái)合成VII型3，4-不飽和carba核苷。用亞磺酰氯中止叔丁氧基甲基對(duì)261(261，反應(yīng)方案36)的邁克爾加成，然后將產(chǎn)物與碳酸鈣一起加熱，生成了環(huán)戊烯酮262。用DIBAH將262還原，然后磺酰化，獲得了263。如上文所述用NaH將263(優(yōu)選R＝CF3)與嘌呤堿縮合，生成了嘌呤核苷VII-b例如neplanocin A(264)。用NaN3處理263(優(yōu)選R＝Me)，生成了265，通過(guò)反應(yīng)方案30中已描述的方法可將265容易地轉(zhuǎn)化成包括266在內(nèi)的各種嘧啶核苷(VII-a)。
由L-核糖酸內(nèi)酯開(kāi)始，可容易地制得相應(yīng)的L-核苷對(duì)應(yīng)物(X-a和X-b)。
反應(yīng)方案36 D.合成XI和XII型核苷有幾種可用于合成這些類型核苷的方法。用于本發(fā)明的一些核苷主要是以下述方式制得的。將2，2-二甲氧基乙酸的1-薄荷基酯(267，反應(yīng)方案37)與巰基乙酸縮合以獲得非對(duì)映體混合物268，268可易于在硅膠柱上分離。用NaBH4在乙醇中將268還原，然后乙?；@得了269，在四氯化錫存在下將其與甲硅烷化的堿縮合。主要獲得了所需的保護(hù)的β-核苷，通過(guò)色譜法純化。進(jìn)行去-O-乙?；?，獲得了相應(yīng)的未保護(hù)的核苷270。由N-t-Boc-L-脯氨酸的2，2-二甲氧基乙酯也獲得了270。在MgSO4和CAS存在下，用3當(dāng)量的巰基乙酸在二氯甲烷中處理該化合物，獲得了作為非對(duì)映體混合物的271，通過(guò)色譜法將其分離。用Li(t-BuO)3AlH在四氫呋喃中將271的每種非對(duì)映體還原，然后乙酰化，獲得了272，將其與甲硅烷化的堿縮合，然后對(duì)產(chǎn)物脫保護(hù)，生成了270。
反應(yīng)方案37 用于本發(fā)明的XIII型核苷是用本領(lǐng)域已知的方法制得的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，XIII-a型核苷是按照所報(bào)道的一步或兩步合成(Nucleic Acid Chem，1978，1，272和343)，通過(guò)磺酰化將5′-OH活化，然后用堿處理或用Ph3P和重氮二甲酸二乙酯直接處理未保護(hù)的核苷。
用于本發(fā)明的XIV型核苷的制備是通過(guò)有幾分類似于Duschinsky等人的合成相應(yīng)的5-氟脫氧尿苷加合物的方法(J.Med.Chem.，1967，10，47)來(lái)進(jìn)行合成的。反應(yīng)方案38中顯示了使用5-氟尿苷(273)的幾個(gè)實(shí)例。在C-5位含有強(qiáng)吸電子取代基的任何嘧啶核苷經(jīng)歷類似加合物形成。用溴在甲醇中處理273，生成了加合物274，可通過(guò)催化氫化將其還原成275。在水中處理，生成了溴代醇277，在乙酸酐存在下在乙酸中通過(guò)溴的作用獲得了276。相應(yīng)的其它加合物可通過(guò)使用其它次鹵酸鹽例如次氯酸鹽來(lái)制得，生成了278。每一這些加合物都是非對(duì)映體混合物，并且以這樣的形式用于篩選。
反應(yīng)方案38 E.XV-XVIII型核苷用于本發(fā)明的核苷是通過(guò)依據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的方法將4-硫尿苷和6-硫肌苷衍生物氧化而制得的。XVI型化合物是C-核苷。XVI-a核苷是通過(guò)本領(lǐng)域已知方法由ψ-尿苷合成的(Watanabe，“C-核苷化學(xué)”，Townsend，L.B.，Ed.，In“Chemistry of Nucleosides andNucleotides”，Plenum，Publ.，New York，Vol.，3，421，1994)，或者通過(guò)將芳族化合物與保護(hù)的核糖酸內(nèi)酯縮合，然后構(gòu)建產(chǎn)物來(lái)合成(例如Kabat等人.，J.Med.Chem.，1987，30，924)。核苷XVI-b和XVI-c是依據(jù)Pankiewicz等人開(kāi)發(fā)的改進(jìn)方法來(lái)制備的(Carbohydr.Res.，1984，127，227；Nucleosides Nucleotides，1991，10，1333)。嘌呤-型XVI-d C-核苷是依據(jù)Chu等人報(bào)道的方法合成的(J.Heterocycl.Chem.，1980，17，1435)。用于本發(fā)明的XVII型核苷是通過(guò)4′-甲?；塑张c甲醛的交叉-醛醇反應(yīng)或者預(yù)形成的糖與堿的縮合來(lái)合成的。某些XVIII類型的核苷的制備已經(jīng)在前面描述過(guò)。
提供下述實(shí)施例是為了更好地理解本發(fā)明方法。這些實(shí)施例僅是舉例說(shuō)明，并不是限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明方法的一般范圍的情況下，可用同等的、類似的或合適的溶劑、試劑或反應(yīng)條件來(lái)代替所述這些特定的溶劑、試劑或反應(yīng)條件。
實(shí)施例熔點(diǎn)是在開(kāi)口毛細(xì)管中在Electrothermal數(shù)字式熔點(diǎn)儀上測(cè)定的，并且沒(méi)有校正。UV吸收光譜是在Uvikon 931(KONTRON)分光光度計(jì)上在乙醇中記錄的。1H-NMR光譜是在室溫用Varian Unity Plus 400光譜計(jì)測(cè)定的。化學(xué)位移是以相對(duì)于作為參照的內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷的低場(chǎng)的ppm給出的。進(jìn)行氘交換、去耦實(shí)驗(yàn)或2D-COSY以確定質(zhì)子賦值。信號(hào)多重性是以s(單峰)、d(雙峰)、dd(雙雙峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、br(寬的)、m(多重峰)表示的。所有J-值是Hz給出的。FAB質(zhì)譜是以正-(FAB＞0)或負(fù)-(FAB＜0)離子模式在JEOL DX 300質(zhì)譜儀上記錄的。基質(zhì)是3-硝基芐醇(NBA)或甘油與硫代甘油(GT)的混合物(50∶50，v/v)。比旋度是在Perkin-Elmer 241分光偏振計(jì)(路徑長(zhǎng)度1cm)上測(cè)定的，并且以10-1deg cm2g-1為單位給出。元素分析是通過(guò)Atlantic Microlab Inc.(Norcross，GA)進(jìn)行的。用元素或官能團(tuán)的符號(hào)表示的分析在理論值的±0.4％范圍內(nèi)。薄層色譜是在Whatman PK5F硅膠板上進(jìn)行的，通過(guò)UV吸收，然后用10％的硫酸乙醇溶液炭化并加熱來(lái)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物的顯形。柱色譜法是在Silica Gel(Fisher，S733-1)上于常壓下進(jìn)行的。
實(shí)施例11-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；奏?2，R＝H)在回流狀態(tài)下用30分鐘向N4-乙酰基胞苷(5.7g，0.02mol)在乙腈(300mL)內(nèi)的懸浮液中加入乙酰溴(15mL，0.2mol)。將該混合物回流4小時(shí)，然后真空濃縮至干。將殘余物溶解在二氯甲烷(150mL)中，并用水(150mL)洗滌。將有機(jī)層干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)，將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；奏?2，R＝H，3.4g，40％)，mp179-180℃。
1H NMR(CDCl3)δ10.2(bs，1H，NHAc)，8.1(d，1H，H-6，J5，6＝7.5Hz)，7.5(d，1H，H-5，J5，6＝7.5Hz)，6.0(d，1H，H-1’，J1’，2’＜1Hz)，5.5(d，1H，H-2’，J1’，2’＜1，J2’，3’＝0Hz)，4.2-4.7(m，4H，H-3’，4’，5’，5”)，2.0-2.4(3s，9H，3Ac).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的N-乙酰化胞苷，制得了下列核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-氟胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-氯胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-溴胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-碘胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-(2-甲氧基羰基-乙烯基)-胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-(2-羥基羰基-乙烯基)-胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-苯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；?5-芐基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；奏?，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-氟胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-氯胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-溴胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-碘胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲酰基-5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲酰基-5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-(2-甲氧基羰基-乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-(2-羥基羰基-乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-苯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-苯甲?；?5-芐基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；奏ぃ?-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-氟胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-氯胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香酰基-5-溴胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-碘胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4茴香?；?5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香酰基-5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香酰基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-(2-羥基羰基-乙烯基)-胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香酰基-5-苯基胞嘧啶，和1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-茴香?；?5-芐基胞嘧啶。
實(shí)施例21-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-乙?；奏ぴ赑arr裝置內(nèi)，在碳酸鈣粉末(1g)和Pd-BaSO4催化劑(0.5g)存在下，將1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；奏?2.15g，5mmol)在50％的甲醇水溶液(100mL)中于45psi的初始?jí)毫ο職浠?。通過(guò)過(guò)濾除去催化劑，將濾液真空濃縮。將殘余物從乙醇中結(jié)晶，生成了1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-乙?；奏?3，R＝H，1.06g，60％)，mp174-177℃。
1HNMR(CDCl3)δ10.30(bs，1H，NHAc)，8.05(d，1H，H-6，J5，6＝7.5Hz)，7.43(d，1H，H-5，J5，6＝7.5Hz)，5.90(d，1H，H-1’，J1’，2’＝1.0Hz)，5.46(m，1H，H-2’)，4.30-4.80(3H，m，H-4’，5’，5”)，2.10，2.27(2s，9H，3Ac)，1.60-2.00(m，2H，H-3’，3”).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的3′-溴-木糖核苷，制得了下列核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲酰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲酰基-5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲?；?5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲酰基-5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲酰基-5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲?；?5-苯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-苯甲?；?5-芐基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香?；奏?，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香?；?5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香?；?5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香酰基-5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香酰基-5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香?；?5-苯基胞嘧啶，和1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-茴香?；?5-芐基胞嘧啶。
實(shí)施例31-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)胞嘧啶(3，R＝H)在0℃將1-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙酰基胞嘧啶(4.31g，0.01mol)用氨的飽和甲醇溶液(100mL)處理30分鐘，然后在35℃以下真空濃縮。從甲醇中結(jié)晶殘余物，獲得了1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)胞嘧啶(3，R＝H)。UV和1H NMR(D2O)與木糖型結(jié)構(gòu)一致。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的N-酰化胞苷，制得了下列核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氨基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基胞嘧啶，和1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基胞嘧啶。
實(shí)施例43′-脫氧胞苷(4，R＝H)將1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-乙?；奏?3，R＝H，700mg，2mmol)溶解在氨的甲醇溶液(20mL，在0℃飽和的)中，將該溶液在室溫保持過(guò)夜。通過(guò)真空蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物溶解在乙醇(20mL)中，用2N硫酸將該溶液的pH調(diào)節(jié)至3。收集沉淀，從水-乙醇中結(jié)晶，獲得了作為半硫酸鹽的3′-脫氧胞苷(4)(408mg，74％)。Mp202-203℃(分解)。
1H NMR(D2O)δ8.23(d，1H，H-6，J5，6＝8.0Hz)，6.27(d，1H，H-5，J5，6＝8.0Hz)，5.84(d，1H，H-1’，J1’，2’＝1.0Hz)，4.6(m，1H，H-2’)，3.9(m，3H，H-4’，5’，5”)，1.95-2.15(m，2H，H-2’，2”).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的酰化3′-脫氧核苷，制得了下列核苷及其L-對(duì)應(yīng)物3′-脫氧-5-甲基胞苷，3′-脫氧-5-乙基胞苷，3′-脫氧-5-正丙基胞苷，3′-脫氧-5-異丙基胞苷，3′-脫氧-5-苯基胞苷和3′-脫氧-5-芐基胞苷。
實(shí)施例52′，5′-二-O-乙酰基-3′-脫氧尿苷將2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-N4-乙酰基胞苷(1.06g，3mol)溶解在70％乙酸中，將該溶液輕微回流過(guò)夜。將該化合物真空濃縮后，從乙醇中結(jié)晶殘余物，獲得了2′，5′-二-O-乙酰基-3′-脫氧尿苷(660mg，96％)。1H NMR光譜表明其含有兩個(gè)乙?；?、兩個(gè)亞甲基和兩個(gè)烯屬質(zhì)子。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的3′-脫氧胞苷(4)，制得了下列2′，5′-二-O-乙酰基-3′-脫氧尿苷及其L-對(duì)應(yīng)物2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-甲基尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-乙基尿苷，2′，5′-二-O-乙酰基-3-脫氧-5-正丙基尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-異丙基尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-苯基尿苷和2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-芐基尿苷。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的3′-脫氧胞嘧啶核苷(2)，制得了下列尿嘧啶核苷及其L-對(duì)應(yīng)物2′，5′-二-O-乙酰基-3-脫氧5-氟尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-氯尿苷，2′，5′-二-O-乙酰基-3-脫氧-5-溴尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-碘尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-甲基尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-乙基尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-正丙基尿苷，2′，5′-二-O-乙酰基-3-脫氧-5-異丙基尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-乙烯基尿苷，2′，5′-二-O-乙酰基-3-脫氧-5-(2-氯乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-(2-碘乙烯基)尿苷，
2′，5′-二-O-乙酰基-3-脫氧-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-苯基尿苷，和2′，5′-二-O-乙?；?3-脫氧-5-芐基尿苷。
實(shí)施例61-(2，5-二-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)尿嘧啶(5，R＝H)將1-(2，5-二-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-N4-乙?；奏?2，R＝H，R′＝CH3)(4.31g，0.01mol)溶解在70％乙酸中，將該溶液輕微回流4小時(shí)。將該混合物真空濃縮后，將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了2′，5′-二-O-乙?；?3′-溴-3′-脫氧尿苷(5，2.80g，91％)。1H NMR光譜表明其含有兩個(gè)乙酰基、兩個(gè)亞甲基和兩個(gè)烯屬質(zhì)子。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的2′，5′-二-O-乙?；?3′-溴-3′-脫氧-N4-酰基胞苷(2)，制得了下列1，5-二-O-乙?；?3′-溴-3′-脫氧尿苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，和1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶。
實(shí)施例73′-脫氧尿苷(6b，R＝H)將2′，5′-二-O-乙酰基-3′-脫氧尿苷(1.06g，3mol)溶解在氨的甲醇溶液(10mL，在0℃飽和的)中，并保持過(guò)夜。將該混合物真空濃縮后，將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了3′-脫氧尿苷(6b，660mg，96％)。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的?；?′-脫氧-尿嘧啶核苷(6b)或其L-對(duì)應(yīng)物，制得了下列核苷3-脫氧-5-甲基尿苷，3-脫氧-5-乙基尿苷，3-脫氧-5-正丙基尿苷，3-脫氧-5-異丙基尿苷，3-脫氧-5-苯基尿苷和3-脫氧-5-芐基尿苷。
實(shí)施例81-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)尿嘧啶(6a，R＝H)將1-(2′，5′-二-O-乙酰基-3′-溴-3′-脫氧-β-D-呋喃木糖基)尿嘧啶(5，R＝H)溶解在氨的甲醇溶液(10mL，在0℃飽和的)中。在0℃保持1小時(shí)后，將該混合物真空濃縮，從乙醇中結(jié)晶殘余物，獲得了3′-溴-3′-脫氧尿苷(6a，660mg，9 6％)。UV和1H NMR與結(jié)構(gòu)一致。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的?；?′-溴-木糖基尿嘧啶，制得了下列核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，
1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氨基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，和1-(3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶。
實(shí)施例92′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(7，R＝H)將尿苷(24.4g，0.1mol)和三苯基氯甲烷(83.5g，0.3mol)在無(wú)水吡啶(250mL)中的混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后回流4小時(shí)。冷卻至室溫后，在劇烈攪拌下將該混合物倒入水中。通過(guò)傾析除去水，用水處理該樹(shù)膠狀殘余物，攪拌并傾析出水。將該操作重復(fù)數(shù)次，然后用熱水(500mL)處理殘余物，攪拌并傾析出水。將該操作重復(fù)2次。將殘余物溶解在二氯甲烷中，干燥(Na2SO4)，并真空濃縮。將殘余物溶解在最小必需量的苯中，用乙醚將該溶液稀釋至渾濁，將該混合物在15℃放置過(guò)夜。收集沉淀，從苯-乙醚中重結(jié)晶，獲得了7(R＝H)(22.8g，31％)，mp224-225℃。將合并的濾液濃縮，將殘余物溶解在二氯甲烷中，通過(guò)硅膠柱進(jìn)行色譜純化，使用二氯甲烷-乙醇(99∶1v/v)、(98∶2 v/v)和(97∶3 v/v)洗脫。首先洗脫出了化合物7(10g，14％)，之后洗脫出了3′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(31.0g，42.5％)。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的核苷，制得了下列2′，5′-二-O-保護(hù)的和3′，5′-二-O-保護(hù)的核苷及其L-對(duì)應(yīng)物2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氟尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氯尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-溴尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-碘尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-甲基尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙基尿苷，
2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-正丙基尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-異丙基尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙烯基尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙炔基尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-苯基尿苷，2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-芐基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氟尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氯尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-溴尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-碘尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-甲基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-正丙基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-異丙基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙烯基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙炔基尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-苯基尿苷，和3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-芐基尿苷。
實(shí)施例103′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(8，R＝H)向2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(7，R＝H，7.28g，1mmol)在吡啶(100mL)內(nèi)的冷卻溶液中滴加甲磺酰氯(1mL)，并將該反應(yīng)在4℃保持過(guò)夜。通過(guò)加入乙醇(5mL)來(lái)中止該反應(yīng)。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，將該混合物真空濃縮。將殘余物用乙醇(250mL)研制，收集固體，從乙醇中重結(jié)晶，獲得了8(R＝H)(7.45g，92％)，mp225-226℃。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的核苷，制得了下列2′，5′-二-O-三苯基甲基化和3′，5′-二-O-三苯基甲基化的核苷及其L-對(duì)應(yīng)物3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氟尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氯尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-溴尿苷，3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-碘尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-甲基尿苷，3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙基尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-正丙基尿苷，3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-異丙基尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙烯基尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙炔基尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)尿苷，3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-苯基尿苷，3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-芐基尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氟尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氯尿苷，2′-O-甲磺酰基-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-溴尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-碘尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-甲基尿苷，2′-O-甲磺酰基-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙基尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-正丙基尿苷，
2′-O-甲磺酰基-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-異丙基尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙烯基尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙炔基尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2′-O-甲磺酰基-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-苯基尿苷，和2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-芐基尿苷。
實(shí)施例112，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)尿嘧啶(9，R＝H，X′＝OH)將3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(806mg，1mmol)、苯甲酸鈉(2g)在二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物在130-140℃加熱過(guò)夜。將該混合物冷卻至室溫，在攪拌下倒入1升水中。通過(guò)傾析收集沉淀，并用乙醇(100mL)研制，獲得了3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)尿嘧啶(9，R＝H，X′＝OH)(500mg，75％)，mp237℃。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(8)，制得了下列2，3′-脫水-二-O-三苯基甲基化的核苷及其L-對(duì)應(yīng)物2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿苷，
2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)-尿苷，2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿苷，和2，3′-脫水-1-(2，5-二-O-三苯基甲基-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿苷。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷，制得了下列2，2′-脫水-3′，5′-二-O-三苯基甲基化的核苷及其L-對(duì)應(yīng)物2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-氟尿嘧啶，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-氯尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-溴尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碘尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-甲基尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-正丙基尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-異丙基尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙烯基尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙炔基尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)-尿苷，2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-苯基尿苷，和2，2′-脫水-1-(3，5-二-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-芐基尿苷。
實(shí)施例123′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(11，R＝H，X＝I，X′＝OH)將3′-O-甲磺?；?2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(8，1.61g，2mmol)、碘化鈉(3g，20mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(40mL)中的混合物加熱回流過(guò)夜。通過(guò)真空蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物溶解在二氯甲烷中。將該溶液依次用5％硫代硫酸鈉和水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空濃縮至干。用硅膠柱對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化，使用二氯甲烷-乙醚(3∶1v/v)洗脫，獲得了703mg(42％)3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(11，R＝H，X＝I，X′＝OH)。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的3′-O-甲磺酰基-2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(8)，制得了下列3′-碘衍生物及其L-對(duì)應(yīng)物3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氟尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氯尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-溴尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-碘尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-甲基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-正丙基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-異丙基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙烯基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙炔基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-苯基尿苷，和3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基-5-芐基尿苷。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的2′-O-甲磺?；?3′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷，制得了下列2′-碘衍生物及其L-對(duì)應(yīng)物2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氟尿苷，
2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-氯尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-溴尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-碘尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-甲基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-三苯基甲基-5-正丙基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-異丙基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙烯基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-乙炔基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-苯基尿苷，和2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基-5-芐基尿苷。實(shí)施例133′碘-3′-脫氧尿苷將3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷(840mg，1mmol)(11，R＝H，X＝I，X′＝OH)溶解在二氯甲烷與三氟乙酸的10∶1混合物(20mL)中，并將該混合物保持在室溫。真空除去溶劑，用乙醚(15mL×2)研制殘余物。將不溶于醚的殘余物從甲醇-乙醚中結(jié)晶，獲得了3′-碘-3′-脫氧尿苷(312mg，88.1％)。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的3′-脫氧-3′-碘-2′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷，制得了下列3′-碘尿苷衍生物及其L-對(duì)應(yīng)物3′-脫氧-3′-碘-5-氟尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-氯尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-溴-尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-碘尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-甲基-尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-乙基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-正丙基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-異丙基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-乙烯基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-乙炔基尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-(2-氯-乙烯基)-尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-(2-溴乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-(2-碘乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-(2-甲氧基羰基-乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-(2-羥基-羰基-乙烯基)尿苷，3′-脫氧-3′-碘-5-苯基尿苷和3′-脫氧-3′-碘-5-芐基-尿苷。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的2′-脫氧-2′-碘-3′，5′-二-O-三苯基甲基尿苷，制得了下列2′-碘尿苷衍生物及其L-對(duì)應(yīng)物2′-脫氧-2′-碘-5-氟尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-氯尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-溴-尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-碘尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-甲基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-乙基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-正丙基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-異丙基-尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-乙烯基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-乙炔基尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-(2-氯乙烯基)-尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-(2-溴乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-(2-碘乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-(2-羥基羰基-乙烯基)-尿苷，2′-脫氧-2′-碘-5-苯基尿苷和2′-脫氧-2′-碘-5-芐基尿苷。
實(shí)施例149-(2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)腺嘌呤(14，R＝H，X＝Br，Y＝NH2，Z＝H)將化合物14(R＝2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基，X＝Br，Y＝NH2，Z＝H，500mg，1mmol)溶解在氯化氫的甲醇溶液(通過(guò)將3滴乙酰氯加到10mL甲醇中制得的)中。在室溫保持30分鐘后，加入3mL飽和碳酸氫鈉溶液，將該混合物真空濃縮至干。用乙醇研制殘余物直至上清液在260nm不表現(xiàn)出顯著的UV吸收。將乙醇提取物濃縮，從甲醇中結(jié)晶殘余物，獲得了所需的14(R＝H，X＝Br，Y＝NH2，Z＝H)，325g(87％)。
1H NMR(D6-DMSO)δ8.16，8.32(2s，H-2 and H-8)，6.10(d，1H，H-1’，J1’，2’＝3.9Hz)，5.91(dd，1H，H-2’，J1’，2’＝3.9，J2’，3’＝4.1Hz)，5.85(dd，1H，H-3’，J2’，3’＝4.1，J3’，4’＝5.1Hz)，4.38(dt，1H，H-4’，J3’，4’＝5.1，J4’，5’＝J4，5”＝5.0Hz)，3.79(dd，2H，H-5’，5”)，2.09(s，3H，Ac).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘌呤核苷，制得了下列2′-O-乙?；?3′-溴-3′-脫氧-D-木糖核苷(14)及其L-對(duì)應(yīng)物9-(2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)鳥(niǎo)嘌呤，9-(2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-6-氯嘌呤，9-(2-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-2，6-二氯嘌呤，9-(2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-2-氨基-6-氯嘌呤，9-(2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基)-6-甲基硫嘌呤，和9-(2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-β-D-呋喃木糖基]-6-甲氧基嘌呤。
實(shí)施例159-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]腺嘌呤(14，R＝2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-酮-2-基，X＝Br，Y＝NH2，Z＝H)將腺苷(13，Y＝NH2，Z＝H，10g，0.037mol)與α-乙酰氧基-異丁酰溴(24g，0.117mol)在乙腈(120mL)中的混合物于室溫?cái)嚢?5分鐘。真空除去溶劑，將殘余物溶解在乙酸乙酯中，用碳酸氫鈉溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮。從甲醇中結(jié)晶出殘余物，獲得了6.5g(35％)14(X＝Br，Y＝NH2，Z＝H)，mp169-170℃。
1H NMR(D6-DMSO)δ8.17，8.26(2s，各1H，H-2和H-6)，6.16(d，1H，H-1’，J1’，2’＝3.5Hz)，5.94(dd，1H，H-2’，J1’，2’＝3.5Hz，J2’3’＝3.0Hz)，4.92(dd，1H，H-3’，J2’，3’＝3.0Hz，J3’，4’＝4.8Hz)，4.54(m，1H，H-4’)，3.94(m，2H，H-5’，5”)，2.10(s，3H，Ac)，1.73，1.58，1.47(3s，各3H，在5′上的CH3).如通過(guò)1H NMR所確定的那樣，14結(jié)晶的母液含有2′-溴-2′-脫氧-D-阿拉伯糖基異構(gòu)體15的混合物。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘌呤核苷，制得了下列3′-溴-3′-脫氧衍生物(14)及其L-對(duì)應(yīng)物9-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]-鳥(niǎo)嘌呤，9-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]-6-氯嘌呤，
9-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]-2，6-二氯嘌呤，9-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]-2-氨基-6-氯嘌呤，9-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]-6-甲基硫嘌呤，9-[2-O-乙?；?3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]-6-甲氧基嘌呤，9-[3-O-乙酰基-2-溴-2-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-阿拉伯呋喃糖基]鳥(niǎo)嘌呤，9-[3-O-乙?；?2-溴-2-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-阿拉伯呋喃糖基]-6-氯嘌呤，9-[3-O-乙?；?2-溴-2-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-阿拉伯呋喃糖基]-2，6-二氯嘌呤，9-[3-O-乙?；?2-溴-2-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-阿拉伯呋喃糖基]-2-氨基-6-氯嘌呤，9-[3-O-乙?；?2-溴-2-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-阿拉伯呋喃糖基]-6-甲基硫嘌呤，和(i)9-[3-O-乙?；?2-溴-2-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-阿拉伯呋喃糖基]-6-甲氧基嘌呤。
實(shí)施例162′，3′-脫水腺苷(18，Y＝NH2，Z＝H)在室溫將9-[2-O-乙酰基-3-溴-3-脫氧-5-O-(2，5，5-三甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷-4-酮-2-基)-β-D-呋喃木糖基]腺嘌呤14(5.0g，0.01mol)用1M甲醇鈉的甲醇溶液(20mL)處理1小時(shí)。用冰醋酸將該混合物中和，并在冰箱中保持過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾收集沉積的結(jié)晶18，2.1g(84％)。該樣本的1H NMR光譜與通過(guò)Mendez，E.等人.J.Virol.1998，72，4737的方法制得的樣本相同。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘌呤核苷，制得了下列2′，3′-脫水-D-核糖衍生物(18)及其L-對(duì)應(yīng)物2′，3′-脫水鳥(niǎo)苷，9-(2，3-脫水-β-D-呋喃核糖基]-6-甲基巰基嘌呤和9-(2，3-脫水-β-D-呋喃核糖基]-2-氨基-6-甲氧基嘌呤。
實(shí)施例179-(3-脫氧-3-碘-β-D-呋喃木糖基)腺嘌呤(19，X＝I，Y＝NH2，Z＝H)將18(Y＝NH2，Z＝H，1g，4mmol)、碘化鈉(1.5g，10mmol)、乙酸鈉(100mg)和乙酸(5mL)在丁酮(30mL)中的混合物輕微回流3小時(shí)。將溶劑真空蒸發(fā)，用水研制殘余物，獲得了19(X＝I，Y＝NH2，Z＝H)，1.2g(80％)。
1H NMR(D6-DMSO)δ8.24，8.34(2s，1H each，H-2 and H-8)，5.90(d，1H，H-1’，J1’，2’＝4.7Hz)，4.96(dd，1H，H-2’，J1’，2’＝4.7，J2’，3’＝4.9Hz)，4.60(dd，1H，H-3’，J2’，3’＝4.9，J3’，4’＝4.7Hz)，4.80，(d，2H，H-5’，5”)，4.40(m，1H，H-4’).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的2′，3′-脫水-D-核糖嘌呤核苷(14)，制得了下列3′-脫氧-3′-碘-D-木糖核苷及其L-對(duì)應(yīng)物9-(3-脫氧-3-碘-β-D-呋喃木糖基)鳥(niǎo)嘌呤，9-(3-脫氧-3-碘-β-D-呋喃木糖基)-6-甲基巰基嘌呤，9-(3-脫氧-3-碘-β-D-呋喃木糖基)-6-甲氧基嘌呤，9-(3-脫氧-3-碘-β-D-呋喃木糖基)-2-氨基-6-甲基巰基嘌呤，和9-(3-脫氧-3-碘-β-D-呋喃木糖基)-2-氨基-6-甲氧基嘌呤。
實(shí)施例183′-脫氧腺苷(20，Y＝NH2，Z＝H)在5％Pd/BaSO4催化劑(100mg)和三乙胺(1mL)存在下，將19(Y＝NH2，Z＝H，380mg，1mmol)在甲醇(75mL)中的溶液以3atm的初始?jí)毫υ跉錃夥障抡駬u過(guò)夜。除去催化劑之后，將溶劑真空蒸發(fā)，將殘余物從甲醇中結(jié)晶，獲得了3′-脫氧腺苷20(Y＝NH2，Z＝H)，200mg(80％)。該樣本的1H NMR光譜與蛹蟲(chóng)草菌素的相同。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的3′-碘-D-木糖嘌呤核苷(19)，制得了下列3′-脫氧-核苷及其L-對(duì)應(yīng)物9-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)鳥(niǎo)嘌呤，9-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-嘌呤，9-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲氧基嘌呤，9-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-氨基-嘌呤和9-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-氨基-6-甲氧基嘌呤。
實(shí)施例193-(β-D-呋喃核糖基)-8-氮雜黃嘌呤(24，X＝OH，Y＝N)向5-硝基尿苷(300mg)在DMF(60mL)內(nèi)的溶液中加入疊氮化鈉(100mg)，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空除去溶劑，將殘余物溶解在最小必需量的熱水中，用稀鹽酸將pH調(diào)節(jié)至3-4。將沉淀從水中重結(jié)晶，164-166℃(分解)。元素分析C9H11N5O6H2O的計(jì)算值C，35.64；H，4.29；N，23.1。實(shí)測(cè)值C，35.96；H，4.01；N，23.43。
實(shí)施例201，2-O-亞異丙基-5-O-甲氧基羰基-3-O-苯氧基硫代羰基-α-D-呋喃木糖(26，R＝Ph)向1，2-O-亞異丙基-5-O-甲氧基羰基-α-D-呋喃木糖(25，25.0g，0.1mol)和4-二甲基氨基吡啶(25g，0.2mol)在無(wú)水吡啶(250mL)內(nèi)的溶液中滴加氯硫代甲酸苯酯(50g，0.3mol)在乙腈(100mL)中的溶液，并將該反應(yīng)混合物在50-60℃攪拌24小時(shí)。將該溶液真空濃縮，將殘余物在二氯甲烷與水之間分配。將有機(jī)層依次用水、0.1N氫氧化鈉、水、0.1N鹽酸和水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空濃縮，以定量產(chǎn)率獲得了26(R＝Ph)，為漿狀物(38.2g)。將該漿狀物直接用于下一步驟。
實(shí)施例213-脫氧-1，2-O-亞異丙基-5-O-甲氧基羰基-α-D-赤呋喃戊糖(27)用3小時(shí)將三正丁基氫化錫(58g，0.2mol)在甲苯(300mL)中的溶液加到上述化合物26(R＝Ph)(19.2g，50mmol)和2，2′-偶氮二異丁腈(2.5g，15mmol)在甲苯(400mL)內(nèi)的回流溶液中。將該混合物真空濃縮，將殘余物溶解在乙腈(300mL)中，用石油醚(4×100mL)萃取該該溶液以除去三正丁基錫衍生物。將乙腈層濃縮。殘余物的薄層色譜顯示了一個(gè)主要點(diǎn)，1H NMR光譜表明存在3個(gè)甲基，沒(méi)有任何芳族質(zhì)子，但是摻雜有少量丁基錫衍生物。該產(chǎn)物不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
實(shí)施例221，2-二-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-D-赤呋喃戊糖(28)在冷卻下以將溫度保持在15-25℃的速度向23(2.32g，0.01mol)在乙酸(60mL)與乙酸酐(6mL)的混合物內(nèi)的攪拌溶液中滴加濃硫酸(3mL)。在室溫靜置過(guò)夜后，向該溶液中加入冰(250g)，然后用二氯甲烷(3×50mL)萃取該混合物。用飽和碳酸氫鈉溶液(3×30mL)洗滌合并的萃取液，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮，獲得了28(2.8g，100％)，為正位異構(gòu)體混合物。該化合物的純度足以不用進(jìn)一步純化而用于下一步驟。
實(shí)施例231-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氟尿嘧啶(29，X＝OH，Z＝F)將5-氟尿嘧啶(2.6g，0.02mol)、硫酸銨(約30mg)在六甲基乙硅氮烷(15mL)中的混合物回流直至獲得澄清溶液。真空除去溶劑，將殘余物溶解在1，2-二氯乙烷(20mL)中，加入在1，2-二氯乙烷(20mL)中的1，2-二-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-D-赤呋喃戊糖(28，5.5g，0.02mol)。向該溶液中加入四氯化錫(5.2g，0.02mol)，并將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后在40-50℃加熱3小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉溶液(40mL)，攪拌直至不再有二氧化碳釋放出來(lái)。經(jīng)由硅藻土墊過(guò)濾該混合物。分離出有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉溶液(20mL×2)和水(20mL×2)小心地洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮至干。將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了29(4.3g，62％)。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘧啶堿，制得了下列2′，5′-保護(hù)的3′-脫氧-核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基-尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基-尿嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙?；蜞奏?，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)-尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)-尿嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)-尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基羰基-乙烯基)尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基-乙烯基)尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基-胞嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基-胞嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙?；奏?，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)-胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)-胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)-胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基-羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基胞嘧啶，和1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基胞嘧啶。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘧啶和嘌呤堿，制得了下列2′，5′-二-O-乙?；?′-脫氧-核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙?；蜞奏?，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基尿嘧啶，
1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙酰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，
1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N6-苯甲?；汆堰?，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2，6-二氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲氧基嘌呤，和1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲基巰基嘌呤。
實(shí)施例241-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-氯嘌呤(30，X＝Cl，Y＝H)將6-氯嘌呤(3.1g，0.02mol)、硫酸銨(約30mg)在六甲基乙硅氮烷(25mL)中的混合物回流直至獲得澄清溶液。真空除去溶劑，將殘余物溶解在1，2-二氯乙烷(30mL)中，加入在1，2-二氯乙烷(20mL)中的1，2-二-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-D-赤呋喃戊糖(28，5.5g，0.02mol)。向該溶液中加入四氯化錫(5.2g，0.02mol)，并將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后在40-50℃加熱3小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)，攪拌直至不再有二氧化碳釋放出來(lái)。經(jīng)由硅藻土墊過(guò)濾該混合物。分離出有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉溶液(30mL×2)和水(30mL×2)小心地洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮至干。將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了30(4.3g，62％)。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘌呤堿，制得了下列2′，5′-保護(hù)的3′-脫氧-核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2-O-乙酰基-3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-N6-苯甲?；汆堰?，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-氯嘌呤，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-2，6-二氯嘌呤，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲氧基嘌呤，和1-(2-O-乙?；?3-脫氧-5-O-甲氧基羰基-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲基巰基-嘌呤。
實(shí)施例251，2-O-亞異丙基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-α-D-呋喃木糖(31)將1，2-O-亞異丙基-α-D-呋喃木糖(38.0g，0.2mol)、叔丁基二苯基氯甲硅烷(70g，0.25mol)和咪唑(21.5g，0.4mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，將殘余物溶解在乙酸乙酯(1L)中，用水(300mL×2)和鹽水(300mL)萃取，用硫酸鈉干燥，真空濃縮至干，獲得了粗產(chǎn)物31(86g，100％)，其不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
實(shí)施例26
1，2-O-亞異丙基-3-O-甲磺?；?5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-α-D-呋喃木糖(32，R＝Ms)將甲磺酰氯(17g，0.15mol)滴加到粗產(chǎn)物31(43g，0.1mol)在吡啶(100mL)內(nèi)的溶液中，將該混合物在室溫靜置過(guò)夜。向該混合物中加入碎冰(1L)，用二氯甲烷(300mL×3)萃取該產(chǎn)物。將萃取液合并，用水(300mL×2)和鹽水(300mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮至干。通過(guò)與甲苯反復(fù)共沸蒸餾除去微量吡啶。將殘余物溶解在二氯甲烷(500mL)中，用0.1N鹽酸(250mL×2)和水洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮至干，獲得了粗產(chǎn)物32(R＝Ms)，50.1g(9 9％)。該物質(zhì)的1H NMR光譜表明其純度足以直接用于下一步驟。
實(shí)施例27甲基3-O-甲磺?；?5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-D-呋喃木糖苷(33，R＝Ms)將粗產(chǎn)物32(50g，0.1mol)在1％氯化氫的無(wú)水甲醇溶液(1L)中的溶液在室溫保持過(guò)夜，然后真空蒸發(fā)至獲得了漿狀物，將其在水(100mL)與二氯甲烷(150mL)之間分配。分離出有機(jī)層，用水(100mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮，獲得了粗產(chǎn)物33，為漿狀物，重量為48g(100％)。該產(chǎn)物不用進(jìn)一步純化而直接用于下一步驟。
實(shí)施例28甲基2，3-脫水-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-D-呋喃核糖苷(34)將粗產(chǎn)物33(48g，0.1mol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，并用2M甲醇鈉的甲醇溶液(60mL)處理，并回流2小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾除去不溶性鹽，將濾液真空濃縮至干。將殘余物溶解在二氯甲烷(150mL)中，用水(100mL×2)洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮至干，獲得了粗產(chǎn)物30(38g，100％)，該產(chǎn)物可不用純化直接用于下一步驟。
實(shí)施例29甲基3-脫氧-3-碘-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-D-呋喃核糖苷(35，X＝I)將34(38g，0.1mol)、碘化鈉(60g，0.4mol)、乙酸鈉(0.6g)和乙酸(70mL)在丙酮(500mL)中的混合物加熱回流8小時(shí)。真空除去丙酮，將殘余物在二氯甲烷(500mL)與水(250mL)之間分配。分離出有機(jī)層，用分別是250mL的水、0.1M硫代硫酸鈉溶液和水洗滌，并用硫酸鈉干燥。真空除去溶劑后，將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了31g(60.5％)35(X＝I)。
實(shí)施例30甲基3-脫氧-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-D-赤呋喃戊糖苷(37，由35制得)用5％披鈀炭(2g)將化合物35(X＝I，25.6g，0.05mol)在乙酸乙酯(250mL)中氫化。不再消耗氫氣后，將該混合物過(guò)濾，將濾液用水(150mL×2)洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮至干，獲得了粗產(chǎn)物37(19g，定量產(chǎn)率)，其純度足以直接用于下一步驟。
實(shí)施例31甲基3-脫氧-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-D-赤呋喃戊糖苷(36，由34制得)將氫化鋰鋁(8.4g，0.2mol)在無(wú)水乙醚(220mL)中的懸浮液于氮?dú)夥障聰嚢?，并在冰浴中冷卻。以使得溫度保持25℃以下的速度向該懸浮液中滴加34(19g，0.05mol)在無(wú)水四氫呋喃(250mL)中的溶液。2小時(shí)后，再加入1g氫化鋰鋁，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該攪拌的混合物在冰浴中冷卻，滴加異丙醇(100mL)，然后加入丙酮(50mL)。將該混合物真空濃縮，將殘余物在乙醚(250mL)與水(150mL)之間分配。經(jīng)由硅藻土墊過(guò)濾除去不溶物，用乙醚洗滌。分離出乙醚層，依次用0.2N鹽酸(150mL×2)和水(150mL×2)洗滌，用硫酸鈉干燥，然后濃縮至干，獲得了粗產(chǎn)物36(16.5g，87％)。
實(shí)施例32甲基3-脫氧-D-赤呋喃戊糖苷(38)向粗產(chǎn)物36(13g，0.03mol)在四氫呋喃(320mL)內(nèi)的溶液中滴加1M三乙基氟化氫銨溶液(100mL)，將該混合物攪拌24小時(shí)。將該混合物真空濃縮，將殘余物溶解在水(200mL)中。加入碳酸鈣粉末(20g)，將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后過(guò)濾。將濾液真空濃縮至漿狀物，將其溶解在氯仿(200mL)中，過(guò)濾，真空蒸發(fā)，獲得了粗產(chǎn)物38(4.5g，100％)。
實(shí)施例331，2，5-三-O-乙酰基-3-脫氧-D-赤呋喃戊糖(38)向粗產(chǎn)物甲基3-脫氧-D-赤呋喃戊糖苷37(4.5g，0.03mol)和乙酸(80mL)的劇烈攪拌著的混合物中加入乙酸酐(40mL)，然后加入硫酸(4mL)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該混合物在二氯甲烷(150mL)與冰-水(400mL)之間分配。用二氯甲烷(100mL×2)萃取水層。將合并的有機(jī)層用等體積的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌2次，用水洗滌一次，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮至干。通過(guò)與甲苯共沸蒸餾數(shù)次來(lái)除去微量乙酸，獲得了粗產(chǎn)物38(5.1g，66％)。1H NMR光譜表明產(chǎn)物的主要成分含有3個(gè)乙?；?，并且是β-正位異構(gòu)體。
實(shí)施例341-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氟尿嘧啶(3′-脫氧-5-氟尿苷，6b，X＝OH，R＝F)將39的乙?；苌?X＝OH，Z＝F，3.3g，0.01mol)與三乙胺(3mL)在甲醇(100mL)中的混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將該混合物真空濃縮至干，將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了3′-脫氧-5-氟尿苷(2.0g，83％)，mp169-171℃。
1H NMR(D6-DMSO)δ11.7(bs，1H，N3-H，可交換的)，8.44(d，1H，H-6，J6，F(xiàn)＝7.1Hz)，5.7(d，1H，2’-OH，可交換的)，5.5(窄m，1H，H-1’)，5.3(t，1H，5’-OH，可交換的)，4.1-4.5(m，2H，H-2’和H-4’)，3.5-3.9(m，2H，H-5’，5”)，1.6-2.2(m，2H，H-3’，3”).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的2′，5′-二-O-乙?；奏ず袜堰屎塑?，制得了下列3′-脫氧-核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯尿嘧啶，
1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙?；蜞奏ぃ?-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙?；奏?，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基胞嘧啶，
1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基胞嘧啶，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-氯腺嘌呤，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-氯嘌呤，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2，6-二氯嘌呤，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲氧基嘌呤，和1-(3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-6-甲基巰基嘌呤。
實(shí)施例351-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶將5-氟尿嘧啶(0.02mol)、硫酸銨(約30mg)在六甲基乙硅氮烷(15mL)中的混合物回流直至獲得澄清溶液。真空除去溶劑，將殘余物溶解在1，2-二氯乙烷(20mL)中，加入在1，2-二氯乙烷(20mL)中的1，2，5-三-O-乙?；?3-O-甲磺?；?D-呋喃木糖(5.5g，0.02mol)。向該溶液中加入四氯化錫(5.2g，0.02mol)，并將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后在40-50℃加熱3小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉溶液(40mL)，攪拌直至不再有二氧化碳釋放出來(lái)。經(jīng)由硅藻土墊過(guò)濾該混合物。分離出有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉溶液(20mL×2)和水(20mL×2)小心地洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮至干。將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了標(biāo)題產(chǎn)物(62％)。該樣本的1H NMR光譜與所指出的結(jié)構(gòu)一致。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘧啶和嘌呤堿，制得了下列2′，5′-二-O-乙?；?′-取代的木糖核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；蜞奏?，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；奏?，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-芐基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-N6-苯甲?；汆堰?，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-6-氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-2，6-二氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-6-甲氧基嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-6-甲基巰基嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，
1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；蜞奏?，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，
1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；奏?，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基胞嘧啶，
1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-芐基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-N6-苯甲酰基腺嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-6-氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-2，6-二氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲苯磺?；?β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺?；?β-D-木糖型呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-木糖型呋喃戊糖基)-6-甲氧基嘌呤，和1-(2，5-二-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-6-甲基巰基嘌呤。
實(shí)施例361-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)胸腺嘧啶將胸腺嘧啶(0.02mol)、硫酸銨(約30mg)在六甲基乙硅氮烷(15mL)中的混合物回流直至獲得澄清溶液。真空除去溶劑，將殘余物溶解在1，2-二氯乙烷(20mL)中，加入在1，2-二氯乙烷(20mL)中的1，2，3，5-三-O-乙?；?D-呋喃木糖(5.5g，0.02mol)。向該溶液中加入四氯化錫(5.2g，0.02mol)，并將該混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后在40-50℃加熱3小時(shí)。加入飽和碳酸氫鈉溶液(40mL)，攪拌直至不再有二氧化碳釋放出來(lái)。經(jīng)由硅藻土墊過(guò)濾該混合物。分離出有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉溶液(20mL×2)和水(20mL×2)小心地洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮至干。將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了產(chǎn)物(4.3g，62％)。該樣本的1H NMR光譜與所指出的結(jié)構(gòu)一致。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的嘧啶和嘌呤堿，制得了下列2′，5′-二-O-乙?；?′-取代的木糖型核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(2 3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；蜞奏?，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，
1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；奏?，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-N6-苯甲?；汆堰?，1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-6-氯嘌呤，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-2，6-二氯嘌呤，
1-(2，3，5-三-O-乙酰基-β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-木糖型呋喃戊糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-木糖型呋喃戊糖基)-6-甲氧基嘌呤，和1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-6-甲基巰基嘌呤。
實(shí)施例371-(3-脫氧-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶將1-(2，5-二-O-乙酰基-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶(4.24g，0.01mol)在氨的甲醇溶液(100mL)中的混合物在0℃攪拌30分鐘，真空濃縮至干，將殘余物從乙醇中結(jié)晶，獲得了1-(3-脫氧-3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶(2.82g，83％)。1HNMR(D6-DMSO)表明分子中沒(méi)有任何乙?；?，但是有一個(gè)甲磺?；?。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的2′，5′-二-O-乙?；奏ず袜堰屎塑?，制得了下列3′-O-甲磺?；?核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；蜞奏ぃ?-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，
1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；奏ぃ?-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-5-芐基胞嘧啶，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-2-氯腺嘌呤，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-6-氯嘌呤，1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-2，6-二氯嘌呤，
1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(3-O-甲磺?；?β-D-呋喃木糖基)-6-甲氧基嘌呤，和1-(3-O-甲磺酰基-β-D-呋喃木糖基)-6-甲基巰基嘌呤。
實(shí)施例381-(β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶將1-(2，3，5-三-O-乙?；?β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶(3.88g，0.01mol)與三乙胺(3mL)在甲醇(100mL)中的混合物于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物真空濃縮至干，從乙醇中結(jié)晶殘余物，獲得了1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氟尿嘧啶(2.0g，76％)。該樣本的UV和1H NMR(Me2SO-d6)光譜與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)一致。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的2′，5′-二-O-乙?；奏ず袜堰蕢A，制得了下列木糖型-核苷及其L-對(duì)應(yīng)物1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氯尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-溴尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-碘尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氰基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；蜞奏ぃ?-(β-D-呋喃木糖基)-5-甲基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)尿嘧啶，
1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-苯基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-芐基尿嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氟胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氯胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-溴胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-碘胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氰基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙氧基羰基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-氨基羰基胞嘧啶，1-β-D-呋喃木糖基)-5-乙?；奏ぃ?-(β-D-呋喃木糖基)-5-甲基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-正丙基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-異丙基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙烯基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-烯丙基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-乙炔基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-氯乙烯基)胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-溴乙烯基)胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-碘乙烯基)胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-苯基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-5-芐基胞嘧啶，1-(β-D-呋喃木糖基)-2-氯腺嘌呤，1-(β-D-呋喃木糖基)-6-氯嘌呤，1-(β-D-呋喃木糖基)-2，6-二氯嘌呤，1-(β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-氯嘌呤，1-(β-D-呋喃木糖基)-2-乙酰氨基-6-甲氧基嘌呤，1-(β-D-呋喃木糖基)-6-甲氧基嘌呤，和
1-(β-D-呋喃木糖基)-6-甲基巰基嘌呤。
實(shí)施例392′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-N4-羥基胞苷在0℃，向2′，3′-O-亞異丙基-5-O-三苯基甲基尿苷(1g)在50mL無(wú)水乙腈和三乙胺(0.76g)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入2，4，6-三異丙基苯磺酰氯(1.15g)和DMAP(232mg)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?天。然后加入羥基胺鹽酸鹽(263mg)，并將該混合物在室溫再攪拌1天。通過(guò)加入水來(lái)中止該反應(yīng)，用氯仿(200mL)萃取產(chǎn)物。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并真空濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜純化殘余物(5％MeOH在CHCl3中的混合物)，獲得了2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯甲基-N4-羥基-胞苷(723mg，70％)，為白色固體。Mp99-101℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.34(s，3H)，1.56(s，3H)，3.40-3.73(m，2H)，4.26(br s，1H)，4.79-4.81(m，2H)，5.34(d，J＝8.12Hz，1H)，5.88(br s，1H)，6.88m(d，J＝8.12Hz，1H)，7.22-7.41(m，15H).
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的尿嘧啶核苷，合成了下列N4-羥基-2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基胞苷衍生物2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-氟-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-氯-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-溴-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-碘-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-甲基-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-乙基-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-正丙基-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-異丙基-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-乙烯基-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-乙炔基-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-(2-氯乙烯基)-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-(2-溴乙烯基)-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-(2-碘乙烯基)-N4-羥基胞苷，
2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-(2-羥基羰基乙烯基)-N4-羥基胞苷，2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-苯基-N4-羥基胞苷，和2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯基甲基-5-芐基-N4-羥基胞苷。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的2′，5′-二-O-乙酰基-3′-脫氧尿苷，合成了下列N4-羥基-2′，5′-二-O-乙?；?3′-脫氧胞苷衍生物1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氟-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氯-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-溴-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-碘-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氰基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙氧基羰基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-氨基羰基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙?；?N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-甲基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-正丙基-N4-羥基胞嘧啶，
1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-異丙基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙烯基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-烯丙基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-乙炔基-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-氯乙烯基)-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-溴乙烯基)-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-碘乙烯基)-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙酰基-3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-(2-羥基羰基乙烯基)-N4-羥基胞嘧啶，1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-苯基-N4-羥基胞嘧啶，和1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-5-芐基-N4-羥基胞嘧啶，按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脫氧尿苷，合成了下列N4-羥基-3′，5′-二-O-乙?；?N4-羥基-2′-脫氧胞苷衍生物3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-氟-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-氯-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-溴-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脫氧-5-碘-N4-羥基胞嘧啶，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-氰基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-乙氧基羰基-N4-羥基胞苷，
3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-氨基羰基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-乙?；?N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脫氧-5-甲基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-乙基-N4-羥基胞嘧啶，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-正丙基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-異丙基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-乙烯基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-烯丙基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-乙炔基-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-(2-氯乙烯基)-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脫氧-5-(2-溴乙烯基)-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脫氧-5-(2-碘乙烯基)-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-N4-羥基胞苷，3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-(2-羥基羰基乙烯基)-N4-羥基胞嘧啶，3′，5′-二-O-乙酰基-2′-脫氧-5-苯基-N4-羥基胞苷，和3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-5-芐基-N4-羥基胞苷。
實(shí)施例40N4-羥基胞苷將2′，3′-O-亞異丙基-5′-O-三苯甲基-N4-羥基胞苷(500mg，0.92mmol)溶解在50mL三氟乙酸與水(2∶1，v/v)的混合物中，將該溶液在50℃攪拌3小時(shí)。冷卻至室溫后，通過(guò)蒸發(fā)除去溶劑，與乙醇(3×20mL)共蒸發(fā)。通過(guò)硅膠色譜柱純化殘余物(20％MeOH在CHCl3中的混合物)，獲得了N4-羥基胞苷(215mg)，為白色固體，將其從熱的乙醇中重結(jié)晶；mp.173-176℃。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.66-3.71(m，2H)，3.93(br s，1H)，4.08-4.15(m，2H)，5.17-5.23(m，2H，D2O可交換的)，5.43(d，J＝6.00Hz，1H，D2O可交換的)，5.73(d，J＝8.16Hz，1H)，5.90(d，J＝8.12Hz，1H)，7.28(d，J＝8.40Hz，1H)，9.65(s，1H，D2O可交換的)，10.15(s，1H，D2O可交換的).
元素分析C9H13N3O6的計(jì)算值C，41.70；H，5.05；N，16.21.實(shí)測(cè)值C，41.85；H，5.14；N，16.34。
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的2′，3′-O-亞異丙基-5-O-三苯基甲基-N4-羥基胞苷核苷，合成了下列N4-羥基-5-取代的胞苷5-氟-N4-羥基胞苷，5-氯-N4-羥基胞苷，5-溴-N4-羥基胞苷，5-碘-N4-羥基胞苷，5-甲基-N4-羥基胞苷，5-乙基-N4-羥基胞苷，5-正丙基-N4-羥基胞苷，5-異丙基-N4-羥基胞苷，5-乙烯基-N4-羥基胞苷，5-乙炔基-N4-羥基胞苷，5-(2-氯乙烯基)-N4-羥基胞苷，5-(2-溴乙烯基)-N4-羥基胞苷，5-(2-碘乙烯基)-N4-羥基胞苷，5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-N4-羥基胞苷，5-(2-羥基羰基乙烯基)-N4-羥基胞苷，5-苯基-N4-羥基胞苷，和5-芐基-N4-羥基胞苷。
按照類似方法，但是使用氨的甲醇溶液代替三氟乙酸，并使用相應(yīng)的5-取代的1-(2，5-二-O-乙?；?3-脫氧-β-D-赤呋喃戊糖基)-N4-羥基胞嘧啶核苷，合成了下列N4-羥基-5-取代的3′-脫氧胞苷5-氟-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-氯-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-溴-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-碘-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-甲基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-乙基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-正丙基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-異丙基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，
5-乙烯基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-乙炔基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-氯乙烯基)-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-溴乙烯基)-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-碘乙烯基)-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-羥基羰基乙烯基)-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-苯基-3′-脫氧-N4-羥基胞苷，和5-芐基-3′-脫氧-N4羥基胞苷。
按照類似方法，但是使用氨的甲醇溶液代替三氟乙酸，并使用相應(yīng)的5-取代的3′，5′-二-O-乙?；?2′-脫氧-N4-羥基胞嘧啶核苷，合成了下列N4-羥基-5-取代的2′-脫氧胞苷5-氟-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-氯-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-溴-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-碘-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-甲基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-乙基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-正丙基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-異丙基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-乙烯基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-乙炔基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-氯乙烯基)-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-溴乙烯基)-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-碘乙烯基)-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-甲氧基羰基乙烯基)-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-(2-羥基羰基乙烯基)-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，5-苯基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷，和5-芐基-2′-脫氧-N4-羥基胞苷。
實(shí)施例412，3′-脫水-1-(2-脫氧-2-氟-5-O-三苯甲基-β-D-呋喃來(lái)蘇糖基)胸腺嘧啶(194，R＝Tr)將1-(2-脫氧-2-氟-3-O-甲磺酰基-5-O-三苯基甲基-β-D-阿拉伯呋喃糖基)胸腺嘧啶(193，R＝Tr，6.0g)和DBU(3.0mL)在二氯甲烷(50mL)中的溶液加熱回流16小時(shí)。將該混合物真空濃縮后，在硅膠柱上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化，用氯仿洗脫，從甲醇中重結(jié)晶后，獲得了4.4g 2，3′-脫水-1-(2′-脫氧-2′-氟-5-O-三苯甲基-β-D-呋喃來(lái)蘇糖基)胸腺嘧啶(194，R＝Tr)，mp252-255℃。
1H NMR(DMSO-d6)；δ1.80(s，3H，Me)，4.61(1H，m)，5.40(dm，1H)，5.89(1H，ddd)，5.96(1H，dd，H-1’)，7.30(15H，Tr)，7.66(s，1H，H-6).
實(shí)施例421-(2，3-二脫氧-2′-氟-5′-O-三苯甲基-β-D-甘油(glycero)-戊(pento)-2-烯呋喃糖基(enofuranosyl))-胸腺嘧啶(195，R＝Tr)將194(646mg)和t-BuOK(270mg)在DMSO(10mL)中的懸浮液于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后過(guò)濾。將濾液真空濃縮，在硅膠柱上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化(CHCl3/MeOH，49∶1 v/v)，獲得了600mg 195，mp.176-180℃(從EtOH中結(jié)晶)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.27(s，3H，Me)，3.21(m，2H，H-5，5”)，4.98(m，1H，H-4’)，6.17(t，1H，H-1’，J1’，2’＝J1’，F(xiàn)＝1.5Hz)，6.81(m，1H，H-3’)，7.32(m，16H，H-6，Tr)，11.52(s，1H，NH可交換的)，實(shí)施例431-(2，3-二脫氧-2-氟-β-D-甘油-2-烯呋喃糖基)胸腺嘧啶(196)將195(600mg)在80％乙酸水溶液(10mL)中的溶液加熱回流20分鐘，然后真空濃縮至干。在硅膠柱上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化(CHCl3/MeOH，9∶1v/v)，獲得了100mg 196，mp154-159℃(從EtOH-H2O中結(jié)晶)。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.76(s，3H，Me)，3.61(m，2H，H-5’，5”)，4.79(m，1H，H-4’)，5.15(t，1H，5’-OH，可交換的)，5.99(m，1H，H-1’)，6.76(m，1H，H-3’)，7.88(s，1H，H-6)，11.43(s，1H，NH，可交換的).
實(shí)施例44(1S，2S，3R，4R)-4-(叔丁氧基甲基)-2，3-(亞異丙二氧基)環(huán)戊-1-醇(219)在0℃，向4-(叔丁氧基甲基)環(huán)戊烷-2，3-二醇(218，5g)和CeCl3·7H2O(7.69g)在甲醇(80mL)內(nèi)的溶液中加入NaBH4(1.01g)，并將該混合物在0℃攪拌1小時(shí)。通過(guò)加入冷水來(lái)中止該反應(yīng)，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌(2×200mL)，用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮。在硅膠柱上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化(30％乙酸乙酯在正己烷中的混合物)，獲得了219(4.8g，95％)，為漿狀物。
1H-NMR(CDCl3)δ1.13(s，9H，t-Bu)，1.34(s，3H，Me)，1.48(s，3H，Me)，1.83(m，2H，5a，b-H)，2.19(m，1H，4-H)，2.44(d，OH，可交換的)，3.20(dd，J＝4.5，8.8Hz，1H，6a-H)，3.31(dd，J＝4.5，8.8Hz，1H，6b-H)，4.23(m，1H，1-H)，4.44(m，2H，2-H，3-H).
元素分析C13H24O4的計(jì)算值C，63.91；H，9.90。實(shí)測(cè)值C，64.09；H，9.87。
實(shí)施例45(1S，2S，3R，4R)-4-(叔丁氧基甲基)-2，3-(亞異丙二氧基)-1-甲磺酰氧基環(huán)戊烷(220)在0℃，向219(6.50g)和三乙胺(7.3g)在二氯甲烷(170mL)內(nèi)的溶液中滴加甲磺酰氯(4.73g)。45分鐘后，加入水(270mL)。用二氯甲烷(3×200mL)萃取水層。合并有機(jī)相，用鹽水(2×200mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮，獲得了粗產(chǎn)物220，其純度足以直接用于下一步驟。
實(shí)施例46(1R，2S，3R，4R)-1-疊氮基-4-(叔丁氧基甲基)-2，3-(亞異丙二氧基)環(huán)戊烷(221)將上面獲得的220與疊氮化鈉(17.3g)在DMF(300mL)中的混合物在140℃攪拌下加熱過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾，將濾液真空濃縮。將殘余物在乙酸乙酯(150mL)與水(50mL)之間分配。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，真空濃縮，在硅膠柱上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化(1-4％梯度的乙酸乙酯在正己烷中的混合物)，獲得了221(5.9g)，為油狀物。
1H NMR(CDCl3)δ1.18(s，9H，t-Bu)，1.30(s，3H，Me)，1.46(s，3H，Me)，1.71(m，1H，5a-H)，2.29(m，2H，4-H，5b-H)，3.29(dd，J＝6.7，8.8Hz，1H，6a-H)，3.37(dd，J＝7.0，8.8Hz，1H，6b-H)，3.96(m，1H，1-H)，4.40(dd，J＝2.3，6.1Hz，1H，3-H)，4.48(dd，J＝2.0，6.1Hz，1H，2-H).
元素分析C13H23N3O3·0.13EtOAc的計(jì)算值C，57.95；H，8.65，N，14.99.實(shí)測(cè)值C，58.25；H，8.71；N，14.76。
實(shí)施例47(1R，2S，3R，4R)-4-(叔丁氧基甲基)-2，3-(亞異丙二氧基)-1-環(huán)戊基胺(222)將221(4.0g)與10％Pd/C(1.0g)在無(wú)水乙醇(140mL)中的懸浮液于20psi的H2下振搖5小時(shí)。將該混合物過(guò)濾，將濾液真空濃縮，獲得了粗產(chǎn)物222(3.6g，定量產(chǎn)率)，其不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
1H NMR(CDCl3)δ1.18(s，9H，t-Bu)，1.28(s，3H，Me)，1.36(m，1H，5a-H)，1.45(s，3H，Me)，1.89(br s，2H，NH2)，2.24-2.36(m，2H，4-H，5b-H)，3.34-3.43(m，3H，1-H，6a，b-H)，4.21(dd，J＝2.6，6.2Hz，1H，3-H)，4.48(dd，J＝2.8，6.2Hz，1H，2-H).
元素分析C13H26NO3·0.16H2O的計(jì)算值C，63.41；H，10.37，N，5.69.實(shí)測(cè)值C，63.09；H，10.16；N，5.59。
實(shí)施例48
N-{[1R，2S，3R，4R)-4-(叔丁氧基甲基)-2，3-(亞異丙二氧基)環(huán)戊基]氨基羰基]-3-甲氧基-2-丙烯酰胺(223)將氰酸銀(7.60g，用五氧化二磷在黑暗中于100℃真空干燥3小時(shí))、β-甲氧基丙烯酰氯(2.64g)在無(wú)水苯(30mL)中的混合物加熱回流30分鐘，然后冷卻至室溫。沉淀沉降后，在-15至-20℃、氮?dú)夥障?，?5分鐘將含有β-甲氧基丙烯酰基異氰酸酯的22.5mL上清液加到222(3.0g)在無(wú)水DMF(50mL)內(nèi)的溶液中。在氮?dú)夥障拢瑢⒃摶旌衔镌?15℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?0小時(shí)以上。真空濃縮并與甲苯(2×20mL)共蒸發(fā)，產(chǎn)物223固化(4.0g)。
1HNMR(CDCl3)δ1.17(s，9H，t-Bu)，1.28(s，3H，Me)，1.47(s，3H，Me)，1.58(m，1H，5’a-H)，2.28(m，1H，4-H)，2.36-2.43(m，1H，5’b-H)，3.33-3.42(m，2H，6’a，b-H)，3.73(s，3H，OMe)，4.20(m，1H，3’-H)，4.45(m，2H，1’-H，2’-H)，5.35(d，J＝12.3Hz，1H，5-H)，7.67(d，J＝12.3Hz，1H，6-H)，8.72(br s，1H，NH)，9.35(br s，1H，NH).
元素分析C18H30N2O6的計(jì)算值C，58.36；H，8.16，N，7.56.實(shí)測(cè)值C，58.28；H，8.16；N，7.60。
實(shí)施例49(1′R，2′S，3′R，4′R)-1-[4-(叔丁氧基甲基)-2，3-亞異丙二氧基)環(huán)戊-1-基]尿嘧啶(5′-叔丁基-2′，3′-O-亞異丙基-carba-尿苷，224)將223(4.2g)在乙醇(25mL)和氫氧化銨(30％，11mL)中的溶液在不銹鋼彈中于100℃加熱1 2小時(shí)。除去溶劑后，在硅膠柱上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜純化(乙酸乙酯-正己烷，1∶1v/v)，獲得了224(3.21g)，為白色泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3)δ1.19(s，9H，t-Bu)，1.30(s，3H，Me)，1.54(s，3H，Me)，1.97(m，1H，5’a-H)，2.32-2.41(m，2H，4’-H，5’b-H)，3.43-3.50(m，2H，6’a，b-H)，4.48(dd，J＝4.1，6.5Hz，1H，3’-H)，4.65-4.75(m，2H，1’-H，2’-H)，5.72(d，J＝8.0Hz，1H，5-H)，7.35(d， J＝8.0Hz，1H，6-H)，8.63(br s，1H，NH).
元素分析C17H26N2O5的計(jì)算值C，60.34；H，7.74，N，8.28.實(shí)測(cè)值C，60.06；H，7.70；N，8.14。
實(shí)施例50(1′R，2′S，3′R，4′R)-1-[4-(叔丁氧基甲基)-2，3-亞異丙二氧基)環(huán)戊-1-基]-5-氟尿嘧啶(5′-O-叔丁基-2′，3′-O-亞異丙基-carba-5-氟尿苷，225)在室溫向224(2.50g)在乙酸(600mL)內(nèi)的溶液中小心地鼓入含有5％氟的氟-氮混合物30分鐘。將該混合物攪拌直至在TLC板上不能檢測(cè)到任何UV吸收。真空除去溶劑，將殘余物與乙酸(20mL)共蒸發(fā)至干燥。在50℃用三乙胺將殘余物處理1.5小時(shí)，然后真空濃縮至干。通過(guò)硅膠柱色譜純化殘余物(乙酸乙酯-正己烷，1∶1v/v)，獲得了225(1.31g)，為白色泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3)δ1.22(s，9H，t-Bu)，1.31(s，3H，Me)，1.55(s，3H，Me)，1.85(m，1H，5’a-H)，2.38-2.51(m，2H，4’-H，5’b-H)，3.44-3.52(m，2H，6’a，b-H)，4.47(dd，J＝3.4，6.2Hz，1H，3’-H)，4.58(t，J＝6.0Hz，1H，1’-H)，4.87(dd，J＝8.9，14.5Hz，1H，2’-H)，7.61(d，J＝6.1Hz，1H，6-H)，8.77(br s，1H，NH).
元素分析C17H25FN2O5·0.25H2O的計(jì)算值C，56.58；H，7.12，N，7.76.實(shí)測(cè)值C，56.20；H，7.02；N，7.50。
實(shí)施例51(1′R，2′S，3′R，4′R)-1-[4-(叔丁氧基甲基)-2，3-亞異丙二氧基)環(huán)戊-1-基]-5-氟胞嘧啶(226).(5′-O-叔丁基-2′，3′-O-亞異丙基-carba-5-氟胞苷)將225(350mg)、三乙胺(190mg)、2，4，6-三異丙基苯磺酰氯(590mg)和DMAP(230mg)在乙腈(50mL)中的混合物在室溫?cái)嚢?天。加入氫氧化銨溶液(30％，15mL)，將該混合物再攪拌5小時(shí)。通過(guò)加入氯仿(250mL)和水(10mL)來(lái)中止該反應(yīng)。用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，并真空濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜純化殘余物(5％MeOH在CHCl3中的混合物，v/v)，獲得了226(205mg)，mp128-130℃。UV(MeOH)λmax286.5 nm.1H NMR(CDCl3)δ1.19(s，9H，t-Bu)，1.29(s，3H，Me)，1.53(s，3H，Me)，2.02(dt，J＝10.2，12.8Hz，1H，5’a-H)，2.32(m，1H，4’-H)，2.42(dt，J＝8.0，12.7Hz，1H，5’b-H)，3.42(dd，J＝6.1，8.7Hz，1H，6’a-H)，3.52(dd，J＝4.1，8.8Hz，1H，6’b-H)，4.49(dd，J＝5.1，6.3Hz，1H，3’-H)，4.60(m，1H，1’-H)，4.79(dd，J＝5.0，6.4Hz，1H，2’-H)，7.49(d，J＝6.1Hz，1H，6-H).HR-FAB MS Obsd；m/z 356.1981.Calcdfor C17H26FN3O4m/z 356.1986(M+1)+.
實(shí)施例52(1′R，2′S，3′R，4′R)-1-[2，3-二羥基-4-(羥基甲基)環(huán)戊-1-基]-5-氟胞嘧啶(carba-5-氟胞苷，227)將226(180mg)在三氟乙酸與水的混合物2∶1(v/v)(40mL)中的溶液在50℃攪拌3小時(shí)。真空除去溶劑，將殘余物與乙醇(2×30mL)共蒸發(fā)，在硅膠柱上純化(MeOH-CHCl3，1∶5v/v)，獲得了227(47.5mg)，為泡沫狀物。
UV(H2O)λmax284nm(ε5,876，pH7)，293.5nm(ε7,440，pH2)，2845nm(ε5,883，pH11).1H NMR(DMSO-d6)δ1.19(m，1H，5’a-H)，1.92(m，1H，4’a-H)，2.00(ddd，J＝8.3，8.7，12.5Hz，1H，5’b-H)，3.42(m，2H，6’ab-H)，3.70(dd，J＝2.9，5.3Hz，1H，3’b-H)，3.98(dd，J＝5.2，9.0Hz，1H，2’-H)，4.10(d，J＝4.5，1H，OH，可交換的)，4.51(br s，1H，OH，可交換的)，4.60(dd，J＝9.0，18.2 Hz，1H，1’-H)，4.73(d，J＝6.1Hz，1H，OH，可交換的)，7.33(bs，1H，可交換的)，7.55(bs，1H，可交換的)，7.98(d，J＝7.3Hz，1H，6-H).HR-FAB MSObsd；m/z 260.1054.Calcd for C17H26FN3O4m/z 260.1047(M+1)+.
按照類似方法，但是使用相應(yīng)的5-取代的衍生物，制得了下列5-取代的carba-核苷5-氯-carba-尿苷，5-溴-carba-尿苷，5-碘-carba-尿苷，5-氰基-carba-尿苷，cara-尿苷-5-甲酸，5-乙氧基羰基-carba-尿苷，
carba-尿苷-5-甲酰胺，5-羥基甲基-carba-尿苷，5-硝基-carba-尿苷，5-氨基-carba-尿苷，5-氯-carba-胞苷，5-溴-carba-胞苷，5-碘-carba-胞苷，5-氰基-carba-胞苷，cara-胞苷-5-甲酸，5-乙氧基羰基-carba-胞苷，carba-胞苷-5-甲酰胺，5-羥基甲基-carba-胞苷，5-硝基-carba-胞苷，和5-氨基-carba-胞苷。
XI.生物學(xué)方法本發(fā)明還提供了使用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(“Q-RT-PCR”)來(lái)定量測(cè)定宿主中病毒負(fù)載量的一種有效方法。該方法包括使用可雜交到靶病毒DNA或RNA上的猝滅熒光探針?lè)肿?。?jīng)過(guò)核酸外切降解，可監(jiān)測(cè)可檢測(cè)的熒光信號(hào)。因此，使用該技術(shù)，通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的存在可實(shí)時(shí)探測(cè)RT-PCR擴(kuò)增的DNA或RNA。
在一個(gè)具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了RT-PCR在定量測(cè)定黃病毒科病毒的病毒負(fù)載量中的應(yīng)用。
在一個(gè)更具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了RT-PCR在定量測(cè)定MDBK細(xì)胞系或宿主樣本中BVDV的病毒負(fù)載量中的應(yīng)用。
在另一個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與BVDV NADL NS5B區(qū)域互補(bǔ)的探針?lè)肿印?br> 在一個(gè)更具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了探針?lè)肿?，所述探針?lè)肿泳哂行蛄?′6-fam-AAATCCTCCTAACAAGCGGGTTCCAGG-tamara-3′(Sequence ID No 1)，和引物，所述引物具有正義序列5′-AGCCTTCAGTTTCTTGCTGATGT-3′(Sequence ID No 2)和反義序列5′-TGTTGCGAAAGCACCAACAG-3′(Sequence ID No 3)。
在一個(gè)具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了RT-PCR在實(shí)時(shí)定量測(cè)定宿主衍生樣本或細(xì)胞系中的HCV的病毒負(fù)載量中的應(yīng)用。
在一個(gè)具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了RT-PCR的應(yīng)用，設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與HCV基因組互補(bǔ)的探針?lè)肿印?br> 在一個(gè)更具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了RT-PCR的應(yīng)用，設(shè)計(jì)成經(jīng)過(guò)核酸外切降解發(fā)出熒光并與HCV 5′-未翻譯區(qū)域互補(bǔ)的探針?lè)肿印?br> 在一個(gè)更具體的本發(fā)明實(shí)施方案中，提供了探針?lè)肿樱鎏结樂(lè)肿泳哂行蛄?′6-fam-CCTCCAGGACCCCCCCTCCC-tamara-3′(SequenceID No 4)，和引物，所述引物具有正義序列5′-AGCCATGGCGTTAGTA(T/C)GAGTGT-3′(Sequence ID No 5)和反義序列5′-TTCCGCAGACCACTATGG-3′(Sequence ID No 6)。
A.RNA分離和定量RT-PCR分析本發(fā)明提供了稱為實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(“RT-PCR”)的定量測(cè)定宿主中病毒負(fù)載量的有效方法。該方法包括使用可雜交到病毒DNA或RNA上的猝滅熒光探針?lè)肿?。因此，?jīng)過(guò)核酸外切降解，可監(jiān)測(cè)可檢測(cè)的熒光信號(hào)。因此，通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的存在可實(shí)時(shí)探測(cè)RT-PCR擴(kuò)增的DNA或RNA。
作為該方法的一個(gè)實(shí)例，對(duì)于MDBK細(xì)胞中的BVDV，在第一個(gè)步驟中，通過(guò)市售柱(Viral RNA extraction kit，QiaGen，CA)從140μL細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中分離出病毒RNA。然后將病毒RNA從柱上洗脫下來(lái)以獲得60μL的總體積，然后通過(guò)使用適于BVDV NADL株的引物的定量RT-PCR方法擴(kuò)增。將猝滅熒光探針?lè)肿与s交到BVDV DNA上，之后經(jīng)過(guò)核酸外切降解，生成可檢測(cè)到的熒光信號(hào)。因此，通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的存在來(lái)實(shí)時(shí)探測(cè)RT-PCR擴(kuò)增的DNA。借助于來(lái)Primer Express軟件(PE-Applied Biosystems)來(lái)設(shè)計(jì)TaqMan探針?lè)肿?5′-6-fam-AAATCCTCCTAACAAGCGGGTTCCAGG-tamara 3′[Sequence ID No 1]和引物(正義5′-AGCCTTCAGTTTCTTGCTGATGT-3′[Sequence ID No 2]；和反義5′-TGTTGCGAAAGCACCAACAG-3′[Sequence ID No 3])以與BVDVNADL NS5B區(qū)域互補(bǔ)。在50μL RT-PCR混合物中分析總共10μL RNA。用于定量測(cè)定PCR的試劑和條件購(gòu)自PE Applied Biosystems。使用濃度為6000噬斑形成單位(PFU)-0.6 PFU/份RT-PCR混合物的未稀釋接種病毒來(lái)產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。通常獲得超過(guò)4-log的線性范圍。
可采用比較方法來(lái)測(cè)定其它黃病毒科病毒(主要是HCV、YFV、登革熱病毒、西尼羅河病毒等)在臨床樣本或組織培養(yǎng)樣本中的量。例如，HCV RNA純化與使用下述引物(5′-TTCCGCAGACCACTATGG-3′[Sequence ID No.4]和5′-AGCCATGGCGTTAGTATGAGTGT-3′[SequenceID No.5])和探針(5′-6-fam-CCTCCAGGACCCCCCCTCCC-tamara-3′[Sequence ID No.6])的實(shí)時(shí)RT-PCR的組合可獲得7-log線性范圍的病毒負(fù)載量檢測(cè)。
B.細(xì)胞/病毒材料其特征被最好地確定的一個(gè)瘟病毒屬成員是BVDV。BVDV與HCV具有至少3個(gè)下列所述的共有特征(1)它們都經(jīng)歷IRES-介導(dǎo)的翻譯；(2)NS4A輔因子是其NS3絲氨酸蛋白酶所必需的；(3)它們經(jīng)歷在非結(jié)構(gòu)區(qū)域，尤其是在NS5A和NS5B接合位點(diǎn)的類似多蛋白加工。
使用BVDV復(fù)制系統(tǒng)來(lái)發(fā)現(xiàn)抗黃病毒科化合物。本發(fā)明所述化合物具有抗瘟病毒屬、Hepaciviruse和/或黃病毒屬的活性。
將Maldin-Darby牛腎(MDBK)細(xì)胞在補(bǔ)充10％熱滅活馬血清的改進(jìn)的eagle培養(yǎng)基(DMEM/F12；GibcoBRL)中于37℃在濕潤(rùn)的5％CO2培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)和保持。
牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)株NADL在感染這些細(xì)胞后引起致細(xì)胞病變作用(CPE)。
C.抗病毒測(cè)定使用胰蛋白酶-EDTA，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離出在DMEM/F12-10％馬血清(HS)中生長(zhǎng)的MDBK細(xì)胞。將細(xì)胞以5×104個(gè)細(xì)胞/孔的濃度與測(cè)試化合物(20微摩爾(μM)濃度)接種到96-孔平板中以給出100微升(μL)的總體積。1小時(shí)后，除去培養(yǎng)基，將細(xì)胞在50μL的總體積中以0.02或0.002的感染復(fù)數(shù)(MOI)感染45分鐘。然后除去病毒，并用100μL測(cè)定培養(yǎng)基洗滌2次。最后，將感染的細(xì)胞以含有濃度為10、40或100μM的測(cè)試化合物的100μL總體積接種。22小時(shí)后，通過(guò)經(jīng)由低速離心除去細(xì)胞碎屑來(lái)收集細(xì)胞上清液，然后以定量方式測(cè)定病毒的存在。
D.測(cè)試抗黃病毒科化合物的細(xì)胞毒性該實(shí)施例所進(jìn)行的細(xì)胞毒性測(cè)試是標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。簡(jiǎn)言之，在遞增濃度的測(cè)試化合物(0、1、3、10、33和100μM)存在下，將細(xì)胞以不同濃度(取決于細(xì)胞類型、測(cè)定持續(xù)時(shí)間)，典型地是以5×103個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種到96-孔平板中。培養(yǎng)3天后，通過(guò)加入MTS-染料(Promega)，然后培養(yǎng)3小時(shí)來(lái)測(cè)定細(xì)胞存活力和線粒體活動(dòng)。然后在490nm讀取含有染料的平板。制造商(Promega)很好地描述并提供了這樣的操作方法。
實(shí)施例53BVDV RT-PCR定量標(biāo)準(zhǔn)曲線如通過(guò)常規(guī)噬斑分析(Mendez，E.等人.J.Virol.1998，72，4737)所測(cè)定的那樣，標(biāo)準(zhǔn)BVDV病毒貯備液含有2×106PFU/mL。從140μL該接種材料中提取病毒RNA，使用60μL洗脫緩沖液洗脫。然后將該純化的RNA材料從10-1逐步稀釋到10-5。使用實(shí)時(shí)RT-PCR擴(kuò)增技術(shù)，測(cè)試10μL每一稀釋液。該連續(xù)稀釋的結(jié)果在附圖1中繪圖表示，該圖將PFU與標(biāo)準(zhǔn)物的濃度聯(lián)系起來(lái)。從該實(shí)驗(yàn)可以清楚地看出，該技術(shù)給出了超過(guò)4-log的病毒可靠定量測(cè)定(在擴(kuò)增混合物中從6000至0.6PFU/輸入)。在該實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)的下限是0.6PFU或-0.22log PFU。因此，低于該檢測(cè)限的測(cè)試樣本的實(shí)時(shí)RT-PCR定量測(cè)定值視為不可靠。
實(shí)施例54MDBK細(xì)胞中的BVDV復(fù)制周期為了測(cè)定MDBK細(xì)胞中的BVDV產(chǎn)生以及測(cè)定在一定時(shí)間內(nèi)的最近收獲時(shí)間，將細(xì)胞以5×104個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種，并以MOI＝0.02或MOI＝0.002接種。感染后，除去接種物，并用培養(yǎng)基將細(xì)胞洗滌2次。在不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞上清液；測(cè)定病毒的量，并與初始接種物和細(xì)胞洗滌液比較。如附圖2所示，至少需要2個(gè)洗滌步驟來(lái)除去接種的病毒。感染22小時(shí)后所產(chǎn)生的病毒的量大約等于接種細(xì)胞所用的病毒的量。根據(jù)這些結(jié)果，MDBK細(xì)胞中一個(gè)BVDV復(fù)制周期為22小時(shí)。注意，在這些實(shí)驗(yàn)中設(shè)定的檢測(cè)水平是基于通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的檢測(cè)下限。
實(shí)施例55使用RT-PCR評(píng)價(jià)抗病毒化合物將MDBK細(xì)胞以5×104個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種，用BVDV以0.02的感染復(fù)數(shù)(MOI)感染，并在測(cè)試化合物存在下生長(zhǎng)22小時(shí)。將未用測(cè)試化合物處理的細(xì)胞作為陰性對(duì)照，利巴韋林用作陽(yáng)性對(duì)照。提取病毒RNA，并通過(guò)實(shí)時(shí)RT-PCR進(jìn)行分析。附圖3所示的典型實(shí)驗(yàn)證實(shí)了陰性對(duì)照和大部分處理的細(xì)胞產(chǎn)生了相差不大的病毒(1.5-2logPFU/輸入)，這有效地表明了測(cè)試化合物是沒(méi)有活性的。然而，用陽(yáng)性對(duì)照利巴韋林(RIB)或用5-羥基尿苷(β-D-CL)處理的細(xì)胞表現(xiàn)出幾乎完全不存在病毒RNA。在22小時(shí)的繁殖期間，RIB和β-D-CL將病毒產(chǎn)量減少了大約2log PFU或99％。從該種實(shí)驗(yàn)中不能推斷出這些化合物的精確效力，因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)中的檢測(cè)限設(shè)定為-0.22log PFU，并且在所述實(shí)驗(yàn)條件下僅進(jìn)行了一個(gè)病毒復(fù)制周期。
在一組類似實(shí)驗(yàn)中，加大測(cè)試化合物的濃度范圍(0、1、3、10、33、100μM)，來(lái)測(cè)定抗BVDV化合物的效力或者將病毒產(chǎn)量抑制50％或90％時(shí)化合物的有效濃度(分別是EC50或EC90值)。EC90值是指在22小時(shí)期間內(nèi)獲得病毒產(chǎn)量的1-log減少所必需的濃度。表21列出了表現(xiàn)出有效抗病毒活性的化合物。該表給出了在感染22小時(shí)后以給定濃度觀察到的最大病毒負(fù)載量減少。
表21感染22小時(shí)后的BVDV病毒負(fù)載量
實(shí)施例56測(cè)定抗病毒活性的另一細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)可通過(guò)改變細(xì)胞系統(tǒng)和病毒病原體來(lái)使上述測(cè)定適于黃病毒科的其它成員。測(cè)定這些抗病毒化合物的效力的方法包括如在下列文獻(xiàn)中描述的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)的改進(jìn)形式Holbrook，MR等人.Virus Res.2000，69(1)，31；Markland，W等人.Antimicrob.Agents.Chemother.2000，44(4)，859；Diamond，MS等人，J.Virol.2000，74(17)，7814；Jordan，I.等人，J.Infect.Dis.2000，182，1214；Sreenivasan，V.等人.J.Virol.Methods1993，45(1)，1；或Baginski，SG等人.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2000，97(14)，7981，或?qū)崟r(shí)RT-PCR技術(shù)。具體來(lái)說(shuō)，可使用在HuH7細(xì)胞中的HCV復(fù)制子系統(tǒng)(Lohmann，V等人Science，1999，285(5424)，110)或其改進(jìn)形式(Rice等人.2000，abstract Xth International Symposium for ViralHepatitis and Liver Disease，Atlanta，GA)。
實(shí)施例57測(cè)試候選化合物的細(xì)胞毒性該實(shí)施例所進(jìn)行的細(xì)胞毒性測(cè)試是標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。簡(jiǎn)言之，在遞增濃度的測(cè)試化合物(0、1、3、10、33和100μM)存在下，將細(xì)胞以不同濃度(取決于細(xì)胞類型、測(cè)定持續(xù)時(shí)間)，典型地是以5×103個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種到96-孔平板中。培養(yǎng)3天(Vero細(xì)胞)、4天(CEM細(xì)胞)或5天(PBM細(xì)胞)后，通過(guò)加入MTT-染料(Promega)，然后培養(yǎng)8小時(shí)來(lái)測(cè)定細(xì)胞存活力和線粒體活性。之后通過(guò)加入停止溶液后再進(jìn)行8小時(shí)培養(yǎng)，來(lái)固定含有涂料的諸板。最后在570nm讀取吸收度。制造商(Promega)很好地描述并提供了這樣的操作方法。
表22中列出了在該方法中測(cè)試的化合物的相關(guān)目錄。雖然測(cè)試化合物一般沒(méi)有細(xì)胞毒性，但是化合物β-D-GA表現(xiàn)出對(duì)CEM細(xì)胞的選擇性細(xì)胞毒害作用。
表22V-a和VIIIa的細(xì)胞毒性*
*IC50μM(在100μM的％抑制)實(shí)施例58測(cè)試候選化合物對(duì)呼吸系統(tǒng)病毒的抗病毒作用在這些實(shí)驗(yàn)期間，測(cè)試了通式(I)化合物抗感染上呼吸道的一組病毒的抗病毒活性。用于這些目的的方法已很好地描述過(guò)。下列方案是得自Virology Branch，Division of Microbiology and InfectiousDiseases，NIAID，NIH的標(biāo)準(zhǔn)操作方法。
A.用于初次篩選的病毒和細(xì)胞系(i)甲型和乙型流感病毒病毒株A/Beijing/262/95(H1N1)(Source CDC)；A/Sydney/05/97(H3N2)(source CDC)；B/Beijing/184/93(sourceCDC)。
細(xì)胞系Maldin Darby Canine Kidney(MDCK)(ii)呼吸道合胞體病毒(RSV)病毒株A2(sourceATCC)。
細(xì)胞系A(chǔ)frican Green Monkey kidney(MA-104)細(xì)胞(iii)3型副流感病毒病毒株14702(sourceisolate 5/95 Boivin，Montreal Canada)細(xì)胞系A(chǔ)frican Green Monkey kidney(MA-104)細(xì)胞B.測(cè)定抗病毒活性的方法(i)抑制病毒致細(xì)胞病變作用(CPE)該測(cè)試是在96-孔微量滴定板中進(jìn)行的。在該CPE抑制測(cè)試中，將每一測(cè)試化合物的4log10稀釋液加到3個(gè)含有單層細(xì)胞的杯子中，在5分鐘內(nèi)，加入病毒并將平板密封，在37℃培養(yǎng)，當(dāng)未處理的感染對(duì)照達(dá)到3-4+CPE時(shí)(約72-120小時(shí))，用顯微鏡讀取CPE。在各個(gè)測(cè)試中，以與測(cè)試藥物平行的方式評(píng)價(jià)已知的陽(yáng)性對(duì)照藥物。對(duì)于流感病毒、麻疹病毒、RSV和副流感病毒，該藥物是利巴韋林。
(ii)增加中性紅(NR)染料攝取進(jìn)行該測(cè)試是為了確認(rèn)在初始測(cè)試中觀察到的CPE抑制，并且在CPE已經(jīng)變?yōu)榧t色后使用同一96-孔微平板。將中性紅加到培養(yǎng)基中；沒(méi)有被病毒破壞的細(xì)胞攝取更大量的染料，在使電腦化微平板讀數(shù)器上讀取。使用McManus描述的方法(Appl.Environment.Microbiol.3135-38，1976)。從該染料攝取中確定EC50。
(iii)證實(shí)測(cè)試CPE-視覺(jué)和病毒產(chǎn)量測(cè)定使用CPE抑制和減少病毒產(chǎn)量作用的試驗(yàn)再測(cè)試通過(guò)CPE抑制和NR染料攝取證實(shí)有活性的化合物。通過(guò)系列稀釋到單層易感細(xì)胞上來(lái)測(cè)定從初始測(cè)試中收集的洗脫物的病毒效價(jià)。CPE在這些細(xì)胞中的發(fā)展是存在感染性病毒的指示。由這些數(shù)據(jù)確定EC90，EC90是將病毒產(chǎn)量抑制1-log的藥物濃度。
表23總結(jié)了部分抗病毒測(cè)試的結(jié)果。β-D-BS具有有效的抗黃病毒科活性，并且具有抗甲型和乙型流感病毒的有效體外抗病毒能力，以及抗RSV的某些活性。沒(méi)有抗3型副流感病毒的活性，這表明該化合物具有抗一些種類但不是全部RNA病毒的特異性抗病毒作用。
此外，化合物β-D-CL是有效的體外抗RSV化合物，選擇性指數(shù)為150。
表23對(duì)呼吸系統(tǒng)病毒的抗病毒作用初始測(cè)試，通過(guò)CPE抑制(視覺(jué)觀察)用呼吸系統(tǒng)病毒進(jìn)行抗病毒篩選
初始測(cè)試，通過(guò)中性紅用呼吸系統(tǒng)病毒進(jìn)行抗病毒篩選β-D-AJ β-D-BSβ-D-CL β-D-DJ甲型流感病毒EC50(μM)150 1.2 8 ＞500(H1N1)初始測(cè)試，通過(guò)中性紅用呼吸系統(tǒng)病毒進(jìn)行抗病毒篩選
β-D-AJβ-D-BSβ-D-CLβ-D-DJSI**＞3.3 1161.1 0甲型流感病毒EC50(μM) ＞500 4 ＞5 ＞500(H3N2)SI**0 20 0 0EC50(μM) 1501.2＞5 110乙型流感病毒SI**＞3.3 1330 4.5EC50(μM) ＞500 ＜0.5 ＜0.5 ＞500RSV*SI**0 ＞30 ＞170 03型副流感病毒EC50(μM) ＞500 40 40 500SI**0 1 1 ＞1證實(shí)測(cè)試，通過(guò)視覺(jué)觀察用呼吸系統(tǒng)病毒進(jìn)行抗病毒篩選(EC50)β-D-BS甲型流感病毒EC50(μM) 1.3(H1N1)SI**＞246甲型流感病毒EC50(μM) 0.5(H3N2)SI**＞640EC50(μM) 0.6乙型流感病毒SI**＞533證實(shí)測(cè)試，通過(guò)產(chǎn)量用呼吸系統(tǒng)病毒進(jìn)行抗病毒篩選(EC90)
β-D-BS甲型流感病毒EC50(μM) 0.4(H1N1)SI**＞800甲型流感病毒EC50(μM) 0.32(H3N2)β-D-BSSI**＞1000EC50(μM) 0.6乙型流感病毒SI**＞533*RSV呼吸道合胞體病毒A**SI選擇性指數(shù)(IC50/EC90)實(shí)施例59測(cè)定候選化合物抗黃病毒科的抗病毒測(cè)試A.在Huh7細(xì)胞中的HCV復(fù)制子系統(tǒng)可在含有10％胎牛血清、1×非必需氨基酸Pen-Strep-Glu(分別是100單位/升，100微克/升，和2.92mg/升)和500-1000微克/毫升G418的DMEM培養(yǎng)基(高葡萄糖，不含丙酮酸鹽)中培養(yǎng)含有HCV復(fù)制子的HuH7細(xì)胞?？扇缦滤鲈诓缓珿418的相同培養(yǎng)基中進(jìn)行抗病毒篩選測(cè)定為了將細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以低密度例如1000個(gè)細(xì)胞/孔將細(xì)胞接種到96孔中。接種細(xì)胞后立即加入測(cè)試化合物，在培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)3-7天。然后除去培養(yǎng)基，制備細(xì)胞以提取總的核酸(包括復(fù)制子RNA和宿主RNA)。然后在Q-RT-PCR方案中擴(kuò)增復(fù)制子RNA，并因此定量測(cè)定。在復(fù)制子RNA定量測(cè)定中觀察到的差異是表示測(cè)試化合物抗病毒效力的一個(gè)方法。典型實(shí)驗(yàn)證實(shí)了，在陰性對(duì)照和沒(méi)有活性的化合物組中產(chǎn)生了相差不大的復(fù)制子的量。這可以推斷出來(lái)，因?yàn)樵趦山M中測(cè)定的HCV RT-PCR的閾-周期彼此接近。在這樣的實(shí)驗(yàn)中，表示化合物抗病毒有效性的一個(gè)方法是從測(cè)試化合物的閾RT-PCR周期減去陰性對(duì)照的平均閾RT-PCR周期。該值稱為δCt(ΔCt或DCt)。在復(fù)制子產(chǎn)生中，3.3的ΔCt等于1-log減少(等于EC90)。導(dǎo)致HCV復(fù)制子RNA水平減少程度大于2ΔCt(復(fù)制子RNA減少75％)的化合物是抗病毒治療的候選化合物。這樣的候選化合物屬于通式(I)-(XXIII)結(jié)構(gòu)。表24給出了如果目標(biāo)化合物以所述方式培養(yǎng)96小時(shí)可獲得的平均ΔCt值(N＝測(cè)試的時(shí)間)。至于陽(yáng)性對(duì)照，使用重組干擾素α-2a(Roferon-A，Hoffmann-Roche，New Jersey，USA)作為陽(yáng)性對(duì)照。
然而，該HCV ΔCt值不包括編碼病毒RNA-依賴性RNA聚合酶的復(fù)制子的任何特異性參數(shù)。在典型的組中，化合物既可以降低宿主RNA聚合酶活性，也可以降低復(fù)制子-編碼的聚合酶活性。因此，rRNA(或任何其它宿主RNA聚合酶I產(chǎn)物)或β-肌動(dòng)蛋白mRNA(或任何其它宿主RNA聚合酶II)的定量測(cè)定以及與未使用藥物的對(duì)照的RNA水平比較是確定測(cè)試化合物對(duì)宿主RNA聚合酶的作用的有關(guān)測(cè)定。表24還給出了測(cè)試化合物對(duì)于rRNA的ΔCt值。
通過(guò)獲得HCV ΔCt數(shù)據(jù)和rRNA ΔCt，可引入特異性參數(shù)。該參數(shù)是通過(guò)從彼此中減去兩個(gè)ΔCt值而獲得的。這樣獲得了δ-δCT值(ΔΔCt或DDCt)；0以上的值表示對(duì)復(fù)制子編碼的聚合酶的抑制作用更強(qiáng)，0以下的ΔΔCt值表示對(duì)宿主rRNA水平的影響大于對(duì)復(fù)制子水平的影響。表24中給出了以ΔΔCt值表示的測(cè)試化合物的抗病毒活性。一般情況下，超過(guò)2的ΔΔCt值被認(rèn)為與未使用藥物處理的對(duì)照有顯著差異，并因此表現(xiàn)出顯著的抗病毒活性。然而，ΔΔCt值小于2，但是表現(xiàn)出有限分子細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)(rRNA ΔCT為0-2)的化合物也有可能是活性化合物。
在另一個(gè)典型的組中，化合物可能降低宿主RNA聚合酶活性，但是不降低宿主DNA聚合酶活性。因此，rDNA或β-肌動(dòng)蛋白DNA(或任何其它宿主DNA片斷)的定量測(cè)定以及與未使用藥物的對(duì)照的DNA水平比較是確定測(cè)試化合物對(duì)細(xì)胞DNA聚合酶的作用的有關(guān)測(cè)定。表25給出了測(cè)試化合物對(duì)于rDNA的ΔCt值。
通過(guò)獲得HCV ΔCt數(shù)據(jù)和rDNA ΔCt，可引入特異性參數(shù)。該參數(shù)是通過(guò)從彼此中減去兩個(gè)ΔCt值而獲得的。這樣獲得了ΔΔCt值；0以上的值表示對(duì)復(fù)制子編碼的聚合酶的抑制作用更強(qiáng)，0以下的ΔΔCt值表示對(duì)宿主rDNA水平的影響大于對(duì)復(fù)制子水平的影響。表25中給出了以ΔΔCt值表示的測(cè)試化合物的抗病毒活性。一般情況下，超過(guò)2的ΔΔCt值被認(rèn)為與未使用藥物處理的對(duì)照有顯著差異，并因此是進(jìn)一步評(píng)估的有意義的化合物。然而，ΔΔCt值小于2，但是表現(xiàn)出有限分子細(xì)胞毒性(rDNAΔCT為0-2)的化合物也可能是想要的化合物。
導(dǎo)致HCV復(fù)制子RNA水平特異性降低，但是使得細(xì)胞RNA和/或DNA水平發(fā)生有限降低的化合物是抗病毒治療的候選化合物。評(píng)價(jià)了屬于通式(I)-(XXIII)的候選化合物降低黃病毒科病毒RNA(包括BVDV和HCV)的特異性能力，并檢測(cè)了有效的化合物(表21、24和25)。
平均HCV RNA 平均rRNA 平均ID nΔCtΔCtΔΔCtβ-D-AA33.832.411.42β-D-AI32.932.430.48β-D-AJ22 2.921.741.18β-D-AK43.732.481.25β-D-AL23.082.720.36β-D-AN63.332.111.22β-D-AO14.102.131.97β-D-AP23.273.230.05β-D-AQ74.453.221.22
平均HCV RNA 平均rRNA 平均ID nΔCt ΔCtΔΔCtβ-D-AT23.71 3.070.64β-D-BE24.44 2.801.64β-D-BF24.37 2.691.68β-D-BH13.06 0.912.15β-D-BJ25.06 3.621.44β-D-BL12.28 1.930.35β-D-BO14.52 2.951.57β-D-BS40 4.89 1.053.83β-D-BT54.83 3.591.24β-D-BU43.46 2.181.06β-D-BV31.88 0.651.22β-D-CC65.04 4.820.2 1β-D-DD16.60 4.991.61β-D-DH34.13 2.911.21β-D-DJ53.51 3.62-0.11β-D-EB13.33 1.421.90β-D-FA23.80 3.581.44β-D-GA46.04 2.103.93β-D-HA25.52 3.851.68β-D-HB52.94 1.651.30β-D-KB23.61 2.521.10β-D-LA33.85 4.100.89
平均HCV RNA 平均rRNA 平均ID nΔCtΔCt ΔΔCtβ-D-MD33.571.95 1.62β-D-ME12.891.25 1.64β-D-MF23.792.69 1.10β-D-OE14.514.20 0.31β-D-QA32.913.81 -0.89β-D-RB24.303.18 1.12β-D-TA14.003.31 0.69β-D-UA12.911.61 1.3β-D-VA15.564.17 1.39β-L-FC35.555.13 0.42β-L-JB13.654.55 -0.90β-L-KA14.104.84 -0.74β-L-KC21.191.35 -0.16IFN45.210.69 4.52利巴韋林 23.132.35 0.78表25平均HCV RNA平均rDNA平均ID NΔCt ΔCt ΔΔCtβ-D-AA33.83 2.53 1.88β-D-AI13.76 -0.96 4.55β-D-AJ16 2.75 0.43 2.33
平均HCV RNA 平均rRNA 平均ID NΔCtΔCtΔΔCtβ-D-AK13.512.690.79β-D-AL13.182.560.61β-D-AN23.862.531.88β-D-AO14.101.842.26β-D-AP23.272.261.02β-D-AQ34.751.782.73β-D-AT13.812.431.43β-D-BE14.992.062.98β-D-BF15.272.043.28β-D-BH13.061.421.64β-D-BJ14.340.813.53β-D-BL12.281.620.65β-D-BS14 4.810.384.45β-D-BT24.441.173.39β-D-BU43.461.101.16β-D-BV31.880.311.65β-D-CC35.842.173.66β-D-DD16.603.303.30β-D-DH14.140.893.25β-D-DJ14.842.702.14β-D-EB13.330.962.37β-D-FA23.801.920.78
平均HCV RNA平均rRNA 平均ID NΔCt ΔCtΔΔCtβ-L-FC14.41 1.003.41β-D-HA15.12 2.043.16β-D-HB11.90 1.190.40β-D-KB13.81 0.003.81β-L-JB13.65 1.202.45β-L-KA14.10 0.423.69β-L-KC12.73 -0.81 3.54β-D-LA13.54 1.561.98β-D-MD23.50 1.581.46β-D-ME12.89 1.531.36β-D-MF23.79 2.171.65β-D-OE14.51 -0.04 4.60β-D-QA14.85 2.302.55β-D-RB14.00 1.272.74β-D-TA14.00 3.070.93β-D-UA12.91 0.502.41實(shí)施例60β-D-GA的毒性特性該實(shí)施例所進(jìn)行的細(xì)胞毒性測(cè)試是標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。簡(jiǎn)言之，在遞增濃度的測(cè)試化合物(0、1、3、10、33和100μM)存在下，將細(xì)胞以不同濃度(取決于細(xì)胞類型、測(cè)定持續(xù)時(shí)間)，典型地是以5×103個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種到96-孔平板中。根據(jù)細(xì)胞類型，與測(cè)試化合物培養(yǎng)的時(shí)間可以改變，但是一般為3-5天。通過(guò)加入MTT-染料(Promega)，然后培養(yǎng)8小時(shí)來(lái)測(cè)定細(xì)胞存活力和線粒體活性。之后通過(guò)加入停止溶液，然后再培養(yǎng)8小時(shí)將含有染料的平板固定。最后在570nm讀取吸收度。制造商(Promega)很好地描述并提供了這樣的操作方法。
雖然測(cè)試化合物一般沒(méi)有細(xì)胞毒性，但是令人驚奇的是，充足的β-D-GA表現(xiàn)出對(duì)于CEM細(xì)胞的選擇性細(xì)胞毒害作用(表21)。為了探究該化合物的完全潛力，將一組人惡性T和B細(xì)胞和不同的腫瘤細(xì)胞系與不同濃度的β-D-GA培養(yǎng)，讀取吸收度后，計(jì)算IC50值。使用Ara-G、5FU和放線菌酮作為對(duì)照(表26)。
β-D-GA在人惡性T和B細(xì)胞中有有效毒性，但是在人PBM細(xì)胞和非-T或B腫瘤細(xì)胞中沒(méi)有毒性。與Ara-C和5-FU相比，β-D-GA的抗癌活性對(duì)于T和B細(xì)胞有高度選擇性。
表26β-D-GA抗不同腫瘤細(xì)胞系的毒性特性(IC50，μM)*β-D-GA Ara-C5-FU放線菌酮PBM ＞100713.72.6Vero ＞1000.8 65 2.1CEM 2.9 0.6 90.50.1SUDHL-1 0.7 3.7 ° 0.3SupT1 0.3 °53.60.6H91.4 °14.21JY3°7.5 0.8BL41 ＜1.0°24.10.3
β-D-GAAra-C 5-FU放線菌酮LNCaP45.7°22.1 2.4SK-MES-1 ＞100 °13.1 3.4SK-MEL-28＞100 °11.2 1HEPG2＞100 °40.6 3.6MCF-7＞100 °43.7 1.5*MTT測(cè)定(3-5天的培養(yǎng)時(shí)間)PBM人外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞Vero非洲綠猴腎細(xì)胞系CEM人T-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系SUDHL-1人退行發(fā)育大T-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系SupTI人T-細(xì)胞成淋巴細(xì)胞的細(xì)胞系H9人T-細(xì)胞成淋巴細(xì)胞的細(xì)胞系JY人B-細(xì)胞成淋巴細(xì)胞的細(xì)胞系(用EBV轉(zhuǎn)化的)BL41人B-細(xì)胞成淋巴細(xì)胞的細(xì)胞系LNCap人前列腺腺癌細(xì)胞系SK-MES-1人肺鱗狀癌細(xì)胞系SK-MEL-28黑素瘤細(xì)胞系HEPG2人肝臟癌細(xì)胞系MCF-7人乳腺癌細(xì)胞系通過(guò)加入天然核苷來(lái)測(cè)定對(duì)于CEM細(xì)胞(T-細(xì)胞淋巴瘤)和SUDHL-1細(xì)胞(人退行發(fā)育大T-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系)中的β-D-GA相關(guān)細(xì)胞毒性的防止作用。通過(guò)向培養(yǎng)基中加入50μM天然核苷和遞增濃度的β-D-GA來(lái)開(kāi)始該實(shí)驗(yàn)。將CEM細(xì)胞以2500個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種，并培養(yǎng)3天(＝快生長(zhǎng)性細(xì)胞系，倍增時(shí)間為約1.3天)。將SUDHL-1細(xì)胞以10000個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種，并培養(yǎng)4天(＝慢生長(zhǎng)性細(xì)胞系，倍增時(shí)間為約3天)。附圖4中繪圖表示了該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。該附圖表明，胞苷和尿苷顯著防止了β-D-GA在SUDHL-1細(xì)胞和CEM細(xì)胞(類似的圖，未顯示)中的毒性。2′-脫氧胞苷具有中等預(yù)防活性作用。從這些數(shù)據(jù)可以推斷出，β-D-GA同等有效地抗慢生長(zhǎng)性SUDHL-1細(xì)胞和快生長(zhǎng)性CEM細(xì)胞，并且胞苷和尿苷在這兩種細(xì)胞系中都防止了與該化合物有關(guān)的毒性。β-D-GA的作用可與宿主RNA分子的合成和功能有關(guān)，但是與DNA分子的合成和功能無(wú)關(guān)。
已經(jīng)用各種具體和優(yōu)選的實(shí)施方案和技術(shù)來(lái)描述了本發(fā)明。然而應(yīng)當(dāng)理解，通過(guò)本發(fā)明的上面詳細(xì)描述，多種改變和變型對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，并且可在仍然在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)的情況下作出。
權(quán)利要求
1.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(I)或(II)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D是氫、烷基、酰基、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸；每個(gè)W1和W2獨(dú)立地為CH或N；每個(gè)X1和X2獨(dú)立地為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR4、NR4R4′、NHOR4、NR4NR4′R4″、OH、OR4、SH或SR4；每個(gè)Y1是O、S或Se；每個(gè)Z是CH2或NH；每個(gè)R1和R1′獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)炔基、芳基、烷基芳基、鹵素(F、Cl、Br或I)、NH2、NHR5、NR5R5′、NHOR5、NR5NHR5′、NR5NR5′R5″、OH、OR5、SH、SR5、NO2、NO、CH2OH、CH2OR5、CO2H、CO2R5、CONH2、CONHR5、CONR5R5′或CN；每個(gè)R2和R2′獨(dú)立地為氫或鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每個(gè)R3和R3′獨(dú)立地為氫或鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、SH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、CH3、C2H5、CH＝CH2、CN、CH2NH2、CH2OH、CO2H；每個(gè)R4、R4′、R4″、R5、R5′和R5″獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或芐基；條件是對(duì)于通式(I)或(II)的核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
2.權(quán)利要求1的方法，其中式(I-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O H H OHH H OHNH2O H H OHH H INH2O H H OHH H ClNH2O H H OHH H BrNH2O H H OHH H S-CNNH2O H H OHH H N3NH2O H H H Cl H OHNH2O H H H Br H OHNH2O H H H OH BrHNH2O H H H OH H HNH2O H H H OH O-Ms HNH2O H H H OH O-Ts HNH2O H H O-Ms H H OHNH2O H H ClH H OHNH2O D D OHH H OHNH2O F H OHH H OHNH2O F H H OH H OHNH2O F H H OH H HNH2O F H H OH ClHNH2O F H H OH BrHX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O F H H Cl H OHNH2O F H H OH O-TsHNH2O F H H OH O-MsHNH2O ClH H OH O-MsHNH2O BrH H OH O-MsHNH2O BrH H OH O-TsHNH2O BrH H OH Cl HNH2O BrH H OH H OHNH2O BrH OHHH OHNH2O I H H OH O-MsHNH2O I H H OH Br HNH2O I H H OH O-TsHNH2O I H H Cl H OHNH2O I H BrHH OHNH2O OHH OHHH OHNH2O NH2H H OH H OHNH2O CH3H H OH Cl HNH2NHH H OHHH OHNH2S H H H Se-苯基 H HNH-(2-Ph-Et) O H H OHHH OHNH-COCH3O H H OHHH OHNH-NH2O H H OHHH OHNH-NH2O F H OHHH OHNH-NH2O CH3H H OH H OHNH-OH O H H H OH H OHNH-OH O F H H OH H OHNH-OH O Br H H OH H OHNH-OH O I H H OH H OHNH-OH O H H OHHH OHOH O OH H OHHH OHOH O NH2H H OH H OHX1Y1R1R1′R2R2′R3R3′OHO F H OHH H OHOHO F H H O-TsH OHOHO F H H O-MsH O-MsOHO F H H OH H OHOHO F H H OH H O-TsOHO F H H H H OHO-Et O H H H O-BzH O-BzS-CH3O H H H F H OHSHO H H H OH H OHSHO F H H OH H OHN3O H H H H H HNH-(2-Ph-Et) O H H H OH H OHOHO OHH H OH H OHOHO H H H OH H H
3.權(quán)利要求1的方法，其中式(I-b)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1X2W1R2R2′R3R3′OH NH2N H OH H OHOH NH2CHF H H OHNH-環(huán)己基 H CHH H H HNH2H CHH OH H FNH2H CHH H H HNH2NH2N H OH H OHNH2NH2CHH OH H OHCl H CHF H H HCl I CHH O-AcH O-AcCl H CHH OH H OHNH2H CHH OH H HX1X2W1R2R2′R3R3′ClHCHH OH H H
4.權(quán)利要求1的方法，其中式(II-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1Y1R1R1′R2R3NH-Bz-(m-NO2)O F H H HNH-Bz-(o-NO2)O F H H HNH2O F H F H
5.權(quán)利要求1的方法，其中式(II-b)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1X2W1R2R3Cl H CHF HOH H CHH HNH2F CHH HNH2F CHF HNH2H CHH HOH NH2CHH HOH H CHH H
6.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(V)或(VII)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，條件是對(duì)于通式(V)或(VI)的核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
7.權(quán)利要求6的方法，其中式(V-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O F H H OH H OHOH H CH3H H H H HOH O H H H H H HNH2O H H H OH H OHNH2O H H H H H HOH O F H H OH H OHNH2O I H H H H HNH2O I H H OH H OHNH2O ClH H OH H OH
8.權(quán)利要求6的方法，其中式(VII-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′NH2O H H H OH H OHNH2O F H H OH H OHNH-OH O H H H OH H OH
9.權(quán)利要求6的方法，其中式(VII-b)的β-D核苷選自下述化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1X2W1R2R2′R3R3′NH2H CHH OH H OH
10.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XI)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，每個(gè)Z1和Z2獨(dú)立地為O、S、NR6或Se；每個(gè)R6是氫、低級(jí)烷基或低級(jí)?；?。
11.權(quán)利要求10的方法，其中式(XI-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1Y1Z1Z2R1R1′NH2O O O H HNH2O O S F HNH2O O O F H
12.權(quán)利要求10的方法，其中式(XI-b)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1X2W1Z1Z2Cl H CHO SCl NH2CHO SNH2F CHO SOH H CHO O
13.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XIII)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)Y2是O、S、NH或NR7；每個(gè)Y3是O、S、NH或NR8；每個(gè)X3是OR9或SR9；且每個(gè)R7、R8和R9是氫、C1-C6低級(jí)烷基、芳基烷基或芳基；條件是對(duì)于通式(XIII-d)核苷，R2和R2′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫，且R3和R3′當(dāng)中至少有一個(gè)是氫。
14.權(quán)利要求13的方法，其中式(XIII-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽Y2Y3R1R1′R2R2′R3R3′O O F H H OH H OH
15.權(quán)利要求13的方法，其中式(XIII-c)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽Y2Y3R1R1′R3R3′O O F H H OHO O F H H O-MsNHO H H H O-MsY2Y3R1R1′R3R3′NHO H H H O-AcNHO H H H OHNHO F H H OHNHO F H H O-Ac
16.權(quán)利要求13的方法，其中式(XIII-d)的β-D核苷選自下述化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽Y2X3R1R1′R2R2′R3R3′OO-CH3H H H O-AcH O-Ac
17.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XIV)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、X1、Y1、Z1、R1、R2、R2′、R3和R3′的定義同前，每個(gè)L1是氫、Cl或Br；每個(gè)L2是OH、OCH3、OC2H5、OC3H7、OCF3、OAc或OBz；每個(gè)Z3可以是O或CH2。
18.權(quán)利要求17的方法，其中式(XIV)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1Y1R1R1′R2R2′R3R3′L1L2NH2O NH-OH OH OHH H OHH OHOH O O F H OH H OHClO-CH3OH O O H H OH H OHBrO-CH3OH O O F H OH H OHBrO-COCH3OH O O F H OH H OHBrO-CH3OH O O F H OH H OHBrO-EtOH O O Cl H OH H OHBrO-CH3
19.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XV)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、Y1、Z3、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前。
20.權(quán)利要求19的方法，其中式(XV-a)的β-D核苷是定義如下的化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽Y1Z3R1R1′R2R2′R3R3′O O H H H OH H OH
21.權(quán)利要求19的方法，其中式(XV-b)的β-D核苷是定義如下的化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1W1Z3R2R2′R3R3′NH2CHO H OH H OH
22.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XVI)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、W1、X1、X2、Y1、Z、R1、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)W3獨(dú)立地為N、CH或CR1；每個(gè)W4和W5獨(dú)立地為N、CH、CX1或CR1′；且每個(gè)Z4和Z5獨(dú)立地為NH或C(＝Y(jié)1)；條件是如果Z4和Z5是通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合的，則當(dāng)Z5是C(＝Y(jié)1)時(shí)，Z4不是C(＝Y(jié)1)；并且環(huán)氮原子不超過(guò)3個(gè)。
23.權(quán)利要求22的方法，其中式(XVI-a)的β-D核苷選自一種下列化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽W3Z4W5W4Z5R2R2′R3R3′CHNCH3C-OH N C＝OH OH H O-TsCHNH C-NH2N C＝OH OH H OHCHNH C-NHAc N C＝OH OH H OHCHNH C-OH N C＝OH OH H OHCHNCH3C-NH2N C＝OH OH H OHCHNH C-NHBz N C＝OH OH H OHCHC＝OC-NH2C-SH NH H OH H OHCHNH C-OH N C＝OH Cl H OHCHNH C-NH2N C＝OH Br H OH
24.權(quán)利要求22的方法，其中式(XVI-c)的β-D核苷是定義如下的化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽W3Z4Z5W4R2R2′R3R3′CHN-CH3C＝ON H OH H O-Ac
25.權(quán)利要求22的方法，其中式(XVI-d)的β-D核苷是定義如下的化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽W3Z4Z5W4R3R3′CHN C＝NHN H OH
26.權(quán)利要求22的方法，其中式(XVI-f)的β-D核苷是定義如下的化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1X2W1R2R2′R3R3′NH2H N H OH H OH
27.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XVII)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、Z3、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前；每個(gè)X4和X5獨(dú)立地為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、N3、NH2、NHR8、NR8R8′、OH、OR8、SH或SR8；且每個(gè)R8和R8′獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基或芳基烷基例如未取代或取代的苯基或芐基；條件是對(duì)于通式(XVII-a)或(XVII-b)核苷，X4不是OH或OR8。
28.權(quán)利要求27的方法，其中式(XVII-d)的β-D核苷是定義如下的化合物或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽X1X2W1X3X4NH2F CHH OH
29.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XVIII)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、W1、W2、X1、X2、Y1、R1、R1′、R2、R2′、R3和R3′的定義同前。
30.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XIX)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、R1、R4和R4′的定義同前；每個(gè)R9是氫、鹵素(F、Cl、Br或I)或OP3；每個(gè)P1是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基、芳基烷基(例如未取代或取代的苯基或芐基)、OH、OR4、NH2、NHR4或NR4R4′；和每個(gè)P2和P3獨(dú)立地為氫、烷基、?；?、-Ms、-Ts、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸。
31.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D和P2的定義同前。
32.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XX)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4、R4′和R9的定義同前。
33.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XXI)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同前。
34.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同前。
35.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XXII)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1和R1的定義同前。
36.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中D的定義同前。
37.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(XXIII)化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同前。
38.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同前。
39.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其可藥用鹽。
40.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其可藥用鹽。
41.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其可藥用鹽。
42.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的通式(I)或(II)化合物 或其可藥用鹽。
43.一種治療或預(yù)防表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主的方法，包括施用有效量的下述通式所示的化合物 或其可藥用鹽。
44.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的依據(jù)權(quán)利要求1-29任一項(xiàng)的化合物。
45.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的式(XIX)的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、R1、R4和R4′的定義同前；每個(gè)R9是氫、鹵素(F、Cl、Br或I)或OP3；每個(gè)P1是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、芳基、芳基烷基(例如未取代或取代的苯基或芐基)、OH、OR4、NH2、NHR4或NR4R4′；和每個(gè)P2和P3獨(dú)立地為氫、烷基、酰基、-Ms、-Ts、一磷酸、二磷酸、三磷酸、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷脂或氨基酸，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
46.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D和P2的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
47.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的式(XX)的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4、R4′和R9的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
48.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的式(XXI)的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
49.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
50.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的通式(XXII)所示的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1和R1的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
51.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的通式(XXII)所示的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中D的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
52.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的式(XXIII)的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P1、P2、P3、R1、R4和R4′的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
53.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下式(XXIII)的β-D核苷 或其β-L對(duì)映體或其可藥用鹽，其中每個(gè)D、P2和P3的定義同前，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
54.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的核苷 或其可藥用鹽，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
55.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的核苷 或其可藥用鹽，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
56.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的核苷 或其可藥用鹽，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
57.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的核苷 或其可藥用鹽，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
58.一種治療或預(yù)防宿主中丙型肝炎病毒感染的方法，包括施用有效治療量的下述通式所示的核苷 或其可藥用鹽，所述化合物任選在可藥用載體中施用。
60.如權(quán)利要求1-58任一項(xiàng)所述的化合物在制備用于治療黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
61.如權(quán)利要求1-58任一項(xiàng)所述的化合物在治療表現(xiàn)出黃病毒科、正粘病毒科或副粘病毒科病毒感染或異常細(xì)胞增殖的宿主中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了用于治療宿主，包括動(dòng)物，尤其是人中黃病毒科(包括BVDV和HCV)、正粘病毒科(包括甲型和乙型流感病毒)或副粘病毒科(包括RSV)感染或涉及異常細(xì)胞增殖的病癥的組合物和方法，所述組合物和方法使用的是通式(I)－(XXIII)核苷或其可藥用鹽或前藥。本發(fā)明還提供了使用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(“TR－PCR”)來(lái)定量測(cè)定宿主中病毒負(fù)載量，特別是BVDV、HCV或西尼羅河病毒的病毒負(fù)載量的有效方法。此外，本發(fā)明還公開(kāi)了可發(fā)出與樣本中存在的病毒量成比例的熒光的探針?lè)肿印?br> 文檔編號(hào)C12Q1/68GK1646141SQ01820816
公開(kāi)日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2001年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月18日
發(fā)明者L·斯圖伊維爾, 渡邊恭一 申請(qǐng)人:法瑪塞特有限公司