專利名稱：肉的嫩化的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及采用具有有限的底物特異性的不耐熱酶的肉嫩化方法和組合物。
本發(fā)明
背景技術(shù)：
柔軟性是影響肉產(chǎn)品的市場(chǎng)價(jià)格和消費(fèi)者接受度的主要品質(zhì)屬性。牛肉一貫缺乏柔軟性是造成牛肉在美國(guó)消費(fèi)量遞減的主要原因。為了改善肉的柔軟性，有這樣幾種方法，包括機(jī)械嫩化、升溫貯存、注射氯化鈣、電刺激、肌肉伸展、沖擊波施壓、干和濕法老化和酶處理。最常用的一種方法是用酶處理，例如使用木瓜蛋白酶、波蘿蛋白酶或無(wú)花果蛋白酶。然而這些酶具有非常寬廣的特異性，且因此不加選擇地對(duì)主要的肉蛋白(結(jié)締組織/膠原和肌原纖維蛋白)進(jìn)行水解，產(chǎn)生過(guò)嫩的(即糊狀的)產(chǎn)品。而且，最常用的木瓜蛋白酶對(duì)熱相當(dāng)穩(wěn)定，在烹飪期間或之后會(huì)造成不受控制的結(jié)構(gòu)變質(zhì)。
因此，在該技術(shù)領(lǐng)域中就有了對(duì)肉嫩化方法的需要，所述的方法采用了與木瓜蛋白酶不同的酶，所述的酶具有窄的底物特異性表現(xiàn)出對(duì)肉蛋白質(zhì)的自限水解；水解兩種主要肉蛋白質(zhì)成分其中之一，而不是兩者；不耐熱，且因此在烹飪溫度下，易于失活；且對(duì)風(fēng)味沒(méi)有不良影響。
本發(fā)明概述本發(fā)明提供了嫩化肉的方法，該方法是通過(guò)將肉與包含有效嫩化量的不耐熱蛋白酶的溶液接觸而實(shí)現(xiàn)的。優(yōu)選該蛋白酶具有有限的底物特異性，使得其(a)對(duì)肉蛋白的消化只達(dá)了有限的程度和/或(b)只對(duì)兩種主要的肉蛋白質(zhì)成分中的一種進(jìn)行消化。在一些實(shí)施方案中，該蛋白酶源自根粘菌屬(Rhizomucor)的種，優(yōu)選R.miehei。在一些實(shí)施方案中，蛋白酶源自哺乳動(dòng)物，例如牛凝乳酶。該蛋白酶可以直接從R.miehei細(xì)胞分離，或者從用編碼該蛋白酶的核酸轉(zhuǎn)化的重組宿主細(xì)胞分離。優(yōu)選該蛋白酶用過(guò)氧酸處理，以使其更不耐熱。
接觸步驟包括，但不僅限于對(duì)肉的注射；浸漬；或在屠宰之前對(duì)動(dòng)物注射，且也可以包括在嫩化溶液中翻動(dòng)(tumbling)所接觸的肉。一般，用約0.001至約0.1AU/100g肉的重量比來(lái)進(jìn)行蛋白酶與肉的接觸，優(yōu)選重量比是約0.005至約0.05AU/100g肉。
本發(fā)明方法提供的嫩化肉，顯示出的相對(duì)剪切力(通過(guò)Warner-Bratzler方法測(cè)量得到)是嫩化之前的肉的相對(duì)剪切力的約50％至約90％，優(yōu)選約60％至約80％。
另一方面，本發(fā)明提供使用本文所述方法制備的嫩化肉產(chǎn)品。
在還有的一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種肉嫩化組合物，該組合物包括具有有限底物特異性的不耐熱蛋白酶和一種或多種的鹽水、腌制劑和風(fēng)味劑。
附圖簡(jiǎn)述


圖1表示的是不耐熱的R.miehei蛋白酶(菱形標(biāo)記)和木瓜蛋白酶(方塊標(biāo)記)的不耐熱性情況。
圖2表示的是用不耐熱的R.miehei蛋白酶(菱形標(biāo)記)和木瓜蛋白酶(方塊標(biāo)記)處理的肉的相對(duì)剪切力情況。
圖3表示的是冷藏對(duì)嫩化肉的相對(duì)剪切力的影響。菱形標(biāo)記，對(duì)照；方塊標(biāo)記是不耐熱的R.miehei蛋白酶；三角標(biāo)記，木瓜蛋白酶。
本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供用于嫩化肉的方法和組合物。本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，用具有有限底物特異性的不耐熱蛋白酶處理肉，得到的肉相對(duì)于未嫩化的肉或用常規(guī)嫩化酶，例如木瓜蛋白酶處理的肉，顯示出更優(yōu)異的特性。
蛋白酶如本文中所使用的，不耐熱蛋白酶指的是在高溫下，例如在約50℃以上，其酶活性降低水平表達(dá)的蛋白酶，這是由于(a)通過(guò)蛋白酶催化的酶反應(yīng)的不耐熱性和/或(b)蛋白酶自身的結(jié)構(gòu)不耐熱性造成的。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)酶反應(yīng)在至少約70℃，優(yōu)選至少約60℃，更優(yōu)選至少約50℃的溫度下進(jìn)行時(shí)，不耐熱蛋白酶顯示出小于約75％，優(yōu)選小于約50％，更優(yōu)選小于約25％，最優(yōu)選小于約10％的其最大酶活性。作為替換，或者與上述結(jié)合，不耐熱蛋白酶是在至少約70℃，優(yōu)選至少約60℃，更優(yōu)選至少約50℃的溫度下孵育5-30分鐘之后，其活性降低至小于約75％，優(yōu)選小于約50％，更優(yōu)選小于約25％，最優(yōu)選小于約10％的其最大酶活性的蛋白酶，且這是在未處理的酶正常顯示其最大活性的溫度下，測(cè)量其酶活性的。
如本文所使用的，具有有限底物特異性的蛋白酶是只識(shí)別特定多肽中的氨基酸子集作為水解蛋白質(zhì)進(jìn)攻靶標(biāo)的蛋白酶。具有有限底物特異性的蛋白酶對(duì)實(shí)施本發(fā)明是有用的，包括但不僅限于，當(dāng)將肉按例如下述實(shí)施例2中所述接觸時(shí)，能(a)消化兩種肉蛋白質(zhì)成分中的一種或兩種達(dá)到小于約10％，優(yōu)選小于約5％，且最優(yōu)選小于約2％的水解程度(DH)，和/或(b)只消化肉的兩種主要蛋白質(zhì)成分中的一種的那些蛋白酶。DH可以采用本領(lǐng)域中任何公知的方法進(jìn)行測(cè)量，包括但不僅限于使用OPA(鄰苯二醛)測(cè)量游離氨基的方法(Church等人，Anal.Biochem.146343，1985)(參見(jiàn)下文實(shí)施例3)；測(cè)量pH的減低；和測(cè)量重量摩爾滲透壓濃度的增加。用于膠原和肌原纖維蛋白質(zhì)水解的比較方法描述于例如下述實(shí)施例4中。
用于本發(fā)明的蛋白酶可以包含野生型或突變型酶。該酶可以從其原生細(xì)胞分離出來(lái)或可以使用本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法重組制備出來(lái)。只要求蛋白酶顯示出不耐熱性，且優(yōu)選具有有限的底物特異性和能夠如本文所述對(duì)肉實(shí)行嫩化作用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，用于實(shí)施本發(fā)明的蛋白酶源自根粘菌屬物種，包括但不僅限于R.miehei或R.pusillus，優(yōu)選R.miehei。R.miehei蛋白酶序列公開(kāi)于美國(guó)專利US5800849中。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的蛋白酶源自哺乳動(dòng)物，例如，牛凝乳酶(從例如Chris Hansen，Inc.市售得到)。
上述酶可以是固有的不耐熱或可以是通過(guò)本領(lǐng)域任何公知的方法賦予不耐熱性，這些方法包括，但不僅限于天然酶的化學(xué)或其它處理，或通過(guò)將突變引入酶序列，產(chǎn)生增強(qiáng)的不耐熱性。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)用含活性氯(US4357357)或脂肪族或無(wú)機(jī)過(guò)氧酸(US4591565)的氧化劑處理，使R.miehei蛋白酶被賦予了更強(qiáng)的不耐熱性。
嫩化肉的方法本發(fā)明提供嫩化肉的方法，該方法包括將肉與含有有效嫩化量的不耐熱蛋白酶的溶液接觸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，蛋白酶具有有限的底物特異性。
本文所使用的“肉”包括但不僅限于肌肉，不管它是來(lái)源于活的動(dòng)物還是屠體，或者屠宰得來(lái)的新鮮肉，以及凍肉、冷凍干燥肉和任何形式的再制肉(restructured meat)。
嫩化指的是使肉的質(zhì)地更易于咀嚼，或者以其它方式令消費(fèi)者更滿意的方法。嫩化一般通過(guò)測(cè)量肉的相對(duì)剪切力或通過(guò)感官評(píng)定來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)?？墒褂肳arner-Bratzler方法(Olson等人，《食品科學(xué)雜志》(J.Food Sci.)，42506，1977；和Fogle等人，《食品科學(xué)雜志》，471113，1982)來(lái)測(cè)量相對(duì)剪切力。在該方法中，肉樣品被切割成直徑0.75cm的圓柱體，沿著肉纖維的縱截面構(gòu)成該圓柱體的軸。該樣品被放置于V-形Warner-Bratzler刀片上，該刀片以2mm/秒的固定速度通過(guò)30-50mm的固定距離沿著樣品的長(zhǎng)度方向向下移動(dòng)切割。通過(guò)各樣品進(jìn)行切割所需要的最大的力就是剪切力。
蛋白酶的有效嫩化量是導(dǎo)致相對(duì)剪切力降低至約50-90％，優(yōu)選約60-80％的未處理肉的相對(duì)剪切力所需要的量。
在實(shí)施本發(fā)明中，酶與肉接觸的(重量)比是約0.001至約0.1Anson單位(AU)/100g肉，優(yōu)選約0.0025至約0.05AU/100g肉，最優(yōu)選約0.005至約0.05AU/100g肉。一個(gè)AU被定義為在25℃，pH7.5條件下，10分鐘以初始速率消化變性的血紅蛋白的酶的量，其中釋放三氯乙酸可溶性物質(zhì)的量等于一毫當(dāng)量的酪氨酸，這是使用酚試劑通過(guò)產(chǎn)生顏色而測(cè)定的。
接觸步驟可以包括以下一種或多種方式(a)對(duì)肉直接注射；(b)浸漬肉；或(c)在屠宰之前對(duì)活的動(dòng)物進(jìn)行注射。應(yīng)該理解，肉與蛋白酶接觸的時(shí)間，以及肉接觸的溫度，將依賴于所采用的接觸的方式(或方式組合)。例如，肉可以用含蛋白酶的溶液注射，并在5℃下貯存長(zhǎng)達(dá)約2周時(shí)間?；蛘?，在5-10℃下，浸漬肉約0.5至10小時(shí)。肉還可以在烹飪期間與蛋白酶接觸。
該方法還可以包括在例如浸漬溶液中對(duì)肉進(jìn)行翻動(dòng)，例如在5-10℃下，翻動(dòng)1-3小時(shí)。
應(yīng)該理解，各反應(yīng)條件(例如蛋白酶濃度、蛋白酶與肉的比例、接觸方式、pH、溫度和時(shí)間)可以變化，這依賴于肉和/或酶的來(lái)源和所需嫩化的程度。還應(yīng)該理解，通過(guò)確立條件矩陣和測(cè)試該矩陣中不同的點(diǎn)，采用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)手段可以得到最佳的反應(yīng)條件。
在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括使用上述方法和組合物已被嫩化的肉和肉制品。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明包括嫩化肉的組合物，其中除了不耐熱蛋白酶以外，還包括鹽水、腌制劑和風(fēng)味劑中的一種或多種。鹽水包括，但不僅限于氯化鈉、磷酸鹽、葡萄糖和其它成分。腌制劑包括，但不僅限于亞硝酸鹽、糖和異抗壞血酸鹽。風(fēng)味劑包括但不僅限于香料(herbs)、調(diào)味品和液體熏制劑。
下述實(shí)施例只是舉例說(shuō)明，并不意味著是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1R.miehei蛋白酶的不耐熱性進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)用以對(duì)R.miehei蛋白酶與嫩化肉最常用的木瓜蛋白酶的不耐熱性進(jìn)行比較。
在50、60和70℃下對(duì)酶進(jìn)行30分鐘熱處理，之后使用Protazyme試劑盒(Megazyme International Ireland Ltd.)，按下述方法確定其殘余的活性。
將1ml酶(在100mM磷酸氫二鈉、30mM鹽酸半胱氨酸、30mM EDTA，pH7.0中)添加進(jìn)1ml含protazyme的緩沖液(100mM磷酸氫二鈉、1％w/v十二烷基硫酸鈉，pH7.0)，在連續(xù)攪拌下在40℃下培養(yǎng)10分鐘，之后通過(guò)在劇烈攪拌下，添加10ml的2％(w/v)磷酸三鈉(pH為12.3)將反應(yīng)終止。容許該反應(yīng)在室溫下再維持2分鐘，之后通過(guò)Whatman No.2過(guò)濾器將其過(guò)濾。對(duì)比空白基質(zhì)，測(cè)定590nm下的上層清液吸光率，除了添加1ml緩沖液替代酶以外，該空白基質(zhì)含同樣的成分。
結(jié)果(
圖1)顯示不耐熱R.miehei蛋白酶在大于60℃溫度下，快速喪失其活性。
實(shí)施例2使用R.miehei蛋白酶的肉的嫩化進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)以評(píng)定使用R.miehei蛋白酶的肉的嫩化情況。
方法購(gòu)自當(dāng)?shù)赝涝讏?chǎng)的牛肉(過(guò)了尸僵期的牛胴腱子肉，即死后72小時(shí)的)，并在新鮮狀態(tài)下使用。樣品經(jīng)稱重和用酶溶液注射凈增量5％(濕肉重)，注射時(shí)，注射針相距約1英寸，壓力為50psi。將肉在小型冷卻器(5℃)中以7rpm翻動(dòng)2小時(shí)，之后樣品被切割成1″厚度的部分。
在5℃下，貯藏樣品1周，并在第1、7和14天進(jìn)行分析，然后進(jìn)行如下的Warner-Bratzler剪切力的測(cè)定源自熟肉的核心樣品(1”直徑)在TAXT2結(jié)構(gòu)分析器中進(jìn)行Warner-Bratzler剪切力分析，且最大力作為柔軟度的指標(biāo)。通過(guò)30mm的固定距離測(cè)試速度是2mm/s。
結(jié)果測(cè)試的兩種酶中，木瓜蛋白酶對(duì)牛肉的柔軟度顯示出較大的影響。在最低的濃度時(shí)，木瓜蛋白酶降低柔軟度超過(guò)40％，且在更高的濃度下，使肉降低至呈糊狀，使其不能夠獲得任何的柔軟度評(píng)定結(jié)果(圖2)。相反，不耐熱R.miehei蛋白酶提供最佳的肉嫩化水平。而且，采用這種酶允許嫩化的肉的冷藏，不帶有進(jìn)一步的肉的水解降解(圖3)。
實(shí)施例3水解程度(DH)的測(cè)量如下通過(guò)OPA對(duì)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物進(jìn)行DH分析通過(guò)將7.620g的十水四硼酸二鈉(Aldrich22、133-3)和200mg的十二烷基硫酸鈉(Sigma L-3771)溶于150ml水中，制備OPA試劑。
將160mg的97％的鄰苯二醛(Sigma P-0657)溶于4ml乙醇中并添加進(jìn)混合物中，用去離子水添加至200ml。將3ml OPA試劑添加進(jìn)試管中，之后添加400μl標(biāo)準(zhǔn)絲氨酸或樣品。在混合之后，該混合物被正好溫育2分鐘。之后在340nm測(cè)量吸光率。使用下式計(jì)算DH 絲氨酸NH2＝meqv絲氨酸NH2/g蛋白質(zhì)X＝g樣品P＝樣品中蛋白質(zhì)％0.1＝樣品體積的升數(shù)h＝絲氨酸-NH2-βmeqv/g蛋白質(zhì)b.DH＝h/htot*100％實(shí)施例4蛋白酶對(duì)于膠原和肌原纖維的水解潛力測(cè)量進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)對(duì)肉的兩種主要蛋白質(zhì)成分的每一種進(jìn)行蛋白酶相對(duì)活性的評(píng)定。
膠原酶活性1.將200μl的膠原酶(或蛋白酶)溶液(1mg/ml在Tris緩沖液中)添加進(jìn)懸浮于3.8ml Tris緩沖液(0.02M三羥甲基氨基甲烷、0.005MCaCl2，pH7.4)的源自牛腱的20mg膠原中(Sigma)，使總體積是4.0ml。
2.在40℃下溫育該混合物3小時(shí)，或在70℃下溫育30分鐘。
3.在微型離心機(jī)中，將該反應(yīng)混合物以14000rpm下離心10分鐘。
4.將1.5ml上清液與4.5ml 5N的HCl混合，并放置于110℃的烘干爐中16小時(shí)(過(guò)夜)，用于可溶肽的完全水解。
5.接著按如下對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行羥脯氨酸含量分析
羥脯氨酸含量1.用蒸餾水將水解產(chǎn)物稀釋25倍。
2.將1.00ml的氯胺-T溶液添加進(jìn)1.00ml的稀釋水解產(chǎn)物中，并讓該混合物在室溫下放置20分鐘。
3.在這段時(shí)間之后，添加1.00ml的顯色試劑，且該反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至60℃的水浴中，并溫育15分鐘。
4.取出試管，并冷卻至室溫。
5.在560nm下測(cè)量吸光率。
肌原纖維的提取(Olson等人，1976，J.Food Sci.，411036-1041)。
1.將100g的切碎肉在10倍體積(v/w)KCl-磷酸鹽緩沖液(100mM KCl，20mM磷酸鉀-pH7.0)中，以11000rpm勻漿30秒。
2.將勻漿物于1000g離心15分鐘，且沉淀物再懸浮于5倍體積(v/w)緩沖液中，且在同樣條件下再離心。
3.將沉淀物又一次再懸浮于5倍體積緩沖液中，并傾注通過(guò)濾網(wǎng)，用以去除結(jié)締組織和碎屑。
4.將得到的肌原纖維懸浮液以1000g離心15分鐘，再懸浮，并用緩沖液清洗兩次。
5.將肌原纖維提取物懸浮在緩沖液中，并使用Leco蛋白質(zhì)分析器確定蛋白質(zhì)含量。
可溶蛋白質(zhì)分析1.將0-100μl的酶溶液(1mg蛋白質(zhì)/ml)添加進(jìn)2.9-3.0ml肌原纖維提取物中，且在70℃下將反應(yīng)混合物溫育30分鐘。
2.通過(guò)添加1.5ml的15％的三氯醋酸使反應(yīng)停止，并且讓該混合物在室溫下放置15分鐘。
3.在10000rpm下，將懸浮液離心8分鐘，測(cè)量280nm的上清液的吸光度。
或者，1.向1.95ml肌原纖維提取物添加50μl的酶溶液(1mg蛋白質(zhì)/ml)，并在70℃下溫育30分鐘。
2.通過(guò)添加2ml的15％的三氯醋酸使反應(yīng)停止，并且讓該混合物在室溫下放置15分鐘。
3.在10000rpm下，將懸浮液離心8分鐘，測(cè)量280nm的上清液的吸光度。
實(shí)施例5牛凝乳酶的不耐熱性進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)，以測(cè)試牛凝乳酶的不耐熱性。
對(duì)酶(來(lái)自Chris Hansen，Inc.的Chy-Max)在55、65和75℃下進(jìn)行熱處理30分鐘，之后用Neutrase標(biāo)準(zhǔn)在pH7.5測(cè)定殘余活性(使用血紅蛋白作為底物以Anson單位表達(dá))。
結(jié)果顯示在超過(guò)60℃的溫度下，牛凝乳酶快速喪失其活性，在加熱到75℃后，只保留了10-15％的活性。
本文提到的所有專利、專利申請(qǐng)和文獻(xiàn)以其全文的形式引入作為參考。
根據(jù)上述詳細(xì)描述，本發(fā)明的許多變化對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。這些明顯的變化均在附及的權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.用于嫩化肉的方法，所述的方法包括將肉與有效嫩化量的不耐熱蛋白酶接觸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的蛋白酶具有有限的底物特異性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述蛋白酶源自根粘菌屬物種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的根粘菌屬物種是R.miehei。
5.根據(jù)權(quán)利要4的方法，其中所述的蛋白酶在所述的接觸之前用過(guò)氧酸處理。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的蛋白酶源自哺乳動(dòng)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的哺乳動(dòng)物是牛。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述的蛋白酶是凝乳酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的蛋白酶從用編碼所述蛋白酶的核酸轉(zhuǎn)化的重組宿主細(xì)胞獲得。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中嫩化后的所述肉顯示出的相對(duì)剪切力是嫩化之前的所述肉的約50％至約90％。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中嫩化后的所述肉顯示出的相對(duì)剪切力是嫩化之前的所述肉的約60％至約80％。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的接觸包括注射或浸漬。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，還包括將所述肉翻動(dòng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述蛋白酶與所述肉接觸的比例是約0.001至約0.05AU/g肉。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的肉選自新鮮肉、凍肉、冷凍干燥肉和再制肉。
16.使用權(quán)利要求1的方法獲得的嫩化肉產(chǎn)品。
17.使用權(quán)利要求5的方法獲得的嫩化肉產(chǎn)品。
18.一種嫩化肉的組合物，包括有效嫩化量的(i)不耐熱蛋白酶和(ii)一種或多種風(fēng)味劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中所述的蛋白酶具有有限的底物特異性。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中所述的蛋白酶源自根粘菌屬物種。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的組合物，其中所述的根粘菌屬物種是R.miehei。
22.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中所述的蛋白酶是牛凝乳酶。
23.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，還包括鹽水和/或腌制劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中所述的風(fēng)味劑選自香料、調(diào)味品、液體熏制劑和前述的任意組合。
25.一種嫩化肉的組合物，包括(i)有效嫩化量的不耐熱蛋白酶和(ii)亞硝酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于嫩化肉的方法,所述的方法包括將肉與有效嫩化量的不耐熱蛋白酶接觸。
文檔編號(hào)A23L1/318GK1368854SQ00810617
公開(kāi)日2002年9月11日 申請(qǐng)日期2000年7月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月22日
發(fā)明者I·阿什, T·索蘭森, P·M·尼爾森 申請(qǐng)人:諾沃奇梅茲北美公司, 諾沃奇梅茲有限公司