具有高含量異黃酮衍生物的豆葉或豆莖及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖，以及一種用于制備所述大豆葉或大豆莖的方法。更具體地，已經(jīng)表明經(jīng)乙烯和乙烯利，即乙烯供體，處理過的大豆葉或大豆莖的異黃酮衍生物含量的顯著增加，因此，用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方法，以及通過使用所述方法制備的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖可以有益地采用作為功能性食品和藥材用于由雌激素失衡和抗氧化活性缺乏所致的疾病。
【專利說明】
具有高含量異黃酬衍生物的豆葉或豆莖及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種用于制備具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖的方法、用 所述方法制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、所述具有高含量異黃酬衍生 物的大豆葉或大豆莖的用途W(wǎng)及一種從大豆葉或大豆莖中大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 異黃酬衍生物是一種具有很好藥理功效的典型類黃酬，大量資金投入用于研發(fā)具 有高含量異黃酬衍生物的功能性植物。由于異黃酬具有與非醬體雌激素化學(xué)上相似的結(jié) 構(gòu)，并且具有與雌激素相似的生理學(xué)特性，因此異黃酬被稱為植物雌激素。異黃酬具有與雌 激素（即雌性激素)相似的結(jié)構(gòu)，因此顯現(xiàn)出期望能從雌激素獲得的有益生物活性。特別是， 已有報(bào)道稱異黃酬降低了更年期后發(fā)生骨質(zhì)疏松癥的風(fēng)險(xiǎn)，并且降低了血漿膽固醇。也有 報(bào)道稱異黃酬具有降低冠屯、病風(fēng)險(xiǎn)的作用，并且具有很好的抗氧化活性。
[0003] 異黃酬Κβ-糖巧連接的糖巧形式存在，或W去除糖的非糖巧形式存在。非糖巧的 實(shí)例包括染料木黃酬(肖6111316；[]1)、大豆巧元((1日1(^6；[]1)和大豆黃素(肖17(3；^6；[]1)，而糖巧 的實(shí)例包括染料木巧(genistin)、大豆巧(daidzin)和大豆黃巧(glycitin)。由于糖類是糖 巧被與發(fā)酵相關(guān)的細(xì)菌降解而得的，因此來源于大豆的未發(fā)酵食物大多含有糖巧，發(fā)酵食 物大多含有非糖巧。
[0004] 大多數(shù)用作食品和藥材的異黃酬是從大豆和紅Ξ葉草中提取并使用的。已經(jīng)進(jìn)行 了各種育種研究來開發(fā)具有高含量異黃酬的大豆，但是已有報(bào)道稱具有4000yg/g異黃酬含 量的大豆為具有最高含量水平的大豆(參見J.AgricJood Cehm.2012,60,6045-6055)。此 夕h韓國專利公開號(hào)2003-93025公開了一種制備含有高濃度異黃酬的發(fā)芽大豆的方法，其 通過在純水中浸泡洗凈大豆，然后使其發(fā)芽，從而將異黃酬含量提高40-70 %。然而，存在異 黃酬含量仍然低的缺點(diǎn)。
[0005] 已有報(bào)道稱，大豆葉含有含量極低的異黃酬衍生物。具體來說，大豆葉含有大豆巧 (未檢測(cè)到）、染料木巧(9化g/g)、丙二酷大豆巧(malonyldaidzin)(未檢測(cè)到）、丙二酷染料 木巧(11131〇]171肖6]1131：；[]1)(31〇4肖/肖）、大豆巧元(未檢測(cè)到)和染料木黃酬(未檢測(cè)到）（參見 BI0MEDICI肥&PHARMAC0T肥RATY，2002，56，289-295)。
[0006] 因此，本發(fā)明人嘗試開發(fā)具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖，其結(jié)果是 通過W下發(fā)現(xiàn)完成了本發(fā)明，當(dāng)在大豆培育過程中用乙締或2-氯乙基麟酸（乙締利，即乙締 供體)處理時(shí)，高濃度異黃酬衍生物在大豆葉或大豆莖中富集。
[0007] 發(fā)明概述 [000引技術(shù)問題
[0009] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖的 制備方法，包括用乙締、乙締供體或乙締生成劑(generator)處理大豆葉或大豆莖。
[0010] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供用所述制備方法制備的具有高含量異黃酬衍生物 的大豆葉或大豆莖。
[0011] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種食品和藥材的用途，該食品和藥材包含具有高含 量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分。
[0012] 本發(fā)明的又一目的在于提供一種通過使用乙締、乙締供體或乙締生成劑從大豆葉 或大豆莖中大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的方法。
[oou]技術(shù)方案
[0014]為了實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明提供了一種用于制備具有高含量化學(xué)式1所示的異黃 酬衍生物的大豆葉或大豆莖的方法，該方法包括用乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆 葉或大豆莖：
[001引[化學(xué)式1]
[0016]
[0017] (其中，Ri獨(dú)立地為Η或0H，化獨(dú)立地為H、葡萄糖或葡萄糖丙二酸）。
[0018] 本發(fā)明還提供了通過所述制備方法制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或 大豆莖。
[0019] 此外，本發(fā)明提供了一種組合物，其包括本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物 的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分。
[0020] 本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防和治療因雌激素缺乏所致疾病的藥物組合物，該組 合物包含本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提 取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0021] 此外，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和緩解因雌激素缺乏所致的疾病保健食品，該 組合物包含本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的 提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種用于抗氧化的藥物組合物，該組合物包含本發(fā)明所述的具有 高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作 為活性成分。
[0023] 此外，本發(fā)明提供了一種用于抗氧化的保健食品，該食品包含本發(fā)明所述的具有 高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作 為活性成分。
[0024] 本發(fā)明還提供了一種用于皮膚護(hù)理的藥物組合物，該組合物包含本發(fā)明所述的具 有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分 作為活性成分。
[0025] 此外，本發(fā)明提供了一種用于皮膚護(hù)理的化妝品組合物，該組合物包含本發(fā)明所 述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的 一部分作為活性成分。
[0026] 本發(fā)明還提供了一種用于皮膚護(hù)理的保健食品，該食品包含本發(fā)明所述的具有高 含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為 活性成分。
[0027] 此外，本發(fā)明提供了采用本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆 莖的茶。
[0028] 本發(fā)明還提供了一種使用本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大 豆莖的制茶方法。
[0029] 此外，本發(fā)明提供了一種通過使用乙締、乙締供體或乙締生成劑從大豆葉或大豆 莖中大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的方法。
[0030] 進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種用于大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的方法，包括：
[0031] 1)用乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖來制備大豆葉或大豆莖； 和
[0032] 2)對(duì)步驟1)中的大豆葉和大豆莖進(jìn)行萃取，并分離異黃酬衍生物。
[0033] 有益效果
[0034] 本發(fā)明已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)大豆植物在播種后10-90天用乙締或乙締利（即乙締供體)處 理時(shí)，異黃酬衍生物在大豆葉或大豆莖中W高濃度富集。因此，與用于制備具有高含量異黃 酬衍生物的大豆葉或大豆莖的方法一樣，具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大 豆葉或大豆莖的提取物和該提取物的一部分可用作針對(duì)雌激素失衡和抗氧化活性缺乏所 致疾病的藥材和食品。
【附圖說明】
[0035] 圖1為UPLC色譜圖，示出了大豆葉用乙締利處理后異黃酬衍生物含量根據(jù)培育時(shí) 間增加的模式。
[0036] 圖2示出了乙締利處理前大豆葉經(jīng)乙醇萃取所得的提取物的UPLC色譜圖結(jié)果。
[0037] 圖3示出了乙締利處理后7天大豆葉經(jīng)乙醇萃取所得的提取物的UPLC色譜圖結(jié)果。 [003引圖4示出了證實(shí)圖3中的峰1為大豆巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[0039] 圖5示出了證實(shí)圖3中的峰2為染料木巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[0040] 圖6示出了證實(shí)圖3中的峰3為丙二酷大豆巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[0041] 圖7示出了證實(shí)圖3中的峰4為丙二酷染料木巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[0042] 圖8示出了乙締利處理后7天大豆葉經(jīng)乙醇萃取獲得的提取物隨后用β-葡萄糖巧 酶處理的UPLC色譜圖結(jié)果。
[0043] 圖9示出了大豆莖用乙締處理前和處理后異黃酬衍生物含量增加模式的HPLC色譜 圖。
[0044] 圖10示出了乙締處理前大豆莖經(jīng)乙醇萃取所得的提取物的HPLC色譜圖結(jié)果。
[0045] 圖11示出了乙締處理后大豆莖經(jīng)乙醇萃取所得的提取物的HPLC色譜圖結(jié)果。
[0046] 圖12示出了證實(shí)圖11中的峰1為大豆巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[0047] 圖13示出了證實(shí)圖11中的峰2為染料木巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[004引圖14示出了證實(shí)圖11中的峰3為丙二酷大豆巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0FMS)。
[0049]圖15示出了證實(shí)圖11中的峰4為丙二酷染料木巧的質(zhì)譜結(jié)果(Q-T0F MS)。
[0050]圖16示出了乙締處理后大豆莖經(jīng)乙醇萃取獲得的提取物隨后用β-葡萄糖巧酶處 理的UPLC色譜圖結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0051 ] W下，將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)地描述。
[0052] 本發(fā)明提供了一種用于制備具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖的方法， 該方法包括用乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖。
[0053] 大豆葉和大豆莖優(yōu)選播種后10天或W上的大豆葉或大豆莖，更優(yōu)選播種后40天， 但不限于此。
[0054] 乙締供體優(yōu)選乙締利，但不限于此。乙締是最簡單的締基控(化學(xué)式C2H4)，并且是 無色帶有甜味的氣體。植物雌激素促進(jìn)水果采摘后的生理變化，特別是園林產(chǎn)品的成熟或 植物組織的成熟，如綠色蔬菜的黃化。此外，2-氯乙基麟酸（乙締利），一種乙締生成劑，其特 征在于能在ΡΗ4.1或W上的中性或堿性條件下產(chǎn)生乙締，并且當(dāng)給水果和園林水果施用 1000-2000倍液相溶液時(shí)，經(jīng)降解而產(chǎn)生乙締促進(jìn)成熟、催熟或著色。
[0055] 乙締、乙締供體或乙締生成劑優(yōu)選地在5-50化pm濃度下進(jìn)行處理，更優(yōu)選地在5- lOOppm濃度下，但不限于此。乙締、乙締供體或乙締生成劑可在大豆葉或大豆莖采摘前或采 摘后進(jìn)行處理。
[0056] 異黃酬衍生物優(yōu)選為下述[化學(xué)式1]所示的化合物，更優(yōu)選為下述[化學(xué)式2]至 [化學(xué)式7]所示的任一化合物，但不限于此。
[0057] [化學(xué)式。
[0化引
[0059] (其中，Ri獨(dú)立地為Η或0H，化獨(dú)立地為H、葡萄糖或葡萄糖丙二酸），
[0060] [化學(xué)式2]
[0061]
[0062][化學(xué)式3]
[0070][化學(xué)式7]
[0071]
[0072] 本發(fā)明還提供了用所述制備方法制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大 豆莖。
[0073] 異黃酬衍生物優(yōu)選為下述[化學(xué)式1]所示的化合物，更優(yōu)選為下述[化學(xué)式2]至 [化學(xué)式7]所示的任一化合物，但不限于此。
[0074] 在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明人在大豆播種后40天(生長期R4)用在水 中稀釋的乙締利(5-lOOppm)處理大豆植物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異黃酬衍生物自處理后第1天起顯著 增加，并在處理后5-12天達(dá)到最大值(參見圖1)。此外，已發(fā)現(xiàn)未經(jīng)乙締利處理的大豆葉包 含山奈酪糖巧為主要化合物，即山奈酪-3-0-β-0-化喃葡萄糖基（1^2)-αΑ-化喃鼠李糖基 (1一6)-護(hù)0-半乳糖巧、山奈酪-3-0-護(hù)0-化喃葡萄糖基（1一2)-〇寸-化喃鼠李糖基（1一6)- β-D-化喃葡萄糖巧、山奈酪-3-0-( 2，6-雙-O-a-k化喃鼠李糖基)-β-D-化喃葡萄糖巧、山奈 酪-3-0-β-雙化喃半乳糖巧，山奈酪-3-0-β-雙化喃葡萄糖巧、山奈酪-3-0-αΑ-化喃鼠李糖 基（1^6)-β-0-化喃半乳糖巧。然而，已發(fā)現(xiàn)在經(jīng)乙締利處理的大豆葉中，大豆巧、染料木 巧、丙二酷大豆巧、丙二酷染料木巧運(yùn)4種異黃酬衍生物在大豆葉中迅速富集(參見表1)。進(jìn) 一步地，用乙醇對(duì)經(jīng)乙締利處理的大豆葉進(jìn)行萃取來獲得提取物。然后，用β-葡萄糖巧酶處 理該大豆葉提取物，然后進(jìn)行分離和純化來獲得6種異黃酬衍生物:大豆巧、染料木巧、丙二 酷大豆巧、丙二酷染料木巧、大豆巧元和染料木黃酬(參見圖3至圖8)。
[0075] 此外，本發(fā)明人對(duì)分別從乙締利處理后采摘的大豆葉和采摘后用乙締利處理的大 豆葉中分離出來的四種異黃酬衍生物，即大豆巧、染料木巧、丙二酷大豆巧和丙二酷染料木 巧進(jìn)行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于乙締利處理后采摘的大豆葉，異黃酬衍生物含量顯著增 加;對(duì)于采摘后用乙締利處理的大豆葉，異黃酬衍生物含量也顯著增加。因此，發(fā)現(xiàn)乙締利 處理后再采摘大豆葉和用乙締利處理采摘的大豆葉運(yùn)兩種方法都可作為用于制備具有高 含量異黃酬衍生物的大豆葉的方法(參見表1和表2)。
[0076] 此外，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在大豆播種40天后（生長期R4)用乙締（100- lOOOppm)處理大豆植物時(shí)，處理后大豆莖中異黃酬衍生物的含量相對(duì)于處理前顯著增加 (參見圖9)。此外，在未經(jīng)乙締處理的大豆莖中未檢測(cè)到異黃酬衍生物。然而，發(fā)現(xiàn)在經(jīng)乙締 處理的大豆莖中，四種異黃酬衍生物，即大豆巧、染料木巧、丙二酷大豆巧和丙二酷染料木 巧在大豆莖中迅速富集(參見表3)。進(jìn)一步地，用乙醇對(duì)經(jīng)乙締處理的大豆莖進(jìn)行萃取來獲 取提取物。然后，用0-葡萄糖巧酶處理大豆莖提取物，隨后進(jìn)行分離和純化W獲得6種異黃 酬衍生物，即大豆巧、染料木巧、丙二酷大豆巧、丙二酷染料木巧、大豆巧元和染料木黃酬 (參見圖11至圖16)。
[0077] 此外，本發(fā)明人對(duì)分別從乙締處理后采摘的大豆莖和采摘后用乙締處理的大豆莖 中分離出來的四種異黃酬衍生物，即大豆巧、染料木巧、丙二酷大豆巧和丙二酷染料木巧進(jìn) 行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于乙締處理后采摘的大豆莖，異黃酬衍生物含量顯著增加。因此， 發(fā)現(xiàn)乙締處理后采摘大豆莖的方法可作為用于制備具有高含量異黃酬衍生物的大豆莖的 方法。
[0078] 此外，本發(fā)明提供了一種通過使用乙締、乙締供體或乙締生成劑從大豆葉或大豆 莖大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的方法。
[0079] 具體地，該方法優(yōu)選地包括：
[0080] 1)用乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖來制備大豆葉或大豆莖； 和
[0081] 2)對(duì)步驟1)中的大豆葉或大豆莖進(jìn)行萃取，并分離異黃酬衍生物。
[0082] 在該方法中，步驟1)中的大豆葉或大豆莖優(yōu)選播種10天或W上的大豆葉或大豆 莖，更優(yōu)選播種40天后的，最優(yōu)選播種10-90天后的。
[0083] 在該方法中，步驟1)中的乙締、乙締供體或乙締生成劑可在大豆葉采摘之前或之 后進(jìn)行處理。
[0084] 在該方法中，步驟1)中的乙締供體優(yōu)選乙締利，但不限于此，并且引入或產(chǎn)生乙締 的所有材料都可用。
[0085] 在該方法中，步驟1)中的乙締、乙締供體或乙締生成劑優(yōu)選處理濃度為5- lOOOppm，更優(yōu)選5-500ppm，最優(yōu)選 5-lOOppm。
[0086] 在本發(fā)明中，異黃酬衍生物優(yōu)選為上述[化學(xué)式1]所示的化合物，更優(yōu)選為上述 [化學(xué)式2]至[化學(xué)式7]所示的任意一種或多種化合物。
[0087] 在本發(fā)明中，用乙締和乙締利（即乙締供體)處理大豆葉或大豆莖來制備具有高含 量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖。此外，該制備方法可用作大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的 方法。此外，通過發(fā)現(xiàn)乙締利處理后采摘大豆葉或大豆莖和采摘后用乙締利處理大豆葉或 大豆莖運(yùn)兩種方法都顯示出異黃酬衍生物含量的顯著增加，可將運(yùn)一在采摘之前或之后用 乙締和乙締供體處理大豆葉或大豆莖來制備具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖 的方法，作為大規(guī)模生產(chǎn)異黃酬衍生物的方法。
[0088] 此外，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大 豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其中所述大豆葉或大豆莖是通過用 乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖而制備的。
[0089] 所述大豆葉或大豆莖提取物或該提取物的一部分優(yōu)選地通過包括下列步驟的制 備方法制備，但不限于此：
[0090] 1)將萃取溶液加入大豆葉或大豆莖中用于萃取；
[0091] 2)過濾步驟1)中的提取物；
[0092] 3)減壓濃縮步驟2)中的濾出提取物，然后干燥所得物W制備大豆葉或大豆莖;和
[0093] 4)用有機(jī)溶劑對(duì)步驟3)中的大豆葉或大豆莖進(jìn)行進(jìn)一步萃取來制備大豆葉或大 豆莖的一部分。
[0094] 在該方法中，步驟1)中的大豆葉或大豆莖是從經(jīng)乙締或乙締利處理后異黃酬高濃 度富集的大豆植物中獲取，并隨后使用的。雖然植物采摘之后再進(jìn)行乙締或乙締利處理也 是可行的，但優(yōu)選在采摘之前進(jìn)行處理。用乙締或乙締利處理后的大豆植物的所有葉、莖或 根都是可用的。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，優(yōu)選使用大豆葉或大豆莖，但不限于此。 [00%]在該方法中，步驟1)中的萃取溶劑優(yōu)選為水、醇或其混合物。對(duì)于醇，優(yōu)選使用C1 至C4的低級(jí)醇。對(duì)于低級(jí)醇，優(yōu)選使用乙醇或甲醇。對(duì)于萃取方法，優(yōu)選采用振蕩萃取、索氏 萃取或回流萃取，但不限于此。萃取溶劑優(yōu)選W1-10倍的量進(jìn)行添加用于萃取，更優(yōu)選W干 燥大豆葉或大豆莖量的4-6倍量。萃取溫度優(yōu)選為20°c-10(rc，更優(yōu)選為20°c-4(rc，最優(yōu)選 為室溫，但不限于此。萃取時(shí)間優(yōu)選為10-48小時(shí)，更優(yōu)選為15-30小時(shí)，最優(yōu)選為24小時(shí)，但 不限于此。此外，萃取次數(shù)優(yōu)選為1-5次，更優(yōu)選為3-4次，最優(yōu)選為3次，但不限于此。
[0096] 在該方法中，步驟3)中減壓濃縮優(yōu)選采用真空減壓濃縮器或旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器，但 不限于此。此外，干燥優(yōu)選減壓干燥、真空干燥、沸騰干燥、噴霧干燥或冷凍干燥，但不限于 此。
[0097] 在該方法中，步驟4)中大豆葉或大豆莖提取物優(yōu)選為深棟色粗提取物，其為減壓 濃縮的大豆莖提取物，但不限于此。另外，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選為正己燒、氯仿、乙酸乙醋或下 醇。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，更優(yōu)選使用氯仿，但不限于此。所述一部分優(yōu)選正己 燒饋分、氯仿饋分、乙酸乙醋饋分、下醇饋分或水饋分，其是通過使大豆葉或大豆莖提取物 在水中懸浮，然后依次用正己燒、氯仿、乙酸乙醋、下醇和水對(duì)懸浮液進(jìn)行分饋而獲得，但不 限于此。所述一部分可通過對(duì)大豆葉或大豆莖提取物重復(fù)進(jìn)行分饋過程1-5次獲得，優(yōu)選3 次。此外，減壓濃縮優(yōu)選在分饋之后進(jìn)行，但不限于此。
[0098] 另外，本發(fā)明提供了一種用于治療和預(yù)防因雌激素缺乏所致疾病的藥物組合物， 該組合物包含用乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異 黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成 分。
[0099] 因雌激素缺乏所致的疾病優(yōu)選為選自骨質(zhì)疏松、屯、臟疾病、乳腺癌、陰道疾病、高 脂血癥、皮膚老化和顏面潮紅中的任一種疾病，但不限于此。
[0100] 由于從具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖中分離出的異黃酬衍生物具 有確定的生物活性，因此包含運(yùn)些化合物的大豆葉或大豆莖的提取物及其一部分可W作為 用于預(yù)防和治療因雌激素缺乏所致疾病的藥物組合物。
[0101] 本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步包含藥物組合物制備中常用的合適的載體、賦形劑和稀 釋劑。
[0102] 本發(fā)明的組合物可口服或腸胃外施用。對(duì)于腸胃外施用，優(yōu)選局部皮膚、腹腔注 射、直腸注射、皮下注射、靜脈注射、肌內(nèi)注射或胸腔注射，但不限于此。
[0103] 本發(fā)明的組合物可根據(jù)常用方法被配制成口服制劑、外用制劑、栓劑和無菌可注 射溶液，諸如散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑和氣霧劑，并隨后使用。該組 合物里所包含的載體、賦形劑和稀釋劑的實(shí)例可包括乳糖、葡萄糖、薦糖、山梨醇、甘露醇、 木糖醇、赤薛醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、海藻酸鹽、明膠、憐酸巧、娃酸巧、纖維素、甲基 纖維素、微晶纖維素、聚乙締化咯燒酬、水、徑基苯甲酸甲醋、徑基苯甲酸丙醋、滑石、硬脂酸 儀和礦物油。對(duì)于制劑，采用常用的稀釋劑或賦形劑進(jìn)行制備，諸如填充劑、增量劑、粘合 劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑等。用于口服施用的固體制劑包括片劑、丸劑、散劑、顆粒劑 和膠囊劑等。固體制劑是通過將至少一種賦形劑如淀粉、碳酸巧、薦糖、乳糖或明膠混入混 合草藥中來制備的。除了簡單的賦形劑W外，使用潤滑劑如硬脂酸儀和滑石粉。用于口服的 液體制劑的實(shí)例包括混懸劑、供內(nèi)用的液體、乳劑和糖漿劑。除了通常使用的簡單稀釋劑諸 如水和液體石蠟W外，可W包括各種賦形劑諸如濕潤劑、甜味劑、調(diào)味劑和防腐劑。用于腸 胃外施用的制劑的實(shí)例包括無菌溶液、非水溶劑、混懸劑、乳劑、凍干制劑和栓劑。對(duì)于非水 溶劑和混懸劑，可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄攬油，W及可注射醋如油酸乙醋。作為 栓劑的基質(zhì)（base)，可W使用wit邱sol、聚乙二醇(macrogol)、吐溫61、可可脂、月桂脂和甘 油明膠。
[0104] 本發(fā)明組合物的優(yōu)選施用劑量隨患者的狀態(tài)和體重、疾病的嚴(yán)重程度、藥物的構(gòu) 成W及施用的途徑和療程而不同，并由本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行適當(dāng)選擇。然而，為達(dá)到所期望 的效果，該組合物優(yōu)選W每天0.0001-lg/kg、更優(yōu)選W每天0.001-200mg/kg的劑量施用，但 不限于此。施用可W每天一次，或分為數(shù)次進(jìn)行。施用劑量不W任何方式限制本發(fā)明的范 圍。
[0105] 另外，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和緩解因雌激素缺乏所致疾病的保健食品，該 食品包含用乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異黃酬 衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0106] 因雌激素缺乏所致的疾病優(yōu)選為選自骨質(zhì)疏松、屯、臟疾病、乳腺癌、陰道疾病、高 脂血癥、皮膚老化和顏面潮紅中的任一種疾病。
[0107] 由于從本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖中分離出來的異黃酬 衍生物具有確定的生物活性，因此包含運(yùn)些化合物的大豆葉或大豆莖提取物及其一部分可 W作為用于緩解和預(yù)防因雌激素缺乏所致疾病的保健食品。
[0108] 在本發(fā)明的保健食品中，具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或 大豆莖的提取物或其一部分可W整體加入，或根據(jù)通常的方法與其他食品或食品成分一起 使用。
[0109] 食品的種類沒有特別限制。食品的實(shí)例包括功能性混合茶、飲品、肉、香腸、面包、 餅干、年糕、巧克力、糖果、零食、曲奇、比薩餅、拉面、其他面條、樹膠、包括冰洪淋的乳制品、 各種湯、飲料、酒精飲料和復(fù)合維生素，食品還包括一般意義上的所有保健食品。
[0110] 根據(jù)本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖 的提取物或該提取物的一部分可W整體加入食品中，或根據(jù)通常的方法與其他食品或食品 成分一起使用?；钚猿煞值幕旌狭靠蒞根據(jù)其用途(即預(yù)防或緩解)適當(dāng)?shù)卮_定。一般而言， 保健食品中具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提 取物的一部分的量，可W是相對(duì)于食品總重量的0.01-15重量份，并且基于100ml保健飲料 組合物，加入〇.〇2-5g，優(yōu)選0.3-lg。然而，出于健康和衛(wèi)生目的或出于健康管理目的所進(jìn)行 的長期給藥，所述量可少于或等于上述范圍。此外，由于不存在安全性問題，活性成分可W W等于或多于上述范圍的量使用。
[0111] 除了作為必要成分，本發(fā)明的保健功能性飲料組合物W預(yù)先確定的比例包含具有 高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分， 其他成分沒有特別限制。此外，如常見飲料一樣，可包括各種調(diào)味劑或天然碳水化合物作為 附加成分。上述天然碳水化合物的實(shí)例包括:常見的糖如單糖，例如葡萄糖和果糖;二糖，例 如麥芽糖和薦糖；多糖，例如糊精和環(huán)糊精;和糖醇如木糖醇、山梨醇和赤薛醇。對(duì)于調(diào)味 劑，除了上述那些，可W有利地使用天然調(diào)味劑(索馬甜，甜葉菊提取物，例如萊鮑迪武A和 甘草甜素)和合成調(diào)味劑(糖精、阿司帕坦）。
[0112] 除了上述的那些，本發(fā)明的食品可包含各種營養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)（電解質(zhì)）、調(diào) 味劑如合成調(diào)味劑和天然調(diào)味劑，著色劑和增強(qiáng)劑(奶酪、巧克力等），果膠酸及其鹽、海藻 酸及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)膠體增稠劑、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、碳酸飲料中使用 的碳酸化試劑等。此外，本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆 莖的提取物或該提取物的一部分可包含用于制備天然果汁的果肉、果汁飲料和蔬菜飲料。 運(yùn)些成分可W單獨(dú)使用或組合使用。運(yùn)些添加劑的比例并不重要，而一般是在W下范圍內(nèi) 選擇:每100重量份的本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖 的提取物或該提取物的一部分，包含0至約20重量份。
[0113] 另外，本發(fā)明提供了一種用于抗氧化的藥物組合物，該藥物組合物包含用乙締、乙 締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或 大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0114] 另外，本發(fā)明提供了一種用于抗氧化的保健食品，該保健食品包含用乙締、乙締供 體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆 莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0115] 由于從本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖中分離出來的異黃酬 衍生物具有確定的生物活性，因此包含運(yùn)些化合物的大豆葉或大豆莖提取物及其一部分可 W作為用于抗氧化的組合物。
[0116] 另外，本發(fā)明提供了一種用于皮膚護(hù)理的藥物組合物，該藥物組合物包含用乙締、 乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉 或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0117] 另外，本發(fā)明提供了一種用于皮膚護(hù)理的化妝品組合物，該化妝品組合物包含用 乙締、乙締供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異黃酬衍生物的大 豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0118] 另外，本發(fā)明提供了一種用于皮膚護(hù)理的保健食品，該保健食品包含用乙締、乙締 供體或乙締生成劑處理大豆葉或大豆莖所制備的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大 豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分作為活性成分。
[0119] 由于從本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖中分離出來的異黃酬 衍生物具有確定的生物活性，因此包含運(yùn)些化合物的大豆葉或大豆莖提取物及其一部分可 W作為用于皮膚護(hù)理的組合物。
[0120] 所述化妝品組合物可W是乳液、軟膏、凝膠、乳霜、貼片或噴霧，但不限于此。在制 備包含本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該 提取物的一部分的化妝品組合物時(shí)，本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、 大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分可W3-30重量份、優(yōu)選5-20重量份加入局部 用皮膚組合物。
[0121] 除了本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取 物或該提取物的一部分，本發(fā)明的化妝品組合物可包含皮膚病學(xué)領(lǐng)域常用的添加劑，如脂 肪材料、有機(jī)溶劑、溶劑、濃縮劑、膠凝劑(ge 1 lating agent)、軟化劑、抗氧化劑、助懸劑、穩(wěn) 定劑、發(fā)泡劑、香料、表面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、金屬離子封閉劑、 馨合劑、防腐劑、維生素、封閉劑、潤濕劑、精油、染料、色素、親水性或親脂性活性劑、脂質(zhì)囊 泡或任何其他在化妝品組合物中常用的成分。
[0122] 此外，運(yùn)些成分可WW皮膚病學(xué)領(lǐng)域中一般使用的量引入。
[0123] 此外，本發(fā)明提供了一種使用根據(jù)本發(fā)明所述具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉 或大豆莖的茶。
[0124] 此外，本發(fā)明提供了一種混合茶，其中混合了根據(jù)本發(fā)明所述具有高含量異黃酬 衍生物的大豆葉或大豆莖和具有香味的草藥植物。
[0125] 所述使用大豆葉或大豆莖的茶可通過包括W下步驟的制備方法制備：
[0126] 1)洗涂并粉碎根據(jù)本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖；
[0127] 2)烘賠已粉碎的大豆葉或莖;和
[0128] 3)干燥經(jīng)烘賠的大豆葉或莖。
[0129] 在該方法中，步驟1)中的粉碎優(yōu)選通過使用粉碎機(jī)進(jìn)行，運(yùn)樣尺寸為l-5mm，但尺 寸不限于此。
[0130] 在該方法中，步驟2)中的烘賠優(yōu)選在250-30(TC下進(jìn)行30-60分鐘，運(yùn)樣大豆葉或 大豆莖不會(huì)燒焦。然而，溫度和時(shí)間不限于此。
[0131] 在該方法中，步驟3)中的干燥可W是自然干燥或通過使用干燥機(jī)進(jìn)行。干燥優(yōu)選 在30-50°C的溫度下進(jìn)行24-36小時(shí)，但溫度和時(shí)間并不限于此。
[0132] 所述草藥植物優(yōu)選為選自洋甘菊、巧樣草、玫瑰果、薰衣草、薄荷、茵香、迷迭香、萊 莉、木穫、玫瑰花、蘋果果實(shí)、草替果實(shí)、巧樣果實(shí)和澄花中的至少一種。所有用作茶的草藥 都可用。
[0133] 所述茶或混合茶可W加工成一種選自調(diào)味茶、茶包、速溶茶或罐頭的形式。
[0134] 此外，本發(fā)明提供了一種用于治療和預(yù)防因雌激素缺乏所致疾病的方法，其包括 給受試者施用本發(fā)明的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提 取物或該提取物的一部分。
[0135] 本發(fā)明還提供了一種抗氧化的方法，其包括給受試者施用本發(fā)明的具有高含量異 黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分。
[0136] 此外，本發(fā)明提供了一種皮膚護(hù)理的方法，其包括給受試者施用本發(fā)明的具有高 含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分。
[0137] 本發(fā)明還提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆 葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種預(yù)防和治療因雌激素缺乏所致疾 病的藥物組合物。
[0138] 此外，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、 大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種預(yù)防和緩解因雌激素缺乏所 致疾病的保健食品。
[0139] 本發(fā)明還提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆 葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種抗氧化的藥物組合物。
[0140] 此外，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、 大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種抗氧化的保健食品。
[0141] 本發(fā)明還提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆 葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種皮膚護(hù)理的藥物組合物。
[0142] 此外，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、 大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種皮膚護(hù)理的化妝品組合物。
[0143] 本發(fā)明還提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、大豆 葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作一種皮膚護(hù)理的保健食品。
[0144] 此外，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉或大豆莖、 大豆葉或大豆莖的提取物或該提取物的一部分，其被用作茶。
[0145] W下，參考下述實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明。
[0146] 然而，下述實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，本發(fā)明的范圍不限于此。
[0147] <實(shí)施例1>具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖的制備
[0148] <1-1>具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉的制備
[0149] 大豆種子（Glycine mdx)獲自Rural Development Adminishation，并對(duì)其進(jìn)行 栽培。播種10-90天后用5-l(K)ppm的2-氯乙基麟酸（乙締利）或5-5(K)ppm的乙締處理大豆植 物，來制備具有高異黃酬含量的大豆葉。異黃酬在大豆葉中的富集模式可能隨處理乙締利 或乙締的濃度和被處理的植物的生長期而不同。
[0150] 具體地，播種40天后，大豆植物定期用水中稀釋至濃度50ppm的乙締利處理。結(jié)果， 目標(biāo)異黃酬在處理一天后迅速富集。處理5-12天后，即得到富集了最高濃度異黃酬的大豆 葉。
[0151] 此外，大豆葉于播種后（10-90天后）從大豆植物采摘，并定期用稀釋至濃度δ? ?θυρη 的乙締利處理。處理 3-10 天后，即得到富集了最高濃度異黃酬的大豆葉。
[0152] 結(jié)果，如圖1所示，大豆葉中的目標(biāo)異黃酬衍生物濃度在處理后增加。處理5-12天 后，即得到富集了最高濃度異黃酬的大豆葉。此外，已發(fā)現(xiàn)大豆葉在植物老化激素乙締的影 響下逐漸變黃（圖1)。因此，從結(jié)果可知，播種10-90天后用稀釋至濃度5-l(K)ppm的乙締利或 5-50化pm的乙締處理大豆植物的第一天起，異黃酬就在大豆葉中開始富集，并在處理5-12 天后得到具有最高異黃酬衍生物含量水平的大豆葉。
[0153] <1-2>具有最高含量異黃酬衍生物的大豆莖的制備
[0154] 大豆種子（Glycine max)獲自Rural Development Adminishation，并對(duì)其進(jìn)行 栽培。播種10-90天后用5-10化pm的2-氯乙基麟酸（乙締利)或lOO-lOOOppm的乙締處理大豆 植物，來制備具有高含量異黃酬的大豆莖。異黃酬在大豆莖中的富集模式可能隨處理乙締 利或乙締的濃度和被處理的植物的生長期而不同。
[01 W]具體地，播種40天后，大豆植物定期用20化pm的乙締處理。
[0156] 結(jié)果，如圖9所示，大豆莖中目標(biāo)異黃酬衍生物的濃度在處理后增加。此外，已發(fā)現(xiàn) 大豆莖在植物老化激素乙締影響下逐漸變黃（圖9)。因此，從結(jié)果可知，播種10-90天后用稀 釋至濃度5-10化pm的乙締利或lOO-lOOOppm的乙締處理大豆植物，就得到了異黃酬衍生物 含量迅速富集的大豆莖。
[0157] <實(shí)施例2>具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖的制備
[0158] < 2-1 >具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉的制備
[0159] 對(duì)通過實(shí)施例<1-1>方法所獲得的大豆葉進(jìn)行干燥，并用50-100%的醇在20- l〇〇°C的條件下萃取3-10天。減壓濃縮所得的萃取溶劑從而得到提取物，產(chǎn)率為8-15%。
[0160] 具體地，對(duì)通過實(shí)施例<1-1>所述方法獲得的大豆葉進(jìn)行干燥，然后，將化g干燥 的大豆葉用80%乙醇在室溫下萃取7天。此后，減壓濃縮所得的萃取溶劑，得到86g的提取 物。此外，將干燥的大豆葉用純水在40-100°C的條件下萃取。減壓濃縮所得的萃取溶劑得到 提取物，產(chǎn)率為10-17 %。
[0161] 結(jié)果，如圖2和圖3所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)與乙締利處理前用乙醇萃取的大豆葉中的提 取物相比，乙締利處理7天后再用乙醇萃取的大豆葉中的提取物顯現(xiàn)出明顯更高的異黃酬 衍生物含量(圖2和圖3)。
[0162] <2-2>具有高含量異黃酬衍生物的大豆莖的制備
[0163] 對(duì)通過實(shí)施例<1-2>方法獲得的大豆莖進(jìn)行干燥，并用50-100%的醇在20-100 °C的條件下萃取3-10天。減壓濃縮所得的萃取溶劑從而得到提取物，產(chǎn)率為8-15%。
[0164] 具體地，對(duì)通過實(shí)施例<1-2>所述方法獲得的大豆莖進(jìn)行干燥。然后，將化g干燥 的大豆莖用80%乙醇在室溫下萃取7天。此后，減壓濃縮所得的萃取溶劑，得到86g的提取 物。此外，將干燥的大豆莖用純水在40-100°C的條件下萃取。減壓濃縮所得的萃取溶劑從而 得到提取物，產(chǎn)率為10-17 %。
[0165] 結(jié)果，如圖10和圖11所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)與乙締處理前用乙醇萃取的大豆莖中的提 取物相比，乙締處理后用乙醇萃取的大豆莖中的萃取物顯現(xiàn)出明顯更高的異黃酬衍生物含 量(圖10和圖11)。
[0166] <實(shí)施例3>從大豆葉和大豆莖中分離和純化異黃酬衍生物
[0167] <3-1>從大豆葉中分離和純化異黃酬衍生物
[0168] 采用MPLC(Teledyne Isco CombiFlash Companion)對(duì)通過實(shí)施例<2-1 >所述方 法獲得的具有高含量異黃酬大豆葉的乙醇饋分中的異黃酬衍生物進(jìn)行分離和純化。對(duì)于柱 材料，使用C1姉圭膠(YMC，50ym)。對(duì)于洗脫條件，使用水/乙臘混合溶液，運(yùn)樣使其中乙臘溶 劑自0-90%增加的梯度洗脫得W進(jìn)行。其結(jié)果是，四種異黃酬衍生物被分別分離。
[0169] 此外，通過實(shí)施例<2-1>所述方法獲得的具有高含量異黃酬衍生物大豆葉的乙 醇提取物用0-葡萄糖巧酶進(jìn)行處理。為了對(duì)所得提取物中的異黃酬衍生物進(jìn)行分離和純 化，如上所述進(jìn)行C1姉圭膠色譜分析。結(jié)果，由于β-葡萄糖巧酶對(duì)四種異黃酬糖巧轉(zhuǎn)化而獲 得的兩種異黃酬衍生物被分別分離，因此，總共6種異黃酬衍生物被分別分離。
[0170] <3-2>從大豆莖中分離和純化異黃酬衍生物
[0171 ]采用MPLC(Teledyne Isco CombiFlash Companion)對(duì)通過實(shí)施例<2-2>所述方 法獲得的具有高含量異黃酬大豆莖的乙醇提取物中的異黃酬衍生物進(jìn)行分離和純化。對(duì)于 柱材料，使用C1姉圭膠(YMC，50ym)。對(duì)于洗脫條件，使用水/乙臘混合溶液，運(yùn)樣使其中乙臘 溶劑自0-90%增加的梯度洗脫得W進(jìn)行。其結(jié)果是，四種異黃酬衍生物被分別分離。
[0172] 此外，通過實(shí)施例<2-2>所述方法獲得的具有高含量異黃酬衍生物大豆莖的乙 醇提取物用0-葡萄糖巧酶進(jìn)行處理。為了分離和純化所得提取物中的異黃酬衍生物，進(jìn)行 C1姉圭膠色譜分析。結(jié)果，兩種由于β-葡萄糖巧酶對(duì)四種異黃酬糖巧轉(zhuǎn)化而獲得的異黃酬衍 生物被分別分離。因此，總共6種異黃酬衍生物被分別分離。
[0173] <實(shí)施例4>分離所得異黃酬衍生物的結(jié)構(gòu)分析
[0174] 為了分析通過 < 實(shí)施例3>所述方法分離出來的6種異黃酬衍生物化合物，進(jìn)行了 HPLC、UPLC/Q-T0F MS和NMR分光分析。
[0175] 結(jié)果，如圖4和圖12所示，6種異黃酬衍生物中的峰1確定為下述[化學(xué)式2]所示的 大豆巧（圖4和圖12)。
[0176] [化學(xué)式2]
[0177]
[017引 大豆巧（峰 1) :ESI-MS(Q-T0F)[M+H]+417.1186(計(jì)算值417.1186，C21H2109， 0.0wm);lHNMR(500MHz，DMS0-d6)S3.30(2H，m，H-4"，2")，3.47(3H，m，H-3"，H-5"，6"b)， 3.73αH，dd，J=14.2,7.4Hz，H-6"a)，5.12αH，m，H-Γ)，6.82(2H，d，J = 8.細(xì)z，H-3'，5')， 7.15(lH，dd，J = 8.6,2.1Hz，H-6) ,7.24(lH，d，J = 2. lHz，H-8) ,7.41 (2H，d，J = 8.細(xì)z，H-2'， 6' ),8.04( lH，d，J = 8.9Hz，H-5) ,8.39( lH，s，H-2)，和 9.56( lH，s ,4'-OH); 13C NMR( 125MHz， DMS0-d6)δ61.1(C-6")，70.1(C-4")，73.6(C-2")，76.9(C-3")，77.7(C-5")，100.5(C-8)， 104.5(C-1"),115.6(C-3' ,5' )，116.0(C-6)，118.9(C-4a)，122.8(C-3)，124.2(C-1')， 127.4(C-5)，130.6(C-2' ,6'),153.8(C-2)，157.5(C-4' ),157.7(C-8a)，161.9(C-7)，175.2 (C-4)。
[0179] 此外，如圖5和圖13所示，峰2確定為下述[化學(xué)式3]所示的染料木巧(圖5和圖13)。
[0180] [化學(xué)式3]
[0181]
[0182] 染料木巧（峰 2):651-]?5(9-1'0。）[]\1+扣+433.1139(計(jì)算值433.1135，〔21肥1010， 0.9ppm);lH NMR(500MHz，DMS0-d6)S3.19(lH，dd J = 9.9,4.細(xì)z，H-4") ,3.29(lH，dd，m，J = 13.4,7.4Hz，H-2")，3.32(lH，dd，J=13.4,4.8Hz，H-3")，3.45(lH，m，H-5")，3.48(lH，dd，J = 11.4,5.5Hz，H-6"b)，3.73(lH，dd，J=11.4,4.8Hz，H-6"a)，5.06(lH，d，J = 7.4Hz，H-r)， 6.49αH，d，J = 2.1Hz，H-6)，6.72αH，d，J = 2.1Hz，H-8)，6.84(2H，d，J = 6.細(xì)z，H-3'，5')， 7.41(2H，d，J = 6.6Hz，H-2'，6')，8.41(lH，s，H-2)，9.53αH，s，4'-OH)，和12.9αH，s，5- 0H).13C NMR(125MHz，DMS0-d6)S61.1(C-6"),70.1(C-4")，73.6(C-2")，76.9(C-3"),77.6 (C-5")，95.0(C-8)，100.0(C-6)，100.4(C-l")，106.5(C-4a)，115.5(C-3'，5')，121.4(C- 3)，123.0(C-1' )，130.5(02' ,6' ),154.9(C-2)，157.6(C-4' ),157.9(C-8a)，162.0(C-5)， 163.4(C-7)，180.9(C-4)。
[0183] 此外，如圖6和圖14所示，峰3確定為下述[化學(xué)式4]所示的丙二酷大豆巧（圖6和圖 14)。
[0184] [化學(xué)式4]
[0185]
[0186] 丙二酷大豆巧（峰3) : ESI-MS (Q-TOF) [M+H]+503. 1190(計(jì)算值 503.1190， C24H23012，0.0卵m); IH NMR( 500MHz，DMS0-d6) δ3.17 (2H，m，丙二酷-邸2)，3.19(巧，111，護(hù) 4"),3.34(lH，m，H-2"),3.38(lH，m，H-3"),3.75W-5")，4.14(lH，m，H-6"b)，4.34(lH，m，H- 6"a) ,5.14(lH，d，J = 7.細(xì)z，H-r)，6.52(2H，d，J = 8.2Hz，H-3' ,5' ),6.74(lH，d，J = 8.9Hz， H-6)，7.04(lH，s，H-8)，7.38(2H，d，J = 8.2Hz，H-2' ,6' )，7.95(lH，d J = 8.9Hz，H-5)，8.42 (lH，s，H-2) .13C 醒3(1251化，0150-(16)541.9(丙二酷-細(xì)2)，64.2((：-6")，67.3((：-4")， 71.4(C-2" )，72.9(C-5")，75.6(C-3")，95.7(C-8)，100.2(C-1")，102.2(06)，106.5(C-3'， 5'),113.l(C-4a)，120.4(C-3)，121.9(C-1'),130.2(C-2',6' ),157.6(C-2)，154.8(C-4')， 162.2(C-8a)，161.9(C-7) ,166.8(丙二酷-COOR) ,169.5(丙二酷-COOH)，179.9(C-4)。
[0187] 此外，如圖7和圖15所示，峰4確定為下述[化學(xué)式5]所示的丙二酷染料木巧（圖7和 圖 15)。
[01則[化學(xué)式引
[0189]
[0190] 丙二酷染料木巧（峰4) :ESI-MS(Q-T0F)[M+H] + 519.1138(計(jì)算值519.1139， C24H23013，-0.2卵m); 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)δ3.19(2H，m，丙二酷-CH2)，3.20(lH，m，H- 4")，3.28(lH，m，H-2")，3.33(lH，m，H-3")，4.12(lH，m，H-6"b)，4.35(lH，m，H-6"a),5.12 (lH，d，J = 7.7Hz，H-r)，6.46(lH，s，H-6)，6.71(lH，s，H-8)，6.83(2H，d，J = 8.1Hz，H-3'， 5' )，7.39(2H，d，J = 8.1Hz，H-2' ,6' )，8.40(lH，s，H-2).13C NMR(125MHz，DMS0-d6)S41.6 (丙二酷-邸2)，63.9(06")，69.4(04")，72.7((：-2")，73.6((：-5")，76.1((：-3")，94.3((：- 8)，99.3(C-1" )，99.4(C-6)，106.0(C-4a)，115.0(03' ,5' )，120.9(01' )，122.5(03)， 130.2(C-2',6'),154.6(C-2)，157.l(C-8a)，157.4(C-4' ),162.2(C-5)，162.6(C-7)，167.0 (丙二酷-COOR)，167.5(丙二酷-COOH)，180.5(C-4)。
[0191] 此外，如圖8和圖16所示，從4種異黃酬衍生物轉(zhuǎn)化而來的6種異黃酬衍生物種的一 種確定為下述[化學(xué)式6]所示的大豆巧元(圖8和圖16)。
[0192] [化學(xué)式6]
[0193]
[0194] 大豆巧元:ESI-MS(Q-TOF) [M+扣+255.0658(計(jì)算值255.0657，C15H1104，0.4ppm); lH醒R(500MHz，DMS0-d6)δ6.84(2H，dJ = 8.細(xì)z，H-3'，5')，6.85αH，d，J = 2.0Hz，H-8)， 6.96αH，dd，J = 8.8,2.2Hz，H-6)，7.38(2H，d，J = 8.細(xì)z，H-2'，6')，8.07(lH，d，J = 8.細(xì)z， H-5)，8.15(lH，s，H-2).13C NMR( 125MHz，DMS0-d6)Sl02.5(C-8)，115.4(06)，115.6(03'， 5' )，117.0(C-4a)，123.0(C-1' ),123.9(C-3)，127.7(C-5)，130.5(02' ,6' ),153.2(C-2)， 157.6(C-4' ),157.9(C-8a)，163.1(07)，175.1(04)。
[01M]此外，如圖8和圖16所示，從4種異黃酬衍生物轉(zhuǎn)化而來的6種異黃酬衍生物的其中 一種確定為下述[化學(xué)式7]所示的染料木黃酬(圖8和圖16)。
[0196] [化學(xué)式7]
[0197]
[0198] 染料木黃酬：ESI-MS(Q-TOF) [M+H] + 271.0600(計(jì)算值271.0606，C15H1105，- 2.2卵m);lHNMR(500MHz，DMS0-d6)δ6.2lαH，dJ=l.細(xì)z，H-6)，6.33(lH，dJ=l.細(xì)z，H- 8)，6.86αH，dd，J = 6.7，l.細(xì)z，H-3'，5')，7.38(lH，dd，J = 6.7，l.細(xì)z，H-2'，6')，8.06(lH， s，H-2).13C 醒 R( 125MHz，DMS0-d6)S94.0(C-8)，99.3(C-6)，104.8(C-4a)，115.4(03'， 5' ),121.6(C-3)，122.7(C-1'),130.5(C-2',6'),154.3(C-2)，157.8(C-4'),158.0(C-8a)， 162.4(C-5)，164.7(C-7)，180.6(C-4)
[0199] <實(shí)施例5>采用UPLC的異黃酬衍生物定量分析
[0200] <5-1>從大豆葉中分離的4種異黃酬衍生物的定量分析
[0201] 采用UPLC來對(duì)通過實(shí)施例<3-1>所述方法分離的4種異黃酬化合物W及從采摘 后經(jīng)乙締利處理的大豆葉中分離出來的4種異黃酬化合物進(jìn)行定量分析。
[0202] 具體地，采用AC卵ITY UPLCTM系統(tǒng)(來自Waters Co.，USA)用于UPLC。對(duì)于柱，使用 0DS基邸Η C18 (100 X 2.1mm)。對(duì)于流動(dòng)相，使用含0.1 %乙酸的水和含0.1 %乙酸的乙臘。梯 度洗脫進(jìn)行15分鐘，其中乙臘溶劑從最初3%增加到57%。將流速調(diào)至0.4ml/min。提取液的 注射量為化1。用于分析的檢測(cè)波長為254nm。將用 < 實(shí)施例3>所述方法分離的4種異黃酬 化合物溶解在甲醇中，W制備l-l(K)μg/ml范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后，進(jìn)行UPLC分析，并根據(jù) 峰面積制成校正曲線。分析中使用的異黃酬標(biāo)準(zhǔn)材料(stand material)為四種，即大豆巧、 染料木巧、丙二酷大豆巧、丙二酷染料木巧，所有運(yùn)些均具有至少98%的高純度(表1)。
[0203] 此外，獲取實(shí)施例<1-1>播種后10-90天的大豆植物的大豆葉，并用50ppm的乙締 利處理。然后，用實(shí)施例<3-1>所述方法對(duì)4種異黃酬衍生物進(jìn)行分離，然后根據(jù)上述進(jìn)行 定量分析(表2)。
[0204] 結(jié)果，如圖1所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)乙締利處理的大豆葉的乙醇饋分中，未檢測(cè)到 異黃酬衍生物，而在用50ppm乙締利處理的大豆葉的乙醇饋分中，4種異黃酬衍生物的含量 迅速增加。特別是，乙締利處理7天后，異黃酬含量達(dá)到最高水平1707化g/g(表1)。
[0205] 此外，如表2所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)采摘后用乙締利處理的大豆葉顯現(xiàn)出異黃酬衍生物含 量迅速增加，正如乙締利處理后采摘的大豆葉那樣(表2)。因此，從結(jié)果來看，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有 高含量異黃酬衍生物的大豆葉可W通過采摘后用乙締利處理大豆葉的方法，W及乙締利處 理后采摘大豆葉的方法來制備。
[0206] [表1]
[0207]
[0210] <5-2>從大豆莖分離的4種異黃酬化合物的定量分析
[0211] 采用HPLC來對(duì)通過實(shí)施例<3-2>所述方法分離的4種異黃酬化合物進(jìn)行定量分 析。
[0212] 具體地，采用HPLC 200系列系統(tǒng)（來自Perkinelmer Co.，USA)用于冊(cè)LC。對(duì)于柱， 使用ODS基Zo化ox Bonus-RP( 150 X 4.6mm)。對(duì)于流動(dòng)相，使用含ο. 1 %乙酸的水和含ο. 1 % 乙酸的乙臘。梯度洗脫進(jìn)行85分鐘，其中乙臘溶劑從最初5%增加到95%。將流速調(diào)至1ml/ min。提取液的注射量為10μ1。用于分析的檢測(cè)波長為254皿。將通過實(shí)施例<3-2>所述方 法分離的4種異黃酬化合物溶解在甲醇中，來制備l-l(K)μg/ml范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后，進(jìn) 行HPLC分析，并由峰面積制成校正曲線。分析中使用的異黃酬標(biāo)準(zhǔn)材料（stand material) 為四種，即大豆巧、染料木巧、丙二酷大豆巧、丙二酷染料木巧，所有運(yùn)些均具有至少98%的 高純度(表3)。
[0213] 結(jié)果，如表3所示，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)乙締處理的大豆莖的乙醇饋分中，未檢測(cè)到異 黃酬衍生物，而在用lOO-lOOOppm乙締處理的大豆莖的乙醇饋分中，4種異黃酬衍生物含量 迅速增加。特別是，乙締處理后，總異黃酬含量達(dá)到最高水平1195化g/g(表3)。
[0214] [表 3]
[0215]
[0216] W下，描述本發(fā)明組合物的制備實(shí)施例。
[0217] <制備實(shí)施例1>藥物組合物的制備
[0218] <1-1>粉末劑的制備
[0219] 本發(fā)巧具幕高含量異黃獅衍生物的大豆葉和太至莖、其提取物或該 提取物的一部分 0.1 g 乳糖 ！.5g 滑石粉 0.5 g
[0220] 將上述成分混合，并裝入密封袋W制備粉末劑。
[0221] <1-2>片劑的制備
[0222] 本發(fā)明具有高含量異黃廝衍生物的太豆葉和大豆莖、其撮取物歲讀 提取物的一部分 0.1 g 乳糖 7.9 g 結(jié)晶纖維素 1.5 g 硬脂酸緩 0.5 g
[0223]將上述成分混合后，通過直接壓片法制備片劑。
[0224] <1-3>膠囊劑的制備
[0225] 本發(fā)明具有高含量異黃醜衍生物的大豆葉和大至莖、其提取物或該 提取物的一部分 0.1 g 玉米淀粉 5 g 敦基奸維素 4.9 g
[0226] 在通過混合上述成分制備粉末劑之后，根據(jù)制備膠囊劑的典型方法，將粉末填充 到硬膠囊中制備膠囊劑。
[0227] <1-4>注射制劑的制備 [022引 本發(fā)明具有高含量異黃醜衍生物的大豆葉和大至莖、其提取物或該 提取物的一部分 0.1 g 注射用無菌水 適量 pH調(diào)節(jié)劑 適量
[0229] 根據(jù)制備注射制劑的典型方法進(jìn)行制備，每安飯含有2ml的上述成分。
[0230] <1-5>液體制劑的制備
[0231] 本發(fā)明具有高含量異黃醜衍生物的大豆葉和欠豆莖、其提取物或該 換取物的一部分 0.1苔 異構(gòu)糖 10 g 甘露醇 5 g 純水 適量
[0232] 根據(jù)制備液體制劑的典型方法，將各成分加入并溶解于純水中。然后，加入適量巧 樣香料，并將上述成分混合。然后，加入純水將體積調(diào)至100ml，隨后將所得物裝入棟色瓶中 并滅菌，W制備液體制劑。
[02削 < 制備實(shí)施例2>保健食品的制備
[0234] <2-1 >混合茶的制備
[0235] 將本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取物或該提取物的一 部分與具有香味的草藥植物混合W制備混合茶。
[0236] < 2-2 >小麥?zhǔn)称返闹苽?br>[0237] 將0.5-5.0重量份的本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取 物或該提取物的一部分加入到小麥中，并混合。通過使用該混合物，制備面包、蛋糕、曲奇、 薄脆餅干和面條。
[023引 < 2-3 >湯和肉汁的制備
[0239]將0.1-5.0重量份的本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取 物或該提取物的一部分加入到湯和肉汁中，W制備用于增強(qiáng)健康的家畜加工產(chǎn)品的湯和肉 汁w及面條。
[0240] <2-4>碎牛肉的制備
[0241] 將10重量份的本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取物或該 提取物的一部分加入到碎牛肉中，來制備用于增強(qiáng)健康的碎牛肉。
[0242] < 2-5 >乳制品的制備
[0243] 將5-10重量份的本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取物或 該提取物的一部分加入牛奶，并通過使用該牛奶制備各種乳制品，如黃油和冰洪淋。
[0244] <2-6>Suns化(谷粉）的制備
[0245] 將糖米、大麥、懦米和慧巧通過已知方法進(jìn)行預(yù)糊化，并干燥。然后，將所得物烘賠 并用粉碎機(jī)粉碎成粒徑為60目的粉末。
[0246] 將黑豆、黑芝麻和紫蘇子通過已知方法蒸熟，并干燥。然后，將所得物烘賠并用粉 碎機(jī)粉碎成粒徑為60目的粉末。
[0247] 將本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取物或該提取物的一 部分在真空濃縮器中進(jìn)行減壓濃縮。然后，將所得物用噴霧、熱風(fēng)干燥機(jī)進(jìn)行干燥，將得到 的干燥產(chǎn)物粉碎至粒徑60目，W獲得干燥粉末。
[0248] 將W上制備的谷物、種子和本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、 其提取物或該提取物的一部分按下述比例混合用于制備。
[0249] 谷物(糖米30重量份、慧巧15重量份、大麥20重量份）、
[0250] 種子(紫蘇子7重量份、黑豆8重量份、黑芝麻7重量份）、
[0251] 本發(fā)明具有高含量異黃酬衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取物或該提取物的一部 分(3重量份）、
[0252] 靈芝(0.5重量份）、
[0253] 地黃(0.5重量份）
[0254] <制備實(shí)施例3>保健飲料的制備
[0 巧5] 本發(fā)明具有高含量異黃網(wǎng)衍生物的大至葉和大豆莖、其提取物或該 提取物的一部分 Κ)0 m呂 梓橡酸 100 mg 寡搪 100' mg 李子濃縮汁 2 mg 牛碳酸 10.0 mg
[0256] 加入純水將總體積調(diào)為500ml。
[0257] 將上述成分根據(jù)制備保健飲料的典型方法混合。然后，將混合物在85°C下加熱攬 拌1小時(shí)。此后，過濾所得溶液，并裝入1升的滅菌容器中。將容器密封、滅菌并冷藏，用于制 備本發(fā)明的保健飲料組合物。
[0258] 該組成比是一個(gè)優(yōu)選的例子，其中將比較適合于最受喜愛的飲料的成分進(jìn)行混合 和配制。然而，該組成比可隨地區(qū)和種族喜好而不同，包括用戶階層、用戶國家和使用目的。
[0259] <制備實(shí)施例4 >化妝品組合物的制備
[0260] <4-1 >乳霜的制備
[0261] 本發(fā)明鼻有高含量彝黃醜衍主物的大豆葉和太豆蓋、其提取物或該 提取物的…部分 4.6重量份 十八醇十六醇混合物 2.8重量份 屈蠟 2.6重量份 硬脂酸 1.4重量份 親脂性單硬脂酸甘油酶 2重量份 PEG-100硬脂酸醋 1重量份 失水山梨醇倍半油酸離 1.4重量份 荷荷色油 4重量粉 角望燒 3.8重量份 聚山梨醋60 1.1重量紛 澳洲祭果油 2重量份 生育軟醋酸醋 0.2重量份 甲基聚珪氣燒 0.4重量份 尼泊金乙醋 0.1重量份
[026^ 尼泊金巧醋 0.1重量翁 Euxyl K-400 0.1 重量紛 ;1，3-了二辱 7重量份 據(jù)諭金甲醋 0,05重量份 甘油 6重量份 D-泛醇 0.2重量份 五乙醇胺 0.2重量份 pt 41891 0.2重量份 P-札0 46.05重量輸
[02創(chuàng) <4-2>乳液的制備
[0264] 本發(fā)明具有高含量異黃禍衍生物的大豆葉和大豆莖、其提取物或該 提取物的一部分 3.5重量份 十八醇十六醇混合物 1.6重量紛 硬脂酸 1.4重量份 親脂性單硬脂酸甘油醋 1.8重量份 PEG-100硬脂酸醋 2.6重量份 失水山梨醇倍半油酸醋 0.6重量份 角莖蜂 4.8重量份 澳洲豎果油 2重量份 荷荷匹油 2重量份 生育齡蠟酸酶 0.4重量份 甲基聚珪氣綠 0.2重量徐 尼泊金乙醋 0.1重量份 尼泊金丙醋 0.1重量儉 1，3-Τ二醇 4重量份 尼泊金甲醋 0.1重量份 黃原膠 0.1重量份 甘油 4棄量徐
[0265] ?_)-泛醇 0. 1 5重量份 尿囊素 0.1重量紛 Garbo;朋（2%水溶液） 4重量徐 互乙醇胺 0.15重量份 芭醇 3重量份 pt 41891 0.1 重量紛 p-H.O 48.3重量餘
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方法，所述方法包括用 乙烯、乙烯供體或乙烯生成劑處理大豆葉或大豆莖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方 法，其中所述大豆葉或大豆莖為播種10-90天后的大豆葉或大豆莖。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方 法，其中所述乙烯供體是乙烯利。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方 法，其中所述乙稀、乙稀供體或乙稀生成劑以5-1000ppm的濃度進(jìn)行處理。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方 法，其中所述異黃酮衍生物為下述[化學(xué)式1]所示的化合物： [化學(xué)式1] (其中，Ri獨(dú)立地為H或OH;和 R2獨(dú)立地為H、葡萄糖或葡萄糖丙二酸）。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于制備具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的方 法，其中所述異黃酮衍生物為下述[化學(xué)式2]至[化學(xué)式7]所示的化合物： [化學(xué)式2] [化學(xué)式3][化學(xué)式4][化學(xué)式5] [化學(xué)式6] [化學(xué)式7]7. -種如權(quán)利安豕1所還萬'/云制爸的具有咼1?、重并頁酮佑王物的入顯吖現(xiàn)入顯莖。8. -種大規(guī)模生產(chǎn)異黃酮衍生物的方法，所述方法包括： 1)用乙烯、乙烯供體或乙烯生成劑處理大豆葉或大豆莖來制備大豆葉或大豆莖;和 2)對(duì)步驟1)中的大豆葉和大豆莖進(jìn)行萃取，然后分離異黃酮衍生物。9. 一種包含如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的組合 物、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分。10. -種用于治療和預(yù)防因雌激素缺乏所致疾病的藥物組合物，所述組合物包含如權(quán) 利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取 物或所述提取物的一部分作為活性成分。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的用于治療和預(yù)防因雌激素缺乏所致疾病的藥物組合物，其 中所述因雌激素缺乏所致疾病為選自骨質(zhì)疏松、心臟疾病、乳腺癌、陰道疾病、高脂血癥、皮 膚老化和顏面潮紅中的任一種疾病。12. -種用于預(yù)防和緩解因雌激素缺乏所致疾病的保健食品，所述食品包含如權(quán)利要 求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或 所述提取物的一部分作為活性成分。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的用于預(yù)防和緩解因雌激素缺乏所致疾病的保健食品，其中 所述因雌激素缺乏所致疾病為選自骨質(zhì)疏松、心臟疾病、乳腺癌、陰道疾病、高脂血癥、皮膚 老化和顏面潮紅中的任一種疾病。14. 一種用于抗氧化的藥物組合物，所述組合物包含如權(quán)利要求7所述的具有高含量異 黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為 活性成分。15. -種用于抗氧化的保健食品，所述食品包含如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮 衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為活性 成分。16. -種用于皮膚護(hù)理的藥物組合物，所述組合物包含如權(quán)利要求7所述的具有高含量 異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分作 為活性成分。17. -種用于皮膚護(hù)理的化妝品組合物，所述組合物包含如權(quán)利要求7所述的具有高含 量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分 作為活性成分。18. -種用于皮膚護(hù)理的保健食品，所述食品包含如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃 酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為活 性成分。19. 使用如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖的荼。20. -種用于預(yù)防或治療因雌激素缺乏所致疾病的方法，所述方法包括向受試者施用 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的 提取物或所述提取物的一部分。21. -種抗氧化的方法，所述方法包括向受試者施用如權(quán)利要求7所述的具有高含量異 黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分。22. -種皮膚護(hù)理的方法，所述方法包括向受試者施用如權(quán)利要求7所述的具有高含量 異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大豆莖的提取物或所述提取物的一部分。23. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為藥物組合物用于預(yù)防和治療因雌激素缺乏所致 疾病的一種用途。24. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為保健食品用于預(yù)防和緩解因雌激素缺乏所致疾 病的一種用途。25. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為藥物組合物用于抗氧化的一種用途。26. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為保健食品用于抗氧化的一種用途。27. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為藥物組合物用于皮膚護(hù)理的一種用途。28. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為化妝品組合物用于皮膚護(hù)理的一種用途。29. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖、所述大豆葉或大 豆莖的提取物或所述提取物的一部分作為保健食品用于皮膚護(hù)理的一種用途。30. 如權(quán)利要求7所述的具有高含量異黃酮衍生物的大豆葉或大豆莖作為荼的一種用 途。
【文檔編號(hào)】A61K31/352GK106028795SQ201480075528
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2014年11月27日
【發(fā)明人】樸基勛, 陸興周, 宋泳勛
【申請(qǐng)人】慶尚大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)