一種檢測(cè)肉蓯蓉種子生活力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種檢測(cè)肉蓯蓉種子生活力的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肉灰蓉(Cistanchedeserticola Y.C.Ma)為列當(dāng)科(Orobanchaceae)肉灰蓉屬(Cistanche)多年生全寄生草本植物。目前《中國(guó)植物志》將我國(guó)肉灰蓉屬植物確定為五個(gè)種和一個(gè)變種，即肉灰蓉、沙灰蓉(C.sinensis G.Beck)、鹽生肉灰蓉[C.salsa(C.A.Mey.)G.Beck]、管花肉灰蓉[C.tubulalosa (Schenk) Winht]和蘭州肉灰蓉(C.1anzhouensisZ.Y.Zhang)，存疑種為蒙古肉灰蓉(C.mongoIica)。
[0003]肉蓯蓉屬根莖類藥材，是用途非常廣泛的珍貴中藥材植物，自古以來一直被用作強(qiáng)壯滋補(bǔ)的中草藥。肉蓯蓉在我國(guó)有1800多年的藥用歷史，享有“沙漠人參”之美譽(yù)。據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》記載，肉蓯蓉的醫(yī)藥作用主要是“補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便，用于陽(yáng)痿、不孕、腰膝酸軟、筋骨無力，腸燥便秘”。
[0004]肉灰蓉為多年生寄生性種子植物，寄生于藜科小喬木梭梭[HaloxylonammodendronBunge (C.A.Mey.)Bunge])根部，是我國(guó)西北干旱區(qū)特有的傳統(tǒng)名貴中藥材，已被收入《國(guó)際野生植物保護(hù)名錄》和瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約(CITES)附錄二。我國(guó)也將肉蓯蓉列為二級(jí)保護(hù)植物并對(duì)肉蓯蓉實(shí)施了專營(yíng)管理制度。近幾十年來，隨著我國(guó)改革開放與對(duì)外交流的加強(qiáng)以及人們生活水平的提高和保健意識(shí)的增強(qiáng)，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)和國(guó)際市場(chǎng)對(duì)肉蓯蓉的需求量迅速增加。然而，由于國(guó)內(nèi)肉蓯蓉人工種植規(guī)模有限、接種率普遍較低，野外現(xiàn)存肉蓯蓉資源遭到無節(jié)制采挖，肉蓯蓉產(chǎn)量與國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求之間仍存在著很大的差距。
[0005]近年來，內(nèi)蒙古、新疆、寧夏等省區(qū)紛紛結(jié)合生態(tài)建設(shè)進(jìn)行肉蓯蓉人工種植和野生撫育，但種源緊缺、種子質(zhì)量不高已成為制約肉蓯蓉種植產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。因此，研究肉蓯蓉種子質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，對(duì)節(jié)約用種、保證種子質(zhì)量及提高接種率意義重大。
[0006]肉蓯蓉生長(zhǎng)在條件惡劣的沙漠、荒漠中，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，繁殖能力弱，野生資源稀少，導(dǎo)致肉蓯蓉種子資源緊缺，價(jià)格昂貴。野生種源質(zhì)量較差，加之肉蓯蓉種子萌發(fā)率較低，且萌發(fā)的種子胚根必須在有限的時(shí)間和空間范圍內(nèi)與寄主根部維管束連接，才能順利完成寄生。目前所采用的人工栽培上往往是通過盲目加大用種量的方法來提高接種率，不僅造成種源浪費(fèi)，還增加了種植成本。種子生活力是種子發(fā)芽的潛在能力或種胚所具有的生命力，肉蓯蓉種子是否具有健康的種胚是決定種子質(zhì)量的重要因素。
[0007]針對(duì)肉蓯蓉種子生活力的測(cè)定，國(guó)內(nèi)學(xué)者往往通過在特定溫度光照條件下，利用TTC法(氯化三苯四氮唑法)對(duì)肉蓯蓉種子生活力進(jìn)行測(cè)定。高生活力的種子可以大大提高田間接種率，低生活力種子不宜在生產(chǎn)上使用。采用TTC染色法測(cè)定種子活力的原理是利用無色的TTC進(jìn)入細(xì)胞，在去氫酶作用下，使H+成為還原態(tài)的紅色沉淀物TTCH，根據(jù)TTCH的形成量，特別是它在種胚器官組織上的分布狀況來判斷種子的生活力水平。然而，這種利用生化原理檢測(cè)肉蓯蓉種子生活力的方法，不僅化學(xué)試劑成本昂貴，而且檢測(cè)周期較長(zhǎng)、檢測(cè)條件和操作復(fù)雜，不適用于人工接種前大批量肉蓯蓉種子的質(zhì)量評(píng)估。
[0008]選擇高生活力的肉蓯蓉種子進(jìn)行人工播種，是提高肉蓯蓉接種率和藥材產(chǎn)量所必需解決的關(guān)鍵技術(shù)措施之一。因此，研發(fā)出一種快速、簡(jiǎn)便、低成本的肉蓯蓉種子生活力檢測(cè)方法是保證肉蓯蓉種子質(zhì)量、提高肉蓯蓉接種率和產(chǎn)量的關(guān)鍵生產(chǎn)環(huán)節(jié)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)某批次肉蓯蓉種子是否為有效種子批的方法。
[0010]本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟:
[0011]I)從某批次肉蓯蓉種子中選取具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子；
[0012]所述具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子滿足如下1)_4)全部條件:
[0013]I)種子直徑為 0.5-1.0mm ；
[0014]2)種子具有橢圓形黃色胚乳；
[0015]3)種子具有橢圓形白色種胚；
[0016]4)種子的種胚擠壓后飽滿且堅(jiān)實(shí)不破碎；
[0017]2)計(jì)算所述具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子百分?jǐn)?shù)，若所述具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子百分?jǐn)?shù)等于或大于77.50 %，則該批次種子為或候選為有效種子批；若所述具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子百分?jǐn)?shù)小于77.50%,則該批次種子不為或候選不為有效種子批；
[0018]所述具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子百分?jǐn)?shù)為所述具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子數(shù)量與所述某批次種子總數(shù)量的百分比；
[0019]所述有效種子批為在田間的預(yù)期接種率等于或大于40 %的種子批。
[0020]上述方法中，
[0021]所述從某批次肉蓯蓉種子中選取具有生活力的直徑為0.5-1.0mm的種子的方法包括如下步驟:
[0022]A、從某批次肉蓯蓉種子中選取直徑為0.5-1.0mm的種子；
[0023]B、將所述直徑為0.5-1.0mm的種子均去除種皮，觀察胚乳，選取具有橢圓形黃色胚乳的種子；
[0024]C、將所述具有橢圓形黃色胚乳的種子均在距胚乳種孔端1/3處擠壓，觀察種胚，選取具有橢圓形白色種胚的種子；
[0025]D、擠壓所有所述具有橢圓形白色種胚的種子的種胚，觀察種胚，選取種胚飽滿且堅(jiān)實(shí)不破碎的的種子，得到有生活力肉蓯蓉種子。
[0026]上述方法中，所述擠壓均采用解剖針，擠壓為輕輕擠壓。
[0027]上述方法中，所述步驟A)和步驟B)之間還包括如下步驟:將所述直徑為0.5-1.0mm的種子吸水至飽和狀態(tài)。
[0028]上述方法中，所述吸水時(shí)間大于等于6min。
[0029]本發(fā)明第二個(gè)目的是提供一種檢測(cè)待測(cè)肉蓯蓉種子是否具有生活力的方法。
[0030]本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟:依次檢測(cè)待測(cè)肉蓯蓉種子的直徑、胚乳、種胚及種胚活力，若待測(cè)種子滿足如下1)-4)全部條件，則所述待測(cè)種子具有或候選具有生活力，若待測(cè)種子不滿足如下全部條件，則所述待測(cè)種子不具有或候選不具有生活力；
[0031]所述條件為:
[0032]I)所述待測(cè)種子直徑為0.4-1.0mm ；
[0033]2)所述待測(cè)種子具有橢圓形黃色胚乳；
[0034]3)所述待測(cè)種子具有橢圓形白色種胚；
[0035]4)所述待測(cè)種子的種胚擠壓后飽滿且堅(jiān)實(shí)不破碎。
[0036]上述方法中，
[0037]所述檢測(cè)待測(cè)肉蓯蓉種子的直徑方法為測(cè)量待測(cè)肉蓯蓉種子的直徑；
[0038]所述檢測(cè)待測(cè)種子的胚乳方法為將所述待測(cè)種子去除種皮，觀察胚乳形狀顏色；
[0039]所述檢測(cè)待測(cè)種子的種胚方法為將所述待測(cè)種子在距胚乳種孔端1/3處擠壓，觀察種胚形狀顏色；
[0040]所述檢測(cè)待測(cè)種子的種胚活性方法為擠壓所述待測(cè)種子的種胚，觀察種胚是否飽滿且堅(jiān)實(shí)不破碎；
[0041]所述擠壓均具體采用解剖剖針。
[0042]上述方法中，在檢測(cè)所述待測(cè)種子的直徑和檢測(cè)所述待測(cè)種子胚乳之間還包括如下步驟:將所述直徑為0.4-1.0mm的種子進(jìn)行吸水至飽和狀態(tài)；所述吸水時(shí)間具體大于等于 6min ；
[0043]所述直徑為0.4-1.0mm的種子為直徑為0.5-1.0mm的種子。
[0044]上述方法在篩選或選育或培育高生活力肉蓯蓉種子或高生活力肉蓯蓉種子批中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍；
[0045]或上述方法在肉蓯蓉種子質(zhì)量檢測(cè)中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0046]所述肉蓯蓉種子采集于肉蓯蓉成熟花序。
[0047]本發(fā)明以肉蓯蓉種子的采收和接種前種子質(zhì)量的評(píng)估為目的，通過從收集的一批次種子中扦樣，并采用對(duì)充分吸水后的樣本種子進(jìn)行形態(tài)解剖觀察與統(tǒng)計(jì)分析相結(jié)合的方法，有效判斷出了一批次肉蓯蓉種子是否為有效的種子批。該發(fā)明提供了一種肉蓯蓉種子質(zhì)量評(píng)估的方法和標(biāo)準(zhǔn)，為肉蓯蓉高產(chǎn)、高效人工種植提供技術(shù)支持。
[0048]本發(fā)明證明，⑴肉灰蓉成熟花序中種子直徑范圍為0-1.0mm，直徑低于0.4mm的種子均為無生活力的肉蓯蓉種子。因此，在肉蓯蓉種子采收后，可立即去除直徑低于0.4mm的種子；(2)肉蓯蓉種子經(jīng)充分吸水和形態(tài)解剖后，若具有乳白色、飽滿、堅(jiān)實(shí)的胚，則為具有生活力的肉蓯蓉種子；(3)若一批次肉蓯蓉種子內(nèi)，直徑在0.5-1.0mm種子的具有生活力胚的種子百分?jǐn)?shù)的平均值等于或大于77.50%，則該批次種子為有效的種子批。因此，在肉蓯蓉種植生產(chǎn)實(shí)踐中，可采用上述方法和標(biāo)準(zhǔn)可實(shí)現(xiàn)對(duì)大批量肉蓯蓉種子質(zhì)量的快速檢測(cè)。
[0049]本發(fā)明提出了一種快速評(píng)估肉蓯蓉產(chǎn)業(yè)規(guī)模化種植過程中種子質(zhì)量的方法和標(biāo)準(zhǔn)，為肉蓯蓉的高產(chǎn)、高