一種意大利石松種子生活力測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及國(guó)外引進(jìn)優(yōu)良防風(fēng)固沙經(jīng)濟(jì)植物種子育苗技術(shù)領(lǐng)域，特別是常綠樹(shù)種意大利石松種子生活力測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]種子生活力是指種子能夠萌發(fā)的潛在能力或胚的生命力。種子生活力除了在種子質(zhì)量評(píng)定中作為一個(gè)必不可少的衡量指標(biāo)外，還對(duì)育苗造林技術(shù)具有重要的指導(dǎo)意義。例如，人們?cè)诓シN前通過(guò)對(duì)種子生活力的測(cè)定，可以精確計(jì)算出播種量，進(jìn)而降低種子的投入成本(特別是那些進(jìn)口或者名貴的種子)。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，測(cè)定種子生活力的常用方法有種子萌發(fā)法、TTC法、碘化鉀法等。這些方法在實(shí)際的操作中存在很多問(wèn)題。首先，由于具體方法選擇或者某些關(guān)鍵環(huán)節(jié)的操作不當(dāng)?shù)仍?，致使測(cè)定值遠(yuǎn)低于真實(shí)值(低于出苗率)。例如，采用種子萌發(fā)法測(cè)定種子生活力，如果待測(cè)種子具有休眠現(xiàn)象，那么測(cè)定結(jié)果肯定偏低；在11'(:方法中，如果染色時(shí)間和種子處理時(shí)間掌握不好，測(cè)定的結(jié)果比真實(shí)值低；碘化鉀法是測(cè)量松柏類(lèi)種子生活力比較有效的方法，也存在這樣的問(wèn)題；其次，很多方法在具體的某些關(guān)鍵的步驟都給出一個(gè)范圍。例如，浸種和染色的時(shí)間3?8h，對(duì)于具體的物種可能會(huì)不一樣；再者，有些物種你嚴(yán)格參照TTC法或碘化鉀法測(cè)定的生活力也可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于出苗率。更重要的是在目前的沙漠生態(tài)系統(tǒng)中，種子生活力的測(cè)定常常參照農(nóng)業(yè)上的方法，但是，由于沙漠生態(tài)系統(tǒng)中環(huán)境差異大，所以，產(chǎn)生的種子在形態(tài)和結(jié)構(gòu)上與農(nóng)業(yè)種子差異較大，因此，在沙生植物種子生活力的測(cè)定中，只是參照農(nóng)業(yè)上的方法，對(duì)于具體的物種，測(cè)定方法選擇，關(guān)鍵步驟等方面都應(yīng)該根據(jù)具體種子的特性，做出相應(yīng)的改變，形成一套具體而有效的方法。
[0003]意大利石松{Pinus pinea L.)是一種常綠喬木，隸屬于松科(chenopodiaceace)、松屬(pinea);原產(chǎn)于地中海，分布在南歐、北非和地中海北部的海岸沙灘。具有抗逆性強(qiáng)、耐瘠薄、喜生于光照充足、排水良好的沙地，具備根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)速度快、四季常綠和種子營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的優(yōu)點(diǎn)。由此可見(jiàn)，意大利石松符合我國(guó)西北沙區(qū)當(dāng)前防風(fēng)固沙植物新材料篩選要求。我們已經(jīng)研究出了一種意大利石松容器種子育苗的方法，但是，關(guān)于意大利石松種子生活力的測(cè)定，至今尚無(wú)一套成熟的方法。而且，意大利石松種子價(jià)格較高，一粒種子大約I美元，所以，探索種子生活力的測(cè)定方法對(duì)于降低播種量十分重要。我們?cè)?jīng)通過(guò)種子萌發(fā)率來(lái)測(cè)定種子生活力，花費(fèi)時(shí)間太長(zhǎng)大約I個(gè)月，測(cè)量結(jié)果差異大；我們也采用碘化鉀測(cè)定法，比較費(fèi)時(shí)間，浸種18h和放置72h，然后染色，鑒定判斷較為麻煩，并且測(cè)定的結(jié)果(46%)低于實(shí)際出苗率。
[0004]在國(guó)家林業(yè)局948項(xiàng)目“意大利石松種質(zhì)資源及其培育技術(shù)引進(jìn)”的資助下，我們通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，參照TTC法，探索出了意大利石松種子生活力的測(cè)定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種意大利石松種子生活力測(cè)定方法，以便于精確計(jì)算播種量，降低由于種子生活力計(jì)算不準(zhǔn)確(通常用出苗率估計(jì)種子生活力)而造成的資源浪費(fèi)。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)所述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下，一種意大利石松種子生活力的測(cè)定方法，包括種子引進(jìn)、種子處理、種皮破除、浸種、配置TTC溶液、染色、鑒定和統(tǒng)計(jì)；具體步驟如下:
1.種子引進(jìn)
通過(guò)購(gòu)買(mǎi)的方式，經(jīng)過(guò)海關(guān)檢疫，從國(guó)外引進(jìn)當(dāng)年成熟飽滿(mǎn)的意大利石松種子。
[0007]2.種子處理
2.1種子儲(chǔ)藏:將意大利石松種子裝在棉布袋中儲(chǔ)藏，儲(chǔ)藏期間避免煙熏、鼠害、蟲(chóng)害、水濕等；室溫保持在13?30°C，相對(duì)濕度< 30% ；
2.2除雜:將意大利石松種子放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，去除小的石塊、大小和顏色與種子相似的石塊雜物、明顯發(fā)霉和種皮發(fā)黑的種子，意大利石松種子一般為黃色；
2.3水選:將除雜待測(cè)的種子放在大燒杯中加蒸餾水浸泡5?lOmin，然后用玻璃棒連續(xù)攪拌3?5min停止，等到液面靜止5?20min，去除浮在水面上的種子；而后將沉在燒杯底部的種子取出得水選種子隨即進(jìn)行下步驟；
2.4種子消毒:將水選種子完全浸泡在質(zhì)量百分比濃度0.1%的HgCl2試劑中10?15min，取出，用蒸餾水反復(fù)沖洗3?5次得消毒種子，隨即進(jìn)行下步驟。
[0008]3.種皮破除
3.1浸種
意大利石松種皮堅(jiān)硬，透水性差；為了使種子在浸種過(guò)程中提高吸水效率，采取了破除種皮的操作。從消過(guò)毒種子中隨機(jī)地選擇100粒種子，在常溫下用蒸餾水浸泡4?Sh后取出種子，用濾紙吸干種子表面的水分，然后進(jìn)行破皮；
3.2破皮
破皮的方法有二種，方法一，在種皮上找到種臍，將繡花針?lè)旁诜N臍部位，然后輕輕地往里扎，在此過(guò)程中種皮會(huì)出現(xiàn)小的裂縫，就可以通過(guò)該裂縫用刀片撥開(kāi)種皮，去掉黃褐色的內(nèi)種皮，得到淡黃色的種子。在此過(guò)程中，特別注意不要用力過(guò)大，否則會(huì)傷害種子的胚。
[0009]方法二，在種皮上找到種臍，然后采用嗑瓜子的方法嗑種皮，當(dāng)聽(tīng)見(jiàn)種皮破裂的聲音時(shí)，取下種子，破除種皮(此方法容易掌握，對(duì)種子的傷害較小)，最后，去掉褐色的內(nèi)種皮，得到淡黃色的種子。值得注意的是，此操作的容易程度與種子浸泡時(shí)間有關(guān)，一般而言，浸泡時(shí)間越長(zhǎng)，種子越容易破皮。
[0010]4.浸種
將淡黃色的種子100粒放在燒杯中，加入100?200mL蒸餾水，然后用玻璃棒攪拌；等到種子完全沉到燒杯底部時(shí)，將燒杯放在30 °C?35 °(:的恒溫箱中浸種8?12h，在此期間每隔3?4h，取出燒杯用玻璃棒攪拌。
[0011]5.配置TTC溶液
染色劑采用0.5%的TTC溶液，配置方法如下:稱(chēng)取0.5g TTC放入小燒杯中，先加少許乙醇用玻璃棒攪拌溶解后，再用蒸餾水稀釋定容至10mLJTC溶液最好隨用隨配，不宜久藏；溶液應(yīng)遮光貯藏，若已變?yōu)榧t色，則不能繼續(xù)使用。
[0012]6.染色將經(jīng)步驟4浸種后充分吸水的種子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒溫箱進(jìn)行染色，恒溫箱的溫度設(shè)置為30~35°C，染色過(guò)程中每隔3?4h用玻璃棒攪拌I?2 min，使溶液換氣，加快染色的速度，同時(shí)避免種子因無(wú)氧呼吸而導(dǎo)致的種子腐爛；染色的時(shí)間根據(jù)種子染色的程度一般保持在14~20h。
[0013]7.鑒定和統(tǒng)計(jì)
將已經(jīng)染色的種子從TTC溶液中取出，用蒸餾水反復(fù)沖洗3?5次，然后用濾紙吸干種子表面的水分；而后用解剖刀片沿著種子的長(zhǎng)軸方向?qū)⒎N子切成兩半，任取其中一半，將被切平的一面朝上平鋪在玻璃板上，放置10?15min，然后進(jìn)行種子生活力的鑒定。鑒定標(biāo)準(zhǔn)如下:凡種胚全部或大部分被染成紅色的即為具有生活力的種子，種胚不被染色的為死種子；如果種胚中非關(guān)鍵性部位(如子葉的一部分)被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都屬于不能正常發(fā)芽的種子；生活力=N/100X100%，其中:N代表已經(jīng)染色的種子數(shù)。
[0014]本發(fā)明提供的方法填補(bǔ)了意大利石松種子生活力測(cè)定方法的空白，能夠準(zhǔn)確的反應(yīng)意大利石松種子的生活力，從而客觀精確計(jì)算出種子播種量，進(jìn)而降低了種子的購(gòu)置成本投入成本，降低了由于種子生活力計(jì)算不準(zhǔn)確(現(xiàn)有技術(shù)有的是以出苗率估計(jì)種子生活力)而造成的資源浪費(fèi)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
1.種子引進(jìn)
2012年8月，通過(guò)購(gòu)買(mǎi)的方式，經(jīng)過(guò)海關(guān)檢疫，從法國(guó)引進(jìn)當(dāng)年成熟飽滿(mǎn)的意大利石松種子45kg。種子千粒重為643.3g，含水量:3.6%。
[0016]2種子處理
2.1種子儲(chǔ)藏:將意大利石松種子裝在棉布袋中儲(chǔ)藏，儲(chǔ)藏期間避免煙熏、鼠害、蟲(chóng)害、水濕等；室溫保持在13?30°C，相對(duì)濕度< 30%。
[0017]2.2除雜:將意大利石松種子放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，去除如小的石塊，大小和顏色與種子相似的石塊等雜物、去除明顯發(fā)霉和種皮發(fā)黑的種子，意大利石松種子一般為黃色。
[0018]2.3水選:將待測(cè)的種子放在大燒杯中加蒸餾水浸泡5min，然后用玻璃棒不斷地?cái)嚢?min停止，等到液面靜止1min后，去除浮在水面上的種子。然后將沉在燒杯底部的種子取出，等待下一步操作。
[0019]2.4種子消毒:將水選后的意大利石松種子放入質(zhì)量百分比濃度0.1%的HgCl2K劑中浸泡1min取出，用蒸餾水反復(fù)沖洗3次。
[0020]3.種皮破除
3.1浸種
從消過(guò)毒的種子中隨機(jī)地選擇100粒種子，在常溫下用蒸餾水浸泡4h，最后取出種子，用濾紙吸干種子表面的水分，然后進(jìn)行破皮。
[0021]3.2 破皮
在種皮上找到種臍，將繡花針?lè)旁诜N臍部位，然后輕輕地往里扎，在此過(guò)程中種皮會(huì)出現(xiàn)小的裂縫，就可以通過(guò)該裂縫用刀片撥開(kāi)種皮，最后去掉黃褐色的內(nèi)種皮，得到淡黃色的種子。在此過(guò)程中，特別注意不要用力過(guò)大，否則會(huì)傷害種子的胚。最后，去掉褐色的內(nèi)種皮，得到淡黃色的種子。
[0022]4.浸種
將水選后淡黃色的種子100粒放在燒杯中，加入10mL蒸餾水，然后用玻璃棒攪拌。等到種子完全沉到燒杯底部時(shí)，將燒杯放在35 °C的恒溫箱中，浸種時(shí)間為8h，在此期間每隔3h，取出燒杯用玻璃棒攪拌，使得種子換氣，避免發(fā)生由無(wú)氧呼吸而導(dǎo)致的種子腐爛，影響以后的染色。
[0023]5.配置TTC溶液
稱(chēng)取0.5 g TTC放入小燒杯中，先加少許乙醇用玻璃棒攪拌溶解后，再用蒸餾水稀釋定容至100mL。TTC溶液最好隨用隨配，不宜久藏。溶液應(yīng)遮光貯藏。若已變?yōu)榧t色，則不能繼續(xù)使用。
[0024]6.染色
將經(jīng)步驟4浸種處理后充分吸水的種子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒溫箱進(jìn)行染色，恒溫箱的溫度設(shè)置為35°(:，染色過(guò)程中每隔311用玻璃棒攪拌1.5 min，使溶液換氣，加快染色的速度，同時(shí)避免種子因無(wú)氧呼吸而導(dǎo)致的種子腐爛；染色的時(shí)間16h。
[0025]7.鑒定及統(tǒng)計(jì)
將染色的種子從TTC溶液中取出，用蒸餾水反復(fù)沖洗3次，然后用濾紙吸干種子表面的水分；用解剖刀片沿著種子的長(zhǎng)軸方向?qū)⒎N子切成兩半，任取其中一半，將被切平的一面朝上平鋪在玻璃板上，放置llmin，然后進(jìn)行種子生活力的鑒定。具體鑒定