一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藤類植物的繁殖方法，具體是一種毛葉鐵線藤的組培繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鐵線藤屬(Adiantum)植物有200多種，主要分布于熱帶和溫帶。此屬植物中許多具 有較高的觀賞價值，其性耐陰，可作庭園綠化陰濕處點綴，也可作室內(nèi)切葉或盆栽觀賞，毛 葉鐵線藤為其中一種，其高約20~40cm，葉簇生，葉柄深栗色，有光澤，密被棟色長柔毛，頂 端分裂成2枝W上，小葉暗綠色，新葉黃綠色至淺紅色，四季常綠，耐陰性極強，可在立體綠 化背陰面及室內(nèi)綠化應用，具有良好的市場開發(fā)價值。
[0003] 目前關(guān)于鐵線藤屬植物繁殖的研究多見于鐵線藤、扇葉鐵線藤W及荷葉鐵線藤， 未見關(guān)于毛葉鐵線藤組培繁殖的研究。而組培繁殖是藤類生產(chǎn)的主要途徑，其具有不受季 節(jié)限制，繁殖速度快、數(shù)量巨大的優(yōu)勢，許多鐵線藤屬植物的抱子離體培養(yǎng)研究只能獲得大 量原葉體，難W獲得幼抱子體。因此，建立毛葉鐵線藤的組培繁育技術(shù)體系將有助于規(guī)?；?生產(chǎn)，W促進其在園林綠化中的廣泛應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種能簡易快速繁殖毛葉鐵線藤的方法。
[0005] 為達到上述目的，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案： 一種毛葉鐵線藤的組培繁殖方法，所述方法包括W下步驟： 51、 收集毛葉鐵線藤抱子，進行消毒； 52、 毛葉鐵線藤抱子用無菌水配成懸浮液，加入到抱子萌發(fā)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)化~35d，抱 子萌發(fā)并發(fā)育成片狀原葉體； 53、 將片狀原葉體轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)25~35d，再轉(zhuǎn)入抱子體誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng) 30~40d，形成幼抱子體； 54、 將幼抱子體團分離成單株幼抱子體或具4~5株幼抱子體的小叢，與多菌靈消毒液 混合，然后將混合液均勻倒入±壤基質(zhì)中培養(yǎng)。
[0006] 進一步地，所述步驟Sl的消毒具體為:將毛葉鐵線藤抱子用濾紙包好，在無菌水里 浸泡3~5min，再在升隸溶液中浸泡3~4min，最后用無菌水漂洗干凈。
[0007] 進一步地，所述抱子萌發(fā)培養(yǎng)基每升含6~7g瓊脂、20~25g薦糖，其余為MS或Knop 培養(yǎng)基，pH為5.8~6.0。
[000引進一步地，所述步驟S2、S3的培養(yǎng)條件都是：溫度25~30°C，光照強度2000~ 25001X，光照時間 12h/d。
[0009] 進一步地，所述增殖培養(yǎng)基每升含0.2~Img 6-BA、0.1~0.5mg NAA、6~7g瓊脂、 20~25g薦糖，其余為MS培養(yǎng)基，抑為5.8~6.0。
[0010] 6-BA是6-芐基腺嚷嶺，NAA是糞乙酸。
[0011] 進一步地，所述抱子體誘導培養(yǎng)基每升含6~7g瓊脂、20~25g薦糖，其余為MS培養(yǎng) 基，pH 為 5.8 ~6.0。
[0012] 進一步地，所述±壤基質(zhì)由泥炭±、珍珠巖和賠石按體積比1:1:1混合得到。
[0013] 進一步地，所述步驟S4的混合液為每200mL濃度為O.lwt%的多菌靈消毒溶液中含2 塊幼抱子體團的分離物。
[0014] 可W按照W下步驟繁殖毛葉鐵線藤： (1) 抱子采集及消毒處理:收集毛葉鐵線藤抱子用濾紙包好，在無菌水里浸泡3~5min， 再在Ig/L升隸溶液中浸泡3~4min，最后用無菌水漂洗干凈，最好漂洗4~5次，備用； (2) 抱子接種及誘導萌發(fā):消毒過的毛葉鐵線藤抱子用無菌水配成懸浮液，加入到抱子 萌發(fā)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25~35d后，抱子萌發(fā)，并從綠色絲狀體再發(fā)育成大約0.3~0.4cm的片狀 原葉體;培養(yǎng)條件是:溫度為25~30°C，光照強度2000~25001X，光照時間12h/d;抱子萌發(fā) 培養(yǎng)基每升含6~7g瓊脂、20~25g薦糖，其余為MS或Knop培養(yǎng)基，抑為5.8~6.0; (3) 原葉體增殖培養(yǎng):將片狀原葉體轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)25~35d，所得增殖原葉體 團直徑為Icm左右;培養(yǎng)條件是:溫度為25~30°C，光照強度2000~25001X，光照時間12h/d; 所述增殖培養(yǎng)基每升含0.2~Img 6-BA、0.1~0.5mg NAA、6~7g瓊脂、20~25g薦糖，其余為 MS培養(yǎng)基，pH為5.8~6.0; (4) 幼抱子體誘導：將增殖原葉體轉(zhuǎn)入抱子體誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)30~40d，形成幼抱子 體，且生長1~3片幼抱子葉;培養(yǎng)條件是:溫度為25~30°C，光照強度2000~25001X，光照時 間12h/d;所述抱子體誘導培養(yǎng)基每升含6~7g瓊脂，20~25g薦糖，其余為MS培養(yǎng)基，抑為 5.8~6.0; 巧)組培苗移栽管理:將幼抱子體團從瓶內(nèi)取出，分離成單株幼抱子體或具4~5株幼抱 子體的小叢，與多菌靈消毒液混合，混合液為每200血濃度為O.lwt%的多菌靈消毒溶液中含 2塊1~1.5cm幼抱子體團的分離物，然后將混合液均勻倒入±壤基質(zhì)中培養(yǎng)，并覆蓋薄膜保 濕，栽植后15d內(nèi)保持覆膜，W后可打開薄膜透氣，30d后可完全掲開薄膜，但每天噴霧保濕； 上壤基質(zhì)由泥炭上、珍珠巖和賠石按體積比1:1:1混合得到，并用O.lwt%多菌靈消毒液誘 透。
[0015] 本發(fā)明具有W下有益效果： 本發(fā)明通過將消毒過的毛葉鐵線藤抱子在抱子萌發(fā)培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)得到片狀原葉 體，然后將片狀原葉體在增殖培養(yǎng)基中進行激素刺激誘導，再轉(zhuǎn)回不含激素的抱子體誘導 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可獲得大量幼抱子體苗，隨后出瓶移植。全過程只需要轉(zhuǎn)接兩次，無需抱 子體繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)兩個階段，縮短了培養(yǎng)周期，從抱子萌發(fā)到幼抱子體形成只需90d 左右;本發(fā)明投入少，培養(yǎng)基成分簡單，短時間內(nèi)獲得大量毛葉鐵線藤種苗，且煉苗和移栽 同步進行，幼抱子體苗成活率可達100%，可使毛葉鐵線藤成為優(yōu)良觀葉植物。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步的說明： W下實施例所用MS培養(yǎng)基，1L培養(yǎng)基里包含NH4NO3 1650mg，KN〇3 1900 mg，K出P〇4 170 mg，MgS〇4 ? 7也0 370 mg'C^Cb ? 2也0 440 mg，MnS〇4 ? 4也0 22.3 mg，ZnS〇4 ? 7也0 8.6 mg， H3BO3 6.2 mg，KI 0.83 mg，Na2Mo〇4 ? 2也0 0.25 mg，CuS〇4 ? 5也0 0.025 mg，CoCl2 ? 6也0 0.025 mg，F(xiàn)eS〇4*7也0 27.8 mg，Na2邸TA 37.3 mg，甘氨酸2 mg，VBi 0.4 mg，VB6 0.5 mg， 煙酸0.5 mg，肌醇100 mg。
[0017]所用Knop培養(yǎng)基，1L培養(yǎng)基里包含KN03 125 mg，K此P〇4 125 mg，MgS〇4 ? 7此0 125 mg，(MN〇3)2 ? 4出0 500 mg。
[001引實施例1 按照W下步驟繁殖毛葉鐵線藤： (1)抱子采集及消毒處理：當毛葉鐵線藤的抱子囊開始呈現(xiàn)褐色，將其抱子葉剪下，于 室內(nèi)陰驚，待抱子散落收集待用。收集毛葉鐵線藤抱子用濾紙包好，在超凈工作臺上用無菌 水里浸泡3min，再在Ig/L升隸溶液中浸泡3min，最后用無菌水漂洗4次，備用。
[0019] (2)抱子接種及誘導萌發(fā):將MS培養(yǎng)基、6g瓊脂和20g薦糖配制成抑5.8~6.0的抱 子萌發(fā)培養(yǎng)基IL，分裝至200mL培養(yǎng)瓶中，每瓶約加入培養(yǎng)基20mL，室溫冷卻后待用。將消毒 過的毛葉鐵線藤抱子用無菌水配成懸浮液，用無菌的移液槍吸取ImL加入到準備好的培養(yǎng) 瓶中，輕微晃動培養(yǎng)瓶，使抱子均勻分布在萌發(fā)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件是:溫度為25~30°C，光 照強度2000~25001X，光照時間12h/d。培養(yǎng)7d后抱子開始萌發(fā)，培養(yǎng)基顯綠，抱子形成綠色 絲狀體，培養(yǎng)30d后從綠色絲狀體發(fā)育成致密的、大約0.3~0.4cm的片狀原葉體。
[0020] (3)原葉體增殖培養(yǎng):將MS培養(yǎng)基、6g瓊脂、20g薦糖、0.2mg 6-BA、0.1mg NAA配制 成抑5.8~6.0的增殖培養(yǎng)基IL，分裝至200mL培養(yǎng)瓶中，每瓶約加入培養(yǎng)基20mL，室溫冷卻 后待用。將片狀原葉體轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件是:溫度