一種毛棉杜鵑的快速繁殖方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物的栽培及移植技術領域，特別設及一種毛棉杜酷的快速繁殖方 法。
【背景技術】
[0002] 毛棉杜酷（I^iododen化on moulmainense Hook.f.)，又名白杜酷、絲線吊芙蓉，為 杜酷花科杜酷屬馬銀花亞屬長蕊組的灌木或小喬木型常綠植物，主要分布在海拔700-1500 米的灌叢或疏林中。毛棉杜酷極具觀賞價值，傘形花序，花淡紫色、粉紅色或淡紅白色，開花 時節(jié)花覆蓋整個樹冠，非常艷麗，在園林綠化開發(fā)中具有非常大的應用價值。
[0003] 目前，國內(nèi)有關毛棉杜酷的育種和繁殖技術研究非常少，僅有少數(shù)有關毛棉杜酷 種子繁殖和桿插繁殖的報道，但種子繁殖極其緩慢，從播種到開花，少則3-4年，多則8年W 上，且種子播種困難，幼苗死亡率比較高。Sal-chit Ng和Richard T. Corlett研究表明毛棉 杜酷或多或少自交不育。李文華等對毛棉杜酷的桿插繁殖進行研究，采用不同濃度的生根 劑和栽培基質(zhì)但是生根率最高只達到22%。趙富群W毛棉杜酷種子為外植體，對毛棉杜酷 的組織培養(yǎng)進行研究。但是通過種子繁殖得到的實生苗存在不一致現(xiàn)象，且張長芹等研究 發(fā)現(xiàn)種子繁殖的幼苗生長極其緩慢，而且毛棉杜酷自然結實率低，不利于毛棉杜酷的推廣 和應用。
[0004] 為了使觀賞應用價值非常高的高山杜酷毛棉杜酷為城市園林綠化所用，增加景觀 植物種類的多樣性，從而提升園林生態(tài)城市水平，開發(fā)一種不受季節(jié)影響、繁殖速度快且適 合大范圍推廣應用的繁殖方法，具有十分重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種毛棉杜酷的快速繁殖方法。
[0006] 本發(fā)明所采取的技術方案是：
[0007] -種毛棉杜酷的快速繁殖方法，包括W下步驟：
[000引（1)外植體采集與消毒:采集毛棉杜酷嫩莖，洗凈并消毒，剪去變黑部分，放入裝入 濾紙的無菌培養(yǎng)皿中吸干表面水分，得到無菌外植體；
[0009] (2)初代培養(yǎng):將外植體接種至外植體初代誘導培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)條件為:25±1 °C、光照8-12h/d、光照強度為1500-2500LX，培養(yǎng)至得到不定芽；
[0010] (3)增殖培養(yǎng):將不定芽轉移至叢生芽增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同步驟(2)，培養(yǎng)至 得到叢生芽團；
[0011] (4)叢生芽伸長培養(yǎng):將叢生芽團切成小塊，接種至叢生芽伸長培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條 件同步驟(2)，進行叢生芽伸長生長；
[0012] (5)壯苗生根培養(yǎng):將伸長的叢生芽接種至壯苗生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同步驟 (2)，得到生根小苗；
[001引（5)煉苗與移栽:將生根小苗開日煉苗，再定植于基質(zhì)中，誘透水，覆蓋農(nóng)用膜保 濕，培養(yǎng)條件同步驟(2)，得到組培苗。
[0014] 優(yōu)選地，所述的毛棉杜酷嫩莖采集自生長健壯、無病害的實生苗。
[0015] 優(yōu)選地，所述的外植體的消毒是在無菌超凈臺上，用濃度為70%的酒精處理10s， 無菌水沖洗一次;濃度為2 %的化QO浸泡15min，不停搖動瓶子，使外植體與NaQO溶液充分 接觸，再用無菌水沖洗4次W上。
[0016] 優(yōu)選地，所述的外植體初代誘導培養(yǎng)基PH= 5.0，且其成分為:WPM+NAA0.0Img/L+ ZT 0.5mg/L+薦糖30g/L+瓊脂8g/L。
[0017] 優(yōu)選地，所述的叢生芽增殖培養(yǎng)基pH = 5.0,且其成分為：WPMWDZ 0.5mg/L+ NAAO. 5mg/L+薦糖 30g/L+瓊脂 8g/L。
[001引優(yōu)選地，所述的叢生芽伸長培養(yǎng)基pH = 5.0，且其成分為:WPM+ZT0.5mg/L+GA3 2. Omg/L+薦糖 30g/L+瓊脂 8g/L。
[0019]優(yōu)選地，所述的壯苗生根培養(yǎng)基抑=5.0，且其成分為:WPM+IAA0. lmg/L+1 %薦糖+ 瓊脂8g/L。
[0020] 優(yōu)選地，伸長的叢生芽其長度含2畑1。
[0021] 優(yōu)選地，叢生芽伸長培養(yǎng)，每瓶培養(yǎng)基中接種4塊叢生芽團。
[0022] 優(yōu)選地，所述的壯苗生根培養(yǎng)，每瓶接種4個叢生芽。
[0023] 本發(fā)明的有益效果是：
[0024] 本發(fā)明針對毛棉杜酷種子繁殖苗成活率、常規(guī)桿插、嫁接繁殖率低且操作繁瑣困 難額現(xiàn)狀，提供了一種毛棉杜酷的快速繁殖方法，步驟依次為外植體采集及消毒、初代培 養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、叢生芽伸長培養(yǎng)、壯苗生根培養(yǎng)和煉苗移栽，克服組培中無菌體系建立難度 大、叢生苗細弱、移栽成活率低等技術問題，實現(xiàn)了不受季節(jié)影響的、規(guī)?；?、低成本的毛棉 杜酷生產(chǎn)，而且該繁殖遺傳性狀穩(wěn)定，能很好地保持原植株基因型和優(yōu)良觀賞特性，并且所 選用的最佳培養(yǎng)基激素配比，試驗重復性非常好。
【附圖說明】
[0025] 圖1為毛棉杜酷外植體蔽芽萌發(fā)圖；
[0026] 圖2為誘導不定芽誘導所得愈傷組織；
[0027] 圖3為誘導不定芽誘導所得愈傷組織分化不定芽；
[0028] 圖4為誘導不定芽誘導所得愈傷組織分化的不定芽伸長；
[0029] 圖5為誘導不定芽誘導出的愈傷組織分化的伸長不定芽生根。
[0030] 圖6為組培苗穴盤培養(yǎng)。
【具體實施方式】
[0031] 1、外植體的采集
[0032] 取溫室毛棉杜酷生長健壯、無病害的實生苗嫩莖做外植體。外植體用清水洗凈，尤 其是葉蔽處，用自來水淋洗2小時，備用。
[0033] 2、外植體的消毒
[0034] 在無菌超凈臺上，對外植體采用四種不同的滅菌方法進行處理，第一種采用濃度 為75%的酒精處理10s，無菌水沖洗1次，再用濃度為0.1%的升隸浸泡20min，期間不停搖動 瓶子，使外植體與升隸溶液充分接觸，再用無菌水沖洗5次;第二種采用濃度為75 %的酒精 處理IOs，無菌水沖洗一次，再用濃度為2 %的化ClO溶液浸泡15min，期間不停搖動瓶子，使 外植體與NaClO溶液充分接觸，再用無菌水沖洗5次;第=種采用濃度為75 %的酒精處理3s， 無菌水沖洗一次，再用濃度為2%的化ClO溶液浸泡15min，期間不停搖動瓶子，使外植體與 化ClO溶液充分接觸，再用無菌水沖洗5次;第四種采用濃度為75%的酒精處理10s，無菌水 沖洗一次，再用濃度為2%的化QO溶液浸泡15min，期間不停搖動瓶子，使外植體與化QO溶 液充分接觸，再用濃度為0.1 %的升隸浸泡5min，期間不停搖動瓶子，使外植體與升隸溶液 充分接觸，之后用無菌水沖洗5次。消毒后，除去莖尖和尖段上變黑的部分，放入裝入濾紙的 無菌培養(yǎng)皿中吸干表面水分，接種于成分為WPM+NAA0.0 lmg/L+ZT 0.5mg/L+薦糖30g/L+瓊 月旨8g/L，抑=5.0的培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)條件為:溫度為25°C，光照時間為12h/d，光照強度為 20(K)LX，每組接種10瓶，每隔一個星期，觀察其蔽芽萌發(fā)情況及染菌情況，得到實驗結果如 表1。
[0035] 表1外植體滅菌方法的篩選
[0037] 由表1可W得出，用升隸滅菌時，外植體不會染菌，但是外植體表現(xiàn)為植株萌發(fā)慢， 生長緩慢。第=組在無菌超凈臺上，用濃度為70%的酒精處理10s，無菌水沖洗一次;濃度為 2 %的化QO浸泡15min，不停搖動瓶子，使外植體與NaQO溶液充分接觸，再用無菌水沖洗5-6次，采用此方法對外植體進行消毒，外植體染菌較低，不僅植株萌發(fā)快，而且長勢好。
[0038] 3、初代培養(yǎng)
[0039] 將萌發(fā)的蔽芽接種于成分為WPM+NAA0.0 lmg/L+ZT 0.5mg/L+薦糖30g/L+瓊脂Sg/ L，pH = 5.0的培養(yǎng)基中，每瓶接種4個外植體，控制培養(yǎng)條件為：溫度為25°C，光照時間為 12h/d，光照強度為2000LX。培養(yǎng)20天后，嫩莖蔽芽萌發(fā)，具體細節(jié)如圖1，培養(yǎng)40天后，基部 開始形成愈傷組織，具體細節(jié)圖如圖，2,愈傷組織繼續(xù)生長團狀，60天后愈傷組織開始分化 形成不定芽，不定芽高為0.2cm，具體細節(jié)圖如圖3。
[0040] 4、不定芽增殖培養(yǎng)
[0041] 將不定芽切割成IcmX Icm大小的不定芽團，分不同組接種在不同增殖培養(yǎng)基中進 行增殖，培養(yǎng)基