多倍體金線蓮品種的培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物培育領(lǐng)域，具體而言，涉及多倍體金線蓮品種的培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 金線蓮是蘭科（Orchidaceae)開唇蘭屬（Anoectochilus)的全草，別名金線蘭、金 絲草。是民間使用較廣的一種傳統(tǒng)珍貴藥材，具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕、滋陰潤(rùn)肺、降血壓、 平肝等功效。民間用于治療肺結(jié)核、肺熱咳嗽、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小兒驚風(fēng)、跌打損傷、蛇傷等 多種疾病，均有很好療效。其株型小巧，葉型美觀，葉脈金黃色網(wǎng)狀排列，具有極高的觀賞價(jià) 值。近年來，金線蓮用于治療高血壓、糖尿病及腫瘤等疑難病癥方面，日益引起醫(yī)藥界的重 視。民間稱其為"神藥，臺(tái)灣稱為"藥王"。目前金線蓮在臺(tái)灣和東南亞地區(qū)的需求量很大， 它在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)的售價(jià)已達(dá)2000元人民幣/kg。
[0003]由于金線蓮對(duì)生態(tài)環(huán)境要求嚴(yán)格，自然繁殖和生長(zhǎng)緩慢，加上人類大量采集，藥源 瀕于枯竭，人工種植成為發(fā)展金線蓮產(chǎn)業(yè)的必然選擇。但是，采用種子直播、分根繁殖、扦插 繁殖等需時(shí)較長(zhǎng)，繁殖倍率不高；金線蓮株型小，導(dǎo)致種植者的效益不夠顯著。
[0004]有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供多倍體金線蓮品種的培育方法，該方法采用安磺靈對(duì)金線 蓮的原球莖進(jìn)行處理，使其染色體加倍，安全性高；得到的多倍體金線蓮植株比二倍體親本 成倍增大，莖桿粗壯，葉片厚實(shí)，并且根、莖、葉的有效成分明顯高于二倍體親本。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0007]多倍體金線蓮品種的培育方法，包括以下步驟：
[0008](a)、將二倍體金線蓮的種子培養(yǎng)得到原球莖；
[0009] (b)、將所述原球莖浸泡在5-15ymol/L安磺靈溶液中浸泡處理10-36h;
[0010] (c)、浸泡后的原球莖繼續(xù)培養(yǎng)，得到叢生芽；
[0011] (d)、所述叢生芽分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到根莖葉完整的組培苗；
[0012] (e)、所述組培苗經(jīng)篩選得到多倍體植株。
[0013]本發(fā)明提供的多倍體金線蓮品種的培育方法，選用金線蓮原球莖作為誘導(dǎo)材料， 原球莖具有很強(qiáng)的分生能力，安磺靈溶液可抑制細(xì)胞有絲分裂，使細(xì)胞中的染色體加倍；本 發(fā)明以特定濃度的安磺靈溶液對(duì)原球莖浸泡特定的時(shí)間，經(jīng)過培養(yǎng)后得到的植株中，篩選 即可得到多倍體金線蓮植株，經(jīng)大量試驗(yàn)驗(yàn)證，誘導(dǎo)率在43. 2% -44. 8%之間，得到的多倍 體金線蓮植株性狀優(yōu)良。
[0014]另外，本發(fā)明特定選用安磺靈，安磺靈毒性小，且性質(zhì)穩(wěn)定；而秋水仙素作為常用 的染色體加倍劑，有劇毒，對(duì)操作人員容易造成傷害。
[0015] 優(yōu)選地，步驟（e)中，通過染色體檢測(cè)篩選出多倍體植株。
[0016]優(yōu)選地，在步驟（a)和步驟（c)中，所述培養(yǎng)均采用第一培養(yǎng)基進(jìn)行；
[0017]所述第一培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有BA 0.8-1. 2mg/L、KT 0.7-1. 2mg/L、NAA 0? 05-0. 15mg/L、蔗糖20-35g/L、瓊脂4. 5-8g/L、香蕉17-25g/L。
[0018] 第一培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富，利于金線蓮種子及其原球莖的生長(zhǎng)。
[0019] 更優(yōu)選地，所述第一培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有BAI.Omg/L、KTI.Omg/L、NAA 0?lmg/L、鹿糖 30g/L、瓊脂 5g/L、香蕉 20g/L。
[0020] 為了培養(yǎng)得到的原球莖處于更好的狀態(tài)，提高誘導(dǎo)染色體加倍的效果，優(yōu)選地，在 步驟（a)中，所述培養(yǎng)的時(shí)間為27-40天，優(yōu)選為28-32天。
[0021] 為了達(dá)到更好的誘導(dǎo)效果，進(jìn)一步地，在步驟（b)中，所述安磺靈溶液的濃度為 8-10ymol/L，浸泡處理 15-30h。
[0022] 為了提高生根率，優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有NAA0. 4-0. 8mg/ U活性炭 0? 4-0. 6g/L、香蕉 18-25g/L。
[0023] 更優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香 蕉20g/L。
[0024] 進(jìn)一步地，在步驟（d)中，生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時(shí)間為38-45天，得到完整的植株。
[0025]進(jìn)一步地，步驟（a)、（b)、（c)、（d)、（e)均在無菌條件下進(jìn)行。
[0026]優(yōu)選地，步驟（a)、（c)和（d)中的培養(yǎng)條件均為：溫度為25 ± 2°C，濕度為 58-63%，光照強(qiáng)度為1500-2000x1，光照時(shí)間為9-12h/天。
[0027] 優(yōu)選地，在步驟（b)中，所述原球莖在浸泡安磺靈溶液之前，先進(jìn)行暗培養(yǎng)3-5天。 通過暗培養(yǎng)增大細(xì)胞的通透性，使誘導(dǎo)劑更容易滲透到細(xì)胞里面，提高誘導(dǎo)率。
[0028] 另外，本發(fā)明中的MS培養(yǎng)基的配方如表1所示。
[0029] 表IMS培養(yǎng)基具體成分
[0030]
[0031] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0032] (1)本發(fā)明選用金線蓮原球莖作為誘導(dǎo)材料，原球莖具有很強(qiáng)的分生能力，以特定 濃度的安磺靈溶液對(duì)原球莖浸泡特定的時(shí)間，即可抑制細(xì)胞的有絲分裂，使細(xì)胞中的染色 體成倍數(shù)性變化；從經(jīng)過誘導(dǎo)后培養(yǎng)得到的植株中篩選，即可得到多倍體金線蓮植株，誘導(dǎo) 率43. 2% -44. 8%之間，得到的多倍體金線蓮植株性狀優(yōu)良。
[0033] (2)本發(fā)明還限定了第一培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的成分，為金線蓮的生長(zhǎng)提供更適 宜的生長(zhǎng)條件，以滿足金線蓮各生長(zhǎng)階段的生長(zhǎng)需求。
[0034] (3)本發(fā)明中的原球莖在浸泡安磺靈溶液之前，通過暗培養(yǎng)增大細(xì)胞的通透性，使 誘導(dǎo)劑更容易滲透到細(xì)胞里面，提高誘導(dǎo)率。
[0035] (4)本發(fā)明還限定了第一培養(yǎng)基的成分，并限定了將種子通過組培誘導(dǎo)成原球莖 的時(shí)間，以使得到的原球莖具有更強(qiáng)的分生能力，提高誘導(dǎo)率。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì) 理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0037] 實(shí)施例1
[0038] 多倍體金線蓮品種的培育方法，包括以下步驟：
[0039](a)、將二倍體金線蓮的種子在第一培養(yǎng)基上培養(yǎng)27天，得到原球莖，其中，第一 培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有BAI. 2mg/L、KTI. 2mg/L、NAA0? 15mg/L、蔗糖 35g/L、瓊脂 5g/ L、香蕉 17g/L;
[0040](b)、將原球莖暗培養(yǎng)3天，然后浸泡在5ymol/L安磺靈溶液中浸泡處理36h;
[0041](c)、浸泡后的原球莖轉(zhuǎn)接到第一培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，得到叢生芽；
[0042](d)、叢生芽分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)38天得到根莖葉完整的組培苗，其中， 生根培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有NAA0. 8mg/L、活性炭0. 6g/L、香蕉25g/L;
[0043] (e)、經(jīng)染色體檢測(cè)篩選得到多倍體植株與親本二倍體相比，植株高大，莖段粗壯， 節(jié)間長(zhǎng)，葉大而厚，葉色深，根粗壯，誘導(dǎo)率為43. 4%。
[0044]另外，步驟（a)、（b)、（c)、（d)、（e)均在無菌條件下進(jìn)行；步驟（a)、（c)和（d)中的 培養(yǎng)條件均為：溫度為25±2°C，濕度為58% -63%，光照強(qiáng)度為1500x1，光照時(shí)間為Ilh/ 天。
[0045] 實(shí)施例2
[0046] 多倍體金線蓮品種的培育方法，包括以下步驟：
[0047](a)、將二倍體金線蓮的種子在第一培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天，得到原球莖，其中，第一 培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有BAI.Omg/L、KTI.Omg/L、NAA0?lmg/L、蔗糖 30g/L、瓊脂 5g/ L、香蕉 20g/L;
[0048](b)、將原球莖暗培養(yǎng)4天，然后浸泡在10ymol/L安磺靈溶液中浸泡處理20h;
[0049](c)、浸泡后的原球莖轉(zhuǎn)接到第一培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，得到叢生芽；
[0050] (d)、叢生芽分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天得到根莖葉完整的組培苗，其中， 生根培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中含有NAA0. 5mg/L、活性炭0. 5g/L、香蕉20g/L;
[0051] (e)、經(jīng)染色體檢測(cè)篩選得到多倍體植株與親本二倍體相比，植株高大，莖段粗壯， 節(jié)間長(zhǎng)，葉大而厚，葉色深，根粗壯，誘導(dǎo)率為44. 6%。
[0052] 另外，步驟（a)、（b)、（c)、（d)、（e)均在無菌條件下進(jìn)行；步驟（a)、（c)和（d)中 的培養(yǎng)條件均為：溫度為25±2°C，濕度為58-63%，光照強(qiáng)度為1800x1，光照時(shí)間為IOh/ 天。
[0053] 實(shí)施例3
[0054] 多倍體金線