輪蟲標(biāo)本的短期固定保存方法和長期固定保存方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及輪蟲的保存，具體地，涉及一種被甲不發(fā)達(dá)、常規(guī)方法固定后易收縮變 形的輪蟲標(biāo)本及其短期固定保存方法和長期固定保存方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 輪蟲是一類微小的多細(xì)胞動物，體長一般在50ym~2000ym之間，具有種類繁 多、食性多樣和繁殖速率快的特點(diǎn)，廣泛分布于自然界的各類水體中，是浮游生物的重要組 成部分。在野外生態(tài)學(xué)研究中，自然水體中的輪蟲群落的物種豐富度和多樣性指數(shù)等對水 質(zhì)變化較為敏感，常被用來評價(jià)水體富營養(yǎng)化和受污程度。在室內(nèi)生態(tài)學(xué)研究中，某些輪蟲 (如晶囊輪蟲）常以小型輪蟲作為食物，如此同時，這些小型輪蟲在捕食壓力下形成了反捕 食對策，由于輪蟲具備繁殖速率快和世代時間短等特征，輪蟲間的捕食與反捕食的對策為 研究物種的種間關(guān)系、協(xié)同進(jìn)化和微進(jìn)化提供了便利。
[0003] 輪蟲樣品的野外采集與物種鑒定、輪蟲個體形態(tài)的度量是研究輪蟲群落和種群生 態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)和前提。目前，主要以4%的福爾馬林溶液或者10%的乙醇溶液作為固定劑來 處理輪蟲樣品，以達(dá)到保存輪蟲樣品的目的。但對于一些被甲無或者被甲不發(fā)達(dá)的輪蟲而 言，這種方法固定后的個體極易發(fā)生形態(tài)變化，它們常出現(xiàn)頭冠和（或）足縮入體內(nèi)、軀干 部蜷曲和體長減小等身體變形的現(xiàn)象，既不利于人們根據(jù)其外部形態(tài)結(jié)構(gòu)特征鑒別種類， 也影響了有關(guān)其外形生物學(xué)特征研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種被甲不發(fā)達(dá)、常規(guī)方法固定后易收縮變形的輪蟲標(biāo)本及 其短期固定保存方法和長期固定保存方法，通過這兩種方法制備的輪蟲標(biāo)本與輪蟲活體相 比體貌變化小，便于測量體長、體寬和種類的鑒別。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種輪蟲的短期固定保存方法，該短期固定保 存方法包括：
[0006] (1)將輪蟲的活體樣品置于水中進(jìn)行熱處理；
[0007] (2)將熱處理后的輪蟲樣品取出，然后進(jìn)行保存。
[0008] 本發(fā)明還提供了一種輪蟲的長期固定保存方法，該長期固定保存方法包括：
[0009] (1)將輪蟲的活體樣品置于水中進(jìn)行熱處理，然后冷卻；
[0010] ⑵將甲醛加入至所述輪蟲樣品中以對冷卻后的輪蟲標(biāo)本進(jìn)行保存。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種輪蟲標(biāo)本，該輪蟲標(biāo)本是通過上述方法制備而成的。
[0012] 通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明提供了一種輪蟲標(biāo)本及其短期固定保存方法和長期固 定保存方法。其中，短期固定保存方法直接通過熱水處理輪蟲活體以達(dá)到短期固定保存 (陰暗條件下可以保存2-3天，4°C的冰箱環(huán)境中可以保存7天）的目的；長期固定保存方 法首先通過熱水處理輪蟲活體，然后再用福爾馬林稀釋溶液浸泡便可達(dá)到長期固定保存的 效果。在上述兩種固定保存方法中得到的輪蟲標(biāo)本均可以保持輪蟲活體的原有體型（輪蟲 標(biāo)本與輪蟲活體之間的顯著性差異P值均< 0. 05)，特別是未發(fā)生頭冠和/或足等縮入體 內(nèi)、軀干部蜷曲和體長變短等體貌變形，以便于人們在顯微鏡下準(zhǔn)確測定體長和體寬，鑒別 其種類。
[0013] 本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說明。
【附圖說明】
[0014] 附圖是用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具 體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：
[0015]圖1是實(shí)施例1中制得的輪蟲標(biāo)本放大40倍的個體形態(tài)圖；
[0016] 圖2是對比例1中制得的輪蟲標(biāo)本放大40倍的個體形態(tài)圖；
[0017] 圖3是對比例2中制得的輪蟲標(biāo)本放大40倍的個體形態(tài)圖；
[0018] 圖4是輪蟲活體、實(shí)施例1中輪蟲標(biāo)本和對比例1-2中輪蟲標(biāo)本的體長統(tǒng)計(jì)圖；
[0019] 圖5是輪蟲活體、實(shí)施例1中輪蟲標(biāo)本和對比例1-2中輪蟲標(biāo)本的體寬統(tǒng)計(jì)圖；
[0020] 圖6是實(shí)施例6中制得的輪蟲標(biāo)本放大40倍的個體形態(tài)圖；
[0021] 圖7是輪蟲活體、實(shí)施例6中輪蟲標(biāo)本和對比例1-2中輪蟲標(biāo)本的體長統(tǒng)計(jì)圖；
[0022] 圖8是輪蟲活體、實(shí)施例6中輪蟲標(biāo)本和對比例1-2中輪蟲標(biāo)本的體寬統(tǒng)計(jì)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 以下對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體 實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0024] 本發(fā)明提供了一種輪蟲的短期固定保存方法，該短期固定保存方法包括：
[0025] (1)將活體輪蟲樣品置于水中進(jìn)行熱處理；
[0026](2)將熱處理后的輪蟲樣品取出，然后進(jìn)行保存。
[0027] 在上述短期固定保存方法中，熱處理的溫度和時間均可以在寬的范圍內(nèi)選擇， 為了使制得的輪蟲標(biāo)本不發(fā)生變形，優(yōu)選地，熱處理至少滿足以下條件：熱處理的溫度為 70-90°C，熱處理的時間為2min-5min。
[0028] 同時，保存溫度也可以在寬的范圍內(nèi)選擇，為了使輪蟲標(biāo)本不發(fā)生變形，優(yōu)選地， 保存至少滿足條件：保存溫度為1-40°C。
[0029] 本發(fā)明還提供了一種輪蟲的長期固定保存方法，該長期固定保存方法包括：
[0030] (1)將輪蟲的活體樣品置于水中進(jìn)行熱處理，然后冷卻；
[0031] (2)將甲醛加入至所述輪蟲樣品中以對冷卻后的輪蟲標(biāo)本進(jìn)行保存。
[0032] 在上述長期固定保存方法中，熱處理的溫度和時間可以在寬的范圍內(nèi)選擇，為了 使制得的輪蟲標(biāo)本不發(fā)生變形且可以長期保存，優(yōu)選地，熱處理至少滿足以下條件：熱處理 的溫度為70-90°C，熱處理的時間為2min-5min。
[0033] 同時，冷卻溫度和時間可以在寬的范圍內(nèi)選擇，為了防止向熱處理后的輪蟲中直 接加入甲醛時使輪蟲發(fā)生變形，優(yōu)選地，冷卻至少滿足以下條件：冷卻溫度為1_25°C，冷卻 時間為20-40min。
[0034]同樣地，甲醛的含量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，為了使輪蟲標(biāo)本可以長期的保存，優(yōu) 選地，以甲醛與水的總體積為基準(zhǔn)，所述甲醛的含量為3-5體積％。
[0035] 當(dāng)然，甲醛可以是純甲醛，也可以是甲醛水溶液，并且，甲醛水溶液中甲醛的濃度 也可以在寬的范圍內(nèi)選擇，為了使輪蟲標(biāo)本可以長期的保存，優(yōu)選地，甲醛通過甲醛水溶液 提供，且甲醛水溶液中甲醛的濃度為37-40重量％。
[0036]同時，保存溫度也可以在寬的范圍內(nèi)選擇，了使輪蟲標(biāo)本可以長期的保存，優(yōu)選 地，保存溫度為1-40°C
[0037] 在上述保存方法中，活體輪蟲可以在寬的范圍內(nèi)選擇，可以是晶囊輪蟲或巨腕輪 蟲，也可以是聚花輪蟲或膠鞘輪蟲或疣毛輪蟲，為了能夠長期保存和便于測量，優(yōu)選地，活 體輪蟲選自晶囊輪蟲、巨腕輪蟲、聚花輪蟲或疣毛輪蟲。
[0038] 本發(fā)明還提供了一種輪蟲標(biāo)本，該輪蟲標(biāo)本是通過上述方法制備而成的。
[0039] 以下將通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中，活體輪蟲和輪蟲 標(biāo)本的個體形態(tài)通過OlympusBH-2型顯微鏡和MC-D500U(T2)型電子目鏡（江西鳳凰 光學(xué)公司）顯微拍照設(shè)備測得，輪蟲標(biāo)本的體長和體寬通過OlympusBH-2型顯微鏡和 MC-D500U(T2)型電子目鏡（江西鳳凰光學(xué)公司）顯微拍照設(shè)備測得，輪蟲標(biāo)本的體長和體 寬的顯著性差異通過方差分析法和多重比較法測得。
[0040] 實(shí)施例1
[0041] (1)在25°C下，用25號浮游生物網(wǎng)過濾自然水體得到活體晶囊輪蟲；
[0042] (2)將活體晶囊輪蟲置于80°C的熱水中熱處理3min;
[0043] (3)將熱處理后的輪蟲取出，置于25°C的陰暗處保存得到輪蟲標(biāo)本。
[0044] 實(shí)施例2
[0045] 按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，所不同的是在步驟（3)中，將熱處理后的輪蟲置于1°C 的冰箱中保存。
[0046] 實(shí)施例3
[0047] 按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，所不同的是在步驟（3)中，將熱處理后的輪蟲置于40°C 的陰暗環(huán)境中保存。
[0048] 實(shí)施例4
[0049] 按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，所不同的是在步驟（2)中，熱處理的溫度改為70°C，熱 處理的時間改為5min。
[0050] 實(shí)施例5
[0051] 按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，所不同的是在步驟（2)中，熱處理的溫度改為90°C，熱 處理的時間改為2min。
[0052] 對比例1
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