述的培育方法獲得的玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體。
[0020] 本發(fā)明還提供了所述玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體在玉米遺傳轉(zhuǎn)化和后 代擴(kuò)繁中的應(yīng)用。
[0021] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體在玉 米遺傳轉(zhuǎn)化和后代擴(kuò)繁中的應(yīng)用中所述玉米遺傳轉(zhuǎn)化為將所述玉米質(zhì)-核互作雄性不育 轉(zhuǎn)基因受體的幼胚作為受體材料，將外源基因?qū)胨鲇着攉@得雄性不育的轉(zhuǎn)基因后代。
[0022] 本發(fā)明還提供了所述的玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體的繁殖方法，將所述 玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體和保持系在隔離區(qū)內(nèi)同期播種，讓所述保持系的花粉 在自然條件下給所述玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體授粉來繁殖后代。
[0023] 在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因后代的繁殖方法將所述轉(zhuǎn)基因后代和保 持系在隔離區(qū)內(nèi)同期播種，讓所述保持系的花粉在自然條件下給所述轉(zhuǎn)基因后代授粉。
[0024] 本發(fā)明以C型質(zhì)-核互作雄性不育系836 (Maize Genetics Cooperation Stock Center 保藏號(hào) C836G)和轉(zhuǎn)基因受體材料 B73(National Plant GermplasmSystem 保藏號(hào) PI550473)為例，雄性不育系不僅限于836,玉米中其他的質(zhì)-核互作雄性不育系，如Maize Genetics Cooperation Stock Center 中保藏號(hào)為 C437B、C437E、C437H、C537B、C537E、 C537H、C657A、C657D、C657F的雄性不育系或其它經(jīng)過人工選育或自然突變得到的質(zhì)-核互 作雄性不育系也可以達(dá)到本發(fā)明的目的，因此也在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。轉(zhuǎn)基因受體材料 也不僅限于B73,玉米中其他轉(zhuǎn)基因受體材料如綜31等也可以達(dá)到本發(fā)明的目的，因此也 在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0025] 本發(fā)明以C型質(zhì)-核互作雄性不育系836為母本，基因型為S(rfrf)，以具有較高 轉(zhuǎn)化效率的自交系B73為父本，基因型為N(rfrf)，先進(jìn)行雜交，然后用B73作為輪回親本回 交并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇，快速將C型質(zhì)-核互作雄性不育系836轉(zhuǎn)育成具有較高轉(zhuǎn)化 效率的B73背景的雄性不育系并用于遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化后代的擴(kuò)繁，節(jié)省了勞動(dòng)成本，解決 了轉(zhuǎn)基因事件之間的混雜及轉(zhuǎn)基因玉米對(duì)非轉(zhuǎn)基因玉米栽培品種的污染問題。
【附圖說明】
[0026] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0027] 圖1示正常玉米與C型質(zhì)-核互作雄性不育系836的雄穗照片；
[0028] 圖2示回交后代部分籽粒分子標(biāo)記檢測(cè)電泳圖；
[0029] 圖3示利用回交轉(zhuǎn)育及分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)培育玉米C型質(zhì)-核互作雄性不育 轉(zhuǎn)基因受體的技術(shù)路線圖；
[0030] 圖4示部分轉(zhuǎn)基因后代分子檢測(cè)電泳圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 本發(fā)明公開了一種玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體的培育方法及該受體在 遺傳轉(zhuǎn)化和后代擴(kuò)繁中的應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí) 現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們 都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員 明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更 與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0032] 質(zhì)-核互作雄性不育，不但需要細(xì)胞質(zhì)有不育基因 S，而且需要細(xì)胞核里有純合的 不育基因（rfrf)，二者同時(shí)存在，方能使植株表現(xiàn)為雄性不育。如胞質(zhì)基因?yàn)榭捎齆，則不 論核基因是可育（RfRf)還是不育（rfrf)，都表現(xiàn)為雄性可育。同樣，如核里具有可育基 因（RfRf)或（Rfrf)，則不論胞質(zhì)基因是可育N還是不育S，也都表現(xiàn)為雄性可育。這種由 核-質(zhì)互作形成的雄性不育系，其遺傳組成為S (rfrf)，不能產(chǎn)生正常的花粉，但可作為雜 交母本。保持系N(rfrf)與不育系雜交，所產(chǎn)生的Fl仍能保持雄性不育。
[0033] 玉米C型質(zhì)-核互作雄性不育系836[基因型為S(rfrf)]來自于美國Maize Genetics Cooperation Stock Center，保藏號(hào)為C836G，玉米自交系B73來自于美國 National Plant Germplasm System，保藏號(hào)為 PI550473,經(jīng)測(cè)試，B73 為 836 的保持系。
[0034] 表1標(biāo)記名稱、位置及序列
[0035]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體的培育方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 以質(zhì)-核互作雄性不育系為母本，以適合遺傳轉(zhuǎn)化且為雄性不育系保持系的材料為 父本，雜交獲得Fl代果穗； 2) 將步驟1)獲得的所述Fl代果穗的種子單粒播種，選擇不育株為母本，以步驟1所述 父本回交，獲得BClFl代果穗； 3) 從BClFl代開始，通過分子標(biāo)記輔助選擇，挑選獲得背景接近步驟1所述父本的單株 回交，得到下一代果穗，經(jīng)過4~5代回交育成雄性不育的轉(zhuǎn)基因受體材料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述母本選自MaizeGenetics CooperationStockCenter中保藏號(hào)為C437B、C437E、C437H、C537B、C537E、C537H、C657A、 C657D、C657F、C836G的雄性不育系或經(jīng)過人工選育或自然突變得到的質(zhì)-核互作雄性不育 系。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培育方法，其特征在于，所述父本為高轉(zhuǎn)化效率的自交 系，所述父本選自NationalPlantGermplasmSystem中保藏號(hào)為PI550473的B73或適合 轉(zhuǎn)化的材料。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的培育方法，其特征在于，所述適合轉(zhuǎn)化的材料為綜31。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的培育方法獲得的玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因 受體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體在玉米遺傳轉(zhuǎn)化和后代 擴(kuò)繁中的應(yīng)用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述玉米遺傳轉(zhuǎn)化為將所述玉米質(zhì)-核互 作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體的幼胚作為受體材料，將外源基因?qū)胨鲇着攉@得雄性不育的轉(zhuǎn) 基因后代。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體的繁殖方法，其特征在 于，將所述玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體和保持系在隔離區(qū)內(nèi)同期播種，讓所述保 持系的花粉在自然條件下給所述玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體授粉來繁殖后代。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用中獲得的轉(zhuǎn)基因后代的繁殖方法，其特征在于，將所述 轉(zhuǎn)基因后代和保持系在隔離區(qū)內(nèi)同期播種，讓所述保持系的花粉在自然條件下給所述轉(zhuǎn)基 因后代授粉。
【專利摘要】本發(fā)明涉及農(nóng)作物育種技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及玉米質(zhì)-核互作雄性不育轉(zhuǎn)基因受體的培育方法及該受體在遺傳轉(zhuǎn)化和后代擴(kuò)繁中的應(yīng)用。目的是得到雄性不育的轉(zhuǎn)基因受體材料，節(jié)省轉(zhuǎn)化事件擴(kuò)繁過程中的勞動(dòng)成本，避免不同轉(zhuǎn)化事件之間及轉(zhuǎn)基因玉米對(duì)非轉(zhuǎn)基因玉米栽培品種的污染。以現(xiàn)有的玉米質(zhì)-核互作雄性不育系為基礎(chǔ)，用高轉(zhuǎn)化效率的轉(zhuǎn)基因受體材料(經(jīng)測(cè)驗(yàn)為相應(yīng)雄性不育系的保持系)為轉(zhuǎn)育對(duì)象，經(jīng)過多代回交并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇，把高轉(zhuǎn)化效率的轉(zhuǎn)基因受體材料轉(zhuǎn)育成雄性不育系。高轉(zhuǎn)化效率的雄性不育系可用于遺傳轉(zhuǎn)化，得到轉(zhuǎn)化事件后用保持系花粉在自然條件下授粉擴(kuò)繁，進(jìn)行性狀篩選和遺傳穩(wěn)定性分析。
【IPC分類】A01H1-04, A01H1-02
【公開號(hào)】CN104839015
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510315479
【發(fā)明人】何軍光, 呂洪坤, 金少軍, 李松松, 趙振寧, 樓億圓, 張曉麗, 吳濤
【申請(qǐng)人】浙江新安化工集團(tuán)股份有限公司
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年6月10日