后用無(wú)菌水沖洗3次，洗凈殘留的NaClO溶液，進(jìn)行深度消毒，消毒后的莖尖用無(wú)菌濾紙吸去莖尖表面的水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用。
[0035]2)莖尖分生組織的剝離與接種:將消過(guò)毒的莖尖置于80倍體視顯微鏡(雙筒解剖鏡)下，用解剖針逐次去掉幼葉，直至露出光滑的莖尖分生組織，用解剖刀小心切取帶有
I?2個(gè)葉原基(0.1?0.3mm)的生長(zhǎng)點(diǎn)，用接種針將生長(zhǎng)點(diǎn)移至裝有再生培養(yǎng)基(MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L、6-芐基腺嘌呤2.0mg/L、a_奈乙酸0.5mg/L、蔗糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L)的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)可接種約20個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)。
[0036]3)莖尖分生組織的培養(yǎng):把接種后的培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度25?28°C，光照強(qiáng)度2000?30001x、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)30d后，當(dāng)看到莖尖明顯伸長(zhǎng)且呈綠色，有小葉發(fā)生時(shí)將小莖芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基(MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L、蔗糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L)的試管內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長(zhǎng)并形成根系，每個(gè)試管種植一棵小苗，一般經(jīng)過(guò)30d左右即可發(fā)育成4?5個(gè)葉片的“寧紫薯2號(hào)”小植株。
[0037]4)試管苗的病苗檢測(cè):再生出的“寧紫薯2號(hào)”紫色甘薯試管苗要及時(shí)進(jìn)行病毒檢測(cè)，一般長(zhǎng)到4?5個(gè)葉片大小的試管苗即可進(jìn)行病毒檢測(cè)。先用目測(cè)法去除葉片上有花葉明脈或褪綠斑的帶毒試管苗；目測(cè)法無(wú)法鑒定的試管苗用血清法檢測(cè)，去除攜帶有甘薯羽狀斑駁病毒、甘薯潛隱病毒、甘薯類(lèi)花葉病毒的試管苗。
[0038]5)準(zhǔn)備穴盤(pán)和基質(zhì):選擇尺寸為54cmX28cm，規(guī)格72穴的聚乙烯塑料穴盤(pán)，使用前先用高錳酸鉀1000倍液浸泡30分鐘，然后用清水將穴盤(pán)清洗干凈并晾干；將穴盤(pán)內(nèi)裝滿基質(zhì)，基質(zhì)自配(每10kg黃土 +高溫膨化雞糞5kg+45%三元復(fù)合肥lkg+50%多菌靈50g)，饒透水備用，穴盤(pán)底部用托盤(pán)墊底，防止水分溢出。
[0039]6)脫毒試管苗的移栽:在超凈工作臺(tái)中用解剖刀小心截取通過(guò)病毒檢測(cè)的“寧紫薯2號(hào)”紫色甘薯試管苗約4cm左右的莖段，將每個(gè)莖段去掉下部的葉片，只留上端I片展開(kāi)葉，插入穴盤(pán)的一個(gè)孔穴中，插入深度2cm左右，試管苗根部剩余的部分依然留在試管中繼續(xù)生長(zhǎng)；待試管苗再次長(zhǎng)到6cm左右時(shí)可再次截取上部莖段移栽至穴盤(pán)中，一直反復(fù)進(jìn)行。
[0040]7)將插好寧紫薯I號(hào)脫毒苗的穴盤(pán)放入溫室，圍好防蟲(chóng)網(wǎng)；控制溫室的溫度在25?28°C，定時(shí)給薯苗澆水。
[0041]8)待薯苗長(zhǎng)至1cm左右時(shí)即可再次剪苗，上半截只留最上面I?2片展開(kāi)葉，去掉下部多余葉片，插入新的穴盤(pán)中，下半截留在原來(lái)的穴盤(pán)中繼續(xù)生長(zhǎng)，如此連續(xù)進(jìn)行剪苗，一般每個(gè)月可實(shí)現(xiàn)10?16倍的快速繁殖，隨時(shí)備大田移栽。
[0042]脫毒后的“寧紫薯2號(hào)”紫色甘薯品種比脫毒前的“寧紫薯2號(hào)”紫色甘薯品種增產(chǎn) 30.
[0043]實(shí)施例3
[0044]選用“浙紫薯I號(hào)”紫色甘薯品種進(jìn)行脫毒和穴盤(pán)快繁，具體步驟如下:
[0045]I)莖尖消毒:從“浙紫薯I號(hào)”紫色甘薯種苗上切取2cm左右的莖尖，去除所有葉片后放入干凈的三角瓶中，在自來(lái)水下反復(fù)沖洗8min，加入兩滴洗潔精浸泡lOmin，倒去洗滌液，用蒸餾水清洗5次。將莖尖轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇浸泡30s，用無(wú)菌水清洗3次，再將莖尖置于0.1 %的HgCl2 (升汞)溶液中浸泡5min，之后用無(wú)菌水沖洗3次，消毒后的莖尖用無(wú)菌濾紙吸去莖尖表面的水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用；
[0046]2)莖尖分生組織的剝離與接種:將消過(guò)毒的莖尖置于60倍體視顯微鏡(雙筒解剖鏡)下，用解剖針逐次去掉幼葉，直至露出光滑的莖尖分生組織，用解剖刀切取帶I?2個(gè)葉原基(0.1?0.3mm)的生長(zhǎng)點(diǎn)，用接種針將生長(zhǎng)點(diǎn)移至裝有再生培養(yǎng)基(配比是:MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L，6-芐基腺嘌呤1.5mg/L，a_奈乙酸lmg/L，蔗糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L ；)的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)可接種約20個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)；
[0047]3)莖尖分生組織的培養(yǎng):把接種后的培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱或組培室內(nèi)的光照培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度25001x、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)25d后看到莖尖明顯伸長(zhǎng)且呈綠色，有小葉發(fā)生時(shí)將小莖芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基(配比是:MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L，鹿糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L)的試管內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，繼續(xù)生長(zhǎng)并形成根系，再經(jīng)I個(gè)月左右即可發(fā)育成4?5個(gè)葉片的小植株；用血清法檢測(cè)再生小植株，去除攜帶甘薯病毒的植株。
[0048]4)準(zhǔn)備穴盤(pán)和基質(zhì):選擇聚乙烯塑料穴盤(pán)，尺寸為54cmX28cm，規(guī)格72穴(口徑40mm X 40mm，穴深45mm);用高錳酸鉀1000倍液浸泡30分鐘，然后用清水將穴盤(pán)清洗干凈后瞭干；將穴盤(pán)內(nèi)裝滿基質(zhì)，基質(zhì)選擇營(yíng)養(yǎng)土，或自配(每10kg黃土 +高溫膨化雞糞5kg+45%三元復(fù)合肥lkg+50%多菌靈50g)，澆透水備用，穴盤(pán)底部用托盤(pán)墊底。
[0049]5)脫毒試管苗的移栽:在超凈工作臺(tái)中用解剖刀小心截取通過(guò)病毒檢測(cè)的試管苗約4cm左右的莖段，將每個(gè)莖段去掉下部的葉片，只留上端I片展開(kāi)葉，插入穴盤(pán)的一個(gè)孔穴中，插入深度2cm左右，試管苗根部剩余的部分依然留在試管中繼續(xù)生長(zhǎng)；待試管苗長(zhǎng)到6cm左右時(shí)可再次截取上部莖段移栽至穴盤(pán)中，一直反復(fù)進(jìn)行。
[0050]6)將插好苗的穴盤(pán)放入溫室或大棚的多層培養(yǎng)架子上，圍好防蟲(chóng)網(wǎng)；控制溫室或大棚的溫度在25?28°C，定時(shí)給薯苗澆水。
[0051]7)待薯苗長(zhǎng)至1cm左右時(shí)即可再次剪苗，上半截只留最上面I片展開(kāi)葉，去掉下部多余葉片，插出新的穴盤(pán)中，下半截留在原來(lái)的穴盤(pán)中繼續(xù)生長(zhǎng)，如此連續(xù)進(jìn)行剪苗，一般每個(gè)月可實(shí)現(xiàn)10?18倍的快速繁殖，隨時(shí)備大田移栽。
[0052]脫毒后的“浙紫薯I號(hào)”紫色甘薯品種比脫毒前的“浙紫薯I號(hào)”紫色甘薯品種增產(chǎn) 25.5%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種紫色甘薯脫毒及穴盤(pán)快繁的方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行: 1)紫薯莖尖消毒:從紫色甘薯種苗上切取2cm左右的莖尖，去除所有葉片，在自來(lái)水下反復(fù)沖洗5?lOmin，加入兩滴洗潔精浸泡lOmin，倒去洗滌液，用蒸飽水清洗4?5次；將莖尖轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇浸泡30s，用無(wú)菌水清洗2?3次，再將莖尖置于2%的NaClO溶液中浸泡lOmin，或0.1 %的升未溶液中浸泡5min，之后用無(wú)菌水沖洗3次，消毒后的莖尖用無(wú)菌濾紙吸去莖尖表面的水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用； 2)紫薯莖尖分生組織的剝離與接種:將消過(guò)毒的莖尖置于20?80倍體視顯微鏡下，用解剖針逐次去掉幼葉，直至露出光滑的莖尖分生組織，用解剖刀切取帶I?2個(gè)0.1?0.3_長(zhǎng)的葉原基的生長(zhǎng)點(diǎn)，用接種針將生長(zhǎng)點(diǎn)移至裝有再生培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)接種20個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)； 3)紫薯莖尖分生組織的培養(yǎng):把接種后的培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱或組培室內(nèi)的光照培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度2000?30001x、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)20?30d看到莖尖明顯伸長(zhǎng)且呈綠色，有小葉發(fā)生時(shí)將小莖芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基的試管內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，繼續(xù)生長(zhǎng)并形成根系，再經(jīng)I個(gè)月左右即可發(fā)育成4?5個(gè)葉片的小植株；用血清法檢測(cè)再生小植株，去除攜帶甘薯病毒的植株； 4)準(zhǔn)備穴盤(pán)和基質(zhì):選擇聚乙烯塑料穴盤(pán)，用500倍多菌靈液浸泡12小時(shí)或用高錳酸鉀1000倍液浸泡30分鐘，然后用清水將穴盤(pán)清洗干凈后晾干；將穴盤(pán)內(nèi)裝滿基質(zhì)，澆透水備用，穴盤(pán)底部用托盤(pán)墊底； 5)紫薯脫毒試管苗的移栽:在超凈工作臺(tái)中用解剖刀小心截取通過(guò)病毒檢測(cè)的試管苗4cm左右的莖段，將每個(gè)莖段去掉下部的葉片，只留上端I片展開(kāi)葉，插入穴盤(pán)的一個(gè)孔穴中，插入深度2cm左右，試管苗根部剩余的部分依然留在試管中繼續(xù)生長(zhǎng)；待試管苗長(zhǎng)到6cm左右時(shí)可再次截取上部莖段移栽至穴盤(pán)中，一直反復(fù)進(jìn)行； 6)將插好苗的穴盤(pán)放入溫室或大棚的多層培養(yǎng)架子上，圍好防蟲(chóng)網(wǎng)；控制溫室或大棚的溫度在25?28°C，定時(shí)給薯苗澆水； 7)待薯苗長(zhǎng)至1cm左右時(shí)即可再次剪苗，上半截只留最上面I片展開(kāi)葉，去掉下部多余葉片，插入新的穴盤(pán)中，下半截留在原來(lái)的穴盤(pán)中繼續(xù)生長(zhǎng)，如此連續(xù)進(jìn)行剪苗即可實(shí)現(xiàn)甘薯脫毒苗的快速擴(kuò)繁，隨時(shí)備大田移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫色甘薯脫毒及穴盤(pán)快繁的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的再生培養(yǎng)基的配比是:MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L，6-芐基腺嘌呤1.0?2.0mg/L，a_奈乙酸 0.1 ?1.0mg/L，鹿糖 30g/L、植物凝膠 Gelzan 3g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫色甘薯脫毒及穴盤(pán)快繁的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的繼代培養(yǎng)基的配比是:MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L，蔗糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L?
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫色甘薯脫毒及穴盤(pán)快繁的方法，其特征在于，步驟(4)中所述的穴盤(pán)尺寸為54cmX 28cm，規(guī)格50穴或72穴。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫色甘薯脫毒及穴盤(pán)快繁的方法，其特征在于，步驟(4)中所述的基質(zhì)配比為:黃土 10kg+高溫膨化雞糞5kg+45%三元復(fù)合肥lkg+50%多菌靈50g。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種紫色甘薯脫毒及穴盤(pán)快繁的方法，屬于作物品種選育技術(shù)領(lǐng)域。包括：紫薯莖尖的消毒；紫薯莖尖分生組織的剝離與接種；紫薯莖尖分生組織的培養(yǎng)；穴盤(pán)和基質(zhì)的選擇；紫薯脫毒試管苗的移栽和快繁等步驟。本發(fā)明改良了紫薯脫毒再生培養(yǎng)基的配方，操作方便，接種量大；穴盤(pán)的利用大大加快了脫毒苗的擴(kuò)繁速度，且繁殖系數(shù)高，不受季節(jié)限制。
【IPC分類(lèi)】A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104782487
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510210359
【發(fā)明人】馬佩勇, 邊小峰, 賈趙東, 謝一芝, 郭小丁
【申請(qǐng)人】江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年4月28日