一種紫色甘薯脫毒及穴盤快繁的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)脫毒與快繁領(lǐng)域，具體涉及一種紫色甘薯脫毒及穴盤快繁的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫色甘薯是指薯塊肉色呈紫色的一類甘薯，其營養(yǎng)價(jià)值豐富，除了具有普通甘薯的營養(yǎng)價(jià)值外，還含有豐富的花青素。研宄表明，紫薯塊根中的花青素有很強(qiáng)的抗氧化作用，能去除活性氧，預(yù)防高血壓和動(dòng)脈硬化，改善肝功能，減少基因突變，抑制致癌物質(zhì)的產(chǎn)生，改善視力等保健作用，而且紫薯花青素還具有很好的耐熱耐光性，在食品、化妝品、醫(yī)藥方面也有廣闊的應(yīng)用前景。因此近年來種植紫色甘薯也越來越受到人們的歡迎。但隨著紫薯種植面積的擴(kuò)大，紫薯受病毒的危害也越發(fā)嚴(yán)重，紫薯感染病毒后，導(dǎo)致品種退化，死苗率增加，產(chǎn)量下降甚至絕收；感染病毒的紫薯薯塊變小，品質(zhì)變差。紫薯病毒病已成為導(dǎo)致甘薯種性退化、產(chǎn)量下降的重要原因，只有對(duì)染病紫薯種苗進(jìn)行莖尖分生組織的脫毒培養(yǎng)和快繁，才能保證原紫薯品種的產(chǎn)量和品質(zhì)。
[0003]近年來，隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)的不斷進(jìn)步，利用組織培養(yǎng)對(duì)植物進(jìn)行脫毒的技術(shù)也廣泛應(yīng)用在蔬菜、花丼和一些農(nóng)作物上。但不同的植物有其不同的生長特性，脫毒和快繁的具體方法也因植物而異，因品種而異。因此，紫色甘薯因其自身的特點(diǎn)，脫毒培養(yǎng)和快繁的技術(shù)也不同于其他植物，需要研宄人員通過試驗(yàn)來不斷探索和完善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種紫色甘薯的脫毒與穴盤快繁方法，既可保證原紫薯品種產(chǎn)量和品質(zhì)水平，又可打破季節(jié)限制，實(shí)現(xiàn)多次、高效的擴(kuò)繁。
[0005]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn):
[0006]一種紫色甘薯的脫毒與穴盤快繁方法，包括如下步驟:
[0007]I)莖尖消毒:從紫色甘薯種苗上切取2cm左右的莖尖，去除所有葉片后放入干凈的三角瓶中，在自來水下反復(fù)沖洗5?lOmin，加入兩滴洗潔精浸泡lOmin，倒去洗滌液，用蒸餾水清洗4?5次。將莖尖轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇浸泡30s，用無菌水清洗
2?3次，再將莖尖置于2%的NaClO溶液中浸泡lOmin，或0.1 %的HgCl2 (升汞)溶液中浸泡5min，之后用無菌水沖洗3次，消毒后的莖尖用無菌濾紙吸去莖尖表面的水分，置于無菌培養(yǎng)皿中備用；
[0008]2)莖尖分生組織的剝離與接種:將消過毒的莖尖置于20-80倍體視顯微鏡(雙筒解剖鏡)下，用解剖針逐次去掉幼葉，直至露出光滑的莖尖分生組織，用解剖刀切取帶I?2個(gè)葉原基(0.1?0.3mm)的生長點(diǎn)，用接種針將生長點(diǎn)移至裝有再生培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)可接種約20個(gè)生長點(diǎn)；
[0009]3)莖尖分生組織的培養(yǎng):把接種后的培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱或組培室內(nèi)的光照培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度2000?30001x、光照時(shí)間16h/d，一般培養(yǎng)20?30d看到莖尖明顯伸長且呈綠色，有小葉發(fā)生時(shí)將小莖芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基的試管內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，繼續(xù)生長并形成根系，再經(jīng)I個(gè)月左右即可發(fā)育成4?5個(gè)葉片的小植株；用血清法檢測(cè)再生小植株，去除攜帶甘薯病毒的植株。
[0010]4)準(zhǔn)備穴盤和基質(zhì):選擇聚乙烯塑料穴盤，尺寸為54cmX28cm，規(guī)格50穴(口徑50_X50mm，穴深50mm)或72穴(口徑40_X40mm，穴深45mm)為宜；用500倍多菌靈液浸泡12小時(shí)或用高錳酸鉀1000倍液浸泡30分鐘，然后用清水將穴盤清洗干凈后晾干；將穴盤內(nèi)裝滿基質(zhì)，基質(zhì)選擇營養(yǎng)土，或自配(每10kg黃土 +高溫膨化雞糞5kg+45 %三元復(fù)合肥lkg+50%多菌靈50g)，澆透水備用，穴盤底部用托盤墊底。
[0011]5)脫毒試管苗的移栽:在超凈工作臺(tái)中用解剖刀小心截取通過病毒檢測(cè)的試管苗約4cm左右的莖段，將每個(gè)莖段去掉下部的葉片，只留上端I片展開葉，插入穴盤的一個(gè)孔穴中，插入深度2cm左右，試管苗根部剩余的部分依然留在試管中繼續(xù)生長；待試管苗長到6cm左右時(shí)可再次截取上部莖段移栽至穴盤中，一直反復(fù)進(jìn)行。
[0012]6)將插好苗的穴盤放入溫室或大棚的多層培養(yǎng)架子上，圍好防蟲網(wǎng)；控制溫室或大棚的溫度在25?28°C，最低不能低于20°C，注意定時(shí)給薯苗饒水。
[0013]7)待薯苗長至1cm左右時(shí)即可再次剪苗，上半截只留最上面I片展開葉，去掉下部多余葉片，插出新的穴盤中，下半截留在原來的穴盤中繼續(xù)生長，如此連續(xù)進(jìn)行剪苗即可實(shí)現(xiàn)甘薯脫毒苗的快速擴(kuò)繁，隨時(shí)備大田移栽。
[0014]前述紫色甘薯的脫毒與穴盤快繁方法中，所述的再生培養(yǎng)基的配比是:MS基本培養(yǎng)基粉末 4.4g/L，6-芐基腺嘌呤(6-BA) 1.0 ?2.0mg/L，a-奈乙酸(NAA)0.1 ?1.0mg/L，蔗糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L ;繼代培養(yǎng)基的配比是:MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L，蔗糖 30g/L、植物凝膠 Gelzan 3g/L。
[0015]本發(fā)明的積極效果是:
[0016]1.傳統(tǒng)接種方式都是用試管，每管僅能接種I個(gè)莖尖分生組織，而利用培養(yǎng)皿接種，操作更方便(培養(yǎng)皿深度更淺)，單皿接種量大(約20個(gè)/皿)，培養(yǎng)皿可在光照培養(yǎng)箱或組培室中分層疊放，極大的節(jié)省了培養(yǎng)空間；
[0017]2.利用穴盤法進(jìn)行脫毒苗的快速擴(kuò)繁，操作簡便，繁殖系數(shù)高，不受季節(jié)限制。
[0018]3.對(duì)染毒紫薯品種進(jìn)行脫毒和擴(kuò)繁，有效防止品種退化，保持種性和保證穩(wěn)產(chǎn)和品質(zhì)O
【具體實(shí)施方式】
[0019]通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
[0020]下面實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法所使用的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明均為常規(guī)方法；下面實(shí)施例中所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0021]實(shí)施例1
[0022]選用國審紫色甘薯品種“寧紫薯I號(hào)”進(jìn)行脫毒和快繁，具體步驟如下:
[0023]I)莖尖消毒:四月中旬在“寧紫薯I號(hào)”甘薯苗床上選取具有本品種典型特征、生長健壯、無病蟲的健康薯苗，剪取薯苗頂部2cm左右的莖尖，去除所有可見葉，放入干凈的三角瓶中，在自來水下反復(fù)沖洗5min后，加入兩滴洗潔精浸泡lOmin，倒去洗滌液，再用蒸餾水清洗5次，洗凈殘留的洗滌液。隨后將莖尖轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇浸泡30s進(jìn)行表面消毒，用無菌水清洗2次，再將莖尖置于2%的NaClO溶液中浸泡1min之后用無菌水沖洗3次，洗凈殘留的NaClO溶液，進(jìn)行深度消毒，消毒后的莖尖用無菌濾紙吸去莖尖表面的水分，置于無菌培養(yǎng)皿中備用；
[0024]2)莖尖分生組織的剝離與接種:將消過毒的莖尖置于80倍體式顯微鏡(雙筒解剖鏡)下，用解剖針逐次去掉幼葉，直至露出光滑的莖尖分生組織，用解剖刀小心切取帶有I?2個(gè)葉原基(0.1?0.3mm)的生長點(diǎn)，用接種針將生長點(diǎn)移至裝有再生培養(yǎng)基(MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L、6-芐基腺嘌呤1.0mg/L, a-奈乙酸0.lmg/L、蔗糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L)的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)可接種20個(gè)生長點(diǎn)；
[0025]3)莖尖分生組織的培養(yǎng):把接種后的培養(yǎng)皿放在組培室內(nèi)的光照培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度25?28°C，光照強(qiáng)度2000?30001x、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)20d后，當(dāng)看到莖尖明顯伸長且呈綠色，有小葉發(fā)生時(shí)將小莖芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基(MS基本培養(yǎng)基粉末4.4g/L、鹿糖30g/L、植物凝膠Gelzan 3g/L)的試管內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長并形成根系，每個(gè)試管種植一棵小苗，經(jīng)過30d左右即可發(fā)育成4?5個(gè)葉片的“寧紫薯I號(hào)”甘薯小植株；
[0026]4)試管苗的病苗檢測(cè):再生出的寧紫薯I號(hào)試管苗要及時(shí)進(jìn)行病毒檢測(cè)，一般長到4?5個(gè)葉片大小的試管苗即可進(jìn)行病毒檢測(cè)。先用目測(cè)法去除葉片上有花葉明脈或褪綠斑的帶毒試管苗；目測(cè)法無法鑒定的試管苗用血清法檢測(cè)，去除攜帶有甘薯羽狀斑駁病毒、甘薯潛隱病毒、甘薯類花葉病毒的試管苗。
[0027]5)準(zhǔn)備穴盤和基質(zhì):選擇尺寸為54cmX28cm，規(guī)格50穴的聚乙烯塑料穴盤，使用前先用500倍多菌靈液浸泡12小時(shí)，然后用清水將穴盤清洗干凈并晾干；將穴盤內(nèi)裝滿基質(zhì)，基質(zhì)選擇營養(yǎng)土(每10kg黃土 +高溫膨化雞糞5kg+45%三元復(fù)合肥lkg+50%多菌靈50g)，饒透水備用，穴盤底部用托盤墊底，防止水分溢出。
[0028]6)脫毒試管苗的移栽:在超凈工作臺(tái)中用解剖刀小心截取通過病毒檢測(cè)的寧紫薯I號(hào)試管苗約4cm左右的莖段，將每個(gè)莖段去掉下部的葉片，只留上端I片展開葉，插入穴盤的一個(gè)孔穴中，插入深度2cm左右，試管苗根部剩余的部分依然留在試管中繼續(xù)生長；待試管苗再次長到6cm左右時(shí)可再次截取上部莖段移栽至穴盤中，一直反復(fù)進(jìn)行。
[0029]7)將插好寧紫薯I號(hào)脫毒苗的穴盤放入大棚的多層培養(yǎng)架子上，圍好防蟲網(wǎng)；控制溫室或大棚的溫度在25?28°C，定時(shí)給薯苗澆水。
[0030]8)待薯苗長至1cm左右時(shí)即可再次剪苗，上半截只留最上面I?2片展開葉，去掉下部多余葉片，插入新的穴盤中，下半截留在原來的穴盤中繼續(xù)生長，如此連續(xù)進(jìn)行剪苗，一般每個(gè)月可實(shí)現(xiàn)8?16倍的快速繁殖，隨時(shí)備大田移栽。
[0031]該品種為春、夏薯型，適應(yīng)種植范圍廣，產(chǎn)量30000?45000kg/hm2;脫毒后比對(duì)照(脫毒前的寧紫薯I號(hào))增產(chǎn)28.7%。
[0032]實(shí)施例2
[0033]選用“寧紫薯2號(hào)”紫色甘薯品種進(jìn)行脫毒和穴盤快繁，具體步驟如下:
[0034]I)莖尖消毒:四月中旬在“寧紫薯2號(hào)”紫色甘薯苗床上選取具有本品種典型特征、生長健壯、無病蟲的健康薯苗，剪取薯苗頂部2cm左右的莖尖，去除所有可見葉，放入干凈的三角瓶中，在自來水下反復(fù)沖洗1min后，加入兩滴洗潔精浸泡lOmin，倒去洗滌液，再用蒸餾水清洗5次，洗凈殘留的洗滌液。隨后將莖尖轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇浸泡30s進(jìn)行表面消毒，用無菌水清洗2次，再將莖尖置于2%的NaClO溶液中浸泡lOmin，之