山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)基,尤其涉及一種山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 山菊花,又名山野菊、路邊菊、野黃菊、苦薏等,為菊科菊屬多年生草本植物,分布 于東北、華北、華中、華南及西南各省,生于山坡、荒野、路邊。其花具有極佳的藥用保健功效 和極高的飲用價值,是一種保健飲用茶。野菊花為菊科植物野菊的頭狀花序。性涼,味苦、 辛,歸肺肝二經(jīng),疏風(fēng)清熱,消腫解毒,治療風(fēng)熱感冒,肺炎,高血壓、口瘡、丹毒等癥野 菊花廣泛分布于我國東北、華北、西北、華東、西南等地,野生資源豐富。山菊花含菊醇、野 菊花內(nèi)酯、氨基酸、微量元素等多種活性成分。其水提取液對心血管系統(tǒng)有明顯保護作用, 能提高心輸出量,增加心肌供氧量,保護缺血心肌的正常生理功能。山菊花水提物及水蒸氣 蒸餾法提取的藍綠色揮發(fā)油對多種致病菌、病毒有殺滅或抑制活性,水提取物對金黃色葡 萄球菌、痢疾桿菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌等的抑制活性強于揮發(fā)油;并有抗炎、抗氧化、鎮(zhèn) 痛活性。具有清熱解毒,消腫。對金黃色葡萄球菌、白喉桿菌、鏈球菌、綠膿桿菌、蒺疾桿菌、 流感病毒,均有抑制作用。
[0003] 山菊花以種子繁育的植株性別表現(xiàn)較遲,用種子繁育實生苗很大程度影響了生 產(chǎn)。另外,采用扦插、嫁接等常規(guī)的無性繁殖技術(shù)成活率又低,不適合山菊花的快速繁殖。因 此,通過組培技術(shù)快速繁殖山菊花株性一致的優(yōu)良種苗倍受關(guān)注。大量研宄表明,山菊花利 用組培快繁技術(shù)育苗是非常理想的途徑,具有保持優(yōu)良品種的遺傳穩(wěn)定性;生產(chǎn)無病種苗 的優(yōu)點;種苗繁殖迅速等特點。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,該培養(yǎng) 基包括繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基,其中:
[0005] 每升(L)繼代培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下:
[0006] (1)大量元素:硝酸鉀2450mg/L、硝酸按2100mg/L、七水硫酸鎂450mg/L、磷酸二氫 鉀 350mg/L、氯化鈣 450mg/L ;
[0007] (2)微量元素:一水硫酸錳22. Omg/L、七水硫酸鋅8. 2mg/L、硼酸5. 5mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽35. 5mg/L、七水硫酸 亞鐵 26. 5mg/L、碘化鉀 0· 75mg/L ;
[0008] (3)有機物:甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/L、鹽酸吡哆醇0· 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0009] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑:6-芐基腺嘌呤0· 25-0. 35mg/L、萘乙酸0· 15-0. 25mg/L、荔枝 汁 0· 3-0. 5mg/L ;
[0010] 余量為蒸餾水;
[0011] 每升(L)生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下:
[0012] (1)大量元素:硝酸鉀2100mg/L、硝酸銨1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫 鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ;
[0013] (2)微量元素:一水硫酸錳22. Omg/L、七水硫酸鋅8. 2mg/L、硼酸5. 5mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽35. 5mg/L、七水硫酸 亞鐵 26. 5mg/L、碘化鉀 0· 75mg/L ;
[0014] (3)有機物:甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/L、鹽酸吡哆醇0· 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0015] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑:萘乙酸0· 1-0. 2mg/L、吲哚丁酸L 5-2. 5mg/L、荔枝汁 0. 3-〇. 5mg/L ;
[0016] (5)其他添加物:活性炭2. 0-3. Omg/L ;
[0017] 余量為蒸餾水。
[0018] 本發(fā)明所述荔枝汁為新鮮荔枝去除枝葉、病蟲果、爛果、腐果、未成熟果,清洗、去 除果皮果核,果肉壓榨,得到的果汁,滅菌得到。
[0019] 本發(fā)明山菊花培養(yǎng)基中的繼代培養(yǎng)基的配制方法為:
[0020] (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑母液;
[0021] (2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液,即混合母液;
[0022] (3)稱量白糖和瓊脂,其中白糖30g/L,瓊脂3. 0g/L ;
[0023] (4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解;
[0024] (5)然后加入量好的混合母液,用水定容,攪拌均勻;
[0025] (6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;
[0026] (7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)瓶,蓋上瓶蓋,擰緊;
[0027] (8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋,在121. 6 °C,0· IMPa下滅菌20分鐘;
[0028] (9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固,此時的培養(yǎng)基可以使用。
[0029] 本發(fā)明山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的生根培養(yǎng)基的配制方法為:
[0030] (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有機物母液、植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑母液、活性 炭;
[0031] (2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液,即混合母液;
[0032] (3)稱量白糖和瓊脂,其中白糖15g/L,瓊脂3. 2g/L ;
[0033] (4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解;
[0034] (5)然后加入量好的混合母液,用水定容,攪拌均勻;
[0035] (6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;
[0036] (7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)瓶,蓋上瓶蓋,擰緊;
[0037] (8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋,在121. 6 °C,0· IMPa下滅菌20分鐘;
[0038] (9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固,此時的培養(yǎng)基可以使用。
[0039] 本發(fā)明山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)的方法為:
[0040] (1)先弱光培養(yǎng)7至8天,繼代苗切口愈合,頂芽上挺,分化出側(cè)芽,苗木恢復(fù)長 勢;
[0041] (2)然后強光培養(yǎng)8至12天,頂芽側(cè)芽高3厘米以上,葉片舒展,莖干半木質(zhì)化。 此時的芽即可用于生根培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度保持在25-30°C。
[0042] 本發(fā)明山菊花培養(yǎng)基生根培養(yǎng)的方法為:
[0043] (1)暗培養(yǎng)5至7天,生根苗基部膨脹,形成根原基。溫度要求比較粗放,不低于 15°C即可,最佳溫度25_30°C ;
[0044] (2)強光培養(yǎng)10至15天,室溫培養(yǎng)即可。
[0045] (3)此時生根苗高4-5厘米,根系5條以上,葉片舒展,苗莖木質(zhì)化,即可出圃移植。
[0046] 與目前現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的優(yōu)點是:
[0047] 1、增殖和生根培養(yǎng)通過添加合適量的荔枝汁,能促進甜茶不定芽的生長,繁殖系 數(shù)高,且在增殖的同時誘導(dǎo)生根,縮短培育周期。
[0048] 2、生根率和移栽成活率達到99. 5%以上,遺傳穩(wěn)定性好。
【具體實施方式】
[0049] 下面以實施例對本發(fā)明作進一步說明,但本發(fā)明并不局限于這些實施例。
[0050] 實施例1 :
[0051] 山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基包括繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基,其中:
[0052] 每升(L)繼代培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下:
[0053] (1)大量元素:硝酸鉀2450mg/L、硝酸按2100mg/L、七水硫酸鎂450mg/L、磷酸二氫 鉀 350mg/L、氯化鈣 450mg/L ;
[0054] (2)微量元素:一水硫酸錳22. Omg/L、七水硫酸鋅8. 2mg/L、硼酸5. 5mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽35. 5mg/L、七水硫酸 亞鐵 26. 5mg/L、碘化鉀 0· 75mg/L ;
[0055] (3)有機物:甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/L、鹽酸吡卩多醇0· 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0056] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑:6-芐基腺嘌呤0· 35mg/L、萘乙酸0· 25mg/L、荔枝汁0· 4mg/ L ;
[0057] 余量為蒸餾水;
[0058] 每升(L)生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下:
[0059] (1)大量元素:硝酸鉀2100mg/L、硝酸按1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫 鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ;
[0060] (2)微量元素:一水硫酸錳22. Omg/L、七水硫酸鋅8. 2mg/L、硼酸5. 5mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽35. 5mg/L、七水硫酸 亞鐵 26. 5mg/L、碘化鉀 0· 75mg/L ;
[0061] (3)有機物:甘氨酸2. 0mg/L、鹽酸硫胺素10. 0mg/L、鹽酸吡哆醇0· 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ;
[0062] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑:萘乙酸0· lmg/L、吲噪丁酸2. 0mg/L、落枝汁0· 4mg/L ;
[0063] (5)其他添加物:活性炭2. 0mg/L ;
[0064] 余量為蒸餾水。
[0065] 實施例2 :
[0066] 山菊花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基包括繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基,其中: