一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]刺槐(pseudoacacia)是豆科刺槐屬落葉喬木,是良好的用材、保持水土、防風(fēng)固沙、改良土壤和“四旁”綠化樹種。刺槐原產(chǎn)于美國，天然分布于美國東部阿柏拉契亞山脈和奧薩克山脈，由于其具有較強的適應(yīng)性和速生性，被多個國家引種栽培，與楊樹、桉樹一起稱為世界上引種最成功的三大樹種之一。自1877年被引入我國以來，刺槐在中國已經(jīng)實現(xiàn)了鄉(xiāng)土化，并形成了不少地方類型。刺槐木材質(zhì)重而堅硬，抗壓強度高，宜作礦柱材和樁材。其紋理細(xì)致，耐磨、耐腐，亦可作家具、農(nóng)具、機械部件、水工和木工用材。枝葉和樹根易燃、火力強、發(fā)煙少、燃時長，是良好薪材。刺槐因具有較強的滯塵抗煙能力，而且對氟化氫、氯氣、臭氧、二氧化硫等氣體的抗性較強，具有一定的吸收功能，被廣泛用于城市綠化、工礦綠化的園林樹種。
[0003]刺槐林是我國落葉林中栽植范圍最廣泛的人工林，其適應(yīng)性強、耐干旱瘠薄，在石灰性、酸性、中性以及輕度鹽堿的土壤中均能正常生長，因此在貧瘩山區(qū)、鹽堿地大力發(fā)展刺槐種植，對土壤改良、水土保持具有重要的意義。目前，刺槐種苗主要是采用扦插法、埋根法、嫁接法和播種法進行繁育，由于這些方法繁殖系數(shù)低、周期長，遠遠不能滿足大規(guī)模造林對刺槐種苗的需要。因此很有必要建立完整的刺槐離體快繁體系，為生產(chǎn)實踐提供優(yōu)質(zhì)的刺槐種苗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，本發(fā)明以單葉刺槐一年生木質(zhì)化帶芽莖段為外植體，經(jīng)過啟動培養(yǎng)、繼代與增殖培養(yǎng)、壯苗與生根培養(yǎng)、煉苗及移栽等過程建立了單葉刺槐組培快繁體系，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，包括以下的步驟:
(O啟動培養(yǎng):選取健壯單葉刺槐植株一年生木質(zhì)化帶芽莖段作為外植體，剪去葉片，切成3.0?5.0長的帶有2?3個腋芽的節(jié)段先用洗衣粉水沖洗I?3h，再用軟毛刷輕輕刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗I?3h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5?30s后用無菌水洗3?5次,再用0.1%升汞溶液消毒10?25min，用無菌水沖洗4?6次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后接種到啟動培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為1500?30001x，直至誘導(dǎo)形成叢生芽。
[0006](2)繼代與增殖培養(yǎng):將步驟(I)培養(yǎng)已萌發(fā)的腋芽剪切成帶芽的小段并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照12?14小時，光照強度為1000?20001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，多次反復(fù)切割進行繼代培養(yǎng)，以得到更多的萌芽。
[0007](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)過程獲得的高度約為2.5?3.5cm的叢生芽芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照11?12小時，光照強度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0008](4)煉苗移栽:將步驟(3)獲得的高約6?8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由營養(yǎng)土:沙土 = 2:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田。
[0009]上述步驟(I)所述的啟動培養(yǎng)基為:MS+1?3mg/L6-BA+0.1?lmg/L NAA+15?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0010]上述步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:Ν6+0.5?1.5mg/LNAA+l?3mg/L 6-BA+15?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:1/2MS+0.1?lmg/L ΝΑΑ+0.1?lmg/LIBA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點是:本發(fā)明通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)短時間內(nèi)快速獲得大量刺槐優(yōu)良木苗的方法。以單葉刺槐一年生木質(zhì)化帶芽莖段為外植體，經(jīng)過啟動培養(yǎng)、繼代與增殖培養(yǎng)、壯苗與生根培養(yǎng)、煉苗及移栽等過程建立了單葉刺槐組培快繁體系，為其規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)支持，并為進一步進行分子育種奠定基礎(chǔ)。
【具體實施方式】
[0013]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0014]實施例1:
(O啟動培養(yǎng):選取健壯單葉刺槐植株一年生木質(zhì)化帶芽莖段作為外植體，剪去葉片，切成3.0?5.0長的帶有2?3個腋芽的節(jié)段先用洗衣粉水沖洗lh，再用軟毛刷輕輕刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗Ih后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5s后用無菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用無菌水沖洗4次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后接種到啟動培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)2天，然后置于每天光照10小時，光照強度為15001x條件下培養(yǎng)5天即可開始形成叢生芽，污染率低到5%以下，芽誘導(dǎo)率為87%。所述的啟動培養(yǎng)基為:MS+lmg/L6-BA+0.1mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0015](2)繼代與增殖培養(yǎng):將步驟(I)培養(yǎng)已萌發(fā)的腋芽剪切成帶芽的小段并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)I天，然后置于每天光照12小時，光照強度為ΙΟΟΟΙχ，置于培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)35天后增殖苗可長至3.74cm,增殖系數(shù)為5.09.多次反復(fù)切割進行繼代培養(yǎng)，以得到更多的萌芽。所述的增殖培養(yǎng)基為:N6+0.5mg/LNAA+l.5mg/L 6_BA+15g/L 鹿糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0016](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)過程獲得的高度約為2.5?3.5cm的叢生芽芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后